武汉轻工大学大学生科研项目申报书 (2)

编号：

武汉轻工大学大学生科研项目

申报书

院（部）：动物科学与营养工程学院

项目名称：嗜水气单胞菌2JBN301大质粒的功能研究

申报人：

指导教师：

起止年限：

填报日期：

共青团武汉轻工大学委员会制

主要研究内容和技术关键：

1.研究内容

在获得大质粒消除株的基础上，本项目拟通过对斑马鱼进行活菌攻毒实验，测定并比较大质粒消除前后菌株的LD50差异；通过绘制细菌的生长曲线，得到大质粒消除前后菌株进入对数期的快慢差异；通过测定菌株对15种药物的敏感性实验，了解大质粒消除前后菌株的耐药谱变化。

2. 技术路线图

图1 嗜水气单胞菌2JBN301的大质粒功能研究路线图（2JBN301（-I）为大质粒缺失株）

3.研究方案

①攻毒实验（菌株毒力变化）：

以较大的蓝斑马鱼（体长约25mm）为实验用鱼，在实验室条件下26-28℃充氧养殖2-3周，将嗜水气单胞菌于28℃斜面培养约18-24小时，用0.85%的生理盐水配成1×106、3×106、9×106CFU/mL三种浓度（菌浓度折算按600nm下OD1.2= 3×108 CFU/mL），10 µl/尾腹腔注射斑马鱼，每种浓度至少两个平行，每个平行10条鱼，两周后统计死鱼数，用SPSS14.0计算LD50值。

②耐药谱变化：

将培养至对数中期的菌液用无菌水稀释至105～106CFU/mL，取100μL涂布LB平板，将多种药敏纸片贴在平板上，30℃培养过夜20小时后测量扩散法测定抑菌圈的直径，直径小于13mm的认定为不敏感，直径在13-17mm间的为中度敏感，直径大于17mm为敏感。