葡萄籽原花青素含量测定
四种原花青素含量测定方法比较
四种原花青素含量测定方法比较一、本文概述原花青素（Procyanidins）是一类广泛存在于植物中的多酚类化合物，因其强大的抗氧化和生物活性，近年来在营养学、食品科学、医药学等领域受到了广泛关注。
其中，四种主要的原花青素——儿茶素（Catechin）、表儿茶素（Epicatechin）、没食子儿茶素（Gallocatechin）和表没食子儿茶素（Epigallocatechin）的含量测定对于评估食品营养价值、研究药物作用机制以及监控产品质量具有重要意义。
本文旨在比较和分析目前常用的四种原花青素含量测定方法，包括高效液相色谱法（HPLC）、紫外可见分光光度法（UV-Vis）、荧光光谱法（Fluorometry）和质谱法（MS），以期为相关领域的研究和实践提供有益的参考。
通过比较这些方法的准确性、灵敏度、操作简便性以及成本效益等方面的优劣，我们期望能为科研人员和企业选择最适合的原花青素含量测定方法提供指导。
二、方法概述原花青素（Procyanidins）是一类广泛存在于植物中的多酚类化合物，具有强效的抗氧化性能，对多种疾病具有预防和治疗作用。
由于其生物活性的重要性，对原花青素含量的准确测定显得尤为重要。
目前，常用的原花青素含量测定方法主要包括高效液相色谱法（HPLC）、紫外可见分光光度法、薄层色谱法（TLC）和毛细管电泳法（CE）。
这些方法各有优缺点，适用于不同的样品类型和实验条件。
高效液相色谱法（HPLC）具有高分辨率、高灵敏度、高重现性等优点，可以同时分离和测定多种原花青素。
但是，该方法需要昂贵的仪器设备和专业的操作人员，且样品处理过程繁琐，分析时间较长。
紫外可见分光光度法是一种简便、快速的测定方法，适用于大量样品的初步筛选。
然而，该方法只能测定总原花青素的含量，无法区分不同种类的原花青素，且易受样品中其他色素的干扰。
薄层色谱法（TLC）是一种基于原花青素在薄层板上的分离和显色进行测定的方法。
葡萄籽提取物中原花青素含量不同测定方法比较
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香草醛法的原理在于酸性条件下， 原花青素
［6］ ， 其上的间苯二酚或间苯 5 环的化学活性较高
三酚可与香草醛发生缩合， 产物在浓酸作用下形 成有色的正碳离子， 如图 7 所示。采用分光光度 法测其吸光度， 根据标准曲线即可得到样品中原 花青素含量。盐酸或硫酸均可作为反应过程的催
作者： 作者单位： 刊名： 英文刊名： 年，卷(期)： 被引用次数： 姚开， 何强， 吕远平， 石碧 四川大学轻工与食品工程学院,四川,成都,610065 化学研究与应用 CHEMICAL RESEARCH AND APPLICATION 2002，14(2) 54次
参考文献(5条) 1.石碧.狄莹 植物多酚 2000 2.Porter L.Hrstich L.Chan B 查看详情 1986 3.Deshpande S.Cherycm M 查看详情 1985 4.Foo Y.Porter L 查看详情 1986(06) 5.Deshpano S.Cheryan M 查看详情 1987(02)
第 35 卷
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测定方法 正丁醇7盐酸法 香草酸7盐酸法 香草酸7硫酸法 38 9 3: !3 9 5; 38 9 =4
相对标准偏差 （2） 3 9 <= = 9 8: ! 9 55
参考文献：
［3］ 石碧， 狄莹 > 植物多酚 ［ ?］ ， 北京： 科学出版社， !"""， 3!;—344> ［!］ ［ F］ ， @,(+&( A， B()+0C’ A， D’#1 E9 !"#$%&"’()*$+# #$%&， !’： !!4 G !4= 9 ［4］ ， H&)’I#1.& J， D’&(KC/ ?9 , 9 -%%. /&) ［ 9 F］ #$%’， ’"： :=6 G :3= 9 ［5］ ［ F］ ， （;） ： L,, M， @,(+&( A9 011)$2 #$%&， ($ 588 G 5<= 9 ［6］ ， （!） ： H&)’I#1, J， D’&(K#1 ?9 , 9 -%%. /&) ［ 9 F］ #$%)， ’! 44! G 445 9
葡萄籽提取物中原花青素含量的测定
ｍＩ和 一定 体 积 的 浓 盐 酸 ， 匀 ， 于 （０± 摇 置 ２
关键词
葡萄籽． 原花青 素，香 草醛法，音量测定
原 花青 素是指 从植 物 中分离得 到 的一类
在热酸 处理 下 能产 生花 色 素 的 多酚 化 合 物 。 近 年来 ， 类 化 合物 所 体 现 的 生物 活 性 屡 见 该
公司 产 品 （ ｓ ； 萄 籽精 提 取 物 为 四 川大 Ｙ Ｐ） 葡 力 天然 产 物 公 司产 品 （ Ｄ ； 萄 籽 提 取 物 Ｓ Ｐ） 葡 制 成品 为美 国 Ｌ ＨＰ公 司产 品。
已有 多家 企 业 正 着 手 该 类 产 品 的生 产 。 目
ＵＶＱ５ １ Ｃ型 光 谱 仪 为 日本 岛津 公 司 ０Ｐ
产 品
前， 关于原 花青 素的 测定 方法还 无统 一 标准， 而文献报道 的几 种 方 法 中， 丁醇 法 ＿ 受 原 正 ２ 花青 素结构 的影 响较 大 ， 于 低 聚 合 度 原 花 对 青 素 的测 定并不适 宜 ； 草 醛． 酸法 ＿ 由于 香 硫 ３ ］ 硫 酸的强 氧化作 用也 使得 测定结 果偏 低 。本
１ ７
维普资讯 Βιβλιοθήκη 食 品与 发 酵 工 业
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５ ０ ｍ 处的 吸光 度 ， ０ｎ 由标 准 曲线求 得 试 样 中
葡萄籽中分离提取原花青素的研究
葡萄籽中分离提取原花青素的研究花青素是一类多酚类化合物，其具有高效的清除自由基的功能，是一种新型、高效、低毒的天然抗氧化剂。
本实验通过浸提的方法从葡萄籽中提取原花青素，考察了不同溶剂、浸提时间、浸提温度、乙醇体积分数和料液比等单因素对浸提效果的影响，确定了最佳的单因素水平。
研究结果表明：本项目产品投资费用少，操作费用低，产品附加值高；原料为废物利用，变废为宝符合国家相关产业政策；几乎没有“三废”排放，使用的溶剂全部回收利用，废渣可以作为造纸或者饲料综合利用。
标签：花青素；葡萄籽；提取；正交实验1 概述原花青素是广泛存在于植物中的一类天然多酚类化合物，多以糖苷的形式存在，也称花色苷。
属于缩合鞣质或黄烷醇类。
最早而最丰富的花青素是从红葡萄渣中提取的葡萄皮红。
它于1879年在意大利上市。
由于原花青素的多种功效，由葡萄籽提取的原花青素已被我国卫生部批准为保健原料。
目前对原花青素的提取研究及保健作用研究已非常成熟。
已经将其应用到工业化产业，开发出多种原花青素的保健产品和化妆产品。
原花青素的产品已被广大消费者普遍接受。
2 葡萄籽中花青素的提取本实验通过浸提的方法从葡萄籽中提取原花青素，考察了不同溶剂、浸提时间、浸提温度、乙醇体积分数和料液比等单因素对浸提效果的影响，确定了最佳的单因素水平。
并通过设计正交实验，得出原花青素提取最佳工艺条件。
2.1 实验方法2.1.1 葡萄籽中原花青素的提取本实验采用甘肃紫轩酒业葡萄酒厂生产葡萄酒产生的葡萄籽下脚料作为本实验的原材料。
在生产葡萄酒压榨葡萄汁的糟粕和葡萄酒生产前和发酵后压榨的榨粕，所得的这些榨渣中，以换成干品计，约有50%的葡萄皮，45%的葡萄籽和少量的梗等，将该榨渣经粗选分离出葡萄籽，作为提取的原料。
所得的葡萄籽用粉碎机粉碎后，过20目筛，于磨口三角瓶中，经石油醚脱脂脱水份，得脱脂葡萄籽粉，用一浸提液在50℃的恒温水浴中回流浸提，离心后取上清液，反复提取若干次，最后洗涤残渣，将上清液和洗涤液合并，加入固体无水硫酸钠脱水，倾出上层溶液，在真空度为0.095MPa，温度为40℃的条件下真空浓缩，浓缩液冷却至室温，得到原花青素粗提液，干燥，制得粗提物。
葡萄籽提取物原花青素95%执行标准
葡萄籽提取物原花青素95%执行标准
葡萄籽提取物原花青素95%的执行标准主要包括以下内容：
1. 提取方法：采用超声波辅助萃取、回流萃取等方法，从葡萄籽中提取目标成分。
2. 成分含量：葡萄籽提取物原花青素的含量应达到95%以上。
3. 鉴定方法：应运用高效液相色谱（HPLC）或者紫外分光光度法等可靠的分析方法对葡萄籽提取物原花青素进行鉴定和分析。
4. 检测限值：确定葡萄籽提取物原花青素的检测限值，保证提取物的质量符合要求。
5. 外观特征：葡萄籽提取物原花青素应为深紫色至红棕色粉末，无异味。
6. 残留溶剂：葡萄籽提取物原花青素中不得含有明显的溶剂残留。
7. 重金属限量：葡萄籽提取物原花青素应符合国家或地区规定的重金属限量标准，确保产品安全。
需要注意的是，具体的执行标准可能会因国家、地区以及生产厂家的要求而有所不同，以上内容仅为常见的执行标准举例，具体要求还需参考相关标准文件。
葡萄籽原花青素含量检测方法
杭州尼诺生物科技有限公司葡萄籽原花青素一目的：建立葡萄籽原花青素含量测定法。
二仪器：紫外可见分光光度UV—UNIC7200。
三责任者：QC检验员。
四原理：原花青素在酸性条件下加热水解产生色素，产生色素的过程是定量反应。
通过检测水解产物的最大吸收波长下的吸光度对原花青素进行定量。
在吸光度0.2-0.7纳米范围内浓度和吸光度呈线性关系。
五试剂和对照品：甲醇（分析纯）正丁醇（分析纯）盐酸（分析纯）硫酸铁铵（分析纯）葡萄籽对照品（公司自制）六试剂配制及溶液配制：1 试剂配制：50%甲醇溶液：量取50毫升甲醇溶于50毫升纯化水中。
盐酸正丁醇溶液：量取5毫升盐酸溶于95毫升正丁醇，置阴凉处避光保存。
硫酸铁铵盐酸溶液：称取2克，NH4F e (SO4)212H2O溶于100毫升2摩尔/升的盐酸水溶液中。
2 溶液配制：对照品溶液：称取10毫克葡萄籽对照品，精密称定，用50%甲醇溶解并定容到100毫升容量瓶中。
供试品溶液：称取10毫克葡萄籽供试品，精密称定，用50%甲醇溶解并定容到100毫升容量瓶中。
七测定步骤：在一系列10毫升具塞硼硅酸玻璃刻度试管中，各加0.2毫升硫酸铁铵盐酸溶液，6毫升正丁醇盐酸溶液，再逐个加1毫升待测样品溶液，1毫升对照品溶液，1毫升甲醇（空白），记录试管体积V A。
加塞，振荡混匀。
于98。
C沸水浴中反应45分钟，取出试管于冰水中迅速冷却，记录试管的体积V B。
在546纳米处用紫外分光光度计检测相对于空白的吸光度。
八计算：此方法受环境因素影响，操作中用对照品来定量待测样，其计算公式如下：原花青素%=K×A1×M2×V1/（A2×M1×V2）式中：A1 为供试品吸收度A2 为对照液吸收度M1 为供试品称样量M2 为对照品称样量V1 为供试品最终体积V A-V BV2 为对照品液最终体积K 为对照品的含量。
葡萄籽原花青素检测方法的比较
文 献标 志 码 ：Ａ
Ｔｈ ｅ ｃ ｏ ｍｐ ａ ｒ ｉ ｓ ｏｎ ｏ ｆ ｄ ｅ ｔ ｅ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ｍｅ ｔ ｈ ｏ ｄ ｓ ｏ ｆ ｔ ｈ ｅ ｐ ｒ ｏ ｃ ｙ ａ ｎ ｉ ｄ ｉ ｎ ｓ Ｏｎ ｇ ｒ ａ ｐ ｅ ｓ ｅ ｅ ｄ
Ｚ ｈ ａ ｎ ｇ Ｊ ｉ ｎ ｇ ｙ ｉ ｎ ｇ ， Ｈｕ Ｗｅ ｎ ｘ ｉ ａ ｏ ， Ｇａ ｏ Ｄｅ ｙ ａ ｎ ， Ｌｉ Ｙａ ｎ ｋ ｕ ｉ ， Ｊ ｉ ａ ｎ ｇ Ｘｉ ｌ ｏ ｎ ｇ
（ １ ． Ｓ ｈ ａ ｎ ｄ ｏ ｎ ｇ Ａｃ ａ ｄ ｅ ｍｙ ｏ ｆ Ｇｒ ａ ｐ ｅ ， Ｊ ｉ ｎ ａ ｎ ２ ５ ０ １ ０ ０ ； ２ ． Ｑｉ ｌ ｕ Ｕｎ ｉ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｔ ｙ ｏ ｆ Ｔ ｅ ｃ ｈ ｎ ｏ ｌ ｏ ｇ ｙ ， Ｊ ｉ ｎ ａ ｎ ２ ５ ０ ３ ５ ３ ）
Ｋ ｅｙ ｗｏｒ ｄｓ ： ｇ ｒ ａ ｐ ｅ ｓ ｅ ｅ ｄ ； ｐ ｒ ｏ ｃ ｙ ａ ｎ ｉ ｄ ｉ ｎ ｓ ； ｖ ａ ｎ ｉ ｌ ｌ ｉ ｎ ａ ｓ ｓ ａ ｙ ｍｅ ｔ ｈ ｏ ｄ ； ｆ ｅ ｒ ｒ ｉ ｃ ｉ ｏ ｎ ｃ ａ ｔ ａ ｌ ｙ ｔ ｉ ｃ ｃ ｏ ｌ ｏ ｒ ｉ ｍｅ ｔ ｒ 黄烷 一 ３ 一 醇单体 、低 聚体 酚类化 合 物含 量 ；铁 盐催 化 比 色法 线性 范 围较 宽 ，适 宜 用于 黄烷一 ３ 一
醇不 同聚合度 范围的酚 类化合 物总量检 测。
关键 词 ：葡萄籽 ；原花 青素 ；香草 醛法 ；铁盐催 化 比 色法
中图分 类号 ：Ｒ ２ ８ ４ ． １
葡萄籽 原花青素检测方法 的比较
张 晶莹 ，胡文 效。 山 ，高德 艳 ，李彦 奎 ，蒋锡龙
（ １ ． 山 东省 葡萄研 究院 ，济 南 ２ ５ ０ １ ０ ０ ；２ ． 齐鲁工业 大 学，济 南 ２ ５ ０ ３ ５ ３ ）
葡萄籽原花青素的提取和检测方法
葡萄籽原花青素的提取和检测方法摘要:对原花青素的概念、测定方法及其存在的问题进行了分析，综述了原花青素的性质，安全性和提取、检测方法，并对统一的原花青素检测方法进行了展望。
关键词:葡萄籽原花青素提取检测EXTRACTION AND DETERMINA TION METHODS OF PROANTHOCYANIDIN FROM GRAPE SEEDAbstract:The definition, determination methods of proanthocyanidin from grape seed and their problems were analyzed. The character, safety, extraction methods of proanthocyanidin were also introduced in this paper. Besides, the development foreground of uniform determination method of proanthocyanidin was illustrated.Key words:grape seed ; proanthocyanidins ; extraction; determination20世纪70年代，法国科学家J．Masqulier发现了比松树皮更好的原花青素资源——葡萄籽。
“地中海地区膳食”健康效果揭示了酚类化合物和不饱和脂肪酸的神奇功效Ⅲ；“法国悖论”现象更是揭示了葡萄籽的多酚神奇功能。
葡萄籽中含有丰富的亚油酸、蛋白质、原花青素等成分，但研究最多的还是原花青素成分，现已被证明具有显著的抗氧化和清除自由基的活性，具有极大的开发前景。
同时由于葡萄籽原花青素成分的复杂性，原花青素概念认识的不一致，还没有统一的检测方法。
因此，迫切需要建立葡萄籽原花青素含量的统一分析方法，以便对葡萄籽原料及其产品中的原花青素准确定量。
紫外分光光度法测定葡萄籽提取物中的原花青素含量
紫外分光光度法测定葡萄籽提取物中的原花青素含量
傅武胜;赵道辉;黄剑锋
【期刊名称】《食品研究与开发》
【年(卷),期】2002(023)006
【摘要】本文建立了葡萄籽提取物中原花青素的测定方法-紫外分光光度法.本法最低检测限为8.23μg,原花青素浓度在10.4～52.0μg/mL范围内线性相关,r=0.9996,加入浓度为52.0～520μg的原花青素标准溶液时,回收率(n=3)为96.2%～101%,RSD为0.45%～0.67%,符合测定要求.葡萄籽提取物样品经6次分析,平均含量为95.2%,铁盐催化比色法较之略高(99.3%).本法具有测定准确、稳定、灵敏,操作简便的特点,适用于葡萄籽精提物中原花青素总量的测定.
【总页数】3页(P90-92)
【作者】傅武胜;赵道辉;黄剑锋
【作者单位】福建省卫生防疫站,福州,350001;福建省卫生防疫站,福州,350001;南京市卫生防疫站,南安,360001
【正文语种】中文
【中图分类】TS2
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硫酸_香草醛法测定葡萄籽原花青素含量
硫酸-香草醛法测定葡萄籽原花青素含量孙 芸 谷文英(江南大学食品学院,无锡,214036)摘 要 以硫酸作为香草醛法的酸性介质,测定葡萄籽提取物水溶液中原花青素含量,对硫酸浓度、香草醛浓度、反应温度及时间等影响比色反应的因素进行了研究,选择出较适宜的反应条件。
关键词 葡萄籽,原花青素,硫酸-香草醛法第一作者:博士研究生(谷文英为通讯作者)。
收稿时间:2003-04-17,改回时间:2003-09-03原花青素是一类由黄烷-3-醇缩合而成的聚多酚类物质,具有很强的生物活性,作为防癌、抗突变、防治心血管疾病药物的有效成分和用作安全无毒的新型天然抗氧化剂,在医药、保健食品等领域具有广泛的用途。
原花青素的定量测定方法,除比较经典的H PLC 法外,更多的是比色测定方法,包括Folin -Ciocateau (FC )法[1]、酸化香草醛(Vanillin)法[2,3]、盐酸-正丁醇(BuOH -H Cl)法[4]及紫外吸收法[5],其中FC 法测定的是总酚含量,对原花青素缺乏专一性,Vanillin 法可同时测定原花青素单体及聚合体的总含量,BuOH -H Cl 法只测定聚合原花青素含量,儿茶素单体不反应,但与香草醛法相比,反应中易形成副产物,且受结构影响较大,同时比色测定法反应的条件要求较高,重复性较差,原花青素的紫外吸收法一般用于经HPLC 纯化分离后组分的定性及定量检测(270~280nm)。
从测定方法的灵敏度、专一性及简便性来讲,目前应用比较多的是酸化香草醛法。
盐酸及硫酸均可作为其酸性介质,但在不同含量的葡萄籽原花青素含量测定过程中发现,传统的以盐酸为酸性介质的香草醛法在测定原花青素含量较低的葡萄籽提取物水溶液时,体系透明度较低,干扰较大。
而据报道[6],在测定甲醇溶液中原花青素含量的香草醛反应体系中,以硫酸催化的反应灵敏度高于盐酸。
据此,本实验以硫酸作为香草醛法的酸性介质,探索出了测定葡萄籽提取物水溶液中原花青素含量的硫酸-香草醛比色法。
硫酸香草醛法测定葡萄籽原花青素含量
硫酸香草醛法测定葡萄籽原花青素含量一、本文概述本文旨在探讨硫酸香草醛法在测定葡萄籽原花青素含量中的应用。
原花青素作为一种重要的天然抗氧化剂，在葡萄籽等植物中含量丰富，具有显著的生物活性，对人体健康具有积极作用。
因此，准确测定葡萄籽中原花青素的含量对于评估其营养价值和开发相关健康产品具有重要意义。
硫酸香草醛法作为一种常用的原花青素测定方法，具有操作简便、灵敏度高、重现性好等优点，在食品、药品等领域得到了广泛应用。
本文将详细介绍硫酸香草醛法的原理、操作步骤、影响因素及注意事项，并通过实验验证该方法的准确性和可靠性，为葡萄籽原花青素含量的测定提供科学依据。
二、材料与方法硫酸香草醛、葡萄籽提取物、原花青素标准品（纯度≥98%）、甲醇、乙醇、丙酮、盐酸等均为分析纯，购自国内外知名试剂公司。
紫外可见分光光度计、电子天平、恒温水浴锅、离心机、超声波清洗器等。
准确称取葡萄籽粉末适量，加入一定比例的甲醇-水-盐酸混合溶液，置于恒温水浴锅中进行回流提取。
提取液经过离心、过滤后，得到原花青素提取液。
精确称取原花青素标准品，用甲醇溶解并定容，得到不同浓度的标准溶液。
分别取各浓度标准溶液，加入硫酸香草醛试剂，摇匀后在一定温度下反应一定时间，测定其吸光度。
以吸光度为纵坐标，原花青素浓度为横坐标，绘制标准曲线。
取适量葡萄籽原花青素提取液，加入硫酸香草醛试剂，摇匀后在相同条件下进行反应，测定其吸光度。
根据标准曲线计算样品中原花青素的含量。
所有数据均以平均值±标准差表示，采用SPSS等统计软件进行数据分析，采用单因素方差分析（ANOVA）比较不同处理组之间的差异，显著性水平设为P<05。
通过以上方法和步骤，可以准确测定葡萄籽中原花青素的含量，为进一步研究葡萄籽的营养价值和开发利用提供依据。
三、实验结果与分析在本次研究中，我们采用硫酸香草醛法测定了葡萄籽原花青素含量。
此方法基于原花青素在特定条件下与硫酸香草醛发生显色反应，通过测定反应后溶液的光密度值，可推算出原花青素含量。
葡萄籽原花青素的提取和检测方法
葡萄籽原花青素的提取和检测方法
葡萄籽原花青素的提取和检测方法有多种，其中一种常用的方法是索氏提取法和固相萃取法相结合，具体步骤如下：
1. 将葡萄籽进行干燥、粉碎、过筛、脱脂，得到葡萄籽粉末。
2. 将葡萄籽粉末进行提取、过滤、浓缩，再溶解，最后进行固相萃取，得到精制原花青素。
3. 精制原花青素过微孔滤膜后进入高效液相色谱进行检测。
另外，也可以使用Bate-Smith法和Porter法来检测葡萄籽中原花青素的
含量。
Bate-Smith法是先称取适量的葡萄籽提取物用甲醇溶解，然后加入
盐酸-正丁醇溶液在特定温度下反应一定时间后迅速冷却，在特定波长下测
定其吸光度，以甲醇代替提取物溶液作为空白。
而Porter法是对Bate-Smith法进行了改进，主要是在试剂中添加了Fe3+以提高反应的程度和颜
色的稳定性。
请注意，不同方法提取和检测葡萄籽原花青素的步骤和条件可能会有所不同，具体的操作方法和参数需要根据实际情况和实验条件进行调整。
同时，由于提取和检测过程中可能会涉及到化学试剂的使用，因此也需要注意安全问题。
以原花青素B2标定葡萄籽提取物中原花青素含量
ｓａ ｄ ｒ． ｅｅ ｔｔｅ ｔ－ ｍｉ ｔｎ ａｄ Ｒ ｆｒｏ ｈ Ｂａｅ Ｓ ｔ ｔｏ ，ｓｎ ｐｏ ｎｈ ｃ ａ ｉｉ ２ ≥９ ： Ｌ ｔｃ ｌ ｒｔ ｐ ｏｎｈ ｃ ａ ｉｉｓ ｈｍｅｈ ｄｕ ｉｇ ｒａ ｔｏ ｙ ｎｄｎＢ （ ９ ＨＰ Ｃ）ｏ ａｉ ａｅ ｒａ ｔｏ ｙ ｎｄｎ ｂ
以原花青素混合物做标准品其原花青素含量标 准不统 一， 无法让人信服的 问题 ， 测定结果能准确反 映葡萄籽提取 其
物 中的原 花青素的真 实含量 ， 可用作质控 方法 。 关键词 ： 原花青素 Ｂ ； ２ 原花青素 ； 萄籽提取物 葡
Ｄｅｅ ｍｉ ｏ ｎｔ ｃ ａ ｉ ｎ ｎ Ｇｒ ｐ ｅ ｔ ａ ｔｗｉｈ ｏ ｎ ｈ ｃ ａ ｄ ｎ Ｂ２ Ｓ ａ ａ ｄ ｔ ｒ ｎｅＰｒ ａ ｈｏ ｙ ｎ ｄｉｓｉ ａ ｅＳｅ ｄ Ｅｘ ｒ ｃ ｔ Ｐｒ ａ ｔ ｏ ｙ ｎｉ ｉ ｔ ｎｄ ｒ Ｗ Ｕ ｅ ，ＣＨＥＮＧ ｕ ｆ ｎ Ｗ ｉ Ｘｉ－ ｅ ｇ，ＷＡＮＧ ｕ — ｕｉ Ｃｈ ｎ ｈ ，ＣＵＩＷ ｅ —ｘ ，ＦＵ ｎ — ｉ ｇ ｎ ｉ Ｙｉ ｇ ｙｎ
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葡萄籽中原花色素的含量测定方法简述
葡萄籽中原花色素的含量测定方法简述摘要：葡萄籽中的原花色素具有很多的生物活性，其含量的测定对于研究葡萄籽的生物活性以及开发葡萄籽的药用价值具有很大的意义。
本文介绍了葡萄籽中原花色素的含量测定方法，包括提取、纯化、检测等步骤，为研究葡萄籽的生物活性以及开发葡萄籽的药用价值提供了一定的参考。
关键词：葡萄籽；原花色素；含量测定；生物活性；药用价值一、引言葡萄籽是葡萄的种子，富含原花色素、多酚类物质、黄酮类物质等多种生物活性成分。
其中，原花色素是一种天然的生物活性成分，具有很多的生物活性，如抗氧化、抗炎、抗肿瘤等。
因此，研究葡萄籽中原花色素的含量及其生物活性具有很大的意义。
二、葡萄籽中原花色素的提取葡萄籽中原花色素的提取可采用乙醇提取法、水提取法、超声波提取法、微波辅助提取法等多种方法。
其中，乙醇提取法是一种常用的提取方法，其步骤如下：1、取适量的葡萄籽，粉碎成细粉。
2、将葡萄籽粉末加入适量的乙醇中，并加入一定量的氢氧化钠。
3、在室温下振荡提取2-3小时。
4、离心沉淀，取上清液。
5、重复以上步骤，直至提取液无色。
6、将提取液浓缩至一定体积，得到葡萄籽中原花色素的提取物。
三、葡萄籽中原花色素的纯化葡萄籽中原花色素的提取物中含有其他的杂质，需要进行纯化。
纯化方法可以采用硅胶柱层析法、逆流色谱法、高效液相色谱法等多种方法。
其中，高效液相色谱法是一种常用的纯化方法，其步骤如下：1、将葡萄籽中原花色素的提取物溶解在适量的溶剂中。
2、用C18柱进行分离，选择合适的流动相，进行梯度洗脱。
3、将纯化后的葡萄籽中原花色素的溶液收集起来，用氮气吹干。
4、将干燥后的纯化产物溶解在适量的溶剂中，得到纯化后的葡萄籽中原花色素。
四、葡萄籽中原花色素的检测葡萄籽中原花色素的检测可以采用紫外分光光度法、高效液相色谱法、质谱法等多种方法。
其中，高效液相色谱法是一种常用的检测方法，其步骤如下：1、将纯化后的葡萄籽中原花色素溶解在适量的溶剂中。
葡萄籽提取物中原花青素含量的最佳测定方法
葡萄籽提取物中原花青素含量的最佳测定方法葡萄籽提取物-原花青素被誉为“最强效的自由基清除剂”，其抗氧化能力是VC的20倍，VE的50倍。
也是唯一能透过血脑屏障的抗氧化剂，因此在促进皮肤新陈代谢，分解黑色素，以及提高机体免疫力，延缓衰老方面的应用极为广泛。
葡萄籽提取物由原花青素、儿茶素、表儿茶素、没食子酸等多酚类物质组成的，由于原花青素的成分极其复杂，目前的研究实验中还无法提供原花青素的标准品，因此Bate-Smith 和Porter法只能测定葡萄籽提取物中原花青素的相对含量。
一、Bate-Smith法、Porter法测定葡萄籽原花青素含量西安源森生物实验室对Bate-Smith法和Porter法测定原花青素相对含量实验进行了研究：（一）Bate-Smith法测定葡萄籽原花青素含量【实验目的】由于目前没有原花青素的标准品，因此此方法测定的只是葡萄籽提取物中原花青素的相对值，其含量用原花青素指数(procyanidolic index)来表示。
【Bate-Smith法原理】原花青素在酸性条件下加热转化为红色的花青素(图1)。
【实验步骤】称取适量的葡萄籽提取物(约15～40mg)用甲醇溶解，最后定溶于100ml。
从中取1ml样品溶液加到10ml比色管中，然后再加入6ml盐酸-正丁醇溶液(5/95,V/V)，在97℃±1下反应40min后，取出迅速冷却，在550nm处测定其吸光度，以甲醇代替提取物溶液作为空白。
原花青素指数=A×7.0/WW:样品质量(g)；A:吸光度【实验结果】由于用Bate-Smith法测得的葡萄籽提取物中原花青素指数一般在80～100之间，有时也可能大于100。
因此，目前很多植物提取物生产厂家使用原花青素指数来表示葡萄籽提取物中原花青素的百分含量，是不正确的。
（二）Porter法测定葡萄籽原花青素含量【实验概述】由于Bate-Smith法测定的结果重现性很差,并且原花青素在此条件下反应不是很彻底。
葡萄籽原花青素液相检测方法
原花青素原花青素原花青素原花青素HPLC初步方案初步方案初步方案初步方案一．实验目的：分析样品原花青素纯度，了解其中杂质成分。
二．实验方案：1. 方案一：Waters 公司高效液相色谱，C18柱(4.6 ×250 mm) , 检测波长为280 nm，进样量10μL ,柱温为室温。
待测液均经0.45μm 孔径的滤膜过滤。
流动相及流速见下表(A —10 %乙酸,B —重蒸水)：2. 方案二：（间接法定量）（原理类似铁盐催化比色法）(1) 标准曲线：称取前花青素标准品10mg 溶于10ml甲醇中,吸取该溶液0、0.1、0.25、0.5、1.0、1.5ml 置于10ml 容量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀。
各取1ml 测定。
(2) 试样测定: 将正丁醇与盐酸按95 ：5的体积比混合后,取出6.0ml 置于具塞锥瓶中,再加入0.2ml硫酸铁铵[NH4Fe(SO4) 2·12H2O]溶液（用浓度为2mol/L 盐酸配成2%(w/v)的溶液）和1.0ml 经0.45μm滤膜过滤的试样溶液,混匀,置沸水浴回流,精确加热40min后,立即置冰水中冷却,待进行高效液相色谱分析。
(3)液相色谱参考分析条件: 色谱柱Shimadzu Shim –pak CLC –ODS 4.6 ×150mm;柱温35 ℃;检测器:紫外检测器,检测波长525nm流动相: 水:甲醇:异丙醇:10 %甲酸= 73 :13 :6 :8 流速0.9ml/min。
注：该方法使用的水解方法与我们当前使用的铁盐催化水解原花青素方法稍有差异，哪种效果更好，可进行预实验加以比较。
3．方案三：（反相高效液相色谱）标样：原花青素标准品色谱柱：Hypersi ODS-2 ，150 × 4.6mm 5μm；流动相：A：0 . 2%(V/V) 乙酸；B：乙腈；流量：1ml /min；进样量：5μl;柱温：30℃；检测波长：280nm.洗脱梯度：以乙腈的百分比浓度表示(B液溶于A液)0 ～5 % ，10min；5%～20%，10～20min；20%～40%，20～40min；40%～50%，40～50min；50%～5%，45～50min；5%～0，50～60min。
比色法测定葡萄皮和葡萄籽中原花青素的含量
中国公共卫生 2003 年第 19 卷第 10 期 Chi n J Public Healt h 2003 V ol . 19 No. 10
文章编号 : 100120580 (2003) 1021228202 中图分类号 : R151 文献标识码 : A
【实验研究】
比色法测定葡萄皮和葡萄籽中原花青素的含量
作者单位 : 11 浙江省卫生监督所 ,杭州 310009 ; 21 浙江省疾病预防控制中心
作者简介 : 张法明 (1952 - ) ,男 ,浙江黄岩人 ,主管医师 ,大专 ,主要从 事食品卫生监督工作 。
件样品含量比较高 ,分别是猪肉样品 1 件 ,为 01468 mg/ kg ;猪 肝样品 2 件 ,分别为 01186 ,01341 mg/ kg ;猪肺样品 3 件 ,分别 为 01136 ,01470 ,01249 mg/ kg ;猪尿样品 2 件 ,分别为 01360 , 01161 mg/ kg ;猪饲料 1 件 ,为 01689 mg/ kg。(2) 不同监测点 样品盐酸克仑特罗检出阳性率 :屠宰场 、农贸市场及宾馆饭店 等饮食业采样 610 件 ,阳性 67 件 ,阳性率为 1110 % ;其中屠 宰场采样 469 件 ,阳性 50 件 ,阳性率为 1017 % ;农贸市场采 样 129 件 ,阳性 17 件 ,阳性率为 1312 % ;养猪场 (户) 采样 79 件 ,阳性 5 件 ,阳性率 613 % ;饮食业采样 12 件 ,未检出盐酸 克仑特罗 。(3) 不同地区盐酸克伦特罗阳性率比较 :4 个市共 送检样品 610 件 ,其中曾发生过盐酸克仑特罗食物中毒的 3 个市的阳性率分别为 2212 % ,1115 %和 219 % ;作为对照的另 一个市未检出阳性样品 。阳性率与各市发生中毒起数基本一 致。
葡萄籽原花青素含量测定
（ １ ） 配制样品溶液 称取一定量的原花青素标准
品，用蒸馏水定容至一定体积，配成浓度为 ０ ． ０ １ —
０ ． ５ ｍ ｇ ／ ｍ Ｌ的原花青素标准品水溶液。 （ ２ ） 配制显色剂 试剂 Ａ （ 香草醛 一甲醇溶液） ： 称取一定量的香草醛，分别用甲醇定容至一定体积， 配成浓度为 ０ ． ５ ％ 、 １ ％ 、 ２ ％ 、 ３ ％ 、 ４ ％ 、 ５ ％ （ ｗ ／ 的香草醛一
０ ． Ｏ ｌ —Ｏ ． １ ｍ ｇ ／ ｍ Ｌ 之间时， 实验数据具有 良好的线性
相对误差
０ ． ４ ４
～ １ ． ３ ０
０ ． ４ ４
０ ． ４ ４
Ａ ￣ Ｃ １ ）
相对误差
０ ． ２ ４ ６
一 ５ ． ４
０ ． ２ ４ ５
— ５ ． ４
仉２ ９ ９
敏度增加： 当浓度过高时， 会导致香草醛 自 缩合 ． 其产
物影响体系的吸光度 。 在保证不导致副反应发生的前 提下， 应选择较高的硫酸浓度 。本实验最终确定硫酸 浓度为 ３ ０ ％ 。最佳 比色条件为：浓硫酸 ３ ０ ％ ，香草醛 ４ ％ ， 反应温度 ３ ０℃， 反应时间 １ ５ ｍ ｉ ｎ 。
河 北 化 工
第 １期
裹 ４ 香草醛硫酸法与ห้องสมุดไป่ตู้草醛盐酸法重复性实验
序号
Ａ ｍ
ｉ
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２
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３
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４
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在最佳比色条件下。 分别测定原花青与儿茶素的 标准 曲线， 结果见图 ４ 。由图 ４ 知， 当标准品浓度在
［ 作者简介】 赵
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图 １ 酚醛缩合反应机理
积的浓盐酸， 分别用 甲醇定容至一定体积， 配成浓度 为１ ５ ％ 、 ３ ０ ９ ６ 、 ４ ５ ％ （ 的浓盐酸一甲醇溶液；试剂 Ｃ （ 浓硫酸一甲醇溶液） ： 量取一定体积的浓硫酸， 分别 用 甲醇定容至一定体积 ，配成浓度为 ２ ０ ９ ６ 、 ３ ｏ ９ ６ 、 ４ ０ ％
水。
１ ． ２ 实验方法 首先扫描出反应体系的最大吸收波长， 然后考察
体， 要测定每一成分的含量极为困难。目前国际上还 没有统一的原花青素检测方法， 其定量分析常用比色 法， 应用较多的是香草醛法 ， 该方法的原理 （ 图１ ） 基 于原花青素 Ａ 环化学活性较高【 Ｉ 】 ， 其上的羟基可与香 草醛发生酚醛缩合反应， 在浓酸作用下形成有色的正
重复性实验结果（ 表４ ） 表明， 硫酸法的最大相对 误差在 １ ． ３ ０ ％ 之 内，而盐酸法 的最小相对误差大于
用本法测定时， 二者均有很好的线性关系， 但相
同浓度的儿茶素吸光度高于原花青素， 以儿茶素为基
３ ． ８ ９ ６ ， 硫酸法的可靠性高。
２ ． ４ ． ２ 稳定性实验（ 图３ ）
．
（ １ ． 河北科技大学化学与制药工程学院， 河北 石家庄 ０ ５ ０ ０ １ ８ ；２ ． 张家口华源葡萄酒有限公司技术科， 河北 张家 口 ［ 摘 要】 酸性条件下， 原花青素与香草醛反应生成红色产物， 由红色产物的吸光度可确定原花青素的含量。 实验首先考察了 酸对显色的影响， 确定以较低浓度的硫酸作催化剂。在此基础上， 进一步考察了其他因素的影响。 确立了稳定的比色条件； 硫酸
温度 ３ Ｏ℃， 反应时间 １ ５ ｍ ｉ ｎ ， 与水平趋势图一致。 硫 酸在反应中起催化作用， 不改变平衡点． 浓度升高， 灵
两种显色剂分别与不同浓度的样品溶液反应， 结 果表明， 反应的灵敏度与稳定性不仅与酸的种类和浓 度有关． 而且与样品浓度有关。当体系中样品浓度较
低时． 盐酸法的灵敏度稍高于硫酸法， 二者均有较好 的透明度 ， 但后者的稳定性略胜一筹； 随体系中样 品
１ ５ ． ０
０ ． ２ ５ ０
— ３ ． ８
关系。回归方程分别为：儿茶素． ￣Ｚ ２ ９ ４ １ Ａ ＋ Ｑ ０ ０ ８ １ ，
Ｏ ． ９ ９ ８ ９ ；原 花青 素 ： Ａ ＝ ２ ． ３ ８ １ ６ Ｃ － ０ ． ０ ０ ５ ９ ，
／ Ｆ － ＝ Ｏ ． ９ ９ ９ ｌ 。
图３ 香草醛硫酸法稳定性实验
稳定性实验结果（ 图３ ） 表明， 盐酸法反应体系的 吸光度 随时间延长而 降低 ，在 ６ ０ ｍ ｉ ｎ内下 降 了 ２ ． ４ ％ ，硫酸法反应体系的吸光度长时间内基本不变， 因此， 硫酸法稳定性较好。 ２ ． ５ 标准曲线绘制
分子交联， 形成大分子 （ 见图 １ ） ， 使 Ａ环产生红色 的
发光团（ ５ ０ ０ ｒ ｉ ｍ ） ， 见图 ２ 。
裹 ３ 正交实验结果极差分析及水平趋势图
埘●
Ｎ ０ ＾＾■
Ｉ Ｂ●
一●
Ｉ Ｂ●
田 ２ 原花青素与香草醛络合物可见光扫描 图 谱
由反应体系的吸收曲线 （ 图２ ） 知， 最大吸收波长 为５ ０ ０ ｎ ｍ ， 与香草醛法的特征吸收一致 。以后实验在 此波长下检测。
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第 １期
裹 ４ 香草醛硫酸法与香草醛盐酸法重复性实验
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在最佳比色条件下。 分别测定原花青与儿茶素的 标准 曲线， 结果见图 ４ 。由图 ４ 知， 当标准品浓度在
［ 作者简介】 赵
平（ １ ９ ６ ５ 一 ） ， 男， 教授 ， 博士 ， 研 究方向为化 工
分离及生物分离 ．
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第１ 期
赵
平等 ： 葡萄籽原花青素含量测定
・ ４ ７ ・
两种显色剂分别与不同浓度的样品溶液反应， 测 定体系在最大吸收波长下的吸光度。 １ ． ２ ． ４ 比色 条件的确定 以硫酸浓度 ， 香草醛浓度 ， 反应温度和反应时间
佳 比色条件下， 分别采用两种酸作催化剂， 重复测定
４次。
稳定性实验： 为了检验比色条件的稳定性 ， 在最 佳条件下， 分别采用两种酸作催化剂， 每隔一定时间 测定其吸光度， 连续测定 ｌ ｈ 。
１ ． ２ ． ６ 标准曲线绘制
０ ４ 浓度 香革醛浓度
１
反应温度
１ ２
原花青素为植物多酚类天然抗氧化剂， 由不同数 浴锅 （ 龙口市电炉制造厂） 。 量的单体黄烷 － ３ － 醇缩合而成， 这类化合物 因在酸性
条件下加热生成花青素而被命名为原花青素。 原花青 原花青素标准 品（ 天津尖峰天然产物研究开发公 司， 纯度 ≥９ ５ ％ ） ； 儿茶素标准品 （ 美国 Ｓ ｉ ｇ ｍ ａ 公司， 纯 度 ≥９ ８ ９ ６ ） ； 香草醛 （ 天津光复精细化工研 究所 ， 分析
浓度增加 ， 硫酸法的灵敏度升高 且随硫酸浓度继续 ． ４ 可靠性检验 增加， 其升高趋势越来越显著。当硫酸浓度高于 ４ ０ ９ ６ ２ ． ４ ． Ｉ 重复性实验（ 表４ ） 以后， 体系的透 明度降低 ， 稳定性降低 ． 颜 色发生变 ２
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第３ ｏ 卷第 １ 期 ２ ０ ｏ ７年 Ｏ １ 月
五
工
Ｖ Ｊ ｏ １ ． ３ Ｏ Ｎ ｑ ｌ ａ ｎ． ２ ０ ０ ７
葡萄籽原花青素含量测定
赵 平－ ， 宋学娟 － ， 张月萍 ， 贾宏海 ， 于国强
０ ７ ５ ６ ０ ０ ） ．
口 ‘ 口 珊 … ＇Ｖ ｕ 口Ｖ ● ｕ
反应时间等因素的影响。确立了稳定的比色条件： 硫
ｔ ／ ｍ ｉ ｎ
酸３ ６ 香草醛 钒 反 Ｊ 蝴 度３ Ｏ℃， 反 应时间 １ ５ ｍ ｉ ｎ 。
（ ３ ） 根据实验确立的比色条件， 得 出了原花青素
定量的标准曲线。
１ ． ２ ． ２ 确定最 大吸 收波长
Ｕ Ｖ － ２ ５ ０ １ Ｐ Ｃ型分光光度计 （ 日本岛津） ； 恒温 水
【 收藕 日期］ ２ ０ ０ ６ － １ １ — ２ ７
取适量的标准品溶液 ， 与显色剂反应后， 以无水 甲醇作参比， 在可见光区扫描， 测定最大吸收波长。
１ ． ２ ． ３ 酸的选择
０ ． Ｏ ｌ —Ｏ ． １ ｍ ｇ ／ ｍ Ｌ 之间时， 实验数据具有 良好的线性
相对误差
０ ． ４ ４
～ １ ． ３ ０
０ ． ４ ４
０ ． ４ ４
Ａ ￣ Ｃ １ ）
相对误差
０ ． ２ ４ ６
一 ５ ． ４
０ ． ２ ４ ５
— ５ ． ４
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（ Ｖ ／ Ｖ ） 的浓硫酸 一甲醇溶液。
该反应的灵敏度与酸浓度有关圆 ， 具体效果尚无 定论。本文将重点考察酸对显色的影响， 选择合适的 酸作为催化剂。再综合分析其他影响因素， 确定合理
的比色条件， 最终做出标准曲线。
１ 实验部分
１ ． １ 仪器和试剂
显色剂的配制采用一定浓度的 Ａ与 Ｂ混合或 Ａ 与ｃ 混合。
３
１ ２ ３ １ ２ ３
２ ３ １ ３ １ ２
３ １ ２ ２ ３ ｌ
０． ２１ ３ ０． ２ １ ５ ０ ． ２ ｏ ４ Ｑ ３ ３ ２ ０ ． ３ ５ ８ ０ ． ３ ５ ０
香草醛发生缩合而形成有色的正碳离子， 即醛以Ａ 环 上的 ６ 、 ８ 位为亲核活性中心， 通过亚 甲基桥键与多酚
碳离子， 据此正碳离子的吸光度可测定原花青素的含 量。盐酸或硫酸均可作为反应过程的催化剂。
酸的影响， 确定反应的催化剂。 在此基础上， 考察其他 因素的影响， 确定比色条件。 在最佳 比色条件下， 测定 原花青素及其单体儿茶素的标准曲线， 作为检测原花
青素含量的依据。 １ ． ２问 吸光度
１ ２
３
在最佳 比色条件下， 分别绘制原花青素水溶液和 序一 ｌ ２ ３ ４ ５ ６ ７ ８ ９ 号一 ２ 儿茶素水溶液的标准曲线。
０ ． １ ２ ４ ０ ． １ ３ ８
０ ． １ ２ ７
２ 结果与讨论
２ ． １ 最大吸收波长的确定 在酸催化作用下， 原花青紊分子中的间苯二酚与
敏度增加： 当浓度过高时， 会导致香草醛 自 缩合 ． 其产
物影响体系的吸光度 。 在保证不导致副反应发生的前 提下， 应选择较高的硫酸浓度 。本实验最终确定硫酸 浓度为 ３ ０ ％ 。最佳 比色条件为：浓硫酸 ３ ０ ％ ，香草醛 ４ ％ ， 反应温度 ３ ０℃， 反应时间 １ ５ ｍ ｉ ｎ 。
应发生， 影响检测结果 ， 本实验最终选择较低浓度的
硫酸作为催化剂。 ２ ． ３ 比色条件确定
裹 １ 原花青素正交实验 （ ３ ９ 水平因素
水平 ０ ． 浓度 ／ ’ ‘ 香草醛浓度 ／ ’ ‘ 反应温度 ／ ℃ 反应时间 ／ ｍ ｉ ｎ
１ ． ２ ． ５ 可靠性检验
重复性实验 ： 为了验证实验结果是否可靠， 在最
化， 逐渐 由红色变为蓝色 。这是 因为浓硫酸具有强氧
化性， 当浓度较高时， 氧化性更为显著， 使香草醛发生 了自 缩合反应， 生成了绿色产物 咖 ， 从而使体系颜色
为劫８ 晕 因寻 荤 ， 设 比色条件 。
４ 医素３ 水平 Ｉ 鼬
Ｇ ９ 确定
改变。 综上所述 ， 盐酸只有低浓度时灵敏度稍高， 其他 方面均逊于硫酸， 但考虑到高浓度的硫酸会导致副反