醋酸纤维素薄膜电泳

溶液中，可涂布成均一细密的微孔薄膜。待有机溶剂
挥发后，即为白色不透明的醋酸纤维薄膜。该膜具有 均一的泡沫状的结构，厚度约为120μm，有很强的通
透性，对分子移动阻力很小。
1. 样品吸附极少，无拖尾现象，条带清晰。
2. 快速省时。
3. 灵敏度高，样品用量少。 4. 制成透明干膜用于定量扫描分析与长期保存。
5.06
5.06 5.12 6.85-7.50
–5.1×10-5
–4.1×10-5 -2.8×10-5 -1.0×10-5
200,000
300,000 9,000-150,000 156,000-300,000
病名
肾病 弥温性肝损害 肝硬化 原发性肝癌 多发性骨髓瘤 慢性炎症 妊娠 无丙种球蛋白血症 双白蛋白血症
阻力: F’ = 6πrηυ QE = 6πrην
当电泳达到平衡时，带电颗粒匀速运动: F = F’
ν Q = E 6πrη
• 迁移率: 即ν/E，表示单位电场强度时粒子运动的速度。 该值在
一定条件下决定于粒子本身的性质，即其所带电荷、大小和形状.
影响电泳速度的因素
• 样品本身：带电量、分子大小、形状
血清蛋白质的醋酸纤维素薄
膜电泳
实验目的
1．掌握电泳的基本原理，了解电泳仪和电泳
槽的功能。
2．熟悉电泳的基本过程与操作方法。
实验原理
电泳
优点: 快速、准确、重现性好。
应用: 1. 分离各种有机物：如蛋白质、酶、核酸等； 2. 分析某种物质的纯度及分子量。
对生物大分子而言：
电场力: F = QE
分类
电泳
显微电泳 自由电泳 等电聚焦电泳 (无支持体) 等速电泳 密度梯度电泳 滤纸电泳(常压及高压) 区带电泳 薄层电泳(薄膜及Байду номын сангаас板) (有支持体) 凝胶电泳(琼脂、琼脂糖、淀粉胶、聚丙烯酰胺)
垂直板电泳槽
圆盘电泳槽
水平电泳槽
双向电泳
醋酸纤维薄膜电泳
• 醋酸纤维素薄膜电泳以醋酸纤维素薄膜为支持物。 • 醋酸纤维素是纤维素的醋酸酯，将其溶于丙酮等有机
实验步骤
注意事项
1. 点样面为不光滑面，勿用手触摸； 2. 点样量适中，垂直居中点样； 3. 点样端靠近电泳仪负极； 4. 膜条背面朝上放置，需与滤纸贴紧，拉直。
思考题
• 分析影响电泳的各个因素。
• 分析自己的实验结果，针对本实验的各项操作提出改进意见。
白蛋白 ↓↓ ↓↓ ↓↓ ↓↓ ↓ ↓ 双峰
α1球蛋白 ↑ ↑ ↓
AFP
α2球蛋白 ↑↑ ↓ ↓
β球蛋白 ↑ ↓
β-γ桥
γ球蛋白 ↓ ↑ ↑
↑ ↑ ↑ ↑
↑↑ ↑ ↓ ↓↓
实验器材和试剂
• 实验器材
电泳槽、电泳仪、染缸、滤纸、醋酸纤维素薄膜、点样器
• 试剂
1. 血清 2. 巴比妥-巴比妥钠缓冲液 (pH 8.6、I = 0.06) 3. 染色液: 氨基黑10B 0.25g，甲醇50 mL + 冰醋酸10 mL + 水40 mL溶解 (可重 复使用) 4. 漂洗液：甲醇45 mL + 冰醋酸5 mL + 蒸馏水50 mL
• 电场强度：电压
• 缓冲液：成分、pH、离子强度(0.02-0.2 M) • 支持介质：电渗作用、吸附作用 • 温度
正极
－ － － － － － － －－ － － － － － － － ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋
负极
表面带负电荷 带正电荷的水层携带粒子向负极移动
如果样品应移向负极，则泳动速度加快； 如果样品应移向正极，则泳动速度减慢。
5. 操作简单、快速、价廉.
染色方法
– 氨基黑10B
– 考马斯亮蓝R250
– 银染色法
考马斯亮蓝R250
考马斯亮蓝G250
人血浆蛋白质的等电点及迁移率
蛋白质名称 白蛋白 等电点 4.88 泳动度/(cm2· V-1· S-1) -5.9×10-5 分子量 69,000
α1-球蛋白
α2-球蛋白 β-球蛋白 γ-球蛋白