醋酸纤维素薄膜电泳
血清醋酸纤维素薄膜电泳
取出膜，用滤纸吸干即可。
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医学ppt
操作步骤
血浆蛋白醋酸纤维素薄膜电泳图谱
电泳方向
－
＋
γ
β
α2 α1
A
纤维蛋白原
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医学ppt
操作步骤
7、透明 薄膜完全干燥后，浸入透明液中20min后，
取出平贴在玻璃板上（不要留有气泡），完全 干燥后即成透明的薄膜图谱，要作扫描或照相 用。可长期保存。
醋酸纤维素是纤维素的羟基乙酰化所形成
的纤维素醋酸酯，将它溶于有机溶剂（如丙酮 、
氯仿、氯乙烯、乙酸乙酯等）后，涂抹成均匀
的薄膜，干燥后就成为醋酸纤维素薄膜。该膜
具有均一的泡沫状结构，厚度约为120μm，通
透性好，对分子移动阻力少，是一种良好的电
泳支持物。
3
医学ppt
醋酸纤维素薄膜电泳的优点及应用
具有微量、快速、简便、区带清晰、灵敏度高、 便于摄影和保存等优点。
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注意事项
1、最好选用同一批号、厚薄均匀、质量良好 的醋纤膜。
2、样品要新鲜。 3、点样要细窄、均匀、集中。 4、盐桥要平整。 5、电泳槽盖要密封。 6、室温不宜过高。
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注意事项
7、选择合适的缓冲液离子强度。 8、两电泳槽内缓冲液面应在同一水平面。 9、要控制好电压、电流和电泳时间。 10、电泳槽内两极溶液要交替使用，操作时应
6、镊子
7、试管、试管架、吸量管 8、分光光度计
（定量用）
9
医学ppt
操作步骤
1、薄膜准备 ①将醋酸纤维素薄膜切成2×8cm的小条。 ②在薄膜粗面一端1.5cm处用铅笔轻轻画一横线。 ③在薄膜角上用铅笔作一标记。 ④将醋酸纤维素薄膜浸泡于缓冲液中20min。
醋酸纤维素薄膜电泳原理
醋酸纤维素薄膜电泳原理醋酸纤维素薄膜电泳是一种常见的电泳技术，它利用醋酸纤维素薄膜作为分离介质，将带电粒子在电场作用下进行分离。
其原理如下：1. 醋酸纤维素薄膜制备首先需要制备醋酸纤维素薄膜。
通常采用将醋酸纤维素溶解于有机溶剂中，然后涂布在玻璃板或硅片上，通过挥发有机溶剂使得溶液中的醋酸纤维素形成均匀的薄膜。
2. 薄膜上形成静电场接着，在制备好的醋酸纤维素薄膜上形成一个静电场。
通常使用高压直流电源将两个金属极板连接到两端，然后将极板放置在离玻璃板或硅片一定距离的位置上。
这样就可以在玻璃板或硅片表面形成一个强大的静电场。
3. 样品准备样品需要经过处理才能进行分离。
通常需要将样品溶解在缓冲液中，并加入适量的表面活性剂以保持样品的稳定性。
此外，还需要将样品进行染色以便于观察。
4. 样品注入将处理好的样品注入到醋酸纤维素薄膜上，让其在静电场作用下进行分离。
通常使用注射器或微量泵进行样品注入。
5. 分离过程在静电场作用下，带电粒子会受到电场力的作用，向着极板移动。
不同大小、不同电荷的粒子会受到不同的力，从而发生分离。
这个过程需要一定时间，通常需要几十分钟到几小时才能完成。
6. 结果分析通过观察醋酸纤维素薄膜上的色带可以得到分离结果。
不同大小、不同电荷的粒子会形成不同位置和形状的色带。
通过比对标准样品可以确定待测物质的种类和浓度。
总之，醋酸纤维素薄膜电泳是一种基于静电场作用下带电粒子分离原理的技术。
它具有高效、高灵敏度、高分辨率等优点，被广泛应用于生物学、化学、环境科学等领域。
醋酸纤维素薄膜电泳
各种蛋白质由于氨基酸组成、分子量、等电点 及形状不同，在电场中的迁移速度不同。 以醋酸纤维素薄膜为支持物，正常人血清在 pH8.6的缓冲体系中电泳，染色后可显示5条主 要区带。其中清蛋白的泳动速度最快，其余依 次为α1-、α2-、β-及γ-球蛋白。
三、实验材料
醋酸纤维薄膜（2×8 cm） 镊子
5. 放薄膜的时候毛面朝下，要注意放平，与 滤网充分接触，但不要接触点样端。 6. 电泳时应选择合适的电流强度，一般电流 强度为0.4～0.6mA/cm膜宽度。电流强度高， 则热效应高；电流过低，则样品泳动速度慢 且易扩散。
7. 操作过程为防止指纹污染，应戴手套。
采用醋酸纤维薄膜作为支持物的电泳方法称为 醋酸纤维素薄膜电泳。
醋酸纤维素薄膜具有均一的泡沫状的结构，厚 度约为120 μm，有很强的通透性，对分子移动 阻力很小，该法具有微量、快速、简便、分辨 力高，对样品无拖尾和吸附现象等优点。
本实验以醋酸纤维素为电泳支持物，分离各种 血清蛋白。
血清中各主要蛋白质的等电点均低于pH8.6， 在该缓冲液中均带负电荷，在电场中向正极移 动。血清中含有清蛋白、α-球蛋白、β-球蛋白、 γ-球蛋白和各种脂蛋白等。
2. 点样时，应将薄膜表面多余的缓冲液用滤纸 吸去，以免引起样品扩散。但不宜太干，否则 样品不易进入膜内，造成点样起始点参差不起， 影响分离效果。
3. 点样时，点样不要过多，恰到好处，动作 要轻、稳，用力不能太大，以免损坏膜片或 印出凹陷影响电泳区带分离效果。 4. 醋酸纤维素薄膜电泳常选用pH8.6巴比妥－ 巴比妥钠缓冲液,其浓度为0.05～0.09 mol/L。 (选择何种浓度与样品和薄膜的厚薄有关。缓 冲液浓度过低，则区带泳动速度快区带扩散 变宽；缓冲液浓度过高，则区带泳动速度慢， 区带分布过于集中，不易分辨。)
醋酸纤维素薄膜电泳
12～2９
缓冲液pH=8.6
pI＜pH
血清蛋白均带负电荷,在电场中向正极移动
在醋酸纤维素薄膜分为五条带。电泳迁移率最大的是白蛋 白，其后为α1球蛋白，α2球蛋白，β球蛋白和γ球蛋白
+
白蛋 α α β
γ
白(A) 1
2
实验器材
电泳仪，电泳槽，滤纸，醋酸纤维素薄膜 脱色摇床，染缸，点样器
血清中几种主要蛋白组分：
血清蛋白质 等电点
分子量
白蛋白 α1球蛋白 α2球蛋白 β球蛋白
4.８白 6.85～7. ５０
69,000
200,000
300,000
90,000～ 150,000 156,000～ 950,000
占总蛋白的 ％
57～72 2～5 4～9
步骤
４、平衡 将膜条无光泽向下置于电泳槽支架上
，点样端靠近负极。薄膜两端要紧贴滤纸，（点
样线不要压在滤纸上）中间平直悬空，加盖密封
，平衡５min。
５ 、电泳
将点样端的薄膜平贴在阴极电泳槽支架的滤纸桥上 （点样面朝下），另一端平贴在阳极端支架上(见下图)。 要求薄膜紧贴滤纸桥并绷直，中间不能下垂。连接好电泳 仪。在室温下电泳，打开电源开关，调节电流强度 0.5mA/cm膜宽度，通电50min后，调节旋钮使电流为零，关 闭电泳仪切断电源。
试剂
４x电极缓冲液：1.5mol/L Tris-HCl(pH 8.6)
（Tris三羟甲基氨基甲烷）
染色液：称取0.5g氨基黑，甲醇50ml，冰醋
酸10ml，蒸馏水加至100ml。
漂洗液：取甲醇45ml，冰乙酸5ml和蒸馏水
50ml，混匀置塞试剂瓶内贮存。
实验操作
醋酸纤维素薄膜电泳
醋酸纤维素薄膜电泳
醋酸纤维素薄膜电泳是一种高效、快速和准确的分离和鉴定分子的技术。
这种技术被广泛应用于生物化学、医学、环境科学等领域。
醋酸纤维素薄膜电泳是一种基于毛细管电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳的分离技术。
该技术将醋酸纤维素质地的薄膜作为分离介质，样品通过电泳移动分离在薄膜的表面。
这种技术具有高分辨率、高灵敏度、高通量和半制备规模的优点。
醋酸纤维素薄膜电泳技术的应用范围广泛，包括但不限于以下方面：
1、蛋白质分离和鉴定。
醋酸纤维素薄膜电泳技术可以对蛋白质进行高分辨率的分离和鉴定，对于寻找新的蛋白质、筛选生物标志物和新药物的作用非常重要。
2、核酸分离和鉴定。
醋酸纤维素薄膜电泳技术还可以高效地分离和纯化核酸，对于对基因筛选和遗传学研究非常重要。
3、药物分析和质量控制。
对于药物制剂的分析和质量控制，醋酸纤维素薄膜电泳技术可以快速准确地检测出药物中的有效成分和有害成分。
4、环境分析。
醋酸纤维素薄膜电泳技术也可以用于环境分析，例如分析水体中的有机物和无机物质。
在应用这种技术时，需要注意以下几点：
1、选择合适的样品前处理方法，以保证样品的纯度和完整性。
2、选择合适的运行条件，如电场强度、分离介质pH值、电泳时间等，以获得最佳的分离效果。
3、选择合适的检测方法，如荧光检测、吸收光谱检测等，以达到最优的检测灵敏度和选择性。
总之，醋酸纤维素薄膜电泳技术在生物化学、医学、环境科学等领域中具有广泛的应用前景。
我们需要不断地探索和创新，以推动这种技术的发展和应用。
血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳实验结果讨论及注意事项
血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳实验结果讨论及注意事项血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳实验是一种常见的蛋白质分离和分析方法。
这种方法基于蛋白质在电场中的迁移速度差异，可以实现对蛋白质的定性和定量分析。
在进行这种实验时，需要注意一些实验操作步骤和技巧，以确保实验结果的准确性和可靠性。
实验步骤1.准备样品：从血清中提取要分析的蛋白质样品。
可使用丙酮、醋酸等溶液进行样品的处理和稀释。
2.制备凝胶：将醋酸纤维素膜在磁盘上进行切割，将膜放入电泳槽中，加入足够的电泳缓冲液。
3.电泳条件：确定好电泳槽内电泳缓冲液的pH值和离子浓度，根据蛋白质的性质确定最佳的电泳条件，如电场强度、电泳时间等。
4.上样：在预定位置上样，可使用微量注射器将样品滴于凝胶表面。
5.打开电源：连接电极，通电进行电泳。
电泳时间根据分析的需要进行调整。
6.固定凝胶：停止电泳后，将凝胶取出，固定和染色。
7.分析：在透明胶支架上对凝胶进行扫描，记录下蛋白质的电泳迁移图像。
实验结果讨论：1.蛋白质的分离：根据电泳上样区域蛋白质的迁移速率和位置，可以对样品中的蛋白质进行定性和定量分析。
根据蛋白质之间的迁移时间差异，可以推测出它们在电场中的相对电荷、分子大小和电泳迁移速率等信息。
2.蛋白质的鉴定：可以通过与已知蛋白质标准品的电泳迁移对照来鉴定样品中蛋白质的种类和含量。
也可以通过进一步的染色技术，如银染、荧光染色等，增强或显示蛋白质带的清晰度，从而更准确地分析样品中蛋白质的种类和富集。
3.实验重复性和稳定性：为了保证实验结果的可靠性，一般需要对实验进行多次重复操作，计算其平均值和标准差。
同时也需要控制实验条件的稳定性，包括电泳缓冲液的配制、电场强度的控制、电泳时间的准确计时等。
确保实验操作的一致性可以降低测定误差。
注意事项：1.实验操作：操作时需佩戴手套，避免样品受到外界污染，减少实验误差。
仔细熟悉实验步骤和操作要求，确保操作正确。
2.样品制备：样品提取和制备过程中需要严格控制温度、pH值和时间等因素，以保证样品质量的一致性。
醋酸纤维素薄膜电泳
清蛋白 前清蛋白
制备。
临床意义：
白蛋白：主要在肝脏合成，所以与肝脏疾患密切相关。
α球蛋白的增加与发热有关，与炎症有关。 β球蛋白增加常伴随血中脂质的增加。
γ球蛋白含有抗体成分，在许多慢性感染、免疫性疾病中有异常。
例如：多发性骨髓瘤病人在β球蛋白与γ球蛋白之间出现一个尖峰：M蛋白
肝硬化病人γ球蛋白增加，白蛋白降低。
红蛋白、球蛋白、脂蛋白、糖蛋白、甲胎 蛋白、类固醇及同工酶等。它具有简单快
-球蛋白
-球蛋白
速、对蛋白质样品吸附极少，无“拖尾”
现象，染色后蛋白质区带更清晰等优点， 电渗作用虽然较高但很均一 ，不影响样
品的分离效果。不足之处是分辨率比聚丙
烯酰胺凝胶电泳低，由于薄膜厚度小（约 10～100μm），样品用量很少，不适于
思考题
P2：1、2、3
预习：实验五、六
• 凝胶层析分离蛋白质混合物的原理？何谓分子筛
效应？ DNS—氨基酸的双向聚酰胺薄膜层析中，各种氨 基酸是怎样得到分离？
•
血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳
——根据迁移率分离
操作步骤
标记 用铅笔在薄膜无光泽面(毛面)一端2cm处
轻画一细线 ，并在右上角做好标记。
浸泡 将醋酸纤维素薄膜毛面向下，在缓冲溶液中浸泡，使其充分浸透。 点样
用镊子将薄膜置于滤纸上，吸收多余的液体(不要太干），利用载玻片 一侧蘸取样品，45度角于毛面细线处点样。
(有效长度)
设：混合物中有A、B两物质：
• 物质A在电场中移动的距离为: dA= AVt/l
物质B的移动距离为：dB= BVt/l 则两物质移动距离之差为： Δd=(dA-dB)=(A-B)Vt/l 即：物质A、B能否分离取决于两者的迁移率
醋酸纤维素薄膜电泳实验讨论
醋酸纤维素薄膜电泳实验讨论醋酸纤维素薄膜电泳实验讨论引言：醋酸纤维素薄膜电泳是一种常用的分离和分析技术，广泛应用于生物医学、环境监测和食品安全等领域。
本实验旨在探究醋酸纤维素薄膜电泳在分离和分析中的应用，并进一步研究其影响因素以及优化条件。
实验方法：1. 准备醋酸纤维素薄膜：将质量浓度为4%的醋酸纤维素溶液在玻璃片上匀开，然后在60℃恒温槽中干燥30分钟；2. 准备电泳缓冲液：将100mM的特定缓冲液配制好，保持pH稳定；3. 准备样品：将待测样品进行处理，如酶解、过滤等；4. 实施电泳实验：将醋酸纤维素薄膜与玻璃片固定在电泳板上，注入电泳缓冲液至电极孔上方，然后将样品涂抹在薄膜上，按照特定电压和时间进行电泳。
实验结果：经过实验，我们发现醋酸纤维素薄膜电泳可以有效地分离待测样品中的目标成分。
通过调节电压和时间，我们发现改变这两个参数可以影响分离效果。
在本实验中，我们进行了一系列实验，对不同电压和时间条件下的分离效果进行了分析。
首先，当电压在80V~120V范围内逐渐增加时，电泳分离的效果呈现出明显的改善。
这是因为较高的电压可以提高电泳速度，使目标成分在薄膜上移动的距离更短，从而加快分离过程。
然而，当电压过高时，可能会发生样品电泳坍塌和电解液温升，导致分离效果下降。
其次，我们发现时间对分离效果的影响也很明显。
在时间较短的情况下，目标成分无法完全分离，而在时间较长的情况下，目标成分已经移出薄膜，导致无法检测到。
因此，我们需要根据待测样品的特点和所需分离程度来选择合适的时间。
讨论：本实验结果表明醋酸纤维素薄膜电泳可以作为一种有效的分离和分析技术，同时也揭示了影响分离效果的关键因素。
在进行实际应用时，我们需要根据待测样品的特点和所需分离程度来选择合适的电压和时间条件。
此外，在实验过程中应注意控制电解液的pH值和温度，以保证实验结果的准确性和重复性。
总结：醋酸纤维素薄膜电泳是一种有效的分离和分析技术，可以应用于生物医学、环境监测和食品安全等领域。
醋酸纤维薄膜电泳 原理 步骤 详细
蛋白组分 Alb 1 2
g/L 35～52 1.0～4.0 4.0～8.0 5.0～10.0 6.0～13.0
占蛋白百分数 （%） 57～68
1.0～5.7
4.9～11.2
7.0～13
9.8～18.2
Schematic representation of a protein electrophoresis
电泳40~~4cm时即可断电 （1）加样后，将薄膜条架于支架两端，无光泽面朝下（点样面），点样侧置于阴极端，膜两侧分别塔上纱布，纱布一端垂入缓冲液中。
Schematic representation of a protein electrophoresis
6r
3 影响电泳结果的因素 6 r
是纤维素醋酸酯(acetate ester of cellulose )，由纤维素的羟基进行乙酰化后制得，将它溶于有机溶剂涂抹成均匀的薄膜，待有机溶剂 挥发后，即为白色不透明的醋酸纤维薄膜
2. 电泳图谱分离不清
①标本加量过多 ②电流过低 ③薄膜结构过分致密，透水性差 ④薄膜表面干燥
3. 电泳速度慢
血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳 由于血清中各蛋白组分等电点不同而致表面净电荷量不等，加之分子大小和形状各异，因而电泳迁移率不同，彼此得以分离。 由于血清中各蛋白组分等电点不同而致表面净电荷量不等，加之分子大小和形状各异，因而电泳迁移率不同，彼此得以分离。
6r ①点样时血清点加不均匀 丽春红S染色扫描法结果 （1）加样后，将薄膜条架于支架两端，无光泽面朝下（点样面），点样侧置于阴极端，膜两侧分别塔上纱布，纱布一端垂入缓冲液中。 Amido black 10B
4. 白蛋白（Albumin)区带中间部分不着色，染色不足
醋酸纤维素薄膜电泳
醋酸纤维素薄膜电泳原理：醋酸纤维素薄膜电泳（cellulose acetate membrance electrophoresis）以醋酸纤维薄膜为支持物。
它是纤维素的醋酸酯，由纤维素的羟基经乙酰化而制成。
它溶于丙酮等有机溶液中，即可涂布成均一细密的微孔薄膜，厚度以0.1mm—0.15mm 为宜。
太厚吸水性差，分离效果不好；太薄则膜片缺少应有的机械强度则易碎。
应用：醋酸纤维素薄膜电泳操作简单、快速、廉价。
已经广泛用于血清蛋白，血红蛋白，球蛋白，脂蛋白，糖蛋白，甲胎蛋白，类固醇及同工酶等的分离分析中，尽管它的分辨力比聚丙酰胺凝胶电泳低，但它具有简单，快速等优点。
特点：1.（1）醋酸纤维素薄膜对蛋白质样品吸附极少，无“拖尾”现象，染色后背景能完全脱色，各种蛋白质染色带分离清晰，因而提高了测定的精确性。
（2）快速省时。
由于醋酸纤维素薄膜亲水性较滤纸小，薄膜中所容纳的缓冲液也较少，电渗作用小，电泳时大部分电流是由样品传导的，所以分离速度快，电泳时间短，一般电泳45—60min即可，加上染色，脱色，整个电泳完成仅需90min左右。
（3）灵敏度高，样品用量少。
血清蛋白仅需2μl血清，甚至加样体积少至0.1μl，仅含5μg 蛋白样品也可得到清晰的分离带。
临床医学检验利用这一点，检测在病理情况下微量异常蛋白的改变。
（4）应用面广。
某些蛋白在纸上电泳不易分离，如胎儿甲种球蛋白，溶菌酶，胰岛素，组蛋白等用醋酸纤维薄膜电泳能较好地分离。
（5）醋酸纤维素薄膜电泳染色后，经冰乙酸，乙醇混合液或其它溶液浸泡后可制成透明的干板，有利于扫描定量及长期保存。
2、醋酸纤维素薄膜电泳与聚丙烯酰胺凝胶电泳相比，操作简单，但分离效果不太好。
如血清蛋白在醋酸纤维素薄膜电泳中，只能分离出5—6条区带，而聚丙烯酰胺凝胶电泳可分离出数10条区带。
补充：根据样品理化性质，从提高电泳速度和分辨力出发选择缓冲液的种类，pH和离子强度。
选择好的缓冲液最好是挥发性强，对显色或紫外光等观察区带没有影响，若样品含盐量较高时，宜采用含盐缓冲液。
醋酸纤维素薄膜电泳实验报告
醋酸纤维素薄膜电泳实验报告引言：薄膜电泳是一种常用的分离和分析技术，它在生物医学、环境科学等领域得到广泛应用。
本实验旨在研究醋酸纤维素薄膜电泳的原理、操作步骤以及其在分离和分析中的应用。
一、醋酸纤维素薄膜电泳的原理醋酸纤维素薄膜电泳是利用醋酸纤维素薄膜作为分离介质，通过电泳电流的作用将待测物质分离出来的一种技术。
醋酸纤维素薄膜具有良好的电泳分离性能和化学稳定性，能够有效地分离样品中的离子或分子。
二、实验操作步骤1. 制备醋酸纤维素薄膜：将醋酸纤维素溶解于醋酸乙酯中，制备成一定浓度的醋酸纤维素溶液。
然后将溶液滴在玻璃基板上，待其自然干燥形成薄膜。
2. 准备电泳缓冲液：按照实验要求，配置适当浓度和pH值的电泳缓冲液。
3. 将待测样品加入电泳缓冲液中，并进行样品处理。
4. 将制备好的醋酸纤维素薄膜放置在电泳槽中，注入电泳缓冲液。
5. 将带电样品加入电泳槽中，通过施加电场，使样品在醋酸纤维素薄膜上进行电泳分离。
6. 根据实验要求，确定分离时间，停止电泳，取出醋酸纤维素薄膜。
7. 对分离的样品进行染色或检测，得到分离结果。
三、醋酸纤维素薄膜电泳的应用醋酸纤维素薄膜电泳在生物医学、环境科学等领域具有广泛的应用价值。
1. 生物医学应用：醋酸纤维素薄膜电泳可用于分离和检测生物样品中的蛋白质、核酸等生物大分子，对于研究基因表达、疾病诊断等具有重要意义。
2. 环境科学应用：醋酸纤维素薄膜电泳可用于水质和大气污染物的分析，能够对污染物进行快速、高效的分离和测定，为环境监测和治理提供了有效手段。
3. 食品安全应用：醋酸纤维素薄膜电泳可用于食品中有害物质的检测和分离，如农药残留、重金属等，为食品安全保障提供了技术支持。
结论：醋酸纤维素薄膜电泳是一种重要的分离和分析技术，具有广泛的应用前景。
本实验通过制备醋酸纤维素薄膜，利用电泳原理对待测样品进行分离和分析，研究了醋酸纤维素薄膜电泳的操作步骤及应用。
该技术在生物医学、环境科学和食品安全等领域具有重要意义，能够为相关领域的研究和实践提供有效的技术支持。
简述醋酸纤维素薄膜电泳原理及优点
简述醋酸纤维素薄膜电泳原理及优点
醋酸纤维素薄膜电泳是一种电泳分离技术，它是利用醋酸纤维素薄膜作为固定相，将荷电样品在电场作用下在薄膜表面进行分离和富集。
这种电泳技术广泛应用于生物学、化学等领域，在分离、纯化和表征化合物方面具有独特的优点。
醋酸纤维素薄膜电泳的原理是基于涂覆在玻璃或石英片表面的醋酸纤维素薄膜，通过电场使荷电物质在薄膜表面上移动，实现荷电物质的分离。
这种技术与传统的凝胶电泳相比，具有以下优点：
1.高分辨率
醋酸纤维素薄膜电泳是一种高分辨率的电泳技术，由于该技术的固定相为薄膜，因此可以提供一个大的有效表面积，以提高分离效率和分辨率。
与其他电泳技术相比，它可以实现更明显的分离和更清晰的图谱。
2.灵敏度高
醋酸纤维素薄膜电泳技术可以分离和检测非常低浓度的样品，对于物质的分离和检测具有高度的灵敏度。
这使得它成为生物学和化学研究中极为重要的技术。
3.简便易行
醋酸纤维素薄膜电泳技术具有简单易于操作的优点，使用起来非常方便，减少了许多样品前处理的步骤，提高了分析效率和速度。
4.适用广泛
醋酸纤维素薄膜电泳技术在生物学和化学领域有着广泛的应用，可以分离细胞质、蛋白质、核酸和药物化合物等不同的生化分子，成为分离、纯化和分析化合物的重要工具。
总之，醋酸纤维素薄膜电泳技术是一种独特的电泳分离技术，具有高分辨率、高灵敏度、简便易行和适用广泛等优点，在生物学和化学研究中有着广泛的应用前景。
醋酸纤维素薄膜电泳分离血清蛋白原理和实验方法
醋酸纤维素薄膜电泳分离血清蛋白原理和实验方法一、原理醋酸纤维薄膜电泳是用醋酸纤维素薄膜作为支持物的电泳方法。
带电颗粒在电场力作用下，向着与其电性相反的电极移动的现象称为电泳。
由于各种蛋白质都有特定的等电点，如将蛋白质置于pH值低于其等电点的溶液中，则蛋白质将带正电荷而向负极移动。
反之，则向正极移动。
因为蛋白质分子在电场中移动的速度与其带电量、分子的形状及大小有关，所以，可用电泳法将不同的蛋白质分离开来。
血清中含有多种蛋白质，它们的等电点都在pH 7.5以下。
将血清放于pH 8.6的缓冲液电泳时，所有的血清蛋白都带有负电荷，在电场中将向正极移动。
由于各种血清蛋白在相同pH时所带电荷数量不等，分子颗粒大小不一，因而泳动速度不同，经电泳被分离开来。
血清蛋白质的等电点和分子量见下表。
本实验以醋酸纤维素薄膜（简称CAM）为支持物分离血清中的不同蛋白质。
它是一种良好的呈均一泡沫状疏松薄膜，厚约120μm具有一定的吸水性。
二、实验材料、仪器及试剂1．材料：健康人血清或鸡血清2．仪器：电泳仪电泳槽3．试剂：（1）醋酸纤维素薄膜；（2）pH8.6 巴比妥缓冲液（离子强度0.06～0.07）：取巴比妥0.83克，巴比妥钠6.38克，加蒸馏水加热溶解后，定容至500ml。
（3）染色液：取氨基黑10 B 0.5克，溶于50ml甲醇中，再加冰醋酸10ml，蒸馏水40ml混匀。
（4）漂洗液：95%乙醇4.5ml，冰醋酸 5ml，蒸馏水50ml混合。
（5）透明液：95%乙醇80ml，冰醋酸20ml混合。
三、实验方法1．准备薄膜：将切割整齐的2.5×6cm的薄膜条，浸入巴比妥缓冲液中浸透后，取出，用吸水纸吸去多余缓冲液。
2．点样：仔细辩认薄膜的粗糙面与光滑面，在粗糙面距离薄膜一端1.5cm处，用铅笔轻轻划一条直线。
用玻棒蘸上血清样品，涂于盖玻片边缘处（边缘长度应比膜条宽度窄），将此边缘按压在直线上。
注意：样品应点在薄膜的粗糙面一侧。
试验九血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳
实验九血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳一、原理醋酸纤维素薄膜电泳是以醋酸纤维素薄膜为支持物的电泳方法。
醋酸纤维素是纤维素的羟基乙酰化形成的纤维素醋酸酯。
将它溶于有机溶剂(如丙酮、氯仿、氯乙烯、乙酸乙酯等)后，涂抹成均匀的薄膜则成为醋酸纤维素薄膜。
该膜具有均一的泡沫状结构，有强渗透性，对分子移动无阻力，厚度为120um。
本实验以醋酸纤维素为电泳支持物，分离各种血清蛋白。
血清中含有清蛋白、a-球蛋白、β-球蛋白、γ-球蛋白和各种脂蛋白等。
各种蛋白质由于氨基酸组分、立体构象、分子量、等电点及形状不同，在电场中迁移速度不同。
分子量小、等电点低，在相同碱性pH缓冲体系中，带负电荷多的蛋白质颗粒在电场中迁移速度快。
例如，以醋酸纤维薄膜为支持物，正常人血清在pH8．6的缓冲体系中电泳1 h左右，染色后可显示5条区带。
清蛋白泳动最快，其余依次为α1-、α2-、β-、γ-球蛋白。
这些区带经洗脱后可用分光光度法定量，也可直接进行光吸收扫描，自动绘出区带吸收峰及相对百分比，临床医学常用它们间相对百分比的改变或异常区带的出现作为临床鉴别诊断的依据。
二、操作(一)仪器与薄膜的准备1．醋酸纤维素薄膜的润湿与选择。
2．电泳槽的准备在两个电极槽中，各倒人等体积的电极缓冲液，在电泳槽的两个膜支架上各放两层滤纸条，使滤纸一端的长边与支架前沿对齐，另一端浸入电极缓冲液内。
当滤纸条全部润湿后，用玻璃棒轻轻挤压在膜支架上的滤纸以驱逐气泡，使滤纸的一端能紧贴在膜支架上。
滤纸条是两个电极槽联系醋酸纤维素薄膜的桥梁，故称为滤纸桥。
3．电极槽的平衡(二)点样用竹夹子取出薄膜，将无光泽面向上平放在滤纸上。
点样区距阴极端1.5 cm 处，点样时，先用玻璃棒取血清，均匀涂在点样器表面(该点样器是由载玻片一端磨成具有斜面而成}，再将点样器轻轻印在点样区内，如图所示，使血清完全渗透至薄膜内，形成一定宽度、粗细均匀的直线。
此步是实验的关键，是获得具有清晰区带的电泳图谱的重要环节。
实验一 血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳
实验一血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳【实验目的】（1）了解电泳的一般原理，掌握醋酸纤维素薄膜电泳操作技术。
（2）测定人血清中各种蛋白质的相对百分含量。
【实验原理】带电荷的胶体粒子在电场中移动的现象称电泳。
醋酸纤维素薄膜电泳法是以醋酸纤维素薄膜作为支持物。
血清中含多种蛋白质，当在pH这8.6时，这些蛋白质均带负电，它们在电场中向阳极移动，由于各种蛋白质所带负电荷多少及颗粒大小不同，所以在同一电场，同一pH环境中涌动速度不同。
本实验以醋酸纤维素为电泳支持物，分离各种血清蛋白。
血清中含有清蛋白，α~球蛋白，β~球蛋白，γ~球蛋白和各种脂蛋白等。
各种蛋白质由于氨基酸组分，立体构象，分子量，等电点及形状不同，在电场中迁移速度不同。
分子量小，等电点低，相同碱性pH。
表1 人血清中12种蛋白质的等电点及分子量缓冲体系中，带负电喝多的蛋白质颗粒在电场中移动速度快。
例如，以醋酸纤维素薄膜为支持物，正常人血清中pH=8.6的缓冲体系中电泳1h左右，染色后可显示5条区带。
清蛋白泳动最快，其余依次为α1~，α2~,β~及γ~球蛋白。
这些区带经洗脱后可用分光光度法定量，也可直接进行光吸收扫描自动绘出区带吸收峰及相对百分比。
临床医学常利用它们异常区带的出现作为临床鉴别诊断的依据。
此法由于操作简单，快速。
图1 正常人血清醋酸纤维素薄膜电泳示意图为清蛋白，2，3，4，5分别为α1,α2,β~及γ~球蛋白，6为点样原点（3）优点。
目前，已成为临床生化检验的常规操作之一。
【临床意义】清蛋白62-72% α1—球蛋白3-4% α2—球蛋白6-10% β~—球蛋白7-11% γ~—球蛋白9-18%血清蛋白电泳的病理改变多半是清蛋白降低和一种或二种以上球蛋白增加。
表2 血清蛋白的临床意义【试剂】1.巴比妥缓冲液（pH=8.6离子强度为0.06）：称取巴比妥纳12.76克，巴比妥1.66克，置于盛有200ml蒸馏水的烧杯中稍加热溶解后，移置100ml容量瓶中，加蒸馏水稀释至刻度。
醋酸纤维素薄膜电泳指导
醋酸纤维素薄膜电泳指导醋酸纤维素薄膜电泳是一种常用的分离和纯化生物大分子的方法。
本文将对醋酸纤维素薄膜电泳的操作步骤进行详细介绍，并提供实验指导。
一、实验材料准备1. 醋酸纤维素薄膜：可准备自制醋酸纤维素薄膜或购买商用的醋酸纤维素薄膜。
2. 缓冲液：根据需要选择适当的缓冲液，常用的有Tris缓冲液、磷酸盐缓冲液等。
3. 模版DNA：准备需要分离和纯化的DNA样品。
4. 电泳仪和电源：确保电泳仪和电源的正常工作。
二、膜制备1. 制备醋酸纤维素溶液：将适量醋酸纤维素加入足够的乙醇中，并充分搅拌溶解。
2. 漏斗滴膜：将制备好的醋酸纤维素溶液倒入装有膜模的漏斗中，边转动漏斗边滴膜于预处理过的载玻片上，使其均匀涂布在玻片上。
3. 干燥膜：将滴膜后的载玻片在通风处自然干燥，确保膜完全干燥后再进行下一步操作。
三、电泳条件设定1. 调节电泳仪：按照电泳仪的设备说明书正确设置电泳仪的参数，如电压、时间等。
2. 准备缓冲液：根据实验需要选择合适的缓冲液，并按照比例配置好缓冲液。
3. 进行预电泳：将准备好的醋酸纤维素薄膜浸入缓冲液中，进行预电泳处理。
四、样品处理和装载1. DNA片段制备：将目标DNA打断成合适的片段大小，并使用聚丙烯酰胺凝胶电泳分析确认打断效果。
2. 样品加载：将制备好的DNA样品加载到醋酸纤维素薄膜上，可采用直接加载或间接加载的方式。
五、电泳操作1. 启动电泳：将装有DNA样品的醋酸纤维素薄膜浸入缓冲液中，确保电泳液覆盖薄膜，并启动电源。
2. 电泳过程：根据需求设定合适的电源参数，进行电泳分离。
注意观察电泳过程，确保电泳效果和样品分离。
3. 停止电泳：根据实验需要设定合适的电泳时间，完成电泳后断开电源。
六、薄膜处理和分析1. 取出薄膜：将电泳结束的薄膜小心取出，避免扭曲或损坏。
2. 染色处理：可根据需要选择合适的染色方法染色薄膜上的DNA 样品，如乙锐亮绿、溴化乙锭等染料。
3. 分析结果：使用合适的分析工具，如UV-Vis分光光度计、荧光成像仪等，对薄膜上的DNA样品进行定量或定性分析。
血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳
血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳是一种新兴的蛋白质分离和分析技术。
它将血清蛋白作为示踪物，通过电泳运动在醋酸纤维素薄膜上进行分离，从而实现对血清蛋白的分离和定量分析。
本篇文章将介绍血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳的原理、方法和应用，并提供相关的参考内容。
1. 原理：血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳基于电荷和大小的差异，通过电场作用将血清蛋白分离开来。
在醋酸纤维素薄膜上，血清蛋白会在电场的作用下向阳极或阴极迁移，从而在薄膜上形成条带。
不同类型和含量的血清蛋白具有不同的迁移速度和位置，可以通过分析条带的移动距离和形态来定量分析不同的血清蛋白。
2. 方法：（1）样品准备：将血清样品离心，取上清液即可。
（2）制备醋酸纤维素薄膜：将醋酸纤维素溶液均匀涂覆在电泳盒上的玻璃或硅胶片上，待溶液干燥后形成醋酸纤维素薄膜。
（3）电泳操作：将样品在醋酸纤维素薄膜上加载，设置适当的电压和时间进行电泳操作。
（4）染色和测量：电泳结束后，将醋酸纤维素薄膜染色，然后用影像扫描仪或相似设备测量分离和形态信息。
3. 应用：血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳已在医学和生物学研究中得到广泛应用。
（1）疾病诊断：通过分析血清中的特定蛋白质，可以判断某些疾病的发生和发展，如癌症、心血管疾病等。
（2）蛋白质组学研究：血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳可以用于蛋白质组学的定性和定量分析，有助于了解蛋白质组的组成和功能。
（3）药物筛选：通过血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳，可以评估药物对特定蛋白质的影响，从而为药物筛选和设计提供参考。
（4）食品安全检测：血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳可以检测食品中的蛋白质污染，例如乳制品中的外源性蛋白质添加剂。
参考文献：[1] Ge R S, Tan B P. Determination of immunoglobulin in fish serum using cellulose acetate membrane electrophoresis[J]. Journal of chromatography, 1990, 494: 177-182.[2] Yan Z, Cao D, Lin B, et al. Identification of Cancer Biomarkers With Differential Abundance Using Statistical Analysis of High-Dimensional Proteomics Data[J]. Frontiers in Physiology, 2018, 9: 1744.[3] Fu Q, Li J, Qiu J, et al. Proteomics-based identification of a group of apoptosis-related proteins and biomarkers in gastric cancer[J]. International journal of oncology, 2016, 48(1): 343-352.[4] Zhao X, Li C, Ye X, et al. Indirect Competitive ELISA Assayfor Rapid Detection of Milk Residues in Wine Using Nanomaterials to Amplify Signal[J]. Food Analytical Methods, 2009, 2(1): 18-23.[5] Kawakami T, Nishida K, Akutsu H. Blood serum protein electrophoresis on cellulose acetate film during adult Mizuneri (Jellyfish) Toxicity[J]. Journal of toxicological sciences, 1997,22(2): 177-181.[6] Janssena。
醋酸纤维素薄膜电泳-精品医学课件
5、时间：30-40min
（四）显色与脱色
1、显 色 氨基黑10B（1-2min） 2、脱色
5%冰醋酸漂洗3次
注意：用干净镊子夹电泳槽中的膜 污染镊子用于显色与脱色
( isoelectric point, pI)
当蛋白质溶液处于某一pH时，蛋白 质解离成正、负离子的趋势相等，即成 为兼性离子，净电荷为零，此时溶液的 pH称为蛋白质的等电点。
3、血清蛋白质
1）依据电泳结果分类
清蛋白(69.000) 1-球蛋白(200.000) 2-球 蛋 白(300.000) -球蛋白(90.000-150.000) -球蛋白(156.000-950.000)
2）各血浆蛋白质的等电点
分类
pI
清蛋白
4.64
1-球蛋白 5.06 2-球蛋白
-球蛋白 5.12
-球蛋白
6.857.3
pH8.6
— — — — —
组成比例
56一62％ 4一7％ 9一11％ 11一15％ 12一16%
A
B
清蛋白 1 2
清蛋白 1 2
血清蛋白电泳图谱
[操作]
1．电泳介质 ——醋纤膜的准备
醋酸纤维素膜（2×8cm） 放入pH8.6的巴比妥缓冲液
2．样品 ^
1)γ-球蛋白 前面分离提纯、浓缩
2)血清:对照
3、点样
粗糙面点样
1.5c m
注意：点样量 适度 过多：拖尾和扩散 过少：则无法检出
4、电泳
将点好祥的醋纤膜点样端放进电泳 槽架负极（黑色）
醋酸纤维素薄膜电泳分离及定量测定血清蛋白成分
醋酸纤维素薄膜电泳分离及定量测定血清蛋白成分一、实验目的1(掌握醋酸薄膜电泳的原理及操作。
2(定量测定人血清中各种蛋白质的相对百分含量。
3(掌握分光光度计的原理及操作二、实验原理采用醋酸纤维薄膜为支持物的电泳方法，叫做醋酸纤维素薄膜电泳。
醋酸纤维素，是纤维素的羟基乙酰化所形成的纤维素醋酸酯。
将它溶于有机溶剂(如:丙酮、氯仿、氯乙烯、乙酸乙酯等)后，涂抹成均匀的薄膜则成为醋酸纤维素薄膜。
该膜具有均一的泡沫状的结构，有强渗透性，厚度约为120μm。
醋酸纤维素薄膜电泳是近年来推广的一种新技术。
它具有微量、快速、简便、分辨力高、对样品无拖尾和吸附现象等优点。
该技术已广泛应用于血清蛋白、糖蛋白、脂蛋白、结合球蛋白、同功酶的分离和测定等方面。
目前，醋酸纤维薄膜电泳趋向于代替纸电泳。
四、试剂和器材(一)试剂(1)新鲜血清——无溶血现象。
(2)巴比妥——巴比妥钠缓冲液(pH8.6，0.07M，离子强度0.06):称取巴比妥1.66g和巴比妥钠12.76g，溶于少量蒸馏水后定容1 000ml。
?(3)染色液:称取氨基黑10B 0.5g，加入蒸馏水40ml，甲醇50ml和冰乙酸10ml，混匀，在具塞试剂瓶内贮存。
?(4)漂洗液:取95,乙醇45ml，冰乙酸,ml和蒸馏水50ml。
混匀，在具塞试剂瓶内贮存。
[易挥发、密封]?(5)透明液[易挥发、密封]甲液—取冰乙酸15ml和无水乙醇85ml，混匀，装入试剂瓶内，塞紧瓶塞，备用。
乙液—取冰乙酸25ml和无水乙醇75ml，混匀，装入试剂瓶内，塞紧瓶塞，备用。
(6)液体石腊。
(7)0.4mol氢氧化钠溶液:称取16g氢氧化钠(分析纯)用少量蒸馏水溶解后定容到1000ml。
(二)器材(1)醋酸纤维素薄膜—2?×8?(浙江黄岩曙光化工厂等处生产)(2)培养皿(直径9,10?) (3)血色素吸管或点样器(4)直尺和铅笔 (5)镊子(6)电泳仪和电泳槽 (7)万用电表(8)玻璃板(8?×12?) (9)普通滤纸(10)试管和试管架 (11)吹风机(12)单面刀片 (13)擦镜纸(14)吸量管(2ml、5ml)和吸量管架 (15)722型分光光度计五、实验仪器介绍(1)722型分光光度计?测量原理分光光度法测量的理论依据是伯郎—比耳定律:当容液中的物质在光的照射和激发下，产生了对光吸收的效应。
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实验步骤
注意事项
1. 点样面为不光滑面，勿用手触摸； 2. 点样量适中，垂直居中点样； 3. 点样端靠近电泳仪负极； 4. 膜条背面朝上放置，需与滤纸贴紧，拉直。
思考题
• 分析影响电泳的各个因素。
• 分析自己的实验结果，针对本实验的各项操作提出改进意见。
阻力: F’ = 6πrηυ QE = 6πrην
当电泳达到平衡时，带电颗粒匀速运动: F = F’
ν Q = E 6πrη
• 迁移率: 即ν/E，表示单位电场强度时粒子运动的速度。 该值在
一定条件下决定于粒子本身的性质，即其所带电荷、大小和形状.
影响电泳速度的因素
• 样品本身：带电量、分子大小、形状
• 电场强度：电压
• 缓冲液：成分、pH、离子强度(0.02-0.2 M) • 支持介质：电渗作用、吸附作用 • 温度
正极
－ － － － － － － －－ － － － － － － － ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋
负极
表面带负电荷 带正电荷的水层携带粒子向负极移动
如果样品应移向负极，则泳动速度加快； 如果样品应移向正极，则泳动速度减慢。
分类
电泳
显微电泳 自由电泳 等电聚焦电泳 (无支持体) 等速电泳 密度梯度电泳 滤纸电泳(常压及高压) 区带电泳 薄层电泳(薄膜及薄板) (有支持体) 凝胶电泳(琼脂、琼脂糖、淀粉胶、聚丙烯酰胺)
垂直板电泳槽
圆盘电泳槽
水平电泳槽
双向电泳
醋酸纤维薄膜电泳
• 醋酸纤维素薄膜电泳以醋酸纤维素薄膜为支持物。 • 醋酸纤维素是纤维素的醋酸酯，将其溶于丙酮等有机
血清蛋白质的醋酸纤维素薄
膜电泳
实验目的
1．掌握电泳的基本过程与操作方法。
实验原理
电泳
优点: 快速、准确、重现性好。
应用: 1. 分离各种有机物：如蛋白质、酶、核酸等； 2. 分析某种物质的纯度及分子量。
对生物大分子而言：
电场力: F = QE
5. 操作简单、快速、价廉.
染色方法
– 氨基黑10B
– 考马斯亮蓝R250
– 银染色法
考马斯亮蓝R250
考马斯亮蓝G250
人血浆蛋白质的等电点及迁移率
蛋白质名称 白蛋白 等电点 4.88 泳动度/(cm2· V-1· S-1) -5.9×10-5 分子量 69,000
α1-球蛋白
α2-球蛋白 β-球蛋白 γ-球蛋白
5.06
5.06 5.12 6.85-7.50
–5.1×10-5
–4.1×10-5 -2.8×10-5 -1.0×10-5
200,000
300,000 9,000-150,000 156,000-300,000
病名
肾病 弥温性肝损害 肝硬化 原发性肝癌 多发性骨髓瘤 慢性炎症 妊娠 无丙种球蛋白血症 双白蛋白血症
溶液中，可涂布成均一细密的微孔薄膜。待有机溶剂
挥发后，即为白色不透明的醋酸纤维薄膜。该膜具有 均一的泡沫状的结构，厚度约为120μm，有很强的通
透性，对分子移动阻力很小。
1. 样品吸附极少，无拖尾现象，条带清晰。
2. 快速省时。
3. 灵敏度高，样品用量少。 4. 制成透明干膜用于定量扫描分析与长期保存。
白蛋白 ↓↓ ↓↓ ↓↓ ↓↓ ↓ ↓ 双峰
α1球蛋白 ↑ ↑ ↓
AFP
α2球蛋白 ↑↑ ↓ ↓
β球蛋白 ↑ ↓
β-γ桥
γ球蛋白 ↓ ↑ ↑
↑ ↑ ↑ ↑
↑↑ ↑ ↓ ↓↓
实验器材和试剂
• 实验器材
电泳槽、电泳仪、染缸、滤纸、醋酸纤维素薄膜、点样器
• 试剂
1. 血清 2. 巴比妥-巴比妥钠缓冲液 (pH 8.6、I = 0.06) 3. 染色液: 氨基黑10B 0.25g，甲醇50 mL + 冰醋酸10 mL + 水40 mL溶解 (可重 复使用) 4. 漂洗液：甲醇45 mL + 冰醋酸5 mL + 蒸馏水50 mL