舒洛地特对高糖联合脂多糖作用下人腹膜间皮细胞糖萼表达影响

［中图分类号］ Ｒ459. 5
［文献标识码］ B
［文章编号］ 2095 － 1434. 2019. 10. 048
腹膜透析（ PD） 是终末期肾脏病患者（ ESＲD） 的重要 肾脏替代疗法之一。腹膜纤维化和腹膜炎是腹膜透析治 疗的主要并发症，是腹膜透析失败的主要原因。研究表明， 糖萼是腹膜的 第 一 道 保 护 屏 障［1］。 实 验 选 择 测 定 糖 萼 的 组成成分透明质酸（ HA） 和核心蛋白聚糖（ DCN） 观察糖萼 的变化。舒洛地特（ SLX，肝素类似物） 是糖萼的一个组成 成分，近年发现 SLX 具有肾脏保护作用［2］。因此，实验观 察 SLX 对高糖（ HG） 及脂多糖（ LPS） 作用人腹膜间皮细胞 （ HPMCs） 糖萼表达的影响。 1 材料与方法 1. 1 材料与试剂 人腹膜细胞株由医大一院肿瘤外科那 迪教授馈赠。改良型 ＲPMI － 1640 培养基（ HyClone） ； 四季 青胎牛血清（ 浙江天杭生物科技有限公司） ； 胰蛋白酶（ HyClone） ； LPS（ Sigma） ； 人透明质酸（ HA） ELISA 试剂盒（ Bio － Swamp） ； 人核心蛋白聚糖（ DCN） ELISA 试剂盒（ ＲD） ； 舒 洛地特（ 意大利阿尔法韦曼制药公司） 。 1. 2 细胞培养与分组 （ 1） HPMCs 常规培养，待细胞融合 达 90% 时用于实验。（ 2） HPMCs 随机分为下列各组： 1. 对 照组： 只加 1% 胎牛血清的 1640 培养基； 2. HG + LPS 组： 2. 5% HG + 10 μg / ml LPS 作 用 48 h； 3. HG + LPS + SLX 组： 2. 5% HG + 10 μg / ml LPS + 不 同 浓 度 舒 洛 地 特 （ 50 μg / ml，400 μg / ml，800 μg / ml，1 200 μg / ml） 作用 48 h。 1. 3 ELISA 法检测细胞上清液 HA 及 DCN 的表达 具体 步骤参照试剂盒说明书。 1. 4 统计学分析 全部数据采用 SPSS21. 0 医用软件进行 统计学处理。计量资料采用 x珋± s 表示，组间比较采用单因
分透明质酸（ HA） 、核心蛋白聚糖（ DCN） 表达的影响。方法 将 HPMCs 随机分为对照组、HG + LPS 组、HG +
LPS + SLX 组： 2. 5% HG + 10 μg / ml LPS + 不同浓度 SLX（ 50 － 1 200 μg / ml） 作用 48 h。ELISA 法检测各组上清液
大量研究表明，腹膜透析液的生物不相容性可以促进 腹膜间皮细胞 的 凋 亡，细 菌 感 染 可 致 腹 膜 炎，最 终 导 致 腹 膜纤维化及超滤衰竭的发生。腹膜间皮细胞（ PMCs） 损伤 后糖萼 是 腹 膜 的 第 一 道 保 护 性 屏 障，糖 萼 由 糖 胺 聚 糖 （ GAGs） 、蛋白聚糖和磷脂质组成，糖胺聚糖包括透明质酸 （ HA） 、硫酸软骨素或硫酸皮肤素、硫酸乙酰肝素和硫酸角 质素 4 个成分； 蛋白聚糖主要由核心蛋白聚糖（ DCN） 和二 聚糖合成［3］。目前体外研究糖萼主要检测指标为 HA 和 DCN。国内外已有报道在透析液中同时发现 HA、DCN 和 二聚糖。在建立腹膜透析患者的透析液中透明质酸水平 增加以及发作腹膜炎的患者其透明质酸也会进一 步 上 调［4］。DCN 在细胞增殖分化、基质形成、维持内环境稳定 以及在器官发育过程中的结构与功能完整性方面起重要 作用。有研究发现［5］，在肝纤维化中外源性补充 DCN 可以 抑制纤维化相关基因的表达，缓解肝纤维化形成。舒洛地 特（ 肝素类似物） 是目前临床上一种新 的 GAGs 类 制 剂，
中 HA、DCN 的蛋白表达情况。结果 HG + LPS 能轻度上调 HA 和 DCN 的表达，SLX 作用后能显著上调 HA 和
DCN 的表达。结论 HG + LPS 刺激可以反应性上调糖萼表达，但其表达不足以保护腹膜，而补充 SLX 后糖萼表
达显著上调，SLX 具有修复受损糖萼的作用。
［关键词］ 人腹膜间皮细胞； 糖萼； 高糖； 脂多糖
第 30 卷 第 10 期
航空航天医学杂志
2019 年 10 月
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GAGs 是糖萼重要组成成分。有报道表明，在高糖诱导的 大鼠腹膜间皮细胞给予 SLX 干预后能抑制 TGF － β1、MCP － 1 的表达［6］。研究中，HG 联 合 LPS 作 用 HPMC 后，HA 和 DCN 的蛋白含量轻度增加，可能为细胞自身保护性反 应，外源性补充 SLX 后，HA 和 DCN 蛋白含量明显增多。 提示 SLX 能够修复糖萼进而起到保护腹膜的功能，从而为 临床防治腹膜失超滤提供一种新的治疗手段。
作者单位： 1 沈阳二四二医院，110034 2 辽宁省人民医院肾内科，110015
* 通讯作者
素方差分析，P ＜ 0. 05 具有统计学意义。 2 结果 2. 1 SLX 对 HG 及 LPS 作用下 HA 表达的影响 与对照 组相比，2. 5% HG + 10 μg / ml LPS 能够上调 HPMCs HA 表 达水平，差异具有统计学意义（ P ＜ 0. 01） ； 与 HG + LPS 组 相比，不同浓度的 SLX 作用 HPMCs 后 HA 含量明显上调， 且随着 SLX 浓度的增加，HA 的表达逐渐升高，组间差异有 统计学意义（ P ＜ 0. 01） 。 2. 2 SLX 对 HG 及 LPS 作用下 HPMCs DCN 表达的影响 与对照组相比，2. 5% HG + 10 μg / ml LPS 上调 DCN 的水 平； 与 HG + LPS 组 相 比，不 同 浓 度 SLX 作 用 HPMCs 后 DCN 含量显著上调，且随着 SLX 浓度的增加，DCN 的表达 逐渐升高，组间差异有统计学意义（ P ＜ 0. 01） 。 3 讨论
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Vol. 30 No. 10
Journal of Aerospace Medicine
Oct 2019
舒洛地特对高糖联合脂多糖作用下人腹膜间皮细胞糖萼表达影响
边爱淑1* 胡 晔2
［摘要］ 目的 研究舒洛地特（ SLX） 对高糖（ HG） 联合脂多糖（ LPS） 作用人腹膜间皮细胞（ HPMCs） 糖萼组成成