抗原抗体反应

透射免疫比浊（turbidimetry） 免疫比浊测定仪 散射免疫比浊（nephelometry） 包括— 终点～ 速率～
Agglutination
Reaction
例: 人类ABO血型检测(玻片) 肥达(Widal)反应 {direct～ 类风湿因子测定(乳胶) {indirect～ 包括-正向 反向 抗红细胞不完全抗体(Coobs)
区别：
（1）非共价吸附 抗体或蛋白通过疏水性相互作用而附着 （2）共价吸附 借助固相上的活性基团，通过化学交联剂 与抗原/抗体分子上相应活性基团反应形成 共价键，固着～
固相载体
材料要求： 1、结合容量 2、结合能力 3、结合性质 4、性价比
种类： 1、聚苯乙烯 2、聚氯乙烯 3、硝酸纤维素膜 4、尼龙膜 5、磁性微粒
补体介导的抗原抗体反应(complement)
例： CH50（complement hemolysis 50%)(测补体） 脂质体免疫法检测补体（测补体） 微量细胞毒试验（complement dependent cytotoxicity；CDC）（交叉配型） 特定蛋白检测仪及配套试剂（补体单成分）
特异性（specific） 最适比（optimal ratio） 可逆性（reversible） 亲和性（afinity）和亲和力（avidity）
抗原/抗体反应分两阶段
（一）抗原/抗体发生特异性结合
1、亲水胶体转变为疏水胶体（水化层） 2、抗原抗体的结合力（静电引力、范登华引力、氢键 结合力、疏水结合力等）
ELISA：
ELISA— 是以酶作为 标记指示物、以抗原 抗体反应为基础的固 相吸附测定。
— 抗原/抗体的固相化 （coating，包被） （immunosorbent） (蛋白分子表面效应)
操作：（例）Ag/Ab in pH 9.6 carbonate buffer Incubated at 4℃ for overnight
表面效应：
蛋白质分子在吸附（包被）过程，为了克 服与固相载体之间的排斥力，需要重新分 布其表面的功能性基团，使疏水性基团充 分暴露，然后，局部接触区域的偶极分子 脱氢，再通过范德瓦尔引力将其固相于载 体表面。整个过程谓coating。 影响：抗原抗体的构象和功能；抗原-抗体 结合反应的动力学过程。
孔间Baidu Nhomakorabea异 （<10%）
对策
一、 用一定浓度的人IgG（10ng/ml） 适当稀释度的酶标抗人IgG 控制反应各条件 计算各孔读值的平均值并要求每孔的读值与其平均值间的 差异小于10%。 二、 选择已知阳性与阴性标本，作系列稀释 在不同固相载体上按预定的ELISA法进行操作测定 评判的标准：阳性结果与阴性结果差别最大的好
临床免疫学检测技术及应用
2008-3-31
Immunologic technique/appliance
Classical antigen and antibody reaction (抗原抗体反应) Immunoassay (IA){ (免疫测定) Immunolabeling technique (标记免疫技术)
酶免疫技术/ELISA
酶免疫技术— 是以酶标记抗原或抗体作为 主要试剂的免疫测定方法。 ELISA— 是以酶作为标记指示物、以抗原 抗体反应为基础的固相吸附测定。
酶免疫技术分类
（一）酶免疫组织化学测定技术 （二）酶免疫测定技术 Ab *＋Ag → Ab*Ag ＋Ab* Ab ＋Ag * → AbAg * ＋Ag* （1）Homogenous （均相测定） （2）Hetergenous（异相测定） —— Solid phase （固相）
Precipitation
Reaction
Immunodifusion（免疫扩散） Immunoturbidimetry（免疫浊度） Immunoeletrophoresis（免疫电泳） Et al(环状～） （絮状～）
沉淀反应的类型归纳
环状沉淀反应 液相（液体）{絮状沉淀反应 免疫浊度测定 沉淀反应{ 免疫扩散 固相（凝胶）{ 免疫电泳
一、Classical antigen and antibody reaction
Antigen and Antibody reaction
Ag + Ab → Ag-Ab + Ag/Ab
In vivo (不同免疫应答的效应作用) In vitro （抗原抗体结合反应，多样性）
抗原/抗体反应的特点：
（二）抗原/抗体结合的可见反应
1、凝集～ 2、沉淀～ 3、溶细胞～ 4、等等
In vitro（classical～）
Precipitation Reaction （沉淀反应） Agglutination Reaction （凝集反应） Antigen and Antibody Reaction Involved by Complement （补体介导的抗原抗体反应） Et al
Immunolabeling Technique
Enzyme linked immunosorbent assay （ELISA） Fluorescence immunoassay（FIA） Radioimmunoassay（RIA） Luminescence immune-technique Solid phase membrane-based immunoassay Biotin-avidin system（BAS）
免疫浊度(turbidimetry)测定:
含义：是将光学测量仪与自动分析检测系 统结合，应用于沉淀反应试验。 原理：抗原抗体在检测反应液中会形成抗 原抗体复合物，使得反应液出现浊度。当 反应液中保持抗体过剩，形成的复合物随 样本中抗原的量增加而增多，反应液的浊 度亦随之增高。与系列标准品对照(标准曲 线)，可计算样本中被测抗原的浓度。
二、Immunolabeling Technique
Immunolabeling Technique
原理：于抗原或抗体上标记可以微量检测 的标记物（荧光素、酶或同位素等），待 特异性抗原抗体反应后，所测的不必是抗 原-抗体复合物本身，而测定复合物中的标 记物，并可通过标记物的放大作用，进一 步提高其检测的敏感度。