葡萄籽原花青素含量测定
合集下载
相关主题
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
１ ５ ． ０
０ ． ２ ５ ０
— ３ ． ８
关系。回归方程分别为：儿茶素． ￣Ｚ ２ ９ ４ １ Ａ ＋ Ｑ ０ ０ ８ １ ，
Ｏ ． ９ ９ ８ ９ ；原 花青 素 ： Ａ ＝ ２ ． ３ ８ １ ６ Ｃ － ０ ． ０ ０ ５ ９ ，
／ Ｆ － ＝ Ｏ ． ９ ９ ９ ｌ 。
１ ． ２ ． ２ 确定最 大吸 收波长
Ｕ Ｖ － ２ ５ ０ １ Ｐ Ｃ型分光光度计 （ 日本岛津） ； 恒温 水
【 收藕 日期］ ２ ０ ０ ６ － １ １ — ２ ７
取适量的标准品溶液 ， 与显色剂反应后， 以无水 甲醇作参比， 在可见光区扫描， 测定最大吸收波长。
１ ． ２ ． ３ 酸的选择
甲醇溶液； 试剂 Ｂ （ 浓盐酸一甲醇溶液） ： 量取一定体
图 １ 酚醛缩合反应机理
积的浓盐酸， 分别用 甲醇定容至一定体积， 配成浓度 为１ ５ ％ 、 ３ ０ ９ ６ 、 ４ ５ ％ （ 的浓盐酸一甲醇溶液；试剂 Ｃ （ 浓硫酸一甲醇溶液） ： 量取一定体积的浓硫酸， 分别 用 甲醇定容至一定体积 ，配成浓度为 ２ ０ ９ ６ 、 ３ ｏ ９ ６ 、 ４ ０ ％
敏度增加： 当浓度过高时， 会导致香草醛 自 缩合 ． 其产
物影响体系的吸光度 。 在保证不导致副反应发生的前 提下， 应选择较高的硫酸浓度 。本实验最终确定硫酸 浓度为 ３ ０ ％ 。最佳 比色条件为：浓硫酸 ３ ０ ％ ，香草醛 ４ ％ ， 反应温度 ３ ０℃， 反应时间 １ ５ ｍ ｉ ｎ 。
［ 作者简介】 赵
平（ １ ９ ６ ５ 一 ） ， 男， 教授 ， 博士 ， 研 究方向为化 工
分离及生物分离 ．
维普资讯 http://www.cqvip.com
第１ 期
赵
平等 ： 葡萄籽原花青素含量测定
・ ４ ７ ・
两种显色剂分别与不同浓度的样品溶液反应， 测 定体系在最大吸收波长下的吸光度。 １ ． ２ ． ４ 比色 条件的确定 以硫酸浓度 ， 香草醛浓度 ， 反应温度和反应时间
重复性实验结果（ 表４ ） 表明， 硫酸法的最大相对 误差在 １ ． ３ ０ ％ 之 内，而盐酸法 的最小相对误差大于
用本法测定时， 二者均有很好的线性关系， 但相
同浓度的儿茶素吸光度高于原花青素， 以儿茶素为基
３ ． ８ ９ ６ ， 硫酸法的可靠性高。
２ ． ４ ． ２ 稳定性实验（ 图３ ）
原花青素为植物多酚类天然抗氧化剂， 由不同数 浴锅 （ 龙口市电炉制造厂） 。 量的单体黄烷 － ３ － 醇缩合而成， 这类化合物 因在酸性
条件下加热生成花青素而被命名为原花青素。 原花青 原花青素标准 品（ 天津尖峰天然产物研究开发公 司， 纯度 ≥９ ５ ％ ） ； 儿茶素标准品 （ 美国 Ｓ ｉ ｇ ｍ ａ 公司， 纯 度 ≥９ ８ ９ ６ ） ； 香草醛 （ 天津光复精细化工研 究所 ， 分析
３
反应时问 吸光度
１ ２
３
在最佳 比色条件下， 分别绘制原花青素水溶液和 序一 ｌ ２ ３ ４ ５ ６ ７ ８ ９ 号一 ２ 儿茶素水溶液的标准曲线。
０ ． １ ２ ４ ０ ． １ ３ ８
０ ． １ ２ ７
２ 结果与讨论
２ ． １ 最大吸收波长的确定 在酸催化作用下， 原花青紊分子中的间苯二酚与
水。
１ ． ２ 实验方法 首先扫描出反应体系的最大吸收波长， 然后考察
体， 要测定每一成分的含量极为困难。目前国际上还 没有统一的原花青素检测方法， 其定量分析常用比色 法， 应用较多的是香草醛法 ， 该方法的原理 （ 图１ ） 基 于原花青素 Ａ 环化学活性较高【 Ｉ 】 ， 其上的羟基可与香 草醛发生酚醛缩合反应， 在浓酸作用下形成有色的正
温度 ３ Ｏ℃， 反应时间 １ ５ ｍ ｉ ｎ ， 与水平趋势图一致。 硫 酸在反应中起催化作用， 不改变平衡点． 浓度升高， 灵
两种显色剂分别与不同浓度的样品溶液反应， 结 果表明， 反应的灵敏度与稳定性不仅与酸的种类和浓 度有关． 而且与样品浓度有关。当体系中样品浓度较
低时． 盐酸法的灵敏度稍高于硫酸法， 二者均有较好 的透明度 ， 但后者的稳定性略胜一筹； 随体系中样 品
。 ”ｊ
ｏ ｌ Ｔ Ｉ
＋ ……Ⅲ ｛ …
—● 卜 帅 Ｉ ｌ ￣ ２ ５ （ Ｈ ，
准绘制的标准曲线测定原花青素时，含量会偏高， 这 也是香草醛法测定原花青素含量时应注意的问题。
３ 结 论
（ １ ） 通过考察酸对显色的影响， 确定以较低浓度
的硫酸作催化剂。 （ ２ ） 通过考察硫酸浓度、 香草醛浓度、 反应温度、
素具有极强的抗氧化性， 清除 自由基和抑制脂质过氧 化的能力，其抗氧化效果约为 Ｖ Ｅ 的５ ０ 倍， Ｖ Ｃ的 ２ ０
倍， 是目前发现的最强有效的氧 自由基消除剂和脂质 过氧化抑制剂之一。 原花青素单体按不同聚合度形成 聚合体 ， 因构象或键合位置不同， 单体又有多种异构
纯） ； 甲醇、 硫酸、 盐酸均为分析纯； 实验用水为去离子
分子交联， 形成大分子 （ 见图 １ ） ， 使 Ａ环产生红色 的
发光团（ ５ ０ ０ ｒ ｉ ｍ ） ， 见图 ２ 。
裹 ３ 正交实验结果极差分析及水平趋势图
埘●
Ｎ ０ ＾＾■
Ｉ Ｂ●
一●
Ｉ Ｂ●
田 ２ 原花青素与香草醛络合物可见光扫描 图 谱
由反应体系的吸收曲线 （ 图２ ） 知， 最大吸收波长 为５ ０ ０ ｎ ｍ ， 与香草醛法的特征吸收一致 。以后实验在 此波长下检测。
３ ０ ％ 、 香草醛 ４ 来自百度文库 、 反应温度 ３ ０℃、 反应时间 １ ５ ｍ ｉ ｎ ， 并得 出了标准 曲线 。
［ 关键词】 香草醛 ； 葡萄籽； 原花青素 ［ 中豳分类号】Ｒ ２ ８ ４ ． ２ ［ 文献标识码］Ａ ［ 文章编号］ １ ０ ０ ３ — ５ ０ ９ ５ （ ２ ０ ０ ７ ） ０ １ － － ０ ０ ４ ６ － ０ ３
２ ． ２ 酸的选择
由正交实验结果 （ 表２ ） 和极差分析 （ 表３ ） 可知， 各因素对显色反应的影响由大到小依次为硫酸浓度 、 香草醛浓度、 反应温度 、 反应时间。直观分析的结果 为； 硫酸 ４ ０ ９ ６ ， 香草醛 ４ ％ ， 反应温度 ２ Ｏ ℃， 反应时间 １ ５ ｍ ｉ ｎ ； 极差分析结果为 ： 硫酸 ４ ０ ９ ６ ， 香草醛 ４ ％ ， 反应
佳 比色条件下， 分别采用两种酸作催化剂， 重复测定
４次。
稳定性实验： 为了检验比色条件的稳定性 ， 在最 佳条件下， 分别采用两种酸作催化剂， 每隔一定时间 测定其吸光度， 连续测定 ｌ ｈ 。
１ ． ２ ． ６ 标准曲线绘制
０ ４ 浓度 香革醛浓度
１
反应温度
１ ２
０ ． Ｏ ｌ —Ｏ ． １ ｍ ｇ ／ ｍ Ｌ 之间时， 实验数据具有 良好的线性
相对误差
０ ． ４ ４
～ １ ． ３ ０
０ ． ４ ４
０ ． ４ ４
Ａ ￣ Ｃ １ ）
相对误差
０ ． ２ ４ ６
一 ５ ． ４
０ ． ２ ４ ５
— ５ ． ４
仉２ ９ ９
河 北 化 工
第 １期
裹 ４ 香草醛硫酸法与香草醛盐酸法重复性实验
序号
Ａ ｍ
ｉ
０ ． ２ ２ ６
２
０ ． ２ ２ ２
３
０ ． ２ ２ ６
４
０ ． ２ ２ ６
在最佳比色条件下。 分别测定原花青与儿茶素的 标准 曲线， 结果见图 ４ 。由图 ４ 知， 当标准品浓度在
浓度增加 ， 硫酸法的灵敏度升高 且随硫酸浓度继续 ． ４ 可靠性检验 增加， 其升高趋势越来越显著。当硫酸浓度高于 ４ ０ ９ ６ ２ ． ４ ． Ｉ 重复性实验（ 表４ ） 以后， 体系的透 明度降低 ， 稳定性降低 ． 颜 色发生变 ２
维普资讯 http://www.cqvip.com
图３ 香草醛硫酸法稳定性实验
稳定性实验结果（ 图３ ） 表明， 盐酸法反应体系的 吸光度 随时间延长而 降低 ，在 ６ ０ ｍ ｉ ｎ内下 降 了 ２ ． ４ ％ ，硫酸法反应体系的吸光度长时间内基本不变， 因此， 硫酸法稳定性较好。 ２ ． ５ 标准曲线绘制
（ １ ） 配制样品溶液 称取一定量的原花青素标准
品，用蒸馏水定容至一定体积，配成浓度为 ０ ． ０ １ —
０ ． ５ ｍ ｇ ／ ｍ Ｌ的原花青素标准品水溶液。 （ ２ ） 配制显色剂 试剂 Ａ （ 香草醛 一甲醇溶液） ： 称取一定量的香草醛，分别用甲醇定容至一定体积， 配成浓度为 ０ ． ５ ％ 、 １ ％ 、 ２ ％ 、 ３ ％ 、 ４ ％ 、 ５ ％ （ ｗ ／ 的香草醛一
口 ‘ 口 珊 … ＇Ｖ ｕ 口Ｖ ● ｕ
反应时间等因素的影响。确立了稳定的比色条件： 硫
ｔ ／ ｍ ｉ ｎ
酸３ ６ 香草醛 钒 反 Ｊ 蝴 度３ Ｏ℃， 反 应时间 １ ５ ｍ ｉ ｎ 。
（ ３ ） 根据实验确立的比色条件， 得 出了原花青素
定量的标准曲线。
化， 逐渐 由红色变为蓝色 。这是 因为浓硫酸具有强氧
化性， 当浓度较高时， 氧化性更为显著， 使香草醛发生 了自 缩合反应， 生成了绿色产物 咖 ， 从而使体系颜色
为劫８ 晕 因寻 荤 ， 设 比色条件 。
４ 医素３ 水平 Ｉ 鼬
Ｇ ９ 确定
改变。 综上所述 ， 盐酸只有低浓度时灵敏度稍高， 其他 方面均逊于硫酸， 但考虑到高浓度的硫酸会导致副反
维普资讯 http://www.cqvip.com
第３ ｏ 卷第 １ 期 ２ ０ ｏ ７年 Ｏ １ 月
五
工
Ｖ Ｊ ｏ １ ． ３ Ｏ Ｎ ｑ ｌ ａ ｎ． ２ ０ ０ ７
葡萄籽原花青素含量测定
赵 平－ ， 宋学娟 － ， 张月萍 ， 贾宏海 ， 于国强
０ ７ ５ ６ ０ ０ ） ．
碳离子， 据此正碳离子的吸光度可测定原花青素的含 量。盐酸或硫酸均可作为反应过程的催化剂。
酸的影响， 确定反应的催化剂。 在此基础上， 考察其他 因素的影响， 确定比色条件。 在最佳 比色条件下， 测定 原花青素及其单体儿茶素的标准曲线， 作为检测原花
青素含量的依据。 １ ． ２ ． １ 配制试剂
３
１ ２ ３ １ ２ ３
２ ３ １ ３ １ ２
３ １ ２ ２ ３ ｌ
０． ２１ ３ ０． ２ １ ５ ０ ． ２ ｏ ４ Ｑ ３ ３ ２ ０ ． ３ ５ ８ ０ ． ３ ５ ０
香草醛发生缩合而形成有色的正碳离子， 即醛以Ａ 环 上的 ６ 、 ８ 位为亲核活性中心， 通过亚 甲基桥键与多酚
应发生， 影响检测结果 ， 本实验最终选择较低浓度的
硫酸作为催化剂。 ２ ． ３ 比色条件确定
裹 １ 原花青素正交实验 （ ３ ９ 水平因素
水平 ０ ． 浓度 ／ ’ ‘ 香草醛浓度 ／ ’ ‘ 反应温度 ／ ℃ 反应时间 ／ ｍ ｉ ｎ
１ ． ２ ． ５ 可靠性检验
重复性实验 ： 为了验证实验结果是否可靠， 在最
（ Ｖ ／ Ｖ ） 的浓硫酸 一甲醇溶液。
该反应的灵敏度与酸浓度有关圆 ， 具体效果尚无 定论。本文将重点考察酸对显色的影响， 选择合适的 酸作为催化剂。再综合分析其他影响因素， 确定合理
的比色条件， 最终做出标准曲线。
１ 实验部分
１ ． １ 仪器和试剂
显色剂的配制采用一定浓度的 Ａ与 Ｂ混合或 Ａ 与ｃ 混合。
．
（ １ ． 河北科技大学化学与制药工程学院， 河北 石家庄 ０ ５ ０ ０ １ ８ ；２ ． 张家口华源葡萄酒有限公司技术科， 河北 张家 口 ［ 摘 要】 酸性条件下， 原花青素与香草醛反应生成红色产物， 由红色产物的吸光度可确定原花青素的含量。 实验首先考察了 酸对显色的影响， 确定以较低浓度的硫酸作催化剂。在此基础上， 进一步考察了其他因素的影响。 确立了稳定的比色条件； 硫酸
０ ． ２ ５ ０
— ３ ． ８
关系。回归方程分别为：儿茶素． ￣Ｚ ２ ９ ４ １ Ａ ＋ Ｑ ０ ０ ８ １ ，
Ｏ ． ９ ９ ８ ９ ；原 花青 素 ： Ａ ＝ ２ ． ３ ８ １ ６ Ｃ － ０ ． ０ ０ ５ ９ ，
／ Ｆ － ＝ Ｏ ． ９ ９ ９ ｌ 。
１ ． ２ ． ２ 确定最 大吸 收波长
Ｕ Ｖ － ２ ５ ０ １ Ｐ Ｃ型分光光度计 （ 日本岛津） ； 恒温 水
【 收藕 日期］ ２ ０ ０ ６ － １ １ — ２ ７
取适量的标准品溶液 ， 与显色剂反应后， 以无水 甲醇作参比， 在可见光区扫描， 测定最大吸收波长。
１ ． ２ ． ３ 酸的选择
甲醇溶液； 试剂 Ｂ （ 浓盐酸一甲醇溶液） ： 量取一定体
图 １ 酚醛缩合反应机理
积的浓盐酸， 分别用 甲醇定容至一定体积， 配成浓度 为１ ５ ％ 、 ３ ０ ９ ６ 、 ４ ５ ％ （ 的浓盐酸一甲醇溶液；试剂 Ｃ （ 浓硫酸一甲醇溶液） ： 量取一定体积的浓硫酸， 分别 用 甲醇定容至一定体积 ，配成浓度为 ２ ０ ９ ６ 、 ３ ｏ ９ ６ 、 ４ ０ ％
敏度增加： 当浓度过高时， 会导致香草醛 自 缩合 ． 其产
物影响体系的吸光度 。 在保证不导致副反应发生的前 提下， 应选择较高的硫酸浓度 。本实验最终确定硫酸 浓度为 ３ ０ ％ 。最佳 比色条件为：浓硫酸 ３ ０ ％ ，香草醛 ４ ％ ， 反应温度 ３ ０℃， 反应时间 １ ５ ｍ ｉ ｎ 。
［ 作者简介】 赵
平（ １ ９ ６ ５ 一 ） ， 男， 教授 ， 博士 ， 研 究方向为化 工
分离及生物分离 ．
维普资讯 http://www.cqvip.com
第１ 期
赵
平等 ： 葡萄籽原花青素含量测定
・ ４ ７ ・
两种显色剂分别与不同浓度的样品溶液反应， 测 定体系在最大吸收波长下的吸光度。 １ ． ２ ． ４ 比色 条件的确定 以硫酸浓度 ， 香草醛浓度 ， 反应温度和反应时间
重复性实验结果（ 表４ ） 表明， 硫酸法的最大相对 误差在 １ ． ３ ０ ％ 之 内，而盐酸法 的最小相对误差大于
用本法测定时， 二者均有很好的线性关系， 但相
同浓度的儿茶素吸光度高于原花青素， 以儿茶素为基
３ ． ８ ９ ６ ， 硫酸法的可靠性高。
２ ． ４ ． ２ 稳定性实验（ 图３ ）
原花青素为植物多酚类天然抗氧化剂， 由不同数 浴锅 （ 龙口市电炉制造厂） 。 量的单体黄烷 － ３ － 醇缩合而成， 这类化合物 因在酸性
条件下加热生成花青素而被命名为原花青素。 原花青 原花青素标准 品（ 天津尖峰天然产物研究开发公 司， 纯度 ≥９ ５ ％ ） ； 儿茶素标准品 （ 美国 Ｓ ｉ ｇ ｍ ａ 公司， 纯 度 ≥９ ８ ９ ６ ） ； 香草醛 （ 天津光复精细化工研 究所 ， 分析
３
反应时问 吸光度
１ ２
３
在最佳 比色条件下， 分别绘制原花青素水溶液和 序一 ｌ ２ ３ ４ ５ ６ ７ ８ ９ 号一 ２ 儿茶素水溶液的标准曲线。
０ ． １ ２ ４ ０ ． １ ３ ８
０ ． １ ２ ７
２ 结果与讨论
２ ． １ 最大吸收波长的确定 在酸催化作用下， 原花青紊分子中的间苯二酚与
水。
１ ． ２ 实验方法 首先扫描出反应体系的最大吸收波长， 然后考察
体， 要测定每一成分的含量极为困难。目前国际上还 没有统一的原花青素检测方法， 其定量分析常用比色 法， 应用较多的是香草醛法 ， 该方法的原理 （ 图１ ） 基 于原花青素 Ａ 环化学活性较高【 Ｉ 】 ， 其上的羟基可与香 草醛发生酚醛缩合反应， 在浓酸作用下形成有色的正
温度 ３ Ｏ℃， 反应时间 １ ５ ｍ ｉ ｎ ， 与水平趋势图一致。 硫 酸在反应中起催化作用， 不改变平衡点． 浓度升高， 灵
两种显色剂分别与不同浓度的样品溶液反应， 结 果表明， 反应的灵敏度与稳定性不仅与酸的种类和浓 度有关． 而且与样品浓度有关。当体系中样品浓度较
低时． 盐酸法的灵敏度稍高于硫酸法， 二者均有较好 的透明度 ， 但后者的稳定性略胜一筹； 随体系中样 品
。 ”ｊ
ｏ ｌ Ｔ Ｉ
＋ ……Ⅲ ｛ …
—● 卜 帅 Ｉ ｌ ￣ ２ ５ （ Ｈ ，
准绘制的标准曲线测定原花青素时，含量会偏高， 这 也是香草醛法测定原花青素含量时应注意的问题。
３ 结 论
（ １ ） 通过考察酸对显色的影响， 确定以较低浓度
的硫酸作催化剂。 （ ２ ） 通过考察硫酸浓度、 香草醛浓度、 反应温度、
素具有极强的抗氧化性， 清除 自由基和抑制脂质过氧 化的能力，其抗氧化效果约为 Ｖ Ｅ 的５ ０ 倍， Ｖ Ｃ的 ２ ０
倍， 是目前发现的最强有效的氧 自由基消除剂和脂质 过氧化抑制剂之一。 原花青素单体按不同聚合度形成 聚合体 ， 因构象或键合位置不同， 单体又有多种异构
纯） ； 甲醇、 硫酸、 盐酸均为分析纯； 实验用水为去离子
分子交联， 形成大分子 （ 见图 １ ） ， 使 Ａ环产生红色 的
发光团（ ５ ０ ０ ｒ ｉ ｍ ） ， 见图 ２ 。
裹 ３ 正交实验结果极差分析及水平趋势图
埘●
Ｎ ０ ＾＾■
Ｉ Ｂ●
一●
Ｉ Ｂ●
田 ２ 原花青素与香草醛络合物可见光扫描 图 谱
由反应体系的吸收曲线 （ 图２ ） 知， 最大吸收波长 为５ ０ ０ ｎ ｍ ， 与香草醛法的特征吸收一致 。以后实验在 此波长下检测。
３ ０ ％ 、 香草醛 ４ 来自百度文库 、 反应温度 ３ ０℃、 反应时间 １ ５ ｍ ｉ ｎ ， 并得 出了标准 曲线 。
［ 关键词】 香草醛 ； 葡萄籽； 原花青素 ［ 中豳分类号】Ｒ ２ ８ ４ ． ２ ［ 文献标识码］Ａ ［ 文章编号］ １ ０ ０ ３ — ５ ０ ９ ５ （ ２ ０ ０ ７ ） ０ １ － － ０ ０ ４ ６ － ０ ３
２ ． ２ 酸的选择
由正交实验结果 （ 表２ ） 和极差分析 （ 表３ ） 可知， 各因素对显色反应的影响由大到小依次为硫酸浓度 、 香草醛浓度、 反应温度 、 反应时间。直观分析的结果 为； 硫酸 ４ ０ ９ ６ ， 香草醛 ４ ％ ， 反应温度 ２ Ｏ ℃， 反应时间 １ ５ ｍ ｉ ｎ ； 极差分析结果为 ： 硫酸 ４ ０ ９ ６ ， 香草醛 ４ ％ ， 反应
佳 比色条件下， 分别采用两种酸作催化剂， 重复测定
４次。
稳定性实验： 为了检验比色条件的稳定性 ， 在最 佳条件下， 分别采用两种酸作催化剂， 每隔一定时间 测定其吸光度， 连续测定 ｌ ｈ 。
１ ． ２ ． ６ 标准曲线绘制
０ ４ 浓度 香革醛浓度
１
反应温度
１ ２
０ ． Ｏ ｌ —Ｏ ． １ ｍ ｇ ／ ｍ Ｌ 之间时， 实验数据具有 良好的线性
相对误差
０ ． ４ ４
～ １ ． ３ ０
０ ． ４ ４
０ ． ４ ４
Ａ ￣ Ｃ １ ）
相对误差
０ ． ２ ４ ６
一 ５ ． ４
０ ． ２ ４ ５
— ５ ． ４
仉２ ９ ９
河 北 化 工
第 １期
裹 ４ 香草醛硫酸法与香草醛盐酸法重复性实验
序号
Ａ ｍ
ｉ
０ ． ２ ２ ６
２
０ ． ２ ２ ２
３
０ ． ２ ２ ６
４
０ ． ２ ２ ６
在最佳比色条件下。 分别测定原花青与儿茶素的 标准 曲线， 结果见图 ４ 。由图 ４ 知， 当标准品浓度在
浓度增加 ， 硫酸法的灵敏度升高 且随硫酸浓度继续 ． ４ 可靠性检验 增加， 其升高趋势越来越显著。当硫酸浓度高于 ４ ０ ９ ６ ２ ． ４ ． Ｉ 重复性实验（ 表４ ） 以后， 体系的透 明度降低 ， 稳定性降低 ． 颜 色发生变 ２
维普资讯 http://www.cqvip.com
图３ 香草醛硫酸法稳定性实验
稳定性实验结果（ 图３ ） 表明， 盐酸法反应体系的 吸光度 随时间延长而 降低 ，在 ６ ０ ｍ ｉ ｎ内下 降 了 ２ ． ４ ％ ，硫酸法反应体系的吸光度长时间内基本不变， 因此， 硫酸法稳定性较好。 ２ ． ５ 标准曲线绘制
（ １ ） 配制样品溶液 称取一定量的原花青素标准
品，用蒸馏水定容至一定体积，配成浓度为 ０ ． ０ １ —
０ ． ５ ｍ ｇ ／ ｍ Ｌ的原花青素标准品水溶液。 （ ２ ） 配制显色剂 试剂 Ａ （ 香草醛 一甲醇溶液） ： 称取一定量的香草醛，分别用甲醇定容至一定体积， 配成浓度为 ０ ． ５ ％ 、 １ ％ 、 ２ ％ 、 ３ ％ 、 ４ ％ 、 ５ ％ （ ｗ ／ 的香草醛一
口 ‘ 口 珊 … ＇Ｖ ｕ 口Ｖ ● ｕ
反应时间等因素的影响。确立了稳定的比色条件： 硫
ｔ ／ ｍ ｉ ｎ
酸３ ６ 香草醛 钒 反 Ｊ 蝴 度３ Ｏ℃， 反 应时间 １ ５ ｍ ｉ ｎ 。
（ ３ ） 根据实验确立的比色条件， 得 出了原花青素
定量的标准曲线。
化， 逐渐 由红色变为蓝色 。这是 因为浓硫酸具有强氧
化性， 当浓度较高时， 氧化性更为显著， 使香草醛发生 了自 缩合反应， 生成了绿色产物 咖 ， 从而使体系颜色
为劫８ 晕 因寻 荤 ， 设 比色条件 。
４ 医素３ 水平 Ｉ 鼬
Ｇ ９ 确定
改变。 综上所述 ， 盐酸只有低浓度时灵敏度稍高， 其他 方面均逊于硫酸， 但考虑到高浓度的硫酸会导致副反
维普资讯 http://www.cqvip.com
第３ ｏ 卷第 １ 期 ２ ０ ｏ ７年 Ｏ １ 月
五
工
Ｖ Ｊ ｏ １ ． ３ Ｏ Ｎ ｑ ｌ ａ ｎ． ２ ０ ０ ７
葡萄籽原花青素含量测定
赵 平－ ， 宋学娟 － ， 张月萍 ， 贾宏海 ， 于国强
０ ７ ５ ６ ０ ０ ） ．
碳离子， 据此正碳离子的吸光度可测定原花青素的含 量。盐酸或硫酸均可作为反应过程的催化剂。
酸的影响， 确定反应的催化剂。 在此基础上， 考察其他 因素的影响， 确定比色条件。 在最佳 比色条件下， 测定 原花青素及其单体儿茶素的标准曲线， 作为检测原花
青素含量的依据。 １ ． ２ ． １ 配制试剂
３
１ ２ ３ １ ２ ３
２ ３ １ ３ １ ２
３ １ ２ ２ ３ ｌ
０． ２１ ３ ０． ２ １ ５ ０ ． ２ ｏ ４ Ｑ ３ ３ ２ ０ ． ３ ５ ８ ０ ． ３ ５ ０
香草醛发生缩合而形成有色的正碳离子， 即醛以Ａ 环 上的 ６ 、 ８ 位为亲核活性中心， 通过亚 甲基桥键与多酚
应发生， 影响检测结果 ， 本实验最终选择较低浓度的
硫酸作为催化剂。 ２ ． ３ 比色条件确定
裹 １ 原花青素正交实验 （ ３ ９ 水平因素
水平 ０ ． 浓度 ／ ’ ‘ 香草醛浓度 ／ ’ ‘ 反应温度 ／ ℃ 反应时间 ／ ｍ ｉ ｎ
１ ． ２ ． ５ 可靠性检验
重复性实验 ： 为了验证实验结果是否可靠， 在最
（ Ｖ ／ Ｖ ） 的浓硫酸 一甲醇溶液。
该反应的灵敏度与酸浓度有关圆 ， 具体效果尚无 定论。本文将重点考察酸对显色的影响， 选择合适的 酸作为催化剂。再综合分析其他影响因素， 确定合理
的比色条件， 最终做出标准曲线。
１ 实验部分
１ ． １ 仪器和试剂
显色剂的配制采用一定浓度的 Ａ与 Ｂ混合或 Ａ 与ｃ 混合。
．
（ １ ． 河北科技大学化学与制药工程学院， 河北 石家庄 ０ ５ ０ ０ １ ８ ；２ ． 张家口华源葡萄酒有限公司技术科， 河北 张家 口 ［ 摘 要】 酸性条件下， 原花青素与香草醛反应生成红色产物， 由红色产物的吸光度可确定原花青素的含量。 实验首先考察了 酸对显色的影响， 确定以较低浓度的硫酸作催化剂。在此基础上， 进一步考察了其他因素的影响。 确立了稳定的比色条件； 硫酸