多糖的分离纯化及性质表征PPT课件
多糖的分离纯化及性质表征
(3)超高压
超高压提取 也称超高冷等静压提取,是指在常温下用100~1000 MPa的流 体静压力作用于提取溶剂和原料的混合液上,并在预定压力 下保持一段时间,使原料细胞内外压力达到平衡后迅速卸压 ,由于细胞内外渗透压力忽然增大,其结构发生变化使得原 料内的有效成分能够穿过细胞的各种膜而转移到细胞外的提 取液中,达到提取多糖有效成分的目的。
(2) 酸提法
为了提高多糖的提取率,在水提醇沉法的基础上发展了酸提 取法。 如某些含葡萄糖醛酸等酸性基团的多糖在较低pH值下 难以溶解,可用乙酸或盐酸使提取液成酸性,再加乙醇使多 糖沉淀析出。 由于H+的存在抑制了酸性杂质的溶出,稀酸提取法提取得到 的多糖产品纯度相对较高,但在酸性条件下可能引起多糖中 糖苷键的断裂,因此,只在一些特定的多糖提取中占有优势 。且酸会对容器造成腐蚀,除弱酸外,一般不宜采用。
5. 整个过程保持凝胶上方有水
原料 前处理 提取 滤渣 过滤或离心
滤液
醇沉 沉淀 脱蛋白 脱色 透析 柱层析
多糖
四、多糖的纯度鉴定
多糖纯度鉴定方法 超速离心法、电泳法、比旋光度法及凝胶色谱法。
比旋光度测定法
不同的多糖具有不同的比旋度,同时在不同的乙醇中 有不同的溶解度。在一定浓度的乙醇中,分子量大的 较分子量小的溶解度小。因此,不同浓度的醇中得到 的多糖沉淀的比旋度相同,则证明该多糖为均一组分。
(2)超声波辅助提取法
超声波提取是利用超声波的机械效应、空化效应及热效应。 机械效应可增大介质的运动速度及穿透力,能有效的破碎生 物细胞和组织,从而使提取的有效成分溶解于溶剂之中; 空化效应使整个生物体破裂,整个破裂过程在瞬间完成,有 利于有效成分的溶出; 热效应增大了有效成分的溶解速度,这种热效应是瞬间的, 可使被提取成分的生物活性尽量保持不变。
《多糖结构解析》课件
质谱技术
通过电离多糖分子并测量其质量 ,可以获得多糖的分子量和组成 信息。
核磁共振技术
通过测量多糖分子中氢原子或其 他原子周围的磁场,可以解析多 糖的精细结构。
生物技术分析法
凝集素结合法
利用凝集素与多糖的特异 性结合,分离纯化多糖, 并进行结构分析。
抗体技术
利用抗体与多糖的特异性 结合,进行多糖的定性和 定量分析。
THANKS
感谢观看
亲和色谱法
利用多糖分子与配体之间的特 异性亲和力,将多糖分离纯化
出来。
分离纯化过程中的注意事项
注意温度和pH值
在提取和分离纯化过程中,要控制好温度和pH值 ,以保证多糖的稳定性和活性。
避免长时间高温
长时间高温会导致多糖的结构发生变化,影响其 生物活性和稳定性。
注意防止污染
在分离纯化过程中,要避免污染,如微生物、杂 质等,以保证多糖的纯度和质量。
03
多糖的结构解析方法
化学分析法
01
02
03
酸水解
在酸的作用下,将多糖水 解成单糖,然后进行衍生 化反应,通过气相色谱或 液相色谱进行分析。
碱水解
在碱的作用下,使多糖水 解成寡糖和单糖,同样需 要进行衍生化反应,再进 行色谱分析。
酶解
利用特异性酶将多糖水解 成特定结构的片段,再进 行分析。
物理分析法
食品工业
食品添加剂
01
多糖可作为增稠剂、稳定剂、口感改善剂等用于食品加工中,
提高食品品质和稳定性。
功能性食品
02
利用多糖的生理活性,开发具有抗氧化、抗肿瘤、降血糖等功
能的食品。
食品包装材料
03
多糖可制成可食用的食品包装材料,具有良好的阻隔性能和环
多糖的提取和纯化
多糖的提取和纯化Company Document number:WUUT-WUUY-WBBGB-BWYTT-1982GT多糖的提取和纯化→粉碎→脱脂→粗提(2-3次)→吸滤或离心→沉淀→洗涤→干燥首先除去表面脂肪。
原料经粉碎后加入甲醇、乙醚、乙醇、丙酮或1:1的乙醇乙醚混合液,水浴加热搅拌或回流1-3小时,脱脂后过滤得到的残渣一般用水作溶剂(也有用氢氧化钾碱性水液、氯化钠水液、1%醋酸和1%苯酚或-1M氢氧化钠作为提取溶剂)提取多糖。
温度控制在90-100℃,搅拌4-6小时,反复提取2-3次。
得到的多糖提取液大多较粘稠,可进行吸滤。
也可用离心法将不溶性杂质除去,将滤液或上清液混合(得到的多糖若为碱性则需要中和)。
然后浓缩,再加入2-5倍低级醇(甲醇或乙醇)沉淀多糖;也可加入费林氏溶液或硫酸铵或溴化十六烷基三甲基铵等,与多糖物质结合生成不溶性络合物或盐类沉淀。
然后依次用乙醇、丙酮和乙醚洗涤。
将洗干后疏松的多糖迅速转入装有五氧化二磷和氢氧化钠的真空干燥器中减压干燥(若沉淀的多糖为胶状或具粘着性时,可直接冷冻干燥)。
干燥后可得粉末状的粗多糖。
微波辅助提取法:其原理为利用不同极性的介质对微波能的不同吸收程度,使基体物质中的某些区域和萃取体系中的某些组分被选择性加热,从而使萃取物质从基体或体系中分离出来,进入到介电常数小,微波吸收能力较差的萃取剂中[14]。
由于微波能极大加速细胞壁的破裂,因而应用于中草药中有效成分的提取能极大加快提取速度,增加提取产率。
而且由于其选择性好,提取后基体能保持良好的性状,提取液也较一般的提取方法澄清[15]。
聂金源等在柴胡多糖和黄酮化合物的提取[18]中对微波辅助提取法、超声辅助法和索氏提取法进行比较,发现微波辅助提取法所需时间最短(10min),多糖的提取率最高(%)。
超声辅助法:其原理是利用超声波的空化作用加速植物有效成分的浸出提取,另外超声波的次级效应,如机械振动、乳化、扩散、击碎、化学效应等也能加速欲提取成分的扩散释放并充分与溶剂混合,利于提取[16]。
08多糖的提取、分离纯化和结构分析
包括离子交换色谱柱和凝胶柱色谱。
特点:分离效率高、设备简单、操作方便、条件温和 、不易造成物质变性等优点。 应用:物质分离纯化、分析鉴定最重要的方法之一; 分离/有机化合物及生物大分子不可缺少的手段。
多糖的结构分析
多糖的结构:
多糖的结构是其生物活性的基础,多糖的结构分析 在多糖的研究中具有非常重要的地位,是糖化学的核心 所在。 与蛋白质、核酸大分子相比,糖链的结构也包括一
主要是超滤法和柱色谱分离法。
多糖的分离纯化
超滤法:
在常规微粒过滤的基础上发展起来的细微粒子过滤 技术,是膜法分离的一种,其原理是,不同孔径的超过 滤膜排阻不同分子量和形状的多糖而得到分离。 规格:超滤孔径1~100 nm,截留分子量103~106
特点:受渗透压的阻碍作用小,在相当低的压力差
多糖的结构分析
3、糖链中糖残基间的连接位置分析
(2)酶水解法:由于酶促反应具有高度专一性且副产物少 的特点,酶水解法是糖链的结构分析中的一种重要手段,利
用α-糖苷酶和β-糖苷酶对多糖底物的催化反应来确认多糖链
中糖苷键类型,还可以利用酶学方法分析糖肽连接方式。 美国Maley和Tarention发现内切β-N-乙酰氨基葡萄糖糖 苷酶作为稀释放酰胺连接的糖链的工具酶,为研究与天冬酰 胺连接的寡糖结构开辟了新纪元。
多糖的结构分析
3、糖链中糖残基间的连接位置分析
(1)甲基化分析方法:确定糖链中糖基间的连接位置常用 方法。该法首先将多糖链全甲基化,使所有的游离羟基变为
甲氧基。目前最常用的甲基化方法是改良Hakomori法。
Hakomori法先将样品溶于无水二甲基亚砜中,然后与 甲基亚磺酰甲基钠SMSM反应,使得多糖上游离羟基离子化 ,多糖成为阴离子后,易于CH3I反应,该法通常需重复数次 。以α-(1-4)葡聚糖为例说明甲基化过程。
植物活性多糖的分离、纯化与鉴定
实验四、植物活性多糖的分离、纯化与鉴定第一部分多糖的提取、纯化【实验目的】1、了解多糖提取和纯化的一般方法。
2、学习多糖的定量测定方法。
【实验原理】多糖类物质是除蛋白质和核酸之外的又一类重要的生物大分子。
早在60年代,人们就发现多糖复杂的生物活性和功能。
多糖是普遍存在于自然植物界中的由许多相同或不同的单糖以a •或B •糖昔键所组成的化合物,其分子量一般为数万甚至数百万,是构成生命活动四大基本物质之一,与维持生命功能密切相关。
大部分植物多糖不溶于冷水,在热水中呈粘液状,遇乙醇能沉淀。
多糖具有抗氧化性、抗病毒性、反互补特性[1],大量药理及临床研究表明,多糖类化合物是一种免疫调节剂,它具有明显的抗补体活性和促进淋巴细胞增殖作用,能激活免疫受体,提高机体的免疫功能,在用于癌症的辅助治疗中,具有毒副作用小、安全性高、抑瘤效果好等优点[2] o本实验采用常规法(即水溶醇沉法)从植物组织中提取出水溶性粗多糖,对提取得到的多糖进行分离纯化,除去色素及小分子杂质,并采用Sevage法除蛋白。
用蔥酮比色法测定多糖的含量。
多糖的纯化,就是将存在于粗多糖中的杂质去除而获得单一的多糖组分。
一般是先脱除非多糖组分,再对多糖组分进行分级。
常用的去除多糖中蛋白质的方法有:Sevag法、三氟三氯乙烷法、三氯醋酸法,这些方法的原理是使多糖不沉淀而使蛋白质沉淀,其中Sevag方法脱蛋白效果较好,它是用氯仿:戊醇或丁醇,以4: 1比例混合,加到样品中振摇,使样品中的蛋白质变性成不溶状态,用离心法除去。
本实验釆用Sevag法(氯仿:正丁醇=4: 1混合摇匀)进行脱蛋白,用DEAE •纤维素层析柱进行纯化,然后合并多糖高峰部分,浓缩后透析,冻干,得多糖组分。
多糖被浓硫酸水合产生的高温迅速水解,产生单糖,并迅速脱水生成醛糖衍生物,在这种强酸条件下与苯酚反应生成橙色衍生物,该衍生物在波长490 nm处和一定浓度范围内,吸光度与糖浓度呈线性关系,釆用比色法对多糖含量进行测定。
微生物多糖提取与纯化29页PPT
60、生活的道路一旦选定,就要勇敢地 走过 去和未 来文化 生活的 源泉。 ——库 法耶夫 57、生命不可能有两次,但许多人连一 次也不 善于度 过。— —吕凯 特 58、问渠哪得清如许,为有源头活水来 。—— 朱熹 59、我的努力求学没有得到别的好处, 只不过 是愈来 愈发觉 自己的 无知。 ——笛 卡儿
微生物多糖提取与纯化
26、机遇对于有准备的头脑有特别的 亲和力 。 27、自信是人格的核心。
28、目标的坚定是性格中最必要的力 量泉源 之一, 也是成 功的利 器之一 。没有 它,天 才也会 在矛盾 无定的 迷径中 ,徒劳 无功。- -查士 德斐尔 爵士。 29、困难就是机遇。--温斯顿.丘吉 尔。 30、我奋斗,所以我快乐。--格林斯 潘。
多糖的分离纯化及性质表征共62页
1、身就是 讲道理 ……法 律,也 ----即 明示道 理。— —爱·科 克
3、法律是最保险的头盔。——爱·科 克 4、一个国家如果纲纪不正,其国风一 定颓败 。—— 塞内加 5、法律不能使人人平等,但是在法律 面前人 人是平 等的。 ——波 洛克
6、最大的骄傲于最大的自卑都表示心灵的最软弱无力。——斯宾诺莎 7、自知之明是最难得的知识。——西班牙 8、勇气通往天堂,怯懦通往地狱。——塞内加 9、有时候读书是一种巧妙地避开思考的方法。——赫尔普斯 10、阅读一切好书如同和过去最杰出的人谈话。——笛卡儿
Thank you
多糖的分离纯化及性质表征PPT课件
高级结构
二级结构:多糖主链间以氢键为主要次级键而形成的 有规则的构象
三级结构:以二级结构为基础,由于糖单位羟基、羧 基、氨基以及硫酸基之间之间的非共价相互作用,导致 二级结构在有序的空间里产生的有规则的构象
2.5脱蛋白
脱蛋白效果的检测方法
1.除去蛋白质的样品用紫外分光光度计检验,观察在 280mm处是否有吸收,如果无吸收则表明蛋白质已经 除尽。
2.茚三酮反应检测,结果呈阴性表明蛋白基本除去。
2.6脱色
活性炭脱色
活性炭属于非极性吸附剂,有着较强的吸附能力,特 别适合于水溶性物质的分离。
活性炭脱色效果同活性炭类型、活性炭用量、脱色温 度及pH值等相关。
多糖的纯度鉴定
电泳法(Electrophoresis)
多糖在电场作用下,按其分子大小、形状和所带电荷 的不同而移动不同的距离。若为纯品,电泳后会得单 一斑点。
较常用,目前主要有醋酸纤维薄膜电泳、高压电泳法、 聚丙烯凝胶电泳、琼脂糖凝胶电泳、玻璃纤维纸电泳 等
多糖的纯度鉴定
比旋光度测定法
不同的多糖具有不同的比旋度,同时在不同的低级醇 中有不同的溶解度。在一定浓度的低级醇中,分子量 大的较分子量小的溶解度小。因此,不同浓度的低级 醇中得到的多糖沉淀的比旋度相同,则证明该多糖为 均一组分。
吸附法 干葡聚糖凝胶加入提取液中,两者比例为1:5.由于凝 胶吸水,提取液的体积可缩小三倍左右,多糖回收率 达80%。
2.3多糖提取液浓缩
超滤法
在一定压力下,小分子溶质和溶剂穿过一定孔径的薄 膜,而使大分子溶质不能透过,留在膜的一边,从而 使大分子物质得到部分的纯化。
多糖的分离和纯化
一、多糖的分离和纯化多糖是极性极大的大分子化合物,提取时一般先将原料脱脂、脱色,然后用水、盐或稀碱水在不同温度下提取。
提取物浓缩后加沉淀剂(乙醇、丙酮等)离心沉淀,沉淀部分可反复多次离心沉淀,以除去部分水溶性色素等杂质。
1.除蛋白用水或稀碱提取的多糖常含有蛋白质,常用的除蛋白质的方法有Sevag 法、三氟三氯乙烷法、三氯乙酸法等。
前两种多用于微生物多糖,后者多用于植物多糖。
Sevag 法是经典的除蛋白质方法,复杂、费时,且样品损失较大。
冯建林等比较了Sevag 法、三氟三氯乙烷法、三氯乙酸法、硫酸铵法及木瓜蛋白酶复合酶法除蛋白的效果,从蛋白残留量和多糖的得率两方面评价.认为三氯乙酸法最好,但三氯乙酸仍不能完全除去蛋白,建议三氯乙酸法和Sevag 法结合使用。
2.脱色多糖中常含有一些色素(游离色素或结合色素),根据其不同性质采取不同的去除方法。
常用的脱色方法有离子交换法、氧化法、金属络合物法、吸附法(纤维素、硅藻土、高岭土、活性炭等)。
D EA E一纤维素是目前最常用的脱色方法,通过离子交换柱不仅达到脱色目的,而且可以进行多糖的分离。
H2 O2:是一种氧化脱色剂,浓度不宜过高,宜在低温下进行,否则引起多糖的降解。
对于同时含有游离蛋白质和色素的多糖,可通过生成金属络合物的方法同时除去蛋白和色素,即加入费林试剂生成不溶性络合物,经分离后用阴离子交换树脂分解络合物。
吸附脱色法也常用,如通过活性炭、高岭土、硅藻土柱达到脱色的目的。
3.多糖的分级采用一般方法提取的多糖,通常是多糖的混合物,即是多分散性的,其不均一性表现在化学组成、聚合度、分子形状等的不同。
分级可以达到纯化的目的,可按分子大小和形状分级(如分级沉淀、超滤、分子筛、层析等),也可按分子所带基团的性质分级(如按电荷性质分级的电泳、离子交换层析等)。
(1)分级沉淀利用分子大小和溶解度不同进行分离,常用的有两种方法,即有机溶剂沉淀法和季铵盐或硫酸铵法。
多糖的分离纯化及分析
多糖的分离纯化及分析(总3页)--本页仅作为文档封面,使用时请直接删除即可----内页可以根据需求调整合适字体及大小--多糖的分离纯化及分析一、多糖的提取方法(一)溶剂提取法1、水提法水提醇沉法是提取多糖最常用的一种方法.多糖是极性大分子化合物,提取时应选择水、醇等极性强的溶剂.用水作溶剂来提取多糖时,可以用热水浸煮提取,也可以用冷水浸提渗滤,然后将提取液浓缩后,在浓缩液中加乙醇,使其最终体积分数达到70%左右,利用多糖不溶于乙醇的性质,使多糖从提取液中沉淀出来,室温静置5h,多糖的质量分数和得率均较高.2、酸碱提法有些多糖适合用稀酸提取,并且能得到更高的提取率。
有些多糖在碱液中有更高的提取率,尤其是提取含有糖醛酸的多糖及酸性多糖。
与酸提类似,碱提中碱的浓度也应得到有效控制,因为有些多糖在碱性较强时会水解。
3、超临界流体萃取法超临界流体萃取技术是近年来发展起来的一种新的提取分离技术.(二)生物酶提取法酶技术是近年来广泛应用到有效成份提取中的一项生物技术,在多糖的提取过程中,使用酶可降低提取条件,在比较温和的条件中分解植物组织,加速多糖的释放或提取。
此外,使用酶还可分解提取液中淀粉、果胶、蛋白质等的产物,常用的酶有蛋白酶,纤维素酶,果胶酶等。
(三)超声提取法超声波是一种高频率的机械波,其主要原理是利用超声波产生的“空化作用”对细胞膜的破坏,有利用植物有效成分的释放,而且超声波能形成强大的冲击波或高速射流,有效地减小、消除与水相之间的阻滞层,加大了传质效率,有助于溶质的扩散。
超声波提取与传统的提取方法相比,有提取效率高、时间短、耗能低等优点。
(四)微波提取微波是频率介于300MHz和300GHz之间的非电离电磁波,微波提取的原理是微射线辐射于溶剂并透过细胞壁到达细胞内部,由于溶剂及细胞液吸收微波能细胞内部温度升高,压力增大,当压力超过细胞壁的承受能力时,细胞壁破裂,位于细胞内部的有效成份从细胞中释放出来,传递转移到溶剂周围被溶剂溶解。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性,平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益,请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间:9:00-18:30)。
2.2多糖的提取方法
稀碱提取法
0.1-1M氢氧化钠(钾),如几丁质提取用5%氢氧化 钠去杂质。
碱提多糖时易发生美拉德反应,可通过前处理去除小 分子糖、避免pH值处在8-10范围、避免提取温度在 60-80℃。 通氮气或加入硼氢化钠(钾)
2.2多糖的提取方法
微波辅助提取法
利用不同极性的介质对微波 能的不同吸收程度,使基体 物质中的某些区域和萃取体 系中的某些组分被选择性加 热,从而使萃取物质从基体 或体系中分离出来,进入到 介电常数小,微波吸收能力 较差的萃取剂中。
2.2多糖的提取方法 酶法
酶解反应较温和将组织分解,增加多糖的溶出,可较 大幅度提高产率。
常用于除去各种与多糖结合的结合蛋白质。
2.3多糖提取液浓缩
多糖提取液浓缩应尽量在低温下进行,并防止提取物 与氧气接触,防止多糖被氧化,保持原有结构及生物 活性。
吸附法 干葡聚糖凝胶加入提取液中,两者比例为1:5.由于凝 胶吸水,提取液的体积可缩小三倍左右,多糖回收率 达80%。
多糖的分离纯化及结构表征
员工培训 2012-7-31
1、多糖的基本概述
多糖,又称多聚糖,是由10个以上的单糖通过 苷键连接而成的链状聚合物。 (C6H10O5)n, n>10
1、多糖的基本概述
组成分类
同多糖:由一种单糖组成(淀粉、半纤维素、几丁质等) 杂多糖:由两种或两种以上单糖组成(透明质酸、硫 酸软骨素、硫酸皮肤素等)
多糖的表征
1. 无还原性。 2. 大多难溶于水,溶于水后形成胶体溶液。 3. 有旋光性,但没有变旋现象。 4. 无甜味。 5. 在酸或酶的作用下水解成单糖和寡糖。 6. 分子量在数万到数百万之间
1、多糖的基本பைடு நூலகம்述
多糖广泛分布于自然界高等植物、微生物(细菌和真 菌)、地衣、海藻和动物体内。
1、多糖的基本概述
热水浸提法
大多数多糖在热水中溶解度较大且性质稳定。得率应 考虑提取时间、提取次数、溶剂体积、浸提温度、pH 值、醇析浓度和植物颗粒大小等。 水提醇沉是多糖提取最常用方法。
2.2多糖的提取方法
稀酸提取法
1%醋酸 酸性条件引起多糖中糖苷键的断裂,尽量避免在酸性 条件提取多糖。提取时间宜短、提取温度低。
蛋白质在氯仿等有机溶剂变性而不溶于水,将多糖水 溶液、氯仿、正丁醇之比调为25:5:1,混合物剧烈振 摇20到30分钟,蛋白质与氯仿-正丁醇生成凝胶物而 分离,然后离心,分去水层和溶剂层交界处的变性蛋 白质。
效率低,常加入蛋白酶后采用Savage法
2.5脱蛋白
三氟三氯乙烷法
多糖溶液与三氟三氯乙烷等体积混合,低温下搅拌 10min左右,离心得上面水层,水层继续用上述方法 处理几次,即得无蛋白质的多糖溶液。
多糖存在形式: 细胞壁外-胞外多糖 细胞壁内-胞内多糖(大多数多糖) 细胞壁多糖
动植物的细胞大多由脂质包围,用机械粉碎后还必须 脱脂(沙氏提取器,乙醇回流)。 对于含有较多单糖和低聚糖的样品可用热的80%乙醇 处理。
2多糖的提取分离
原料 前处理
提取
滤渣
过滤或离心
滤液
醇沉 沉淀
脱蛋白
脱色
透析
柱层析
多糖
2.2多糖的提取方法
超声辅助法提取法
利用超声波的空化作用产生 的压力造成被破碎物质在瞬 间破碎,加速效成分的浸出 提取,另外超声波的次级效 应,如机械振动、乳化、扩 散、击碎、化学效应等也能 加速欲提取成分的扩散释放 并充分与溶剂混合,利于提 取。
与常规提取方法相比,具有提取时间短、产率高、无 需加热等优点。常用于辅助提取细胞内物质。
愈来愈多的研究发现, 人的生命过程几乎都与糖链有 关:
细胞间通讯、识别和相互作用
细胞的运动和粘附
病原与宿主细胞的作用
糖链携带着生物信息. 它在细胞表面的分子识别过程 中起着决定性作用.
大量研究证明许多多糖具有免疫调节、降血糖、降血 脂、抗氧化、抗衰老、抗肿瘤、抗病毒和保护胃肠系 统等多种生物活性
2多糖的提取分离
2.3多糖的沉淀
沉淀法是分离生物活性物质的传统方法,在生物活性 物质提取中常用于初步分离。
有机溶剂沉淀法
在提取液中加入与水互溶的有机溶剂,使系统介电常 数减小,多糖溶解度减小而发生沉淀。 常用的有机溶剂有乙醇、甲醇、丙酮等。
2.5脱蛋白
粗多糖中往往混杂着蛋白质、色素、低聚糖等杂质, 必须分别除去。
易挥发,需在低温条件下进行
2.5脱蛋白
三氯醋酸法
在多糖水溶液中滴加5%-30%三氯醋酸,直至溶液不 再继续混浊为止,在5-10℃放置过夜,离心除去沉淀 即得无蛋白质的多糖溶液。
反应较为剧烈,易引起糖降解
2.5脱蛋白
酶解法
在样品溶液中加入蛋白质水解酶,如胃蛋白酶、胰蛋 白酶、木瓜蛋白酶、链霉菌蛋白酶等,使样品中的蛋 白质降解,经透析后得到基本无蛋白和小分子的多糖。
1、多糖的基本概述
单糖组成
类型 五碳糖 六碳糖 己糖胺 糖醛酸 去氧己糖
单糖 D-木糖,L-阿拉伯糖 D-葡萄糖,D-甘露糖,D-半乳糖,L-半乳糖,D-果糖 N-乙酰葡萄糖胺,N-乙酰半乳糖胺 D-葡萄糖酸,D-半乳糖酸,D-甘露糖酸 L-鼠李糖,L-岩藻糖,6-去氧-塔罗糖
1、多糖的基本概述
2.1材料的预处理
根据不同原料性质,对一些样品进行粉碎处理,含脂 高应先脱脂,含色素高需进行脱色,通常采用丙酮、 乙醚、乙醇进行预处理以达到脱脂或脱色的目的。
对于含有较多单糖和低聚糖的样品可用热的80%乙醇 处理。
2.2多糖的提取方法
多糖为非极性大分子化合物,大多采用不同温度的水、 稀碱溶液或氯化钠水溶液做提取溶剂。
多糖的分离纯化主要包括脱蛋白、脱色、脱盐和除去 小分子杂质
2.5脱蛋白
采用醇沉或其它溶剂沉淀所获得的多糖,常混有较多 的蛋白质,脱去蛋白质的方法有多种:如选择能使蛋 白质沉淀而不使多糖沉淀的酚、三氯甲烷、鞣质等试 剂来处理,但用酸性试剂宜短,温度宜低,以免多糖 降解。
2.5脱蛋白
沙维积法(Savage法)
2.3多糖提取液浓缩
超滤法
在一定压力下,小分子溶质和溶剂穿过一定孔径的薄 膜,而使大分子溶质不能透过,留在膜的一边,从而 使大分子物质得到部分的纯化。
2.3多糖提取液浓缩
透析法 把装有提取液的透析袋埋在吸水力强的聚乙二醇或甘 油中,提取液中水分通过透析袋到吸水剂中,从而达 到浓缩效果。
真空浓缩 通过真空泵抽真空,使水的沸点降低而 从提取液中蒸发出来,而多糖成分不受 破坏。