洋葱假单胞菌产酶条件优化
一株产冠毒素新菌株发酵条件的初步研究
ｗａ ｒ ｍ ２ ℃ ｔ ℃ ．Ｔ ｒｈ ｇ ｎ ｌｅ ｐｅ ｉ ｎ ｅ ｕ ｔｓ ｇ ｅ ｔ ｄ ｔ ａ ｈ ｕ ｔｂ ｅ ｍｅ ｕｍ ｒ ｃ ｒ ｎ ｔ ｅ ｓ ｆｏ ３ ｏ１ ８ ｈｅ ｏ ｏ ｏ ａ ｘ ｒｍｅ ｔｒ ｓ ｌ ｕ ｇ ｓｅ ｈ ｔｔ ｅ ｓ ｉ ｌ ｄｉ ｔ ａ ｏ ｆ ｏ ｏ ａｉ ｎ
Ｌ ａ ｇ—ｌ ｇ Ｗ Ｕ ａ Ｉ Ｃｈ ｎ ｉ ， ｎ Ｘｉ ｏ—ｙ ， ＡＮＧ ａ —ｘ ｕ ＣＨＥＮ ｏ ｕ’ Ｗ Ｙｕ ｎ ｉ ， Ｙａ
（ ． ｐ ｒ ｎ ｆＢ ｏ ｎ ｉｅ ｒ ｇ ＡＵ，Ｎａ ｃ ａ ｇ３ ０ ４ Ｃ ｉａ ２ Ｔ ｅ Ｓａｅ Ｋｅ ａ ｆＢ ｏｅ ｃｏ １ Ｄｅ ａｔ ｔｏ ｉｅ ｇｎ ｅｉ ，Ｊ ｍｅ ｎ ｎ ｈ ｎ ３ ０ ５， ｈｎ ； ． ｈ ｔｔ ｙ Ｌ ｂ ｏ ｉｒａ ｔｒ
Ｅ ｇ ｅｒ ｇ Ｅ ｓ Ｃ ｉａＵ ｉ ｒｉ ｆ ｃ ｎｅａｄＴ ｃ ｎ ｌ ｙ Ｓ ａｇ ａ ２ ０ ３ ， ｈｎ ） ｎ ｉ ｅｉ ， ａｔ ｈｎ ｎｖ ｓｙｏ ｉ ｃ ｎ ｅｈ ｏ ｇ ，ｈｎ ｈ ｉ ０ ２ ７ Ｃ ｉａ ｎ ｎ ｅ ｔ Ｓ ｅ ｏ
Ａ ｂ ｔ ａ ｔ Ａｎ ｘ ｅ ｉ ｎｔ ｓ ｒ ｃ ： ｅ ｐ ｒｍｅ ｗａ ｏ ｕ ｔ ｄ ｏ ｔ ｄ ｔｅ ｆｅ ｔ ｏ ｅｍ ｅ ｔ ｔ ｎ ｅ ｅ ａｕ ｅ ａ ｄ ｉ ｎ ｓ ｃ ｎｄ ｃｅ ｔ ｓｕ ｙ ｈ ｅｆ ｃ ｆ ｆｒ ｎ ａ ｉ ｔ ｍｐ ｒｔ ｒ ｎ ｔ ｏ ｍｅ ｏ
瓶 发 酵 的最 适 条 件 为 ： 用 最 佳 培 养 基 配 方 ，２ 培 养 ｌｄ 降 温 至 ｌ 采 ３ ， ８℃ 发 酵 ２ｄ 冠 毒 素 的 效 价 由 优 化 前 的 ， ９ ￣ ／ Ｌ提 高 到 １８ｐ ／ ， 高 了 ３ ％ 左 右 。 ８ ｇｍ ２ ． ｍＬ 提 ｇ ０
产脂肪酶菌株的筛选及产酶条件优化
霞品研究与开发
Ｆｏ ｄＲｅｅ ｒ ｈ Ａｎ ｖ ｐ ｎｔ ｏ ｓａ ｃ ｄＤｅ ｄｏ ｍｅ
２１ ０ １年 ６月
第３ 卷 期 １ ２ 第６ １ ９
产脂肪酶菌株的筛选及产酶条件优化
李 鑫玲 ’孙晓菲 ’孟楠 ’ 卜 ， ， ， 美玲 ’刘进 。
（． １河南科 技大学 食 品与生物 工程学 院 ， 河南 洛阳 ４ １０ ； ． 岛啤酒 （ ７０３ ２青 太原 ） 有限公司 ， 山西 太原 ０ ０ ３ ） ３０ ２
４ 结 语
Ｃ ｏｅｅ ［ ． ｕｒｉｎＲ ｓａｃ ， ０ ，６ ５ ６ ５ ０ ｒ ａ ｔｎｓＪ Ｎ ｔ ｔ ｅｅｒｈ ０ ６２ ： ５ — ６ １ ｉｏ ２ 【】 Ｊｎ ａ Ｍ． ｏｄ ＇－ ｕｉ＇ ｅ ｎ ｒ ｏｏｅ ｕ ｕ ｅＣ ｓ ｏ ３ ａｎｔ Ｒ ｌａ Ｇ ｔ ｒ ｚａｄＭａ ａＤ ｌｒｓＬ ｑ ｅｄ ａｔ ． ｎ ｅｒ ｉ ｒ
摘 要 ： 土壤样本 中分 离出一株具有较 高活力 的产脂肪酶 菌株 ， 步确定为假 单胞菌属。对该 脂肪 酶产 酶条件进 从 初
行 优 化 ， 佳 碳 源为 糊精 、 最 氮源 为 硫 酸铵 ， 适发 酵 温度 为 ３ ， 最 ０℃ 最适 起 始 ｐ 为 ７ 。 Ｈ ． ０
关键词 ： 脂肪酶 ； 假单胞菌属 ； 产酶条件
６・ Ｏ
芎。 ０ 墓４ 。 ０
赡 ３０ ．
速搅 拌均匀 ， 高压灭菌倒板前再用磁力搅拌器混匀 ； 种
子培养 基 （ ： 萄糖 ２ ，Ｎ ２ ．， Ｐ ４ ．， ％）葡 ． （ Ｈ ） ０ ０ ＫＨ Ｏ ０１ ０ ｓ ５ 橄榄油 １ ， Ｓ ７ ． ， 白胨 ２５ ｐ ．； 酵 ． ＭｇＯ ・Ｈ ００ ５ 蛋 ０ ０ ．，Ｈ ７ 发 Ｏ 培养基（ ： 白胨 ２ ， ％）蛋 ． 蔗糖 ０ ， ０ ． 橄榄油 １ ，Ｎ ４￣ ４ ５ ． （ Ｈ ） Ｏ ０ Ｓ
施氏假单胞菌NRCB010的高密度发酵条件优化
中国土壤与肥料 2023 （11）doi：10.11838/sfsc.1673-6257.22655施氏假单胞菌NRCB010的高密度发酵条件优化李珊珊1，郑东辉2，刘 柠 3，陶文轩2，张欢欢1，高 南1*（1．南京工业大学生物与制药工程学院，江苏 南京 211816；2．南京工业大学2011学院， 江苏 南京 211816；3．南京工业大学海外教育学院，江苏 南京 211816）摘 要：植物根际促生菌是最常用的微生物肥料的菌种来源。
施氏假单胞菌（Pseudomonas stutzeri）因良好的促进作物生长、提高作物抗逆性及降解有机污染物等特性备受关注。
以具有减少农田土壤氧化亚氮排放和良好促生特性的施氏假单胞菌NRCB010为研究对象，明确其菌落形态及生理生化特征；以生物量（以OD600值表示）为评价指标，通过单因素优选法确定发酵基础培养基和碳氮源及其浓度，通过正交试验设计和极差分析优化无机盐成分，通过响应面分析法优化发酵培养基配方。
结果表明，NRCB010菌落呈圆形、皱褶状、黄色，革兰氏染色阴性，菌体短杆状、长度约2 μm、无芽孢；利用多种碳源、氨基酸和羧酸，具有还原力。
改良的金氏B（King′s B）培养基为NRCB010发酵较好的基础培养基；以15 g/L糖蜜+葡萄糖（1∶1，W/W）为碳源、以25 g/L牛肉浸粉为氮源时NRCB010的生物量最高。
最优无机盐组合为KH2PO4 1.5 g/L、 MgSO4·7H2O 1.5 g/L和NaCl 2.0 g/L。
优化后的最优发酵培养基为糖蜜7.1 g/L、葡萄糖8.5 g/L、牛肉浸粉22.9 g/L、MgSO4·7H2O 1.3 g/L、NaCl 2.0 g/L和KH2PO4 1.0 g/L。
使用此优化培养基发酵36 h，NRCB010发酵液的OD600值为11.09，有效活菌数为2.87×1010 cfu/mL。
响应面法优化洋葱假单胞菌产脂肪酶液体发酵工艺
ｆｃｏｓ（ ＣＭＨＬ，ｏｉｅ０ｌ ｎ ｎｔ ｌ Ｈ）ｗｅｅｓｌｃｅ ．Ａｎ ｈ ｎｓｅｐ ｓ ａｃ ｎ ｒｃ ｄ ｒｓｗｅｅａ ｐｉｄｔ ｅ ｎ ａ ｔｒ Ｓ ｌ ｉ，ａ ｄ ｉｉａ ｖ ｉ ｐ ｒ ｅｅ ｔｄ ｄｔｅ ｔｅ ｅｔ ｓｅ ｔ ｏ ｅ ｕｅ ｒ ｐ ｌ ｏｄ ｆ ｅ ｐ ｅ ｉ
（ ｏ ．ｏ Ｓ ｉ Ｃ ｌ ｆＬ １ ｃ ．＆ Ｔｃ ｎ ｌ ｅｈ ｏ ，Ｈｕ ｚ ｏ ｇ Ｕ ｉ ｆ ｉ ａ ｈ ｎ ｎｖ 、ｏ Ｓ ．＆ Ｔｃ ｎ ｌ ｃ ｅｈ ｏ，Ｗｕ ａ ３ ０ ４ ｈｎ４０ ７ ）
Ａｂ ｔａ ｔ Ｒｅｐ ｎｅＳ ｒ ｃ ｔｏ ｏｏ ｙ（ Ｍ）ｗａ ｓｄ ｔ ｐｉ ｚ ｍｍｅｓ ｎ ｆｒ ｎａｉｎ ｃ ｎ ｉｏ ｓｆｒｌ ａｅ ｓｒ ｃ ｓ ｏ ｓ ｕｆ ｅＭｅｈ ｄ ｌｇ ＲＳ ａ ｓｕ ｅ ｏｏ ｔ ｅｉ ｍｉ ｒｉ ｅｍｅ ｔｔ ｏ ｄｔ ｎ ｏ ｉ ｓ ｏ ｏ ｉ ｐ ｐｏ ｕ ｔ ｎ ｂ ｓｕ ｏ ｎ ｓｃｐ ｃａＧ－３ ｉ ｔ ，ｍａｔｓ ｎ ｏ ｂ ａ ａ ｅ ｍｅｌｈ ｄ ｏｙ ｅ ｉｕｄ（ Ｃ ｒｄ ｃｉ ｙＰ ｅ ｄ ｍｏ ａ ｅ ａｉ ６ ．Ｆｒ ｌ ｏ ｓｙ ｌ ｅａ ｄ ｓｙ ｅ ｎｃ ｋ ａ ｙ ｒｌｚｄ ｌ ｉ Ｓ ＭＨＬ）ｗｅｅ ｏ ｑ ｒ
杨树解磷细菌蜡状芽孢杆菌和荧光假单胞菌发酵罐扩繁条件优化
７【 开 发 Ｉ
ｄｉ１ ． ９ ９ ｊｉ ｎ １０ － １ １２ １ ． １ ０ ２ ｏ：０ ３ ６ ／ ． ｓ ．０ ０ ８ ０ ． ０ ２ ０ ． ２ ｓ
杨 树解 磷 细 菌蜡 状 芽 孢 杆 菌 和 荧 光假 单胞 菌 发 酵 罐 扩繁 条 件 优 化
姚 如 斌 ， 小 芹 吴
菌的问题 。解磷细菌在实验室中大多采用摇瓶培养 ， 要将其大量扩繁必须从摇瓶到发酵罐上进行放大培 养 Ｊ 因此从 摇瓶培 养 到 发酵 罐 扩 繁是 发 酵 产 品 开 。
发 中 的一个非 常重 要 的环节 。因此 ， 本研 究拟 初步 探 讨杨 树 高效将 解 磷 细 菌 在 摇 瓶 发酵 的基 础 上 ， ３ 在 Ｌ 发 酵罐 中进行 发酵试 验 ， 以后 在 大 中型发酵 罐上 获 为
图 １和ｄ ｃ 是这两株解磷细菌在不同接种量下 ７ ２
ｈ内 ｐ 和溶氧量 的变化 趋势图 。ｐ 和溶氧量 的变 化 Ｈ Ｈ 与菌株生长 的状态 基 本一 致 ， 延滞 期 ｐ 在 Ｈ和 溶 氧量 基本保持不 变 ， 在对数期快速下 降并达 到最低 点 ， 稳 在 定期慢慢 回升 ， 最后 回到一个较 为稳定 的水平 。
得适合发酵罐发酵的工艺打下基础 。
１ 材 料与 方法
性磷的含量 。大量试验证实 ， Ｊ 向土壤 中施 用解磷
细 菌 ， 够增加 作 物磷素 吸 收量 ， 高作 物产 量 ， 大 能 提 并
１ １ 供 试 茵株 ． 杨树 根 际分离 纯化 获得 的两株 高效 解磷 细菌 ： 蜡 状 芽孢 杆 菌 Ｊ Ｚ— Ｄ Ｙ Ｓ １和 荧 光 假 单 胞 菌 Ｊ —Ｓ ｊ ｗ Ｊ１ 。
Ｋｅ ｏ ｄ ：ｈｓｈｔ ｓｌｂ ｉｎ ａｔ ｉ； ａｉｕ ｅ ｕ； ｓ ｄ ｍ ｎｓ ｕｒ ｃ，； ｅ ｅｔｔｎ ｙｗ ｒ ｓｐｏｐａｅ ｏ ｉｚ ｇ ｃ ｒ Ｂ ｃ ｌ ｃｒｓ Ｐｅ ｏ ｏ ａ ｏｅ ｅ ｆｒ ｎａｏ ｕ ｌｉ ｂ ｅａ ｌ ｓ ｅ ｕ ｌ ｆ ｓ ￣ ｍ ｉ Ａ ｔｏ ’ ｄ ｒｓ： ｏ ｅｅｏ ｏ ｓ Ｒ ｓｕｃｓａｄＥ ｖ ｏ ｍ ｎ， ａ ｎ ｏｅｔ ｎ ｅｓｙ ａ ｎ １０ ７ ｈｎ ｕｈ ｒ Ｓ ｄ ｅｓ Ｃ ｌｇ ｆ ｒ ｔ ｅｏｒｅ ｎ ｎｉ ｎ ｅｔＮ ｍｉｇＦｒｓ ｙＵ ｉ ｒ ｔ，Ｎ ｍｉｇ ３ ，Ｃ ｉａ ａ ｌ Ｆ ｅ ｒ ｒ ｖ ｉ ２０
洋葱假单胞菌产脂肪酶条件的优化
洋葱假单胞菌产脂肪酶条件的优化作者：王旭愿，张敏，李成涛，等来源：《湖北农业科学》 2014年第1期王旭愿，张敏，李成涛，沈颖辉，武晶（陕西科技大学教育部轻化工助剂化学与技术重点实验室，西安７１００２１）摘要：采用ＲａｓｈｉｄＮｐ－ｎＰＰ比色法，通过单因素试验和正交试验对洋葱假单胞菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｃｅｐａｃｉａ）产脂肪酶的培养基主要成分和发酵条件进行优化，以提高聚丁二酸丁二醇酯（ＰＢＳ）的生物降解速率。
结果表明，该菌种产脂肪酶的最适培养基为菜子油５．０ｇ／Ｌ，酵母膏０．５ｇ／Ｌ，乳化剂Ｔｗｅｅｎ－６０２．５ｇ／Ｌ，培养基初始ｐＨ８．０；最适培养条件为接种量９％，培养温度３５℃，摇床转速１３０ｒ/min，培养时间３ｄ。
在此优化培养基条件下，洋葱假单胞菌产脂肪酶活性可达３２．９３５Ｕ／ｍＬ。
关键词：洋葱假单胞菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｃｅｐａｃｉａ）；聚丁二酸丁二醇酯（ＰＢＳ）；脂肪酶；优化中图分类号：Ｑ９３９．１１＋２；TQ925+.6文献标识码：Ａ文章编号：0439－８114（２０14）01－0184-04ＯｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎｏｆＰｒｏｄｕｃｔｉｏｎＣｏｎｄｉｔｉｏｎｓｏｆｔｈｅＬｉｐａｓｅｆｒｏｍＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｃｅｐａｃｉａＷＡＮＧＸｕ－ｙｕａｎ，ＺＨＡＮＧＭｉｎ，ＬＩＣｈｅｎg－ｔａｏ，ＳＨＥＮＹｉｎｇ－ｈｕｉ，ＷＵＪｉｎｇ（ＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＡｕｘｉｌｉａｒｙＣｈｅｍｉｓｔｒｙ＆ＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙｆｏｒＣｈｅｍｉｃａｌＩｎｄｕｓｔｒｙ，ＭｉｎｉｓｔｒｙｏｆＥｄｕｃａｔｉｏｎ，ＳｈａａｎｘｉＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＳｃｉｅｎｃｅ＆Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｘｉ’ａｎ７１００２１，Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＴｈｅｃｏｌｏｒｉｍｅｔｒｉｃｍｅｔｈｏｄｏｆＲａｓｈｉｄＮｐ－ｎＰＰｗａｓｕｓｅｄ，ａｎｄｓｉｎｇｌｅｆａｃｔｏｒａｎｄｏｒｔｈｏｇｏｎａｌｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓｗｅｒｅａｐｐｌｉｅｄｔｏｏｐｔｉｍｉｚｅｔｈｅｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎｍｅｄｉｕｍａｎｄｃｕｌｔｕｒｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓｏｆＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｃｅｐａｃｉａ，ｉｎｏｒｄｅｒｔｏｉｍｐｒｏｖｅｔｈｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｏｆｌｉｐａｓｅｔｏｉｍｐｒｏｖｅｔｈｅｂｉｏｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎｒａｔｅｏｆｐｏｌｙ（ｂｕｔｙｌｅｎｅｓｕｃｃｉｎａｔｅ）（ＰＢＳ）．Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｏｐｔｉｍｕｍｍｅｄｉｕｍｃｏｎｔａｉｎｅｄ５．０ｇ／Ｌｒａｐｅｓｅｅｄｏｉｌ，０．５ｇ／Ｌｙｅａｓｔｅｘｔｒａｃｔ，２．５ｇ／ＬｅｍｕｌｓｉｆｉｅｒＴｗｅｅｎ－６０，ｗｉｔｈｔｈｅｉｎｉｔｉａｌｐＨ８．０．Ｔｈｅｏｐｔｉｍｕｍｃｕｌｔｕｒｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ were ９％ｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎ，ｃｕｌｔｕｒｅｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ３５℃，ｓｈａｋｅｒｏｔａｔｉｏｎ１３０ｒ/min ａｎｄｃｕｌｔｕｒｉｎｇ length ３ｄａｙｓ．Ｕｎｄｅｒｔｈｅｏｐｔｉｍｕｍｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ，ｔｈｅｌｉｐａｓｅｆｒｏｍＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｃｅｐａｃｉａｃｏｕｌｄｒｅａｃｈ３２．９３５Ｕ／ｍＬ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｃｅｐａｃｉａ；ｐｏｌｙｂｕｔｙｌｅｎｅｓｓｕｃｃｉｎａｔｅ（PBS）；ｌｉｐａｓｅ；ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ众所周知，大多数的传统塑料难以降解，且不易回收利用，其造成的环境污染引起了社会各界的广泛关注［１，２］。
铜绿假单胞菌产抗菌代谢产物发酵条件的优化
HANZhixue１,CHENG Hongsen２,NIMengxiang１∗ (１．CollegeofLifeScienceandTechnology,ChinaPharmaceuticalUniversity, Nanjing２１００００,China;２．NanjingFirstHighSchool,Nanjing２１００００,China) Abstract:UsingtheisolatedPseudomonasaeruginosaasanexperimentalstrain,theinhibitioneffectofthe strainon Methicillin���r���esistantStaphylococcusaureus(MASR)andthedryweightofthebacteriaasevaluation indexes,weoptimizedmediumcomponentsandfermentationconditionsbythesingle���f���actorexperimentandorＧ thogonalexperiment．Theresultsshowthattheoptimalmediumcomponentsareasfollows:soybeanpowderof ２．５g������L－１,soybeanpeptoneof１０g������L－１,anddisodium hydrogenphosphateof１０g������L－１;theoptimalferＧ mentationconditionsareasfollows:inoculum of２％ ,initialpH valueof７,andfermentationtimeof９６h． Keywords:Pseudomonasaeruginosa;mediumcomponent;fermentationcondition;antibacterialactivity
产碱假单胞菌产精氨酸脱亚胺酶的发酵条件优化
精 氨 酸是 人体 非必 需 氨基 酸 ， 精 氨 酸剥 夺 在 动物 模 型 和 临床 试 验 中 已表 现 出抑 制 肿 瘤 细胞 生 长 、 抑
制血管生成等作 用 ｊ 。精 氨酸脱亚胺 酶 （ ａ ｒ ｇ ｉ ｎ ｉ ｎ ｅ ｄ ｅ ｉ ｍ ｉ ｎ ａ ｓ ｅ ， Ａ Ｄ Ｉ ） 不可 逆地将精 氨酸转化 为瓜氨 酸和 氨 Ｊ ， 是微 生物 精氨 酸 降解 的第 １步 ， 该酶拥有 Ｃ ｙ ｓ － Ｈ ｉ ｓ － Ａ ｓ ｐ结 构单 元 的活性 位 点 Ｊ ， 在 高 等 真 核 生物 中还 未发 现此 酶 ＿ ３ Ｊ 。近 年来 ， Ａ Ｄ Ｉ 在抗 肿瘤 药物 研 究 方 面得 到 了广泛 关 注 ， 研 究表 明 ， Ａ Ｄ Ｉ 可 选 择性 抑制肝 癌 及黑 色素 瘤等 精 氨酸缺 陷 型肿瘤 ， 同时 可抑制 白血 病 细胞 的生长 Ｉ ９ ， 含精 氨 酸和不 含 精 氨
酸 的淀粉 样肽 均 可抑制 ＡＤ Ｉ ， 因此 ， Ａ Ｄ Ｉ 是 老 年 痴呆 病 因和 发 病 机 制 的 研究 指标 ， 还 有 报 道认 为 ， Ａ Ｄ Ｉ
可抑制血管生成 ， 因此 ， 有望成为治疗乳腺癌的药物 。同时 ， 精氨酸的降解产物瓜氨酸能广泛应用于医 药、 食品 、 保健 ＿ ｌ 等各 个 方面 ， 具有 良好 的药 理作 用 。 目前 ， 主要 采 用克 隆 支原 体 来 源 的 Ａ Ｄ Ｉ 并 表 达 于 大 肠 杆 菌来 生产 Ａ Ｄ Ｉ ｌ ｌ ３ — １ ４ ３ ， 但 支原 体是 一种 病原 微生 物 ， 存 在 安 全 性 隐患 。探索 其 他来 源 的精 氨酸 脱 亚胺 酶， 能提 高其安 全 性 。 已有 研 究 者 利 用 粪 肠 球 菌 ¨ Ｊ 、 铜 绿 假 单 胞 菌 、 乳 酸 乳 球 菌 引和 恶 臭 假 单胞 菌 等发酵提取 Ａ Ｄ Ｉ ， 但成本高 ， 工艺不成熟 ¨ ， 因此 ， 发酵条件的优化成了人们不断探索的课题 。笔
假单胞菌增殖培养基中碳源氮源的优化
假单胞菌增殖培养基中碳源氮源的优化假单胞菌是一类重要的生物资源，广泛分布于自然环境中，对环境的生物降解和废物处理有重要的作用。
因此，研究假单胞菌的生长特性和培养条件对其产生应用性价值的物质具有重要的意义。
碳源和氮源是细菌培养基中最基本的营养物质，对细菌的生长和代谢起重要的作用，因此本文研究了假单胞菌增殖培养基中碳源和氮源的优化条件。
一、碳源的优化1.1 糖类糖类是常用的碳源，自然界中常见的有葡萄糖、果糖、半乳糖、麦芽糖等。
在培养基中加入适量的糖类，可以促进细菌的快速生长和代谢活动。
糖类的添加浓度过高会影响假单胞菌的生长，因此需要选择合适的糖类和浓度。
酒精类是常用的碳源之一，包括甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇等。
酒精类的添加可以提高培养基中碳源的浓度，促进假单胞菌的生长和代谢活动，但需要注意酒精的浓度不宜过高，否则会对细胞造成损害。
2.1 氨基酸氨基酸是一类含有氨基基团的有机物，包括丝氨酸、赖氨酸、苏氨酸、蛋氨酸等。
氨基酸是细菌所需的氮源之一，可以促进假单胞菌的生长和代谢活动。
2.3 尿素尿素是一种廉价的氮源，可以促进假单胞菌的生长和代谢活动。
尿素的添加需要控制适当的浓度，否则会对细胞造成损害。
假单胞菌的生长和代谢需要充足的碳源和氮源，并且碳源和氮源的比例需要适当。
通常碳源和氮源的比例为10:1或20:1。
此外，培养基的pH值也是影响假单胞菌生长和代谢的重要因素，pH值通常在6.5-7.5之间。
综上所述，通过对假单胞菌增殖培养基中碳源和氮源的优化，可以促进假单胞菌的生长和代谢活动，提高其产生应用价值的物质的效率和产量，并且为假单胞菌的工业化生产提供了重要的参考。
假单胞菌增殖培养基中碳源氮源的优化
假单胞菌增殖培养基中碳源氮源的优化1. 引言1.1 研究背景假单胞菌是一类广泛存在于自然界中的细菌，其具有很强的致病性和耐药性，对人类健康和农业生产造成了严重威胁。
为了更好地理解假单胞菌的生长特性和提高其培养效率，研究人员开始关注假单胞菌增殖培养基的优化。
目前，假单胞菌增殖培养基中碳源和氮源的选择对假单胞菌的生长和代谢起着至关重要的作用。
优化碳源和氮源的选择可以提高假单胞菌的生长速度和生物产物的产量，从而提高其在生物工业生产中的应用价值。
1.2 研究目的研究的目的是对假单胞菌增殖培养基中的碳源和氮源进行优化，以提高假单胞菌的生长性能和生产效率。
通过针对碳源和氮源的优化选择，可以更好地满足假单胞菌的营养需求，促进其生长和代谢过程。
优化培养基的配方可以降低生产成本，提高生产效率，为假单胞菌在工业生产中的应用提供更好的支撑。
通过本研究的实验验证，将验证碳源和氮源的优化选择对假单胞菌的生长情况和代谢产物的影响，为未来的假单胞菌培养基设计和工业应用提供参考和指导。
通过这一研究，旨在探索假单胞菌增殖培养基优化的可行性，为假单胞菌的应用开发和生产提供更有效的支持。
1.3 意义和价值假单胞菌是一类重要的细菌，具有较高的生物学活性和广泛的应用领域，如环境净化、生物降解和医学应用等。
优化假单胞菌增殖培养基中碳源氮源的选择对于提高假单胞菌的生长速率和代谢活性具有重要意义。
通过合理选择碳源和氮源，可以调控假单胞菌的代谢路径，提高产物的产量和纯度，从而增强其应用性能。
优化后的假单胞菌增殖培养基具有更好的生长性能，更适合大规模生产和应用。
优化假单胞菌增殖培养基也可以减少生产成本，提高生产效率，促进假单胞菌在各领域的应用和推广。
对假单胞菌增殖培养基中碳源氮源的优化研究具有重要的意义和价值。
未来的研究方向将集中在进一步优化增殖培养基组成，提高假单胞菌的生长速率和代谢活性，为假单胞菌的应用提供更多可能性和机会。
2. 正文2.1 假单胞菌的特点假单胞菌是一类广泛存在于自然界中的细菌，其特点主要包括以下几个方面：1. 多样性：假单胞菌属于革兰氏阴性细菌，具有非常丰富的物种多样性，包括假单胞杆菌、假单胞菌、铜绿假单胞菌等。
假单胞菌增殖培养基中碳源氮源的优化
假单胞菌增殖培养基中碳源氮源的优化【摘要】本研究旨在优化假单胞菌增殖培养基中碳源和氮源的选择，以提高其生长和代谢活性。
首先选择合适的碳源和氮源，通过试验设计来确定最佳组合比例。
结果分析表明不同碳源氮源组合对假单胞菌增殖有显著影响，其中某些组合可显著提高细菌的生长速率和产生抗生素的能力。
讨论部分详细分析了优化方案的有效性与可行性，并对未来研究方向进行了展望。
实验结果显示，假单胞菌增殖培养基中碳源氮源的优化效果显著，将为相关领域提供重要的理论与实践指导。
这项研究对优化微生物培养基具有重要意义，有望为相关领域的研究工作提供新思路和方法。
【关键词】假单胞菌，增殖培养基，碳源，氮源，优化，试验设计，结果分析，讨论，效果，研究意义，展望1. 引言1.1 研究背景假单胞菌是一种重要的医学微生物，能够引起各种严重的感染病例。
在临床和实验室研究中，为了培养假单胞菌并研究其生长特性，选择合适的碳源和氮源是至关重要的。
碳源和氮源对假单胞菌的生长、代谢和产生的代谢产物都有着重要的影响。
很多以往的研究表明，适当的碳源和氮源选择可以显著影响假单胞菌的生长速度、生长规律和代谢产物的生成量。
由于不同的假单胞菌菌株可能对碳源和氮源有不同的需求和偏好，因此有必要对不同的菌株进行具体的碳源和氮源选择与优化。
本研究旨在探讨假单胞菌增殖培养基中碳源和氮源的选择与优化，以期为假单胞菌的培养和研究提供更为有效的方法和指导。
通过优化碳源和氮源的配比与种类，可以提高假单胞菌的生长速度和代谢产物的产量，从而为探究假单胞菌的生物学特性和医学应用奠定基础。
1.2 研究目的本研究的目的是优化假单胞菌增殖培养基中的碳源和氮源，以提高菌株的生长速率和代谢产物的产量。
通过合适的碳源和氮源的选择与优化，可以使假单胞菌在培养基中快速增殖，提高生物质的产量，增加目标产物的合成效率。
优化碳源和氮源的种类和浓度，还可以促进假单胞菌的代谢途径，提高其对有机废物和环境中污染物的降解能力。
假单胞菌增殖培养基中碳源氮源的优化
假单胞菌增殖培养基中碳源氮源的优化假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）是一种常见的革兰氏阴性细菌，它在自然界中普遍存在于土壤、水体和植物表面，是一种致病菌，也是一种常见的耐药菌。
它广泛存在于医院环境中，是导致医院感染的重要病原菌之一。
研究假单胞菌的生长规律及其增殖条件对于医疗卫生工作者和科研人员具有重要意义。
培养基是进行微生物实验研究的基础设施，对于细菌的生长和繁殖起着至关重要的作用。
优化培养基的碳源和氮源对于提高假单胞菌的培养效率和产量具有重要意义。
首先要考虑的是碳源的选择。
碳源是细菌生长和繁殖的能量来源，也是构成细菌体的重要组分。
在假单胞菌的增殖培养基中，常用的碳源包括葡萄糖、果糖、乳糖等。
在选择碳源时，需要考虑碳源的可溶性、易消化性和对细菌生长的影响。
在实际操作中，常常根据需要选择合适的碳源，或者将两种或多种碳源混合使用，以获得最佳的生长效果。
在进行假单胞菌增殖培养基中碳源氮源的优化时，需要进行一系列的实验操作和数据分析，以找到最佳的配比和条件。
以下是一种可能的优化方案：通过对不同碳源和氮源的单独使用以及不同比例混合使用进行培养实验，比较其对假单胞菌生长的影响。
通过监测菌液的浑浊度、PH值、细菌数量等指标，评估不同碳源和氮源对于细菌生长的影响，找到对假单胞菌生长影响最大的碳源和氮源。
根据实验结果，确定最佳的碳源和氮源比例。
在不同比例下进行培养实验，比较其对假单胞菌生长的影响，找到最佳的碳源和氮源比例。
对优化后的培养基进行验证实验。
通过在优化后的培养基中进行假单胞菌的大规模培养，监测其生长曲线、菌液浑浊度、PH值、细菌数量等指标，验证优化后的培养基对假单胞菌生长的影响。
通过上述优化方案，可以找到最佳的碳源和氮源配比，提高假单胞菌的培养效率和产量，为相关科研工作和医疗卫生工作提供有力支持。
对于假单胞菌增殖培养基中碳源氮源的优化，可以通过一系列的实验操作和数据分析，找到最佳的配比和条件。
假单胞菌增殖培养基中碳源氮源的优化
假单胞菌增殖培养基中碳源氮源的优化假单胞菌是一种广泛存在于自然环境中的细菌，具有广泛的代谢特性和生物学特性。
它们在食品、水和土壤等环境中发挥着重要作用。
因此，学习如何对假单胞菌进行优化的培养技术至关重要。
本文就假单胞菌增殖培养基中碳源和氮源的优化进行探讨。
碳源是细菌生长和代谢的重要营养素，可以通过代谢途径合成各种生物化学物质。
在假单胞菌的培养过程中，葡萄糖、果糖和麦芽糖等单糖类物质常被选择作为碳源。
由于假单胞菌代谢途径的差异，碳源种类的选择会对菌落形态和菌株生长产生影响。
氮源也是细菌生长和代谢的重要营养素，可以通过代谢途径合成蛋白质、DNA/RNA等生物化学物质。
假单胞菌常选择所需氮源为硫酸铵、氨基酸和蛋白胨等，其中氨基酸可以促进细胞壁的合成，加快菌株的生长速度。
然而，在使用氨基酸作为氮源的过程中，还需要考虑该氨基酸的型态和浓度对细胞生理代谢的影响。
根据碳源和氮源在假单胞菌生理代谢过程中的作用，我们可以通过碳源和氮源的优化，进而优化假单胞菌的生长条件。
例如，当要求快速培养大量假单胞菌时，可以采用葡萄糖和氨基酸作为碳源和氮源。
当要求不同菌株生长特性的表现时，可以通过调整不同类型碳源和氮源配比，促进菌株的生长。
在假单胞菌培养基中，菜单元素还包括磷酸盐、钾盐、镁盐和微量元素等，这些元素也会影响假单胞菌的生长特性。
因此，在实际的假单胞菌培养研究中，需要根据具体实验要求进行培养基成分的组合调整，确保假单胞菌的健康生长。
总之，假单胞菌增殖培养基的碳源和氮源的优化是实现假单胞菌生长、繁殖和代谢的重要途径。
通过灵活和科学的配比调整，可以创造出适用于各业领域研究的培养基。
假单胞菌增殖培养基中碳源氮源的优化
假单胞菌增殖培养基中碳源氮源的优化假单胞菌是一种广泛存在于自然环境中的细菌，它们在土壤、水体和植物表面等地方都有发现。
假单胞菌在环境中扮演着重要的角色，参与了有机物的降解和循环，同时也是一些病原菌的致病因子。
对假单胞菌的研究不仅有助于理解自然界的生物循环，也有助于控制和预防与其相关的疾病。
假单胞菌的培养是进行相关研究的基础，而培养基中碳源和氮源的优化则是保证假单胞菌能够正常生长和繁殖的重要因素。
本文将重点讨论假单胞菌增殖培养基中碳源和氮源的优化问题，以期提供一些有益的参考和借鉴。
一、碳源的选择和优化1. 选择合适的碳源在假单胞菌的培养基中，碳源的选择是至关重要的。
常见的碳源包括葡萄糖、蔗糖、麦芽糖等，它们可以为假单胞菌提供生长所需的能量。
在选择碳源时，需要考虑其溶解度、易于吸收利用和对假单胞菌生长的影响等因素。
不同品种的假单胞菌对碳源的利用能力也有所不同，因此需要根据具体情况进行选择。
2. 优化碳源浓度除了选择合适的碳源外，其浓度也需要进行优化。
一般来说，碳源的浓度会对假单胞菌的生长速率和代谢产物的产量等方面产生影响。
适当增加碳源浓度可以促进假单胞菌的繁殖，但过高的浓度可能会导致产物的积累而影响细胞的生长。
在进行培养基优化时，需要进行一系列的实验来确定最佳的碳源浓度。
氮元素是细胞合成蛋白质和核酸等生物大分子的重要成分，对细菌的生长和繁殖具有非常重要的作用。
在假单胞菌的培养基中，常用的氮源有硝酸盐、氨基酸、尿素等。
选择合适的氮源需要考虑其溶解度、对细菌的毒性、易于吸收利用等因素。
三、其他因素的综合优化除了碳源和氮源外，假单胞菌培养基的优化还需要考虑其他因素的综合影响。
培养基的pH值、氧气传质情况、微量元素和生长因子的添加等，都需要考虑到对假单胞菌的影响。
在进行培养基优化时，需要综合考虑以上因素，并通过一系列的实验来确定最佳的培养条件。
还可以借助一些先进的生物技术手段，比如响应面法、遗传工程等，来进一步优化培养条件，提高假单胞菌的产量和代谢产物的质量。
交替假单胞菌LP621菌株产右旋糖苷酶的培养条件优化
交替假单胞菌LP621菌株产右旋糖苷酶的培养条件优化吕明生;王淑军;房耀维;焦豫良;刘姝;张露;吴彬彬【摘要】从江苏连云港海域分离和筛选到1株产右旋糖苷酶的海洋细菌交替假单胞菌Pseudoalteromonas te-traodonis LP621,通过单因素试验和正交试验对该菌株产右旋糖苷酶培养条件进行优化.单因素试验结果表明,最佳培养时间为24 h,最适产酶温度为25 ℃;产酶pH范围为5.0～11.0,最适产酶pH为6.0;产酶NaCI 浓度范围为1%～10%,NaCI浓度为4%时产酶较高;装液量在25%.麦芽糖、胰蛋白胨和酵母膏促进产酶.利用响应面方法对LP621产右旋糖苷酶的发酵条件进行优化.选择培养基pH、时间、麦芽糖浓度和装液量4因素进行优化,结果为pH 7.07,发酵时间21.94 h,麦芽糖浓度0.42%,装液量为21.88%,酶活为270.1U/mL.【期刊名称】《微生物学杂志》【年(卷),期】2010(030)006【总页数】7页(P11-17)【关键词】右旋糖苷酶;交替假单胞菌属;优化【作者】吕明生;王淑军;房耀维;焦豫良;刘姝;张露;吴彬彬【作者单位】淮海工学院,海洋学院,江苏,连云港,222005;江苏省海洋资源开发研究院,江苏,连云港,222001;淮海工学院,海洋学院,江苏,连云港,222005;江苏省海洋资源开发研究院,江苏,连云港,222001;淮海工学院,海洋学院,江苏,连云港,222005;江苏省海洋资源开发研究院,江苏,连云港,222001;淮海工学院,海洋学院,江苏,连云港,222005;江苏省海洋资源开发研究院,江苏,连云港,222001;淮海工学院,海洋学院,江苏,连云港,222005;江苏省海洋资源开发研究院,江苏,连云港,222001;淮海工学院,海洋学院,江苏,连云港,222005;淮海工学院,海洋学院,江苏,连云港,222005【正文语种】中文【中图分类】Q939;TS275.4右旋糖苷酶(Dextranase,α-D-1,6-Glucan-6-DGlucanohydrolase,EC3.2.1.11),又叫α-葡聚糖酶,是专一切割右旋糖苷(Dextean)中α-1,6糖苷键的水解酶[1]。
洋葱假单胞菌(Pseudomonas cepacia)PCL-3产脂肪酶发酵条件研究
洋葱假单胞菌(Pseudomonas cepacia)PCL-3产脂肪酶发酵条件研究汪小锋;杨江科;闫云君【期刊名称】《中国生物工程杂志》【年(卷),期】2008(28)10【摘要】研究了洋葱假单胞菌(Pseudomonas cepacia)PCL-3发酵产碱性脂肪酶培养条件的优化。
采用单因子试验筛选出糊精为最适碳源,蛋白胨和尿素为复合氮源。
通过Plackett-Burman设计试验,对影响产酶条件的8个相关因子进行评估并筛选出具有显著效应的3个因子:尿素、接种量以及初始pH值。
用最陡爬坡实验逼近显著因子的最大响应区域后,采用响应面分析法,确定尿素、接种量以及初始pH值最优值分别为0.15%,3.05%和8.59。
优化后液体发酵培养基中脂肪酶活力提高到48.88U/ml,比初始酶活25.37U/ml提高了1.93倍。
10L的发酵罐中,脂肪酶活力在52h达到最大,为47.69U/ml。
【总页数】7页(P72-78)【关键词】洋葱假单胞菌PCL-3脂肪酶;Plackett—Burman设计;响应面法;优化【作者】汪小锋;杨江科;闫云君【作者单位】教育部分子生物物理重点实验室华中科技大学生命科学技术学院【正文语种】中文【中图分类】Q939【相关文献】1.洋葱伯克霍尔德菌0107产脂肪酶发酵条件优化研究 [J], 李迅;王友东;刘慧琴;王飞;蒋剑春2.洋葱假单胞菌产脂肪酶条件的优化 [J], 王旭愿;张敏;李成涛;沈颖辉;武晶3.施氏假单胞菌 PS59产脂肪酶发酵条件及脂肪酶洗涤性能优化 [J], 刘金辉;李晓路;姜岩;王海宽4.洋葱伯克霍尔德氏菌Lu10-1产脂肪酶发酵条件优化及酶学性质研究 [J], 张瑶;路国兵;周波;王冰;牟志美5.响应面法优化洋葱假单胞菌产脂肪酶液体发酵工艺 [J], 尹利;阎金勇;杨江科;闫云君因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
洋葱伯克霍尔德氏菌Lu10-1产脂肪酶发酵条件优化及酶学性质研究
洋葱伯克霍尔德氏菌Lu10-1产脂肪酶发酵条件优化及酶学性质研究张瑶;路国兵;周波;王冰;牟志美【摘要】旨在对洋葱伯克霍尔德氏菌（Burkholderia cepacia）Lu10-1产脂肪酶的发酵条件及酶学性质进行研究。
通过单因素和正交实验探讨了碳源、氮源、诱导物、初始pH值、温度等主要发酵参数的影响，并初步考察了温度、pH、金属离子和有机溶剂等对其催化反应的影响。
结果表明，B. cepacia Lu10-1产脂肪酶最佳培养基组成和发酵参数为：可溶性淀粉1.5%，蛋白胨1.5%，橄榄油3 g/L，K2HPO42 g/L，发酵温度32℃，初始pH 9.0，培养48 h酶活达12.4 U/mL，比初始酶活提高了2.7倍。
酶的最适温度和pH值分别为60℃和9，在60℃以下保持100 h酶活仍保持在80%以上，在pH5.0-10.0之间活性稳定，对甲醇、乙醇等有机溶剂耐受性好。
%It is aimed to optimize the fermentation conditions of lipase-producing Burkholder cepacia Lu10-1 and analyze its enzymatic properties. The single factor and orthogonal experiments were adopted to study the major factors that affected the lipase yield, such as carbon, nitrogen, inducer, initial pH, temperature, etc. The impact of temperature, pH, metal ion, and organic solvents on lipase catalytic reaction was also primarily investigated. The optimal medium and culture conditions were as follows:soluble starch 1.5%, peptone 1.5%, olive oil 3 g/L, K2HPO4 2 g/L, temperature 32℃, initial pH 9.0, and fermentation time 48 h, the enzyme activity reached 12.4 U/mL, increased 2.7-fold compared to the initial activity. The optimal temperature and pH were 60℃and 9.0 respectively. The lipase was stable under 60℃for 100 h remaining over80%of the activity and it was also stable at pH 5.0-10.0. Moreover, the lipase had solid tolerance to organic solvent such as methanol and ethanol.【期刊名称】《生物技术通报》【年(卷),期】2015(000)009【总页数】7页(P190-196)【关键词】脂肪酶;洋葱伯克霍尔德氏菌;发酵条件优化;酶学性质【作者】张瑶;路国兵;周波;王冰;牟志美【作者单位】山东农业大学林学院，泰安 271018; 山东农业大学生命科学学院，泰安 271018;山东农业大学林学院，泰安 271018;山东农业大学生命科学学院，泰安 271018;山东农业大学生命科学学院，泰安 271018;山东农业大学林学院，泰安 271018【正文语种】中文脂肪酶（Lipase，EC3.1.1.3），又称三酰基甘油水解酶，不仅催化酯水解反应还能催化酯合成反应和转酯反应，为重要的工业酶之一，广泛应用于生物能源、油脂工业、食品加工、皮革绢纺原料脱脂、洗涤工业、医药及饲料工业等诸多领域［1-3］。
产低温脂肪酶假单胞菌的选育及产酶条件的优化
产低温脂肪酶假单胞菌的选育及产酶条件的优化
产低温脂肪酶假单胞菌的选育及产酶条件的优化
从取自华中农业大学的土样和长江流域及桂林桃花江水样中筛选到一株产低温脂肪酶的适冷菌,初步鉴定为假单胞菌,命名为Pseudomonas sp.YT34-8.对其产酶条件进行优化,得到其最佳发酵条件为:玉米浆 2.00%,豆饼粉 2.50%,蔗糖 1.00%,橄榄油0.57%,MgSO4·7H2O0.05%,K2HPO4 0.10%,发酵温度8℃,初始pH 值7.0,发酵时间48 h,250 mL摇瓶装液量21 mL;摇瓶转速182 r·min-1.在此条件下,其发酵酶活力可达到7.833 U·mL-1.对其所产低温脂肪酶进行初步研究,其最适作用pH值为8.0,最适作用温度为30℃,在pH值5.0～10.0范围内、40℃以下酶活力较稳定.
作者：余琼梁运祥 YU Qiong LIANG Yun-xiang 作者单位：华中农业大学农业微生物学国家重点实验室,武汉,430070 刊名：湖北农业科学ISTIC PKU 英文刊名：HUBEI AGRICULTURAL SCIENCES 年，卷(期)： 2006 45(5) 分类号： Q939.124 关键词：低温脂肪酶适冷菌 Plackett-Burman法响应面分析。
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湖北农业科学2013年第52卷第23期2013年12月湖北农业科学Hubei Agricultural Sciences Vol.52No.23Dec.,2013收稿日期:2013-05-10基金项目:陕西科技大学创新科研团队基金项目(TD10-01);陕西科技大学研究生创新基金项目作者简介:王旭愿(1990-),女,陕西西安人,在读硕士研究生,研究方向为微生物降解高分子材料,(电话)153********(电子信箱)xuyuanguo15@。
众所周知,大多数的传统塑料难以降解,且不易回收利用,其造成的环境污染引起了社会各界的广泛关注[1-2]。
因此,人们投入了大量的精力去研究开发可生物降解的环境友好型材料,聚丁二酸丁二醇酯(PBS)具有良好的生物降解性和力学性能,因而受到了极大的关注[3-6]。
PBS 废弃后,在土壤中微生物的作用下,可降解为低分子量物质,最终降解为对环境无污染的CO 2和H 2O [7]。
在PBS 的生物降解过程中,虽然其行为是由微生物主导,但直接起降解作用的是微生物代谢过程中所产生的脂肪酶,即在脂肪酶的作用下,PBS 主链中的酯键发生水解断裂进而发生降解[8]。
因此,提高微生物代谢生产脂肪酶的能力对于促进PBS 降解,提高PBS 降解速度有着十分重要的影响。
本研究是从洋葱假单胞菌出发,对1株代谢脂肪酶的菌株进行了培养基和发酵条件的优化,以提高其可降解PBS 脂肪酶的代谢产量和活力,为后续微生物降解PBS 基共聚物的研究提供了基础数据。
1材料与方法1.1菌种试验于2012年12月-2013年3月在陕西科技大学教育部轻化工助剂化学与技术重点实验室进行。
洋葱假单胞菌(Pseudomonas cepacia ),由本实验室自主分离筛选并鉴定保存。
1.2培养基菌种保存培养基:牛肉膏0.3g、蛋白胨0.5g、洋葱假单胞菌产脂肪酶条件的优化王旭愿,张敏,李成涛,沈颖辉,武晶(陕西科技大学教育部轻化工助剂化学与技术重点实验室,西安710021)摘要:采用Rashid N p-nPP 比色法,通过单因素试验和正交试验对洋葱假单胞菌(Pseudomonas cepacia )产脂肪酶的培养基主要成分和发酵条件进行优化,以提高聚丁二酸丁二醇酯(PBS )的生物降解速率。
结果表明,该菌种产脂肪酶的最适培养基为菜子油5.0g /L ,酵母膏0.5g /L ,乳化剂Tween-602.5g /L ,培养基初始pH 8.0;最适培养条件为接种量9%,培养温度35℃,摇床转速130rmp ,培养时间3d 。
在此优化培养基条件下,洋葱假单胞菌产脂肪酶活性可达32.935U /mL 。
关键词:洋葱假单胞菌(Pseudomonas cepacia );聚丁二酸丁二醇酯(PBS );脂肪酶;优化中图分类号:Q939.11+2文献标识码:A文章编号:0439-8114(2013)23-5800-03Optimization of Production Conditions of the Lipase from Pseudomonas cepaciaWANG Xu-yuan ,ZHANG Min ,LI Chen-tao ,SHEN Ying-hui ,WU Jing(Key Laboratory of Auxiliary Chemistry &Technology for Chemical Industry,Ministry of Education,Shaanxi University of Science &Technology,Xi’an 710021,China)Abstract :The colorimetric method of Rashid N p-nPP was used,and single factor and orthogonal experiments were applied to optimize the fermentation medium and culture conditions of Pseudomonas cepacia,in order to improve the production of li⁃pase to improve the biodegradation rate of poly(butylene succinate)(PBS).The results showed that the optimum medium con⁃tained 5.0g /L rapeseed oil,0.5g /L yeast extract,2.5g /L emulsifier Tween-60,with the initial pH 8.0.The optimum cul⁃ture conditions contained 9%inoculation amount,culture temperature at 35℃,shake rotation 130rpm and culturing 3days.Under the optimum conditions,the lipase from Pseudomonas cepacia could reach 32.935U /mL.Key words :Pseudomonas cepacia ;poly(butylenes succinate);lipase;optimization5830第23期图2不同氮源对洋葱假单胞菌代谢脂肪酶活性的影响氮源NaCl 0.5g、琼脂2g、蒸馏水100mL、pH 7.0。
菌种活化培养基:牛肉膏0.3g、蛋白胨0.5g、NaCl 0.5g、蒸馏水100mL、pH 7.0。
基础发酵培养基:菜子油1g、(NH4)2SO 40.1g、MgSO 4·7H 2O 0.05g、KH 2PO 40.05g、K 2HPO 40.05g、蒸馏水100mL、pH 8.0。
培养基于121℃下灭菌20min。
将洋葱假单胞菌菌种接种到斜面保存培养基上,于37℃培养箱中培养24h,然后用接种环挑取菌体接于活化培养基中,置于35℃,130rpm 摇床上培养24h 后,按6%接种量接入基础发酵培养基中,在250mL 锥形瓶中装100mL 基础发酵培养基,在同样条件下培养48h。
1.3方法1.3.1脂肪酶活性的测定方法以酶活力为检测指标,将培养48h 后的发酵液于3000r /min 下冷冻离心分离12min,除去菌体,取其上层清液即制得粗酶液,于4℃下保存备用。
采用Rashid N p-nPP 比色法[9]测定发酵液中脂肪酶的活性。
在上述条件下,每分钟水解产生1μmol 对硝基苯酚(p-nP)所需的酶量定义为1个酶活单位(U)。
1.3.2洋葱假单胞菌产酶条件的单因素试验从基础发酵培养基出发,研究不同碳源、氮源、培养温度、培养基初始pH、摇床转速、接种量、乳化剂及乳化剂含量对洋葱假单胞菌产脂肪酶的影响,并对其进行分析比较。
1.3.3培养基优化正交试验根据单因素试验结果,采用L 9(34)正交试验优化发酵培养基各组分,正交试验验设计因素和水平见表1。
1.3.4发酵条件优化正交试验根据单因素试验结果,选择接种量、温度、摇床转速和培养时间这4个发酵影响因素,采用L 9(34)正交试验优化发酵条件,正交试验设计因素和水平见表2。
2结果与分析2.1单因素试验2.1.1不同碳源对洋葱假单胞菌代谢脂肪酶活性的影响假单胞菌能利用的碳源种类很多[10],本试验中选取了7种物质分别作为发酵培养基的惟一碳源。
如图1所示,洋葱假单胞菌代谢脂肪酶的最适碳源为菜子油,以菜子油为惟一碳源时洋葱假单胞菌所代谢脂肪酶的活性最高,并且在3组平行试验中,脂肪酶活性相差不大,说明以菜子油为碳源时洋葱假单胞菌产酶量及酶活性较高且相对稳定,所以确定用菜子油作为发酵培养基的碳源。
2.1.2不同氮源对洋葱假单胞菌代谢脂肪酶活性的影响氮素对微生物的生长发育有着重要意义,微生物利用氮素在细胞内合成氨基酸和碱基,进而合成蛋白质、核酸等细胞成分[10]。
从图2可以看出:以酵母膏为氮源时,洋葱假单胞菌所代谢脂肪酶的活性最高,而其他7种物质作为氮源时,酶活性均低于酵母膏为氮源时的酶活性,所以采用酵母膏作为洋葱假单胞菌发酵培养基的氮源。
2.1.3不同培养温度对洋葱假单胞菌代谢脂肪酶活性的影响培养温度的变化能够影响微生物体内许多生化反应,从图3中可以看出,洋葱假单胞菌所代谢脂肪酶的活性随温度的升高呈先增加后减小的趋势,在培养温度为35℃时脂肪酶活性达到表1培养基优化正交试验因素和水平水平123碳源(A )//g/L5.010.015.0氮源(B )//g/L0.51.01.5乳化剂(C )//g/L2.53.03.5因素pH(D )8.08.59.0表2发酵条件优化正交试验因素和水平水平123接种量(E )//%8910温度(F )//℃343536摇床转速(G )//r/min 130140150因素培养时间(H )//d3452520151050橄榄油菜子油甘露醇糊精淀粉蔗糖葡萄糖碳源图1不同碳源对洋葱假单胞菌代谢脂肪酶活性的影响25201510505831湖北农业科学2013年图6不同接种量对洋葱假单胞菌代谢脂肪酶活性的影响35302520152527303235374042温度//℃最高。
说明在培养温度较低时,微生物生长缓慢,其新陈代谢作用所分泌的胞外脂肪酶量较小,而当培养温度高于最适培养温度时,微生物细胞功能急剧下降,易于衰老和死亡。
2.1.4不同培养基初始pH 对洋葱假单胞菌代谢脂肪酶活性的影响环境的酸碱度与微生物的代谢生长和产酶关系密切,pH 影响微生物原生质膜所带电荷的极性和渗透性等。
由图4可知,洋葱假单胞菌所代谢脂肪酶的活性随pH 的增大呈先增加后减小的趋势,且在培养基pH 为8.5时活性达到最高。
由此可知,洋葱假单胞菌所代谢的脂肪酶为碱性脂肪酶,这与国内外相关文献中的报道相符[11,12]。
2.1.5不同摇床转速对洋葱假单胞菌代谢脂肪酶活性的影响摇床转速的大小直接关系到发酵液溶氧量的多少,氧含量是影响微生物生长的因素之一,不同的微生物对氧的需求量不同,因此需要考查不同摇床转速对洋葱假单胞菌产脂肪酶活性的影响。
如图5所示,洋葱假单胞菌所代谢脂肪酶的活性在摇床转速为140r /min 时活性最高,并且在3次平行试验中,脂肪酶活性相差不大,故其最适摇床转速为140r /min。
随着摇床转速的增大,洋葱假单胞菌所代谢脂肪酶的活性呈先增加后减小的趋势。
说明转速过低时,通气量小,影响菌体的生长繁殖,营养物质难以被有效利用,而当转速过高时,通气量又太大,生长繁殖过快,菌体易过早进入死亡期,产生的脂肪酶较少,因此脂肪酶活性差。