蛋白印迹电泳液配置方法
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蛋白印迹电泳液配置方法说实话蛋白印迹电泳液配置这事,我一开始也是瞎摸索。
我试过好多种方法,也失败过不少次,现在总算有点经验了。
首先呢,你得知道蛋白印迹电泳液有不同的组份,主要有Tris碱、甘氨酸和SDS这些东西。
我就先说说常规的Tris - 甘氨酸- SDS电泳缓冲液的配置吧。
我一开始总是搞不清Tris碱和甘氨酸的量。
那Tris碱啊,就像是做饭时盐的关键量一样,特别重要。
一般来说,你要配1L的电泳液,Tris碱大概要用到。
我第一次配的时候可傻了,随便抓了一点,结果跑电泳的时候根本就不正常。
后来我才知道,这个量得精确,就像烤蛋糕一样,面粉的量不对,蛋糕那肯定就烤不好啊。
甘氨酸呢,这个量是每升。
我记得有次把甘氨酸的量弄错了,结果跑出来的条带歪歪扭扭的,就像喝醉了的人走路。
SDS也要加啊,它大概是1g每升,这个就像一个小助手,能让蛋白带着负电荷,在电泳的时候朝着正确的方向跑。
然后就是把这些东西都加到800ml左右的去离子水中。
去离子水很重要啊,就像纯净血液一样,要是水里有杂质,就像血液里有垃圾,那肯定会影响整个电泳过程的。
我在把这些组份溶解的时候也有问题。
Tris碱和甘氨酸比较好溶解,但是SDS不太好溶。
我一开始只是简单搅拌,发现它总是结成小块小块的,就像糖在冷咖啡里不溶解一样。
后来我才知道得加热一下,就像冲速溶咖啡的时候得用热水才能冲开一样,适当加热后,SDS就能溶得很好了。
溶解完了之后,再用去离子水把溶液加到1L。
这里我还犯过一个错,我没有考虑到那些组份溶解后可能会占一定的体积,结果溶液加多了,都溢出来了。
这就提醒我,做什么事情都得留意一下小的细节。
还有啊,你配好的电泳液要放在合适的温度保存,如果放的地方太热或者太冷,就像人住在特别冷或者特别热的地方会不舒服一样,电泳液也会变化,影响后面的使用。
总之啊,蛋白印迹电泳液的配置得仔细点,多试几次有了经验就好了。
我现在配起来就顺利多了,不过偶尔还是得小心着点,毕竟一不小心就可能弄错某个地方。
我还试过一些特殊的电泳液配置,比如加一些特殊的添加剂什么的。
不过那个就更复杂了,等你这个常规的掌握好了再说吧。
比如说,我曾经为了让蛋白跑得更清晰,试着加一点β- 巯基乙醇,但是那个量又不知道怎么控制,加少了没效果,加多了反而干扰电泳。
哎,这探索的路上就是有很多坎儿啊。
但不管怎么样,多做尝试总是没错的。
先把基础的电泳液配置弄熟练,这可是蛋白印迹实验成功的一个重要因素呢。