双缩脲法总蛋白测定..
总蛋白实验测定实验报告
一、实验目的1. 掌握双缩脲试剂法测定血清总蛋白的原理和方法；2. 熟悉实验操作步骤，提高实验技能；3. 了解血清总蛋白的临床意义及检测方法。
二、实验原理血清总蛋白（Total Protein，TP）是指血液中所有蛋白质的总和，包括白蛋白、球蛋白、纤维蛋白原等。
双缩脲试剂法是一种常用的蛋白质定量分析方法，其原理是蛋白质分子中的肽键在碱性溶液中能与铜离子发生双缩脲反应，生成紫红色络合物。
该络合物在540nm处的吸光度与蛋白质含量在一定范围内呈线性关系，通过测定吸光度可计算出蛋白质含量。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：（1）血清样本：采集患者空腹静脉血，分离血清；（2）双缩脲试剂：硫酸铜、酒石酸钾钠、碘化钾；（3）NaOH溶液：6.0mol/L；（4）蛋白质标准液：60～70g/L；（5）试管、移液器、分光光度计等。
2. 仪器：（1）分光光度计；（2）恒温水浴锅；（3）移液器；（4）试管架。
四、实验步骤1. 标准曲线的绘制：（1）取6支试管，分别加入0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5mL蛋白质标准液；（2）向各试管中加入6.0mol/L NaOH溶液1.5mL；（3）向各试管中加入双缩脲试剂A液1.0mL；（4）混匀，室温放置10分钟；（5）向各试管中加入双缩脲试剂B液4.0mL；（6）混匀，室温放置10分钟；（7）以空白管调零，在540nm波长下测定吸光度；（8）以蛋白质浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
2. 血清总蛋白的测定：（1）取血清样本0.5mL，按照步骤1的操作进行测定；（2）以标准曲线为依据，计算血清总蛋白含量。
五、实验结果与分析1. 标准曲线绘制：根据实验数据绘制标准曲线，计算线性回归方程。
2. 血清总蛋白测定：根据标准曲线，计算血清总蛋白含量。
3. 结果分析：（1）根据实验结果，与正常参考范围进行比较，判断患者是否患有蛋白质代谢异常；（2）分析血清总蛋白含量变化与疾病的关系，为临床诊断提供依据。
总蛋白检测试剂盒(双缩脲比色法)
总蛋白检测试剂盒(双缩脲比色法)简介：总蛋白(Total Protein ，TP)由白蛋白和球蛋白组成。
对于生物体液(血清、尿液、脑脊液)中总蛋白质含量的测定，一般要基于如下两个假设：1、所有蛋白质分子由纯多肽组成，含氮量的质量百分比为16%；2、体液中含有数百个蛋白质分子，每个分子对测定反应都具有非常相似的特性。
目前常用的方法有：双缩脲法、紫外分光光度法、染料结合法、凯氏定氮法、沉淀法等。
Leagene 总蛋白检测试剂盒(双缩脲比色法)多用于人或动物血清、血浆、组织等样本中的总蛋白含量测定。
双缩脲反应的原理是在呈蓝色的碱性硫酸铜溶液存在的情况下，铜离子与肽键形成有色螯合的铜复合物，呈紫色，所产生的颜色密度与参与反应肽键数成比例。
可通过比色法分析浓度，在紫外可见光谱中的波长。
双缩脲法测定蛋白浓度兼容性亦很好，不受大部分样本中其他成分的影响，但易受铜离子螯合剂影响。
本试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。
组成：自备材料：1、 离心管或小试管2、 水浴锅或恒温箱3、 比色杯4、 分光光度计操作步骤(仅供参考)：1、 取蛋白标准配制液或稀释液加入到蛋白标准中，充分溶解后配制成的蛋白标准溶液，配制后可立即使用，溶解后的蛋白标准溶液应-20℃保存。
亦可按自己试验要求继续进行稀释，如稀释至1mg/ml 。
特别提示：待测蛋白溶解于什么样的稀释液中，蛋白标准也宜溶解于什么样的稀释液中。
例如待测蛋白溶解于蔗糖中，亦取蛋白标准溶解于蔗糖中。
一般也可以用NaCl 或PBS 作为溶解总蛋白标准品的稀释液。
编号 名称TC0547 120T Storage试剂(A): 双缩脲试剂 250ml 4℃ 试剂(B): 蛋白标准 20mg RT 试剂(C): 蛋白标准配制液 5ml RT 试剂(D): 双缩脲空白试剂(备选) 100ml4℃ 使用说明书1份2、样本处理：血清、血浆样本直接取检测。
对于组织样本，按组织质量(g)：生理盐水比例，加入生理盐水或PBS，冰浴下匀浆后，离心，取上清待检。
血清总蛋白测定标准操作规程
血清总蛋白测定标准操作规程1.实验原理：（双缩脲法）本试剂采用双缩脲反应，即在碱性溶液中，蛋白质分子中的肽键与两价铜离子反应生成蓝紫色络合物，其中每个铜离子与五至六个肽键络合。
双缩脲反应被广泛应用于临床检验，具有简便、快速可靠的特点。
在试剂中加入碘化物有助于防止碱性铜络合物的自动还原，反应形成的蓝紫色物质与样本中总蛋白浓度成正比，通过测定520-560nm 处吸光度值的变化，即可计算出样本中总蛋白的浓度。
+2u C +蛋白质−−→−-OH Cu 蛋白质复合物 2.试剂主要组成成分3.样本要求：新鲜无溶血血清，勿使用肝素抗凝血浆。
22～25℃保存8小时，2～8℃保48小时，-20℃保存7天，样本不可反复冻融！4.检验方法：仪器法（详见DF-603/DI-600标准操作规程）5.参考范围：6.检验结果的解释6.1线性范围：在给定的样本/试剂比例和条件下测定时，本试剂线性范围可达100g/L 。
样本含量超出线性范围时，建议用0.9%（W/V ）的氯化钠溶液稀释样本。
最大稀释5倍。
6.2单位换算：g/dL=g/L ×0.17检验结果的局限性7.1结果的准确性依赖于仪器的校正和测定温度、时间的控制。
7.2若试剂浑浊或以水空白在540nm 处吸光度大于0.200时不能使用。
8.产品性能指标8.1试剂外观：蓝色透明液体，无悬浮物及沉淀物。
8.2装量：不低于标识值8.3空白吸光度：在540nm处，光径1cm时，空白吸光度A≤0.200。
8.4分析灵敏度：在540nm处，光径1cm时，测量70g/L的总蛋白，吸光度差△A≥0.1508.5线性区间：试剂的线性区间为[30.0-100.0]g/L，在此线性区间内：a）线性相关系数r应不小于0.995；b）线性相对偏差不超过±6.0%。
8.6精密度8.6.1重复性：重复测试（70.0±10.0）g/L的样本，所得结果的变异系数（CV）应≤2.0%8.6.2批间差：重复测试（70.0±10.0）g/L的样本，所得结果批间相对极差（R）应≤5.0%8.7准确性：相对偏差应不大于±5.0%。
双缩脲法测定血清总蛋白实验报告
双缩脲法测定血清总蛋白实验报告实验报告：双缩脲法测定血清总蛋白摘要：本实验采用双缩脲法测定血清总蛋白浓度。
通过对比实验组和对照组样本的比色反应，得出了血清总蛋白的浓度。
实验结果表明，该方法简便、可靠、准确，适用于血清总蛋白的浓度测定。
实验目的：1.掌握双缩脲法测定血清总蛋白浓度的基本原理和方法。
2.了解比色法在实验中的应用及操作技巧。
3.验证双缩脲法测定血清总蛋白浓度的可靠性和准确性。
实验方法：1.取不同浓度的血清标准品6个，分别标注不同浓度和编号。
2.取待测样品6个，标注不同编号。
3.将标准品和待测样品加入10ml离心管中，每个管中各加入1ml蒸馏水。
4.在离心管中分别加入1ml蛋白试剂A和B，摇匀，并放置15分钟。
5.加入1ml无水乙醇摇匀。
6.在1ml离心管中加入1ml0.1mol/L NaOH溶液，使溶液转为蓝色。
7.在250nm处比色计测定吸光度（对照组样本的吸光度为0）。
8.计算出样品的血清总蛋白浓度。
实验结果：对照组样本吸光度为0，实验组6个样本的吸光度如下表：编号吸光度S1 0.163S2 0.344S3 0.516S4 0.688S5 0.860S6 1.032标准品的吸光度如下表：编号吸光度浓度G1 0.163 0.7g/LG2 0.344 1.4g/LG3 0.516 2.0g/LG4 0.688 2.8g/LG5 0.860 3.4g/LG6 1.032 4.1g/L通过双缩脲法测定，我们计算出每个实验组样本的血清总蛋白浓度。
编号浓度（g/L）S1 0.7S2 1.4S3 2.0S4 2.8S5 3.4S6 4.1实验结论：1.通过双缩脲法测定血清总蛋白，准确地测定了实验组样本的血清总蛋白浓度。
2.双缩脲法测定血清总蛋白浓度的方法简便、可靠、准确，适用于血清总蛋白浓度测定。
总蛋白实验报告
一、实验目的1. 掌握双缩脲试剂法测定血清总蛋白的原理和操作步骤。
2. 了解血清总蛋白测定的临床意义和注意事项。
3. 培养实验操作技能和数据处理能力。
二、实验原理双缩脲试剂法是一种经典的蛋白质定量方法，其原理基于蛋白质分子中肽键与铜离子在碱性条件下形成紫红色络合物的特性。
在一定浓度范围内，蛋白质含量与紫红色络合物的吸光度成正比。
通过测定吸光度，可以计算出样品中的蛋白质含量。
三、实验材料1. 实验试剂：6.0mol/L NaOH溶液、双缩脲试剂（硫酸铜、酒石酸钾钠、碘化钾）、蛋白质标准液、待测血清样品。
2. 仪器：分光光度计、移液器、试管、烧杯、试管架等。
四、实验步骤1. 准备工作（1）配制双缩脲试剂：称取硫酸铜结晶3g，溶于500ml新鲜制备的蒸馏水中，加入酒石酸钾钠9g和碘化钾5g，待完全溶解后，加入100ml 6.0mol/L NaOH溶液，最后用蒸馏水定容至1L。
（2）配制蛋白质标准液：用定值参考血清或标准白蛋白配制蛋白质标准液，浓度为60～70g/L。
（3）将待测血清样品进行适当稀释。
2. 实验操作（1）取试管若干，编号，分别加入0.5ml蛋白质标准液、0.5ml待测血清样品（或稀释后的血清样品）和0.5ml蒸馏水作为空白对照。
（2）向每个试管中加入1.0ml双缩脲试剂，混匀。
（3）将试管置于水浴中加热5分钟，取出冷却至室温。
（4）用分光光度计在540nm波长处测定各管吸光度。
3. 数据处理（1）绘制标准曲线：以蛋白质标准液浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
（2）根据待测血清样品的吸光度，从标准曲线上查得对应的蛋白质浓度。
五、实验结果与分析1. 标准曲线绘制：以蛋白质标准液浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
2. 待测血清样品蛋白质含量计算：根据待测血清样品的吸光度，从标准曲线上查得对应的蛋白质浓度，即为待测血清样品的蛋白质含量。
六、讨论、心得1. 双缩脲试剂法测定血清总蛋白是一种快速、简便、准确的方法，广泛应用于临床检验和生物化学研究。
测定总蛋白的方法
测定总蛋白的方法测定总蛋白的方法主要包括以下几种：1.双缩脲法：这是一种常用的蛋白质定量方法。
蛋白质中的肽键(-CONH-)在碱性条件下与Cu2+络合成紫红色复合物，产生的颜色强度在肯定范围内与蛋白质含量成正比。
双缩脲试剂与蛋白质中的肽键反应，形成紫色复合物，通过比色法或分光光度法测定其吸光度，进而推算出总蛋白的含量。
2.溴甲酚绿法：溴甲酚绿是一种酸性染料，它与蛋白质结合后颜色会发生变化。
通过测量溶液中颜色的变化，可以间接测定总蛋白的浓度。
3.凯氏定氮法：这是一种经典的蛋白质定量方法。
通过将样品中的蛋白质消解，使其中的氮转化为氨气，然后用酸吸收氨气并进行定量分析，从而计算出总蛋白的含量。
将血清与强酸一起加热消化，使血清中的含氮化合物转化为铵盐，再加碱使铵盐成为氨进经蒸馏分别出来，最终用酸滴定测定氮量，按每克氨相当于6.25g蛋白质计算蛋白质的浓度。
4.电泳法：电泳技术可以根据蛋白质的电荷和分子量差异将其分离，并通过染色或免疫印迹等方法进行定量或定性分析。
5.免疫分析法：利用特异性抗体与蛋白质的结合反应，如酶联免疫吸附测定（ELISA）、免疫比浊法等，来检测总蛋白的含量。
6.质谱法：质谱技术可以精确测定蛋白质的质量和含量，常用于蛋白质组学研究和复杂样品中的总蛋白分析。
7.酚试剂法：蛋白质分子中的酪氨酸残基和色氨酸残基能够和酚试剂中的磷钨酸-磷钼酸反应生成蓝色化合物。
8.紫外分光光度法：蛋白质分子内的色氨酸、酪氨酸等芳香族氨基酸可使蛋白质溶液在280nm波特长有一汲取峰，依此性质可用于蛋白质定量。
9.染料结合法：在酸性环境中，蛋白质分子解离出的-NH3+，可与染料的阴离子产生颜色反应。
常用的染料有氨基黑、考马斯亮蓝等。
10.比浊法：用某些酸类(如二氯醋酸、磺基水杨酸等)和血清蛋白质结合产生沉淀，然后测定其浊度。
这些方法各有优缺点，如凯氏定氮法结果精确，但操作复杂；双缩脲法简便、精确、重复性好，但灵敏度稍差；紫外分光光度法敏感且简便，但受尿酸和胆红素干扰；染料结合法操作简便、重复性好、灵敏度高，但特异性不高；比浊法操作简便，但准确性较差。
实验十七双缩脲法测定血浆总蛋白质含量
实验十七双缩脲法测定血浆总蛋白质含量蛋白质生命的基础，任何生命离不开蛋白质，本实验为了提高同学们的自主动手能力，培养同学们有序化的操作能力，以便各同学在今后的工作中有更出色的表现，不仅能够丰富各同学的知识，而且也能够增强各同学的自信心。
1、实训应用：检测蛋白质的含量，例如:检测食品中蛋白质含量是否达到标准，检测血清中的蛋白质是否出现异常等等。
2、实训原理凡含有两个以上肽键的化合物在碱溶液中能与硫酸铜作用生成紫色或紫红色复合物，这一反应称为双缩脲反应。
蛋白质是由许多氨基酸通过肽键连接起来的，因而可与双缩脲试剂发生颜色反应，且颜色的深浅与蛋白质浓度成正比。
3．试剂的配制3.1 双缩脲试剂：称取硫酸铜1.5g加水100ml，加热助溶。
另取酒石酸钾钠6.0g，碘化钾5g，溶于500ml水中。
两液混匀后，在搅拌下加10%NaOH溶液300ml，用蒸馏水稀释至1000ml，储存在塑料瓶中。
此液可以长期保存。
若储存瓶中有黑色沉淀析出，需重新配置。
3.2 1%蛋白质标准溶液。
3.3 分光光度计。
4、主要器材本次实训分为六大组，每大组再分成四个小组，以下为本次实训要器材及数量：试管（150支） 500ml烧杯（6个）小烧杯（45个） 1000ml容量瓶（6个） 10ml量筒（46个）胶头滴管（46个）玻璃棒（6个）塑料瓶（6个）分光光度计（180个）移液管或10ml量筒（46个）5．实验安排本班生物实验分为六大组，本次实验每大组再分成四个小组，要求自主配试剂（人员自行安排，该洗的还是要洗一下）。
在配好本实验所需的试剂后，每组再分成两人一组完成本次实验.注意事项5.1分光光度计的盖要轻拿轻放，拿器皿时，手必须拿在粗糙面;器皿外有水时用吸水纸吸干，用擦纸一次擦干（不能来回擦拭）。
5.2使用时检查光测是否是透视比5.3使用前必须先打开盖子调0，盖上是出现100，连续两次出现0与100时，方可使用6．实训操作：6.1标准曲线的绘制：取小试管6支，按下表：表5-1 实训的具体操作1 2 3 4 5 6 1%蛋白质标准液（ml）0.1 0.3 0.5 0.7 0.9 —0.9%NaCl(ml) 0.9 0.7 0.5 0.3 0.1 1.0 双缩脲试剂（ml） 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0 蛋白质浓度（ml）10 30 50 70 90 0按上表混合后，于370C水浴中放置15分钟，在520nm波长下比色;以第6管调节零点，测得各管的吸光度值。
血清总蛋白测定(双缩脲
血清总蛋白测定（双缩脲）1. 简介血清总蛋白是指血液中所有蛋白质的总和，包括白蛋白和球蛋白等。
血清总蛋白测定是一项常见的检验方法，用于评估患者的蛋白质代谢情况，以及某些疾病的诊断和监测。
双缩脲法是一种常用的血清总蛋白测定方法，本文将介绍该方法的原理、操作流程和结果解读。
2. 原理双缩脲法利用缩脲与蛋白质中的酚类物质反应生成有颜色的复合物，通过测量复合物的吸光度来定量测定血清中的总蛋白含量。
该方法具有简单、灵敏、快速等特点，被广泛应用于临床实验室及科研领域。
3. 操作流程3.1 样本处理从被检测者的静脉血中采集适量的血清样本，并放置在离心管中，离心10分钟将血清分离出来。
将分离得到的血清样本转移到干净的试管中。
3.2 加入试剂取适量的双缩脲试剂，按照其说明书的要求加入到试管中，与血清样本进行充分混合。
注意避免空气泡的形成。
3.3 酶解反应将试管放置于恒温水浴中，根据试剂的要求进行酶解反应。
一般情况下，反应时间为30分钟。
3.4 测定吸光度将反应体放入分光光度计中，设置波长为试剂说明书要求的波长，记录吸光度值。
3.5 统计结果根据标准曲线，计算出血清样本中总蛋白的含量。
4. 结果解读根据血清总蛋白测定的结果，可以得出以下结论： - 如果测定的结果高于正常范围，可能说明患者在蛋白质代谢方面存在异常，如蛋白质合成过多或凋亡减少。
- 如果测定的结果低于正常范围，可能说明患者在蛋白质合成方面存在问题，如肝功能受损或营养不足等。
需要注意的是，血清总蛋白测定的结果受到多种因素影响，如年龄、性别、饮食习惯等，因此在结果解读时需要综合考虑患者的临床情况。
5. 总结血清总蛋白测定是一种常用的检验方法，通过双缩脲法可以快速、准确地测定血清中的总蛋白含量。
该方法操作简单，结果解读可为临床医生提供重要的参考依据。
但需要注意的是，结果的解读需要综合考虑患者的临床情况，以及其他相关检验指标的结果，才能做出正确的诊断。
血清总蛋白测定方法
血清总蛋白测定方法嘿，血清总蛋白测定这事儿啊，咱来好好唠唠。
一般来说呢，可以用双缩脲法。
先准备好血清样本，可不能太脏了，不然会影响结果哦。
然后把一种叫双缩脲试剂的东西加进去。
这试剂就像个小侦探，能和血清里的蛋白发生反应。
反应完了，颜色就会变。
接着用仪器去测量这个颜色的变化程度。
颜色变化越大，说明血清里的总蛋白就越多。
就像看彩虹一样，颜色越鲜艳，就越好看。
不过这测量可得仔细点，不能马虎。
还有一种方法是考马斯亮蓝法。
也是先把血清准备好，然后加上考马斯亮蓝试剂。
这试剂就像个小精灵，能和蛋白紧紧地抱在一起。
然后呢，同样用仪器去测量颜色的变化。
这个方法比较灵敏，能测出很少量的蛋白呢。
另外呢，也可以用紫外分光光度法。
这就有点高科技了。
把血清放在紫外光下照一照，蛋白会吸收特定的波长。
根据吸收的程度，就能算出蛋白的含量。
就像晒太阳，不同的东西吸收阳光的程度不一样。
在做血清总蛋白测定的时候，一定要注意操作规范。
不能随便乱加试剂，也不能把仪器调得乱七八糟。
就像做饭一样，得按照步骤来，不然做出来的菜不好吃。
我给你讲个事儿哈。
有个医生，他要给一个病人测血清总蛋白。
他先用了双缩脲法，可是操作的时候不小心把试剂加错了，结果测出来的结果乱七八糟的。
后来他又用了考马斯亮蓝法，这次他可小心了，每一步都认真做。
最后终于得到了准确的结果。
他可高兴了，说以后做实验一定要认真，不能马虎。
所以啊，血清总蛋白测定有不同的方法，得根据实际情况选择合适的。
而且做的时候一定要认真仔细，这样才能得到准确的结果呢。
双缩脲法测定血清总蛋白实验报告
双缩脲法测定血清总蛋白实验报告一、实验目的掌握双缩脲法测定血清总蛋白的原理和操作方法，熟悉分光光度计的使用，了解血清总蛋白测定的临床意义。
二、实验原理双缩脲试剂是由硫酸铜的碱性溶液与酒石酸钾钠的碱性溶液混合而成。
当含有两个或两个以上肽键的化合物（如蛋白质）与双缩脲试剂反应时，形成紫红色的络合物。
其颜色的深浅与蛋白质的浓度成正比，在 540nm 波长处有最大吸收峰。
通过比色法，可以测定样品中蛋白质的含量。
三、实验材料与设备1、试剂双缩脲试剂：称取硫酸铜（CuSO₄·5H₂O）15g 和酒石酸钾钠60g，用 500ml 蒸馏水溶解，在搅拌下加入 300ml 10%氢氧化钠溶液，用水稀释至 1000ml，贮存于塑料瓶中，可长期保存。
标准蛋白溶液（10g/L）：称取干燥的牛血清白蛋白 10g，用少量生理盐水溶解后，转移至 100ml 容量瓶中，用生理盐水定容至刻度，摇匀。
生理盐水。
2、器材分光光度计离心机移液器试管刻度吸管四、实验步骤1、标准曲线的绘制取 6 支干燥洁净的试管，按下表进行操作：｜试管编号｜ 1 ｜ 2 ｜ 3 ｜ 4 ｜ 5 ｜ 6 ｜｜｜｜｜｜｜｜｜｜标准蛋白溶液（ml）｜ 0 ｜ 02 ｜ 04 ｜ 06 ｜ 08 ｜ 10 ｜｜生理盐水（ml）｜ 10 ｜ 08 ｜ 06 ｜ 04 ｜ 02 ｜ 0 ｜｜蛋白质含量（g/L）｜ 0 ｜ 2 ｜ 4 ｜ 6 ｜ 8 ｜ 10 ｜向各管中加入 4ml 双缩脲试剂，充分混匀，室温放置 30 分钟后，以空白管调零，在 540nm 波长处测定各管的吸光度值（A）。
以蛋白质含量为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线。
2、血清样品的测定取 3 支试管，分别标记为测定管、空白管和对照管。
测定管：准确吸取血清样品01ml，加入生理盐水09ml，充分混匀。
再加入 4ml 双缩脲试剂，室温放置 30 分钟后，在 540nm 波长处测定吸光度值（A₁）。
双缩脲法测定总蛋白含量
双缩脲法测定总蛋白含量双缩脲法是一种常用的方法，用于测定生物体中的总蛋白含量。
本文将介绍双缩脲法的原理、步骤和应用，以及一些注意事项。
总蛋白是生物体中一类重要的生化指标，它包括了多种蛋白质分子的总量。
测定总蛋白含量可以用于评估生物体的健康状态、疾病诊断以及药物疗效的监测等方面。
而双缩脲法则是一种常用的测定总蛋白含量的方法。
双缩脲法的原理是利用了蛋白质与染料间的结合反应。
当染料分子与蛋白质结合时，会导致染料的吸收光谱发生变化。
通过测量吸光度的变化，可以间接地推算出样品中的总蛋白含量。
在进行双缩脲法测定总蛋白含量时，需要准备一系列试剂和仪器设备。
首先是双缩脲试剂，它是一种含有染料的溶液。
其次是样品，可以是血清、尿液、细胞提取液等。
还需要分光光度计，用于测量吸光度的变化。
具体操作步骤如下：1. 首先准备好双缩脲试剂和待测样品。
将双缩脲试剂稀释至适当浓度，使其能够与样品中的总蛋白发生反应。
2. 取一定量的样品，加入双缩脲试剂中，充分混合。
注意避免产生气泡。
3. 置于室温下静置一段时间，使样品与试剂充分反应。
4. 使用分光光度计，设置好波长，并将样品吸光度读数。
5. 根据吸光度的读数，结合标准曲线，计算出样品中的总蛋白含量。
双缩脲法的应用非常广泛。
它可以用于临床医学中，用于评估病人的肾功能、肝功能等。
在实验室研究中，双缩脲法也是常用的测定总蛋白含量的方法之一。
需要注意的是，双缩脲法测定总蛋白含量也有一些限制和注意事项。
首先，双缩脲法只能测定总蛋白的含量，无法区分不同种类的蛋白质。
其次，双缩脲法的准确性受到样品的干扰因素影响较大，所以在操作过程中需要尽量减少干扰物的存在。
此外，双缩脲法对某些物质有一定的选择性，因此在应用时需要根据具体情况进行调整和修正。
双缩脲法是一种常用的测定总蛋白含量的方法。
它通过测量吸光度的变化，间接地推算出样品中的总蛋白含量。
双缩脲法具有简单、快速、经济的特点，广泛应用于临床医学和科学研究领域。
双缩脲法测定血清总蛋白实验报告
一、实验目的1. 掌握双缩脲法测定血清总蛋白的基本原理和操作步骤；2. 了解双缩脲试剂的配制方法和使用注意事项；3. 熟悉血清总蛋白的临床意义；4. 通过实验，提高实验操作技能和数据分析能力。
二、实验原理双缩脲法是一种测定蛋白质含量的方法，其原理是：在碱性溶液中，蛋白质分子中的肽键与铜离子（Cu2+）发生反应，形成紫红色络合物。
该络合物在特定波长（如540nm）下的吸光度与蛋白质含量呈线性关系。
通过测定吸光度，可以计算出样品中蛋白质的含量。
三、实验材料与试剂1. 实验材料：牛血清、生理盐水、双缩脲试剂、蛋白质标准液、试管、加样枪、刻度吸管、洗耳球、水浴锅、分光光度计。
2. 实验试剂：（1）双缩脲试剂：硫酸铜、酒石酸钾钠、碘化钾；（2）蛋白质标准液：70g/L；（3）生理盐水：0.9%。
四、实验步骤1. 准备工作：将牛血清、生理盐水、双缩脲试剂、蛋白质标准液等实验材料准备好，并检查仪器设备是否正常。
2. 标准曲线的制作：（1）取6支试管，分别编号为1-6号；（2）向1-5号试管中加入不同浓度的蛋白质标准液，6号试管为空白对照；（3）向每支试管中加入适量的双缩脲试剂；（4）将试管放入水浴锅中，室温放置30分钟；（5）用分光光度计测定540nm处的吸光度，记录数据；（6）以蛋白质浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
3. 样品测定：（1）取3支试管，分别编号为A、B、C；（2）向A、B、C号试管中加入适量的牛血清；（3）向A、B号试管中加入适量的双缩脲试剂，C号试管为空白对照；（4）将试管放入水浴锅中，室温放置30分钟；（5）用分光光度计测定540nm处的吸光度，记录数据；（6）根据标准曲线，计算A、B号试管中蛋白质的含量。
五、实验结果与分析1. 标准曲线的制作：根据实验数据，绘制标准曲线，横坐标为蛋白质浓度（g/L），纵坐标为吸光度。
曲线线性良好，相关系数R2=0.99。
2. 样品测定：根据标准曲线，计算A、B号试管中蛋白质的含量，结果如下：A号试管：蛋白质含量为70g/L；B号试管：蛋白质含量为68g/L。
双缩脲法测定血清总蛋白实验报告
双缩脲法测定血清总蛋白实验报告双缩脲法测定血清总蛋白实验报告引言：血清总蛋白是血液中的一种重要指标，它反映了人体内蛋白质的总量和分布情况。
测定血清总蛋白可以帮助医生判断患者的营养状况、肝功能以及某些疾病的发展情况。
本实验采用了双缩脲法，通过与标准物质的比色反应，定量测定了血清总蛋白的含量。
实验方法：1. 实验仪器与试剂准备本实验所需仪器有分光光度计、移液器、比色皿等。
所需试剂有双缩脲试剂、标准物质（如牛血清白蛋白）以及待测血清样品。
2. 样品预处理将待测血清样品离心，取上清液，并用移液器将上清液吸取到比色皿中。
3. 加入双缩脲试剂用移液器向比色皿中加入适量的双缩脲试剂，并轻轻搅拌均匀，使样品与试剂充分反应。
4. 与标准物质比色将标准物质分别加入不同的比色皿中，每个比色皿中加入相同体积的双缩脲试剂，与待测血清样品同时进行比色。
5. 分光光度计测定将比色皿放入分光光度计中，设定波长为标准波长，记录吸光度值。
6. 绘制标准曲线将吸光度值与标准物质的浓度进行对照，绘制标准曲线。
7. 计算待测血清样品的总蛋白含量根据待测血清样品的吸光度值，在标准曲线上找到对应的浓度，即可计算出待测血清样品的总蛋白含量。
结果与讨论：在本次实验中，我们测得待测血清样品的吸光度值为0.6。
根据标准曲线，我们可以得知该吸光度值对应的总蛋白浓度为30 g/L。
通过与标准物质的比色反应，我们成功地测定了待测血清样品的总蛋白含量。
总蛋白是人体内重要的营养物质，对于维持正常的生理功能至关重要。
通过测定血清总蛋白的含量，我们可以了解患者的营养状况。
如果总蛋白含量过低，可能意味着患者存在蛋白质摄入不足或吸收不良的问题。
而过高的总蛋白含量可能与肝功能异常、肾脏疾病等有关。
然而，需要注意的是，双缩脲法只能测定血清总蛋白的含量，并不能提供蛋白质的具体组成信息。
在实际应用中，还需要结合其他指标和临床病史来综合判断患者的健康状况。
结论：通过双缩脲法测定血清总蛋白的含量，我们可以快速、准确地了解患者的营养状况和某些疾病的发展情况。
实验二血清总蛋白测定双缩脲法
实验二血清总蛋白测定（双缩脲法）血清总蛋白是血清中所有蛋白质的总称，正常人含量为60-80g/L。
按不同的分离方法可将血清蛋白质分为不同的组分。
从目前临床生化实际应用上，血清总蛋白分为清蛋白和球蛋白两大类，其中球蛋白又分为α1球蛋白、α2球蛋白、β球蛋白、γ球蛋白四种。
正常成人每天所合成的血清蛋白质中，清蛋白及大部分α1、α2、β球蛋白是肝脏合成的，γ球蛋白（大部分是免疫球蛋白）则主要来源与浆细胞。
总蛋白测定，一般利用下列四种蛋白质的结构或性质进行：重复的肽键结构；酪氨酸和色氨酸残基对酚试剂反应或紫外吸收；与染料的结合能力；沉淀后借浊度或光折射测定。
目前临床应用最广泛的方法是利用蛋白质分子中的多个肽键与双缩脲试剂显色法。
【目的】1. 熟悉血清总蛋白测定的原理及基本操作。
2. 掌握血清总蛋白测定的临床意义。
【原理】蛋白质分子中的肽键（-CONH-）在碱性条件下能与Cu2+ 作用形成紫红色络合物。
此呈色反应与双缩脲（H2N-OC-NH-CO-NH2）在碱性溶液中与Cu2+ 作用产生紫红色的反应相似，故称为双缩脲反应。
反应中溶液颜色的深浅与蛋白质的含量成正比，可用分光光度法定量检测蛋白质的含量。
凡具有两个以上肽键结构的化合物均有此反应，因此双缩脲反应广泛用于肽及蛋白质定性、定量检测。
【器材】恒温水浴箱、分光光度计、刻度吸管、微量移液管、试管、试管架。
【试剂】1．6mol／L NaOH溶液?称取NaOH（优级纯）240g，溶解于新鲜蒸馏水中并加至1000ml。
置聚乙烯瓶内盖紧室温保存。
2. 双缩脲试剂?精确称取结晶硫酸铜(CuSO4·5H20)3.0g，酒石酸钾(NaKC4H4O6·4H2O) 9.0g，碘化钾(KI)5.0g，用500m1新鲜蒸馏水溶解。
在搅拌下，加入6mol／L氢氧化钠溶液100ml，最后加蒸馏水稀释至1000ml。
置聚乙烯瓶内盖紧室温保存。
3．70g/L蛋白标准液?可用商品血清蛋白标准液，也可收集混合新鲜血清用微量凯氏定氮法测定蛋白质含量，加叠氮钠防腐，冰冻保存。
双缩脲法总蛋白测定
生物化学与分子生物学实验教学中心
2013年秋季学期
小牛血清（1：10）
蛋白标准液（1：10） 0.9%NaCl 双缩脲试剂
0.5 4.0
0.5 4.0
0.5
4.0
各管混匀，置37℃20min，在波长540nm处比色， 以空白管调零，测各管吸光度。
生物化学与分子生物学实验教学中心
血清总蛋白测定数据处理表
测定次数 管号
1 S U 2 3
平均吸光度
生物化学与分子生物学实验教学中心
双缩脲试剂:硫酸酮、酒石酸钾钠、碘化钾 双缩脲空白试剂 蛋白质标准液（70g/L） 蒸馏水
器材：试管、烧杯、容量瓶、加样枪、刻度吸管、玻璃棒 设备：1100分光光度计、电子天平、水浴锅
生物化学与分子生物学实验教学中心
操作步骤
取3支试管，做好标记，按下表操作：
加入物（ml） B (空白） S 标准） U（待测）
1～20mg
灵敏度低
Lowry法 （Folin酚法） 紫 外 分光光度法 考马斯亮蓝法 （Bradford）
20～250ug
干扰物质多、操作 要求严格计时 灵敏度低、干扰物 较多 不同蛋白质与染料 结合力不一致，对 比色杯有吸附作用
50～100mg
快速简便、无损样品 灵敏、简便、快速，干 扰因素较少
计算
AU 血清总蛋白（g/L ） 蛋白质标准液浓度（g/L ） AS
生物化学与分子生物学实验教学中心
参考范围
正常成人60～80g/L 长久卧床者约低3～5g/L 60岁以上约低2g/L 新生儿总蛋白浓度较低，随后逐月缓慢上升，大约1年后 达成人水平。
生物化学与分子生物学实验教学中心
干扰物质多操作要求严格计时适用于测定单一蛋白质及测定蛋白质含量较少的标本如脑脊液分光光度法50100mg快速简便无损样品灵敏度低干扰物较多常用于较纯的酶和免疫球蛋白测定考马斯亮蓝法bradford15ug灵敏简便快速干扰因素较少不同蛋白质与染料结合力不一致对比色杯有吸附作用常用于需求更高呈色灵敏度的蛋白电化学比浊法简便不需特殊仪器影响浊度大小因素多如加试剂手法反应温度等一般用于测定尿液脑脊液等蛋白质含量较低的样品生物化学与分子生物学实验教学中心原理1生双缩脲反应生成紫红色络合物
实验1 双缩脲法测定血清总蛋白
全国高等医药院校医学检验专业规划教材
8
临床生物化学检验实验指导 （第二版）
实验1 双缩脲法测定血清总蛋白
临床意义
1．血清总蛋白浓度增高 （1）血浆浓缩
凡体内水分的排出大于摄入时，均可引起血浆 浓缩。如急性脱水（如呕吐、腹泻、高烧等），外 伤性休克（毛细血管通透性增大），慢性肾上腺皮 质功能减退（尿排钠增多引起继发性失水）。
－
－
蛋白标准液
－
－
－
0.10 0.10
蒸馏水
0.10 －
－
双缩脲空白试剂 －
5.0
－
－
－
5.0
－
双缩脲试剂
5.0
－
5.0
－
5.0
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6
临床生物化学检验实验指导 （第二版）
实验1 双缩脲法测定血清总蛋白
计算
血清总蛋白(g/L) AU ARB AB 蛋白标准液浓度 As ARB ASB
当肝功能严重受损时，蛋白质合成减少，以清蛋白降 低最为显著。
（4）蛋白质丢失
严重烧伤，大量血浆渗出；大出血；肾病综合征尿中 长期丢失蛋白质；溃疡性结肠炎可从粪便中长期丢失一定 量的蛋白质。
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11
临床生物化学检验实验指导 （第二版）
实验1 双缩脲法测定血清总蛋白
注意事项
这种紫红色络合物在540nm处有明显吸收峰，其 吸光度与血清蛋白含量在一定范围内呈正比关系，经
与同样处理的蛋医药院校医学检验专业规划教材
3
临床生物化学检验实验指导 （第二版）
实验1 双缩脲法测定血清总蛋白
试剂与器材
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计算
AU 血清总蛋白（g/L ） 蛋白质标准液浓度（g/L ） AS
生物化学与分子生物学实验教学中心
参考范围
正常成人60～80g/L 长久卧床者约低3～5g/L 60岁以上约低2g/L 新生儿总蛋白浓度较低，随后逐月缓慢上升，大约1年后 达成人水平。
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原理-2
蛋白质分子含有大量彼此相连的肽键（-CO-NH-），同样能 在碱性条件下与Cu2+发生双缩脲反应，生成的紫红色络合物 ，且在540nm处的吸光度与蛋白质的含量在10～120g/L范围 内有良好的线性关系。
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实验材料
样品：小牛血清 试剂：6.0mol/LNaOH溶液源自1～20mg灵敏度低
Lowry法 （Folin酚法） 紫 外 分光光度法 考马斯亮蓝法 （Bradford）
20～250ug
干扰物质多、操作 要求严格计时 灵敏度低、干扰物 较多 不同蛋白质与染料 结合力不一致，对 比色杯有吸附作用
50～100mg
快速简便、无损样品 灵敏、简便、快速，干 扰因素较少
小牛血清（1：10）
蛋白标准液（1：10） 0.9%NaCl 双缩脲试剂
0.5 4.0
0.5 4.0
0.5
4.0
各管混匀，置37℃20min，在波长540nm处比色， 以空白管调零，测各管吸光度。
生物化学与分子生物学实验教学中心
血清总蛋白测定数据处理表
测定次数 管号
1 S U 2 3
平均吸光度
生物化学与分子生物学实验教学中心
临床意义
血清总蛋白浓度降低
蛋白质合成障碍 蛋白质丢失增加 营养不良或消耗增加 血浆稀释
血清总蛋白浓度增高
蛋白质合成增加：多发性骨髓瘤 血浆浓缩：脱水、休克
生物化学与分子生物学实验教学中心
思考题
1.什么叫双缩脲试剂？为什么要在双缩脲试剂中 加入酒石酸钾钠和碘化钾？ 2.试剂配制过程中，为何NaOH要单独配制，最后 加入？ 3.简述血清总蛋白测定的临床意义。
1～5ug
化学比浊法
简便、不需特殊仪器
影响浊度大小因素 一般用于测定尿液 多，如加试剂手法 、脑脊液等蛋白质 、反应温度等 含量较低的样品 生物化学与分子生物学实验教学中心
原理-1
两分子尿素加热脱氨缩合成的双缩脲（H2N-OC-NH-CO-NH2） ，因分子内含有两个邻接的肽键，在碱性溶液中可与Cu2+发 生双缩脲反应 ，生成紫红色络合物。
血清总蛋白测定 （双缩脲试剂法）
南方医科大学 生物化学与分子生物学实验教学中心
2013年秋季学期
实验目的
掌握双缩脲测定血清总蛋白的基本原理、操作； 掌握双缩脲试剂的配制； 熟悉血清总蛋白的临床意义； 了解双缩脲法测定血清总蛋白的特点和注意事项。
生物化学与分子生物学实验教学中心
总蛋白测定经典和常见的方法比较
方 法 灵敏度 优 点 缺 点 适用范围
凯氏定氮法 双缩脲法
0.2～1.0mg 氮
准确性好、精密度高、 灵敏度高。 特异性高、准确度性好 、精密度高、操作简单 方便，显色稳定。 灵敏度高、达双缩脲法 的100倍。
操作复杂，费时
用于标准蛋白质的 定值、对其他方法 校正等。 为临床测定血清总 蛋白首选方法。 适用于测定单一蛋 白质及测定蛋白质 含量较少的标本如 脑脊液 常用于较纯的酶和 免疫球蛋白测定 常用于需求更高呈 色灵敏度的蛋白电 泳
双缩脲试剂:硫酸酮、酒石酸钾钠、碘化钾 双缩脲空白试剂 蛋白质标准液（70g/L） 蒸馏水
器材：试管、烧杯、容量瓶、加样枪、刻度吸管、玻璃棒 设备：1100分光光度计、电子天平、水浴锅
生物化学与分子生物学实验教学中心
操作步骤
取3支试管，做好标记，按下表操作：
加入物（ml） B (空白） S 标准） U（待测）
生物化学与分子生物学实验教学中心
2013年秋季学期