Tc1Mariner转座子超家族在褶皱臂尾轮虫中的进化和表达分析

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点研究发展计划项目!"$"$4.*$I$6$$""资助 2W77?8G<DTEGR</AG>?@AB`<E' h *%8?=8AH?[+R>@A!"$"$4.*$I$6$$""
收稿日期#"$"6O$#O$!(修订日期#"$"6O$!O$: 作者简介#范正杰!6II!%"$男$硕士生$主要从事转座子方面的研究'&OHA>B#[9dP"YY9C?H !""!通讯作者#&OHA>B#YdRA@="?WC9<DW9C@
转座子在 基 因 组 中 的 分 布 并 非 是 随 机 的$部 分 转 座子与一些 功 能 元 件 有 密 切 的 联 系*6:O6N+$转 座 子 不 仅 影响了基因组的结构$还参与了基因表达调控的过程$
例如在人类和小鼠中发现E,= 插入的数量与基因差异 表达存在相关 性*6J+' 在 大 鼠 和 小 鼠 中 发 现$长 末 端 重 复序列!-?@=G<8H>@AB8<7<AG<D$-3'"和 长 散 在 重 复 序列!-?@=>@G<8F7<8F<D@WCB<A8<B<H<@GF$-(/&"与基 因表达正相关*6I+' 此 外$转 座 子 插 入 到 基 因 或 基 因 侧 翼区域也可能带来基因功能突变*"$+'
!!转 座 子 !38A@F7?F?@F"$又 被 称 为 转 座 元 件 !38A@FO 7?FATB<<B<H<@GF$3&F"$是一段能通过非同源重组在宿 主基因组内或基因组间进行移动的散在分布的重复序 列*6+'真核生物的转座子按转座机制可分为两大类#0类 元件即逆转录元件$是通过逆转录酶使用,复制O粘贴-的 机制进行转座的 '/,转座子(1类元件 */, 转座子$则 是使用基于 */,的,剪切O粘贴-转座模式直接将转录子 从原始位点整合至目标位点的转座子$其中最大的亚纲 是两端有末端反向重复序列!3<8H>@AB>@\<8G<D8<7<AG$ 3('"结构的 3('转座子$包含着分布广泛且种类众多的 超家族$例如 P;M)G+%-"$% 超家族'P;M)G+%-"$% 转座 子超家族可能是自然界中分布最广的转座子超家族$在 轮虫&真菌&植物&鱼类和哺乳动物等多种生物中都有其 存在$然而其绝大多数是失活突变*"O#+$且它因 P;M 和
褶皱 臂 尾 轮 虫 转 录 组 数 据 !]>?78?P<CG#%'U/, N"$IN""由本 实 验 室 测 序 分 析 获 得$取 自 J 个 发 育 阶 段#非 混 交 胚 胎&非 混 交 雌 性&雄 性&雄 性 胚 胎&携 带 雄 性胚胎的混交雌性&携带休眠卵的混交雌性&新产休眠 卵&休眠三个月后的休眠卵 !见图 6"'使用 g<@?H>CO 'A@=<F软件*K"+及8G8ACQBAE<8软件*KK+对转座子及基因 结构进行了统计$并 且 以 基 因 两 侧 的 !$$$T7 的 长 度 分别作 为 基 因 的 上 游 和 下 游 部 分' 转 录 组 数 据 进 行 8<ADF过滤$并使用 23,' 软件*K#+进行比对得到 2,; 文件$再 使 用 2AHG??BF软 件*K!+转 换 为 按 名 字 排 序 的 ],; 文件并用于后续的分析'将基因注释&转座子注 释文件和各个时期转录组进行比对结果$使用 3&G8A@O FC8>7GF软件*K:+进行C?W@GF统计$并使用 '语言软件中 的 *&F<Y"软件*KN+进行标准化及处理$使用D7BE8&[ACO G?<SG8A*KJ+&.ACG?;>@<' 软件*KI+进行平行组及 各 个 组 之间 的 主 成 分 分 析 以 确 保 质 量$最 后 用 3]G??BF 软 件*#$+来得到各个发育时期的所有转座子及基因的 .%O `; 表达量'规定只有在各个发育时期 .%`;5K时 认为该转座 子 有 表 达$进 行 筛 选 后 将 有 表 达 的 转 座 子 使用 '语言软件中的CBWFG<8%8?[>B<8软件*#6+进行富集分 析以获得转座子家族$对富集到的转座子家族与临近基 因的各世代表达进行 %<8F?@相关性分析$以绝对值$L! 作为相关的系数标准$使用 '语言软件中的==7B?G"*KJ+进 行绘图'
褶皱臂尾轮虫!Q%+;*-&"=6),-;+#-,-6"在分类学上 隶属于轮虫动物门!'?G>[<8A"$单巢纲!;?@?=?@?@GA"& 游泳目!%B?>H>DA"&臂尾轮虫科!]8ACR>?@>DA<"&臂尾轮 虫属!Q%+;*-&"=6"$是目前唯一能在海水养殖中实现规 模 化 养 殖 的 轮 虫 $具 有 抗 逆 性 强 &营 养 丰 富 &繁 殖 快 和 游 动 慢 等 特 点 $因 此 该 物 种 成 为 海 水 鱼 虾 蟹 类 幼 体 重 要的开口饵料 ' *"6+ 同时褶皱臂尾轮虫具有典型的孤 雌生殖世代和有性生殖世代交替的兼性繁殖生活史$ 会在外界环境变化$如温度&营养&种群密度和 75 溶 解氧剧变时进入混交世代'先前的转座子对于轮虫 门基因组影响的研究大多关注含量及结构*""+$而本研 究 基 于 褶 皱 臂 尾 轮 虫 基 因 组 数 据 $针 对 褶 皱 臂 尾 轮 虫 基因附近 的 转 座 子 家 族 进 行 鉴 定 和 富 集$并 针 对 其 P;M)G+%-"$% 超家族进行了进化和表达分析$以从功
P;M)G+%-"$% 转座子的长度在 6!!QT之间$编 码"J"!K#!个氨基酸的转座酶$其两侧有"个 3('$且 3(' 长度 在 6N!66$$T7 之 间*K$N+'来 自 不 同 P;M) G+%-"$% 转座子家族的转座酶蛋白序列并不十分相似$ 但都具有两个特征结构域#一 个 包 含 螺 旋O转 角O螺 旋 !5<B>SO3W8@O5<B>S$535"氨基末端$用于识别和结合 3('(另一个包含 ***)& 羧基末端催化基序结构域$
第!"卷!第#期!
! "$""年#月
中国海洋大学学报
%&'()*(+,-).)+&,/ 0/(1&'2(34 ).+5(/,
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P;M)G+%-"$% 转座子超家族在褶皱臂尾轮虫 中的进化和表达分析"
范正杰6王玉珏6张全启6"K""
!69中国海洋大学海洋生物遗传学与育种教育部重点实验室$山东 青岛 "::$$K( "9青岛海洋科学与技术试点国家实验室 海洋渔业科学与食物产出过程功能实验室$山东 青岛 "::"KN(
其它寄主和寄生体间发现了 G+%-"$% 转座水平转移的 现象$表明 寄 生%寄 主 关 系 可 能 在 转 座 子 水 平 转 移 中 占重 要 地 位*J+' 该 现 象 存 在 于 海 洋 甲 壳 类 动 物 之 间*I+&不同目昆虫之间*6$O66+$甚至存在于不同门的生物 之间$如人类和寄生线虫之间的转移*6"+'然而$目前还 不清楚转座子是如何侵入新的基因组的'参与这种水 平转移的潜在载体是外部寄生者$如螨虫!可能是果蝇 中 %元件水平转移的载体*6K+"4 还是内部寄生者$如病 毒*6#+4 目前针对 P;M)G+%-"$% 的水平转移在昆虫中 报道较多*6!+'
能的视角 去 探 索 P;M)G+%-"$% 超 家 族 在 褶 皱 臂 尾 轮 虫基因组中扮演的角色'
6!材料与方法
696 褶皱臂尾轮虫基因组重复序列注释 褶 皱 臂 尾 轮 虫 基 因 组 数 据 !]>?78?P<CG#%'U/,
N6II#J"和基 因 注 释 信 息 由 本 实 验 室 分 析 获 得' 重 复 序列注释方法分为同源序列比对和从头预测两类'同 源序列比对方法基于 '<7]AF<*"K+$使用 '<7<AG;AFQO <8*"#+和 '<7<AG78?G<>@HAFQ*"!+软件识别与已知重复序 列相 似 的 序 列' 从 头 预 测 使 用 -3'5.(/*&'*":+$ %>B<8*"N+$'<7<AG2C?WG*"J+$'<7<AG;?D<B<8*"I+等 软 件# 首先建立从头测序重复序列库(再通过 '<7<AGHAFQ<8 软件 预 测' 此 外$使 用 3'.*K$+!RGG7#))GA@D<H9TW9 <DW)G8[)G8[9RGHB"寻 找 基 因 组 中 串 联 重 复 序 列 !3A@O D<H8<7<AG"'重复序列的注释均使用软件默认参数' 将 '<7<AG;?D<B<8&'<7<AG2C?WG&%>B<8&-3'5[>@D<8软件预 测出来的结果结合 '<7]AF<库采用 0CBWFG*K6+的软件!遵 从J$OJ$OJ$ 原则"进行整合获得最终注释结果' 69" 转座子及邻近基因表达分析
K9中国海洋大学三亚海洋研究院 海南省热带水产种质重点实验室$海南 三亚 !N"$$$"
摘!要#!为了探究 P;M)G+%-"$% 转座子超家族对褶皱臂尾轮虫!Q%+;*-&"=6),-;+#-,-6"基因组结构和基因表达调控的影 响$本研究基于褶皱臂尾轮虫的基因组和转录组数据$对褶皱臂尾轮虫的重复序列进行了注释$并对褶皱臂尾轮虫的转座 子的表达和其临近基因的表达进行了统计和富集$在基因上下游及内部区域富集到了6$个转座子家族!其中K个家族属 于P;M)G+%-"$% 超家族"'在针对褶皱臂尾轮虫的P;M)G+%-"$% 超家族分析中$共发现其N个亚家族#P;M!**K#&"&P;\ !**K!*"&G+%-"$%!**K#*"&R&3&!**S*"&<+3+"!**K$*"&P-33$%!**K")K:*"和 :&#M!**K$*"$并主要分布在基因间 区$对转座酶催化区域的结构和系统发育分析显示拥有完整转座酶的K个亚家族!P;M&P;\ 和R&3&"保守性强且聚类情 况良好'基于转录组数据发现各个家族的表达模式较为相似$在雄性阶段表达较高'P;M)G+%-"$% 超家族临近基因的功 能大量涉及到环境信息处理和 生 物 发 育 调 节$反 映 了 褶 皱 臂 尾 轮 虫 基 因 组 对 环 境 的 适 应' 本 研 究 通 过 对 褶 皱 臂 尾 轮 虫 P;M)G+%-"$% 转座子超家族在基因组中的进化和表达进行系统分析$为从功能角度认知P;M)G+%-"$% 转座子并理解P;M) G+%-"$% 对基因组进化的作用提供了新的线索' 关键词#!褶皱臂尾轮虫(P;M)G+%-"$%(转座子(系统发育(表达分析 中图法分类号#!a6NK!!!!!文献标志码#!,!!!!!文章编号#!6:N"O!6N#!"$"""$#O$:"O6K #!6$96:##6)P9C@Q>9RDST9"$"6$6#N 引用格式#!范正杰$王玉珏$张全启9P;M)G+%-"$% 转座子超家族在褶皱臂尾轮虫中的进化和表达分析*U+9中国海洋大 学学报!自然科学版"$"$""$!"!#"#:"ON#9 .A@^R<@=P><$XA@=4WPW<$^RA@=aWA@Y>9&\?BWG>?@A@D<S78<FF>?@?[GR<P;M)G+%-"$%FW7<8[AH>BE>@Q%+;*-&"=6),-;+' #-,-6*U+9%<8>?D>CAB?[)C<A@0@>\<8F>GE?[+R>@A$"$""$!"!#"#:"ON#9
G+%-"$%合称而得名*!+'其中P;M 转座子于秀丽隐杆线 虫 !D+$"&%*+7K-#-6$,$3+"6"基 因 组 研 究 时 被 发 现*:+$ G+%-"$%是最小的自主 */,转座子之一$以其水平转移 的倾向而闻名$目前已经发现其在动物&植物&真菌中均 广泛分布$即使在蛭形轮虫这类具有高转座抑制的物种 中$G+%-"$% 转座子也 通 过 其 强 大 的 不 依 赖 宿 主 的 特 性 而大量的存在与繁殖*#+'
#期
范正杰$等#P;M)G+%-"$% 转座子超家族在褶皱臂尾轮虫中的进化和表达分析
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其第一和第二个天冬氨酸!*"残基之间至少有I"个氨 基酸$而第 二 个 天 冬 氨 酸 !*"残 基 和 第 三 个 天 冬 氨 酸 !*"残基或谷 氨 酸 残 基 !&"之 间 的 距 离 是 变 量' 目 前 P;M)G+%-"$% 超家族大致可根据此数目分为N个主要 亚 家 族$分 别 为 **K#&!P;M"&**K#*!(+%-"$%"& **S* !)&3&"&**KN* !HA3"&**KN&&**KI* 和 **#6*!%&6+"'
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