白血病与砒霜治疗PPT课件

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2. 荧光信号
荧光素吸收激光能量 荧光素将吸收能量释放，转换为
振动能和热能 释放较入射光波长更长的光量子
荧光素与特异抗体结合 荧光抗体与细胞抗原结合越多，产生的荧光信号越强
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荧光检测器
FALS Sensor
Freq
Fluorescence detector (PMT3, PMT4 etc.)
全反式维甲酸 30-
60mg/d×45天。
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诱导分化与促凋亡
促细胞凋亡
针对APL的具有中医特色特殊治 疗方法：砷制剂（砒霜、雄黄）。
NAP 正常或↑ 明显减低 正常或↑
NSE （-） （-）-（+） （+）被NaF↓
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MICM分型
M
I
C
M
M0
DR、CD13、33、34
M1
除CD15-/+外，余同M0
5/7、t（9；22） 无一致发现
M2
DR、CD13、33，CD34少
AML/ETO
M3 CD13、15、33 、DR-
骨髓象：多数增生活跃及以上，分 类中以原始细胞+幼稚细胞≥30% （FAB，髓系ANC），（2000年 WHO标准：AML≥20%ANC）正 常造血受到抑制。
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组织化学染色
染色 POX
PAS
ALL
AML
AMOL
（-） 分化差（-）-（+） （-）-（+） 分化好（+）-（+++）
（+）-（++）（-）~（+） （-）-（+）
急性髓细胞白血病（AML）-M0、M1、 M2、M3、M4、M5、M6、M7。
慢性粒细胞白血病（CML）、慢性单核 细胞白血病（CMOL）、慢性淋巴细胞 白血病（CLL）、慢性粒单核细胞白血 病（CMML）
浆细胞白血病（PCL）、多毛细胞白血
病（HCL）、幼淋巴细胞白血病，EL、
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病因和发病机制
Molecular Methods the Ph Chromosome
Fluorescence in situ hybridisation (FISH)
Interphase
Metaphase
Courtesy of Charles Sawyers, UCLA.
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细胞遗传学
Cytogenetic Abnormality of CML:
PML/RARa
t（8；21） t（15；17）
M4 CD14、15、DR
11q23、Inw（16）
M5 CD33＞13、CD34-/+ M6 DR、CD13 -/+ 、33 -/+
M7 CD41、61、34，CD33 -/+ 、DR-/+ 21三体
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WHO分型
Ⅰ. AML伴有重现性细胞遗传学易位 AML伴有t（8;21）（q22;q22）.AML1
Hale Waihona Puke 编辑版ppt49临床表现
发热：与白血病本身和感染相关。 出血：与血小板减少、凝血障碍（如DIC）相关。 贫血：与骨髓白血病细胞异常增殖，使正常造
血受到抑制相关。
组织器官浸润：肝脾淋巴结肿大、骨骼疼痛、
齿龈增生、皮疹及皮下结节等；急淋常累及神经 系统及睾丸等。
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实验室检查
血象：WBC正常、增多或减少，但 DC常可见原始+幼稚细胞即白血病 细胞；可伴贫血和/或BPC减少。
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散点图——Dot Plot
lysed whole blood
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FCM设门法
其中： FSC：反映细胞的大小 SSC：反映细胞内颗粒性
FSC/SSC:不能将淋巴、单核及幼稚细胞区分开 CD45/SSC:CD45是WBC抗原,RBC.PLT为阴性。
CD45在成熟细胞表达强，幼稚细胞表达弱。在淋 巴，单核及粒细胞表达强度不同。 优点：能将淋巴 单核及幼稚细胞区分开，特异分析白血病细胞免疫 表型。
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分类
按细胞分化程度与病程缓急分类
分类 发病
急性白血 较急 病（AL）
自然病 程
一般仅 几个月
慢性白血 缓慢 一般为
病（CL）
数年
血及骨髓细胞形 态
异常原始及早期 幼稚细胞为主
异常成熟细胞与 晚期幼稚细胞为 主
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细胞形态和生物学特征分类
AL CL 特殊
急性淋巴细胞白血病（ALL）-L1、L2、 L3
颜色：淡红→紫红→深紫； 结构：细丝→粗网状→块状。 核仁 大小：由大变小； 数目：多→少→消失。
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细胞分化停滞在较晚阶段分类学习交流ppt按细胞分化程度与病程缓急分类分类分类分类发病发病自然病自然病血及骨髓细胞形血及骨髓细胞形急性白血急性白血病alal一般仅一般仅几个月几个月异常原始及早期异常原始及早期幼稚细胞为主幼稚细胞为主慢性白血慢性白血病clcl缓慢缓慢一般为一般为数年数年异常成熟细胞与异常成熟细胞与晚期幼稚细胞为晚期幼稚细胞为学习交流ppt细胞形态和生物学特征分类alal急性淋巴细胞白血病急性淋巴细胞白血病allalll1l1l2l2l3l3急性髓细胞白血病急性髓细胞白血病amlamlm0m0m1m1m2m2m3m3m4m4m5m5m6m6m7m7
研究对象为生物颗粒，如各种细胞、染 色体、微生物、及人工合成微球等
研究的微粒特性包括多种物理及生物学 特征，并加以定量
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流式细胞仪系统
简介 通过流式细胞仪我们可以得到以下信
息 -相对细胞大小 - 相对细胞颗粒密度和内部复杂度 - 染色过细胞的相对荧光强度
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Fluorescence signals
（二）电离辐射：已证实电离辐射可 引起白血病，与放射剂量及放射部位 相关。
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病因和发病机制
（三）化学物质：已发现苯及其衍生物，乙双吗 啉，氯霉素，磺胺类及某些解热镇痛药、抗癌药 （尤其是烷化剂）等能引起骨髓毒性而导致白血 病。
（四）遗传因素：家族性白血病约占白血病的 0.7%。某些遗传性疾病和免疫缺陷性疾病容易发 生白血病。
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白细胞分化抗原
是白细胞（包括血小板、血管内皮细胞等） 在正常分化成熟的不同阶段以及活化过程 中在这些不同谱系（lineage）细胞胞浆 或细胞膜表面出现或消失的标记，参与机 体重要的生理和病理过程。八十年代在 WHO和国际免疫学联合会(IUIS)组织下， 将识别同一分化抗原的来自不同实验室的 单克隆抗体归为一个分化群
尚未阐明。目前认为凡导致染色体 异常、癌基因突变、活化和抑癌基 因失活等因素均有可能导致白血病 的发生。
多认为与物理、化学、生物等因素 相关，尤其病毒因素。
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病因和发病机制
（一）病毒感染：已证实鸡、小鼠、 猫、牛和长臂猿等动物的自发性白血 病组织中分离出白血病病毒。从人类 T细胞白血病细胞中分离出一种逆转 录病毒，称HTLV。
Fluorescence
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Optical Filters
Longpass
460 500 540
Shortpass
460 500 540
Bandpass
460 500 540
LP 500
SP 500
BP500/50
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FACSCalibur光路图
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分子生物学方法之荧光原位杂交
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化疗治疗
缓解后治疗→目的是消灭微小残留白 血病细胞，防止复发。 采用与诱导缓解方案无交叉耐药的 新方案，连同原方案进行交替序贯治 疗；通常第1年每月1次，第2年每2 月1次，第3年每3月1次。
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诱导分化与促凋亡
诱导分化
针对急性早幼粒细胞白血病 （AML-M3，APL）的特效性治疗：
（CBFα）/ETO APL即AML伴有t（15；17）（q22；q11－
12）及其变体.PML/RARα AML伴有骨髓异常嗜酸粒细胞inv（16）
（p13;q22）或（p16;q16） （p13;q11）.CBFβ/MYH11
AML伴有11q23（MLL）异常
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WHO分型
Ⅱ. AML伴有多系增生异常 继发于MDS或MDS/MPD 先天期MDS或MDS/MPD
（五）其他血液病：MDS，淋巴瘤，骨髓瘤， PNH等
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血细胞的发育演变规律
细胞体积 ：由大→小，巨核和早幼粒例外。 胞浆 量：由少变多； 颜色：深蓝→浅蓝→淡蓝→ 淡红；
颗粒：从无到有，由非特异性到特异性。 胞核 大小：大→小→脱核(红系);形态：圆形→凹陷→分叶(粒系)；
CD: cluster of differentiation/
cluster designation
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免疫分型 Immunophenotyping
CD4
CD # = cluster designation number
CD2
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流式细胞术
流式细胞术（Flow Cytometry, 简称 FCM）是一种可以快速、准确、客观， 并且同时检测单个微粒（通常是细胞）的 多项特性的技术，同时可以对特定群体加 以分选
Ⅲ. AML和MDS，治疗相关性 烷化剂相关性 表鬼臼脂素相关性（有些可能是淋巴细胞性） 其他
Ⅳ. AML不另做分类（沿用FAB标准）
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病例
某女，58岁，因糖尿病入院。 临床除下肢散在少许紫癜外，余无特殊症状体
征； 血象：白细胞 6.7×10e9/l，分类N0.35，
L0.58，血红蛋白108g/l，血小板46×10e9/l； 骨穿2次失败，按血小板减少性紫癜治疗。 第3次诊断为ALL。
防治出血：止血、输注血小板等； 纠正贫血：输注红细胞； 高尿酸血症的防治：水化碱化、别
嘌呤醇等。
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化疗治疗
诱导缓解 → 系迅速杀灭尽量多的白血病细胞，使 造血功能恢复，达到完全缓解标准（症状、体征 消失，血象与骨髓象基本恢复正常，原始+幼稚 细胞＜5%）。
依据AL类型，确定化疗方案： AML（非M3）：DA、MA、HA等 ALL：VP、VDLP、HD-MTX/AC等
鉴别诊断
类白血病反应 骨髓增生异常综合征（白血病前期） 再生障碍性贫血 恶性组织细胞病 巨幼细胞性贫血 传染性单核细胞增多症
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治疗
一般治疗 化学治疗 诱导分化与促凋亡 生物学治疗 疫苗治疗 基因治疗 抗血管新生 造血干细胞移植
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一般治疗
防治感染：预防、抗炎（广谱、杀 菌、联合、早期、足量）、支持等；
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诊断思路
发热、出血、贫血、骨痛→“想到”； 胸骨压痛，肝脾淋巴结肿大→“怀疑”； 外周血发现原始与幼稚细胞→“初诊”； 骨髓细胞形态学及组化染色提示某一系列原始
（幼稚）细胞增生→“确诊”； 结合免疫学、细胞遗传学、分子生物学进一步分
型诊断→“分型、预后”。
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Focused laser beam
Injector Tip
Sheath fluid
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1. 散射光信号
•前向角散射光（FSC, Forward
Scatter） 入射激光的同向散射光信号：细胞相对
大小及其表面积。
•侧向角散射（SSC, Side Scatter）
入射激光90角的散射光信号细胞颗粒 度及细胞内相对复杂性。
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分类
由于细胞形态学对细胞之识别能力有 限，采取以下分型方法。
细胞形态学（morphology，M）、 免疫学（immunology，I）、细胞 遗传学（cytogenetics，C）、分子 生物学（molecularbiology，M）。
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前向角散射光 ——FSC
Forward Angle Light Scatter
Laser
FALS Sensor
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侧向角散射光——SSC
Laser
FALS Sensor
90LS Sensor
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散射光
散射光能被用来区分不同细胞群体 的基本形态上的差异 - 通常使用“散点图”来看散射光 信号 - 散点图上的一个点就代表一个细 胞颗粒的数据
The Ph Chromosome
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
21
22
x
Y
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急性白血病
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我国白血病年发病率为2.76/10万，急 性 ＞ 慢 性 （ 约 5.5:1 ） ， 男 性 ＞ 女 性 （ 1.81:1 ） , 儿 童 中 以 ALL 较 多 见 ， 成 年人以AML为多见。
白血病
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概述
白血病（Leukemia）是一类造血干细胞的恶性 克隆性疾病。
发生恶性克隆性增殖的细胞： 分化障碍，凋亡受阻，停滞在细胞发育的不同
阶段， 积聚在骨髓和其他造血组织中，并浸润其他组织
器官 正常造血受抑制 感染、贫血、出血及肝脾淋巴结肿大。
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分类
急性白血病：细胞分化停滞在较早阶段 慢性白血病：细胞分化停滞在较晚阶段