饲料中尿素含量的测定——比色法

饲料中尿素含量的测定（非国标）

——比色法

一、适用范围

本方法适用于动物饲料及其原料中尿素含量的测定

二、原理

由于对-二甲胺基苯甲醛（DMAB，Ehrilich’S试剂）与尿素可形成有颜色的复合物，并可用分光光度计在420nm处进行比色，以求出尿素的含量

三、仪器与试剂

1、分光光度计420nm，1cm吸收池

本方法除特殊注明外，试剂均为分析纯，水为蒸馏水。

2、DMAB溶液

溶解16g DMAB于1000mL甲醇中，再加入100mol/L盐酸，该溶液在1个月内是稳定的。

3、乙酸锌（Zn（Ac）2.2H2O）溶液

称取22.0克乙酸锌溶于蒸馏水中，再加入3mL乙酸，然后稀释至100mL 。4、亚铁氰化钾（K4Fe（CN）6.3H2O）溶液

溶解10.6g 亚铁氰化钾于蒸馏水中，再稀释至100mL。

5、磷酸缓冲液（PH6—7.0）

先分别溶解3.403g磷酸二氢钾和4.355g磷酸氢二钾100mL蒸馏水中，然后将两溶液合并在一起，再用水稀释至1000mL。

6、木炭Daroa G60

7、尿素标准溶液：

称取5g（准确至1mg）尿素（试剂级）溶解于水，再稀释至1000mL作为储备液（5mg/mL）

工作液：0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 1.4 1.6 1.8和2.0尿素/5mL。吸收储备液各2 4 6 8 10 12 14 16 18和20mL 分别置于250mL容量瓶中，并用磷酸盐缓冲溶液稀释至刻度。

8、参比溶液

用含1.0mg尿素/5mL的标准溶液作为参比溶液。如置于24℃以下环境，该参

比溶液可稳定一周。

四、标准曲线的制备

吸取不同浓度的尿素工作标准溶液5mL ，分别置于20mmX150mm（25mL）的比色管中，各加入5mL DMAB溶液。另外，制备一空白对照液，即吸取5mL DMAB溶液和5mL磷酸缓冲液于25mL比色管中。然后，将所有比色管轻轻充分摇动，并置于25℃水浴中放置10min。然后，用空白对照调节吸光度0点。用1Cm 吸收池于420nm处读取各溶液的吸光度值。然后用吸光度对尿素浓度做图，得一条直线。否则，应将该批号的DMAB溶液重做一次。

五、测定步骤

称取1.00g粉碎的样品置于500mL容量瓶中，加入1g木炭，约250mL水，5mL乙酸锌溶液和5mL铁氰化钾溶液，机械振摇30min，并用水稀释至刻度，静置至沉淀下沉。用滤纸过滤，收集上清溶液。吸取5mL溶液于比色管中，加入5mLDMAB溶液，并充分振摇。每组样品均应带一参比标准（5mL参比溶液和5mL DMAB溶液）及一个空白对照液。于25℃水浴中放置100min。以空白对照液为对照，读取420nm的吸光度。

六、测定结果的计算：

由标准曲线查得的浓度（mg/5mL）X100

尿素（%）=--------------------------------------------------------

样品重X1000/500

（1.0 X A样品）X1000

或尿素（%）=-------------------------------------------

A标准X所测定的样品重（mg）

附注盐酸标准溶液的配置与标定方法

1、盐酸标准溶液的配置

（1）0.05mol/L 取分析纯盐酸4.2mL 加蒸馏水定容至1000mL，摇匀即得。（2）0.1mol/L 取分析纯盐酸8.5mL加蒸馏水定容至1000mL 摇匀即得。

2、标定方法

精密称取在300℃干燥至恒重的基准无水碳酸钠约0.1g（准确至0.1mg），加蒸馏水50mL 使溶解，加甲基红溴甲酚绿指示剂10滴，用盐酸标准溶液滴定至呈紫红色，煮沸2min，冷却至室温，继续滴定至呈紫红色，即得。

3、计算公式

m X 1000

C= ——————

v X 53.00

式中C——盐酸标液的浓度（mol/L）

v——滴定时消耗盐酸标液的量（mL）

m——基准无水碳酸钠的称取量（g）

4、重复性

每次标定至少取3份平均样进行操作，计算结果的相对平均偏差不得超过0.2%，否则需重新标定。

5、注意事项

本方法规定的基准无水碳酸钠称取量，系指盐酸标液浓度0.05mol/L时所称取的量，如果标定时用0.1mol/L标准盐酸液，则基准无水碳酸钠称取量应为0.15g。

尿素的定性检验

方法一：取尿素样品1g 加入试管中, 加水约1ml 溶解，再加浓硝酸20 滴，混合均匀后放置冷却 5 ～10 分钟，若有白色结晶产生就证明存在尿素。方法二：取尿素样品1g 放入试管中，在酒精灯上加热溶化，稍冷却，加入蒸馏水2ml 及1g /ml 氢氧化钠溶液 5 滴，溶解后，再加入0.05g /ml 硫酸铜溶液 3 滴，若出现紫色，也证明是尿素。