图解抗原抗体反应类型和原理课件

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抗原抗体反应的类型 PPT课件

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(二)超速离心分离法 超速离心分离法最常用于分离亚细胞成分及大
分子蛋白质,它是进一步纯化的第一次过筛。 (三)选择性沉淀法
选择性沉淀法是采用各种沉淀剂或利用某些条 件促使抗原成分沉淀的方法。 1.核酸去除法 2.盐析沉淀法
(1)抗原的粗筛 (2)提取丙种球蛋白 (3)抗原的浓缩
3.有机溶剂沉淀法 4.水溶性非离子型聚合物沉淀法 常用聚合物为聚乙 二醇(Polyethyleneglycol,PEG)及硫酸葡聚糖。 水溶性聚合物沉淀蛋白质的机制仍不十分清楚,大 致机制有如下解释: ①聚合物与蛋白质形成共沉淀物; ②聚合物与蛋白质之间发生水的重分配; ③聚合物与蛋白质形成复合物。
细菌的鞭毛抗原需用有动力的菌株,菌液用0.3 %-0.5%甲醛处理,而菌体抗原则需要100℃加温2 -2.5h去掉鞭毛抗原后应用。毒素抗原则需要在杀 菌后再加 0.5%-l%氯化钙溶液。寄生虫和真菌抗 原除用破碎法加工粗提外,大多要加以适当纯化。
有些细胞膜亦可制成颗粒性抗原。颗粒抗原悬液呈
浑浊状或乳浊状,多采用静脉内免疫法,较少加佐 剂作皮内注射。
下能消化细菌和组织细胞。如溶菌酶在碱性条件下, PH8.0可对革兰阳性菌细胞壁的溶菌作用,该法适 用于多种微生物。酶破坏细胞具有作用条件温和、 内含物成分不易受到破坏、细胞壁损坏的程度可以 控制等特点。
(5)表面活性剂处理法: 在适当的温度、pH及低离子强度的条件下,表
面活性剂能与脂蛋白形成微泡,使膜溶解或渗透性 改变。常用的表面活性剂有十二烷基硫酸钠(SDS 阴离子型)、二乙胺十六烷基溴(阳离子型)、聚 山梨酯(非阳离子型)、苯扎溴胺等。该方法常用 于破碎细菌,且作用比较温和。在提取核酸时常用 此方法破碎细胞。
二、可溶性抗原的制备和纯化

抗原抗体反应的原理PPT讲稿

抗原抗体反应的原理PPT讲稿

半抗原与载体的联接
1、连接方式:物理法(吸附) 化学法
2、化学连接方法: 直接联接法: 间接联接法:
碳化二亚胺法
蛋白质-COO— + R-N+=CN-R` H-N+-R
蛋白质-COO-C-NH-R` + 半抗原-NH2 O
蛋白质-C-NH-半抗原 + R-NH-CO-NH R`
半抗原与载体直接联接
一氯醋酸钠法
半抗原-
- OH + Cl- CH2 - COONa
半抗原-
- CH2 - COOH
半抗原与载体间接联接
重氮化的对氨基苯甲酸法
HOOC-
-NH2 + NaNO2
HOOC-
-N=N
半抗原-
- OH + HOOC-
-N=N
半抗原-
-N=N-
OH
-COOH
半抗原与载体间接联接
本章小结
1、免疫学技术的应用范畴 2、免疫学的基本概念 3、抗原抗体反应的原理、特点、影响因素 4、抗原制备的方法
处理与粉碎
组织粉碎:机械、生物 细胞破碎:物理、化学、生物
蛋白质分离
选择性沉淀:盐析 有机溶剂沉淀 水溶性非离子型聚合物沉淀
透析技术:
超滤技术:
单一组分提取
层析技术:凝胶过滤 离子交换 亲和层析
离心技术:差速离心 密度梯度离心
电泳技术:电泳洗脱 等电聚焦
凝胶层析(分子筛)
— —
+ + ++
一、抗原抗体反应的原理 二、抗原抗体反应的特点 三、影响抗原抗体反应的因素
抗原抗体反应的原理
1、抗原抗体结合的作用力 2、抗原抗体结合物析出原因

《抗原抗体反应》课件

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夹心反应
总结词
指抗原和抗体结合后,其复合物可与其 他物质结合,形成夹心结构所引发的反 应。
VS
详细描述
在夹心反应中,抗原和抗体结合后,其复 合物可以与另一种物质结合,形成一种夹 心的结构。这种反应可以显著增加反应的 灵敏度,常用于检测低浓度的抗原。例如 在酶联免疫吸附试验(ELISA)中,酶标 板上的抗体与抗原结合后,再与酶标记的 抗体结合,形成夹心结构。
抗体
指由抗原刺激机体免疫系统产生的,能与相应抗原特异性结合的 球蛋白。
抗原抗体的特性
特异性
抗原和抗体之间的结合具有高度的特异性,即一种 抗原只能与相应的抗体发生结合反应。
亲和力
抗原和抗体之间的结合力称为亲和力,亲和力的大 小决定了抗原抗体反应的强弱。
可逆性
抗原抗体结合后形成的复合物在一定条件下可以解 离,即抗原抗体反应具有可逆性。
凝集反应
观察抗原抗体结合后颗粒物的凝集情况,判断反 应结果。
荧光免疫技术
利用荧光物质标记抗体或抗原,通过荧光信号的 强弱判断反应结果。
06
抗原抗体反应的注意事项
实验前的准备
实验材料准备
确保抗原和抗体溶液的浓 度和纯度,选择适当的标 记物如荧光染料、酶等。
实验设备检查
检查实验所需仪器设备, 如离心机、显微镜、酶标 仪等,确保其正常运行。
02
抗原抗体反应的原理
抗原抗体的结合力
02
01
03
静电吸引
抗原和抗体带有相反的电荷,通过静电吸引相互结合 。
氢键
抗原和抗体中的极性基团形成氢键,增强结合力。
疏水相互作用
抗原和抗体的非极性基团相互靠近,形成疏水键。
抗原抗体的亲和力

详细介绍抗原抗体反应 ppt课件

详细介绍抗原抗体反应  ppt课件
抗体。 抗原过量区(后代现象):沉淀少。
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四、阶段性
第一阶段:抗原与抗体发生特异性结合阶段 特点:反应快
第二阶段:反应可见阶段 特点:反应时间较长
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抗原抗体反应影响因素
影响抗原抗体反应的因素很多,主要有两个方面:一是抗原抗体本身的因素; 另一方面是反应环境因素。 一、反应物自身因素 抗原抗体反应中,抗原和抗体是反应的主体,所以它们的特性直接影响其结合 情况。 (一)抗原 抗原的理化性状、表面抗原决定簇的种类和数目等均可影响抗原抗体反应的结 果。
淀。 沉淀反应可用于研究抗体与大分子抗原结合的
特性。
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抗原抗体反应与沉淀形成
沉 淀 的 抗 体 量
抗原量
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沉淀反应曲线
测定方法:在一定量的抗体中,逐渐增加抗原 浓度,沉淀的形成与抗体的比例密切相关。
曲线分3个区: 抗体过量区(前带现象):小分子复合物,不
形成沉pt课件
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B细胞抗原表位的特性
• 天然蛋白的B细胞抗原表位通常由蛋白表面的亲水氨基
酸组成,易于接近膜结合或自由的抗体。
• 顺序抗原表位(Sequential Epitopes),连续抗原表位
(Continuous Epitopes),蛋白质一级结构
• 结构抗原表位(Continuous Epitopes),不连续抗原表
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结构决定簇与顺序决定簇
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两种抗体与一个连 续性抗原表位及一 个非连续性抗原表 位的相互作用
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蛋白质结构与抗原表位
3. 蛋白质的结构与抗原决 定簇的关系 (1)蛋白质的一级结构 只有顺序决定簇; (2)蛋白质的二级结构 与抗原的反应性密切有关; (3)蛋白质的三级结构 与抗原构象决定簇密切相 关; (4)蛋白质四级结构与 抗原构象决定簇和免疫原 价数密切相关;

2章抗原抗体 Microsoft PowerPoint 演示文稿 (1)

2章抗原抗体 Microsoft PowerPoint 演示文稿 (1)

Fab片段与抗原表位的结合能力。用结合常数K反应出亲和
力的大小。越大亲和力越高。
抗体
抗体
抗原 高亲和力
抗原 低亲和力
抗原抗体的亲和力示意图
多价抗体与抗原分子间的结合能力称为亲合力(avidity)。
Ag
Ig-Fab 亲和力
Ag
IgG 亲合力
Ag
IgM
亲合力
抗原抗体的亲和力和亲合力示意图
第二节 抗原抗体反应的特点

抗A抗体
特异反应与交叉反应示意图
交叉反应 特异反应 交叉反应
3.免疫学检验中也利用交叉反应进行诊断 变形杆菌与立克次氏体有相同的抗原表位,用变形杆菌代
替立克次氏体作为抗原来检测怀疑斑疹伤寒病人血清进行凝 集实验,称为外-斐(Weil-Felix)实验。
交叉反应可影响血清学诊断的准确性。
二、可逆性 抗原抗体结合是分子表面的非共价结合,形成的复合 物在一定条件下可以解离,称之为可逆性。
单价抗原与抗体结合无网格形成
二.抗体 1.抗体的来源
家兔抗体,等价带较宽,适用于做诊断试剂。 马抗体等价带较窄(等价带较窄对抗原抗体的比例要求较 高)一般做免疫治疗。 单克隆抗体不用于凝集或沉淀反应。
2.浓度 抗体浓度适宜。 过大过小都会影响抗原抗体复合物的形成。
3.亲和性 抗体的亲和性又称之为亲和力。 再次应答所产生抗体(IgG)的平均亲和力高于初次免
几乎无游离的抗原或抗体。 ③抗原过量:后带现象(postzone)。



抗体过剩带
形 成
prezone


等价带
equivalence zone

抗原过剩带 postzone

抗原抗体及其反应-PPT课件

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免疫球蛋白的基本结构2
• 抗性种类的多样性与特异性均由可 变区反映出来。抗原结合点即在可变区。 在重链的C区还有一枢纽区(hinge region),抗体分子可在此处发生转动而 使形状改变。
第 三 节 抗原抗体反应
Reaction of Antigen and Antibody
抗原抗体反应
• 抗原抗体反应的一般规律 • 主要的抗原抗体反应 • 现代免疫标记技术
• 常用的方法: • 双抗体夹心法(Double antibody sandwich method) • 间接免疫吸附测定法 (Indirect immunosorbent assay)
酶联免疫吸附试验
• 图7.12 两种酶联免疫吸附试验示意图
双抗体夹心法

是一种测定待检标本中是否 含有抗原的方法。
一、抗原抗体反应的 一般规律
反应的组成成分
反应的基本特点
1、反应的组成成分
• 1)抗原
• 2)特异抗体 • 3)环境因素 • 基本因素:0.85%NaCl作电解质 • 反应温度37℃或56℃ • pH 7.0 • 特殊因素:补体
2、反应的基本特点
• 1)抗原与抗体的结合具有特异性。 • 2)抗原与抗体是分子表面的结合。 • 3)抗原与抗体结合形成可见反应,还与抗 原、抗体的相对浓度有关。 • 4)抗原抗体分两个阶段: • 结合阶段: 抗原抗体特异结合; • 反应阶段: 结合后受环境因素影 响出现可见反应。


3、补体结合试验 (Complement fixation test ,CFT)
• 有补体参与,并以绵羊红血细胞和溶 血素(红细胞的特异抗体)作指标系统 的灵敏度很高的抗原抗体反应。
4、中和试验 (Neutralization test)

《抗原抗体反应原理》课件

《抗原抗体反应原理》课件

免疫应答机制研究
通过研究抗原与抗体的相互作用,深 入了解免疫应答的机制和过程,为疫 苗研发、免疫治疗等提供理论基础。
自身免疫性疾病机制研究
通过对自身抗体与自身抗原的反应进 行研究,揭示自身免疫性疾病的发病 机制,为治疗提供新思路。
免疫细胞功能分析
利用抗原抗体反应检测免疫细胞表面 的抗原标志,分析免疫细胞的功能和 亚型,为免疫学研究提供有力工具。
抗体的纯化
通过一系列分离纯化技术,去除血清中的其 他成分,提高抗体的纯度,常用的方法有离 心、凝胶电泳、亲和层析、离子交换层析等 。
抗原抗体反应的检测方法
沉淀反应
抗原和抗体结合后,在一定条 件下形成肉眼可见的沉淀物, 常用的方法有单向免疫扩散、 双向免疫扩散、对流免疫电泳 等。
凝集反应
抗原和抗体结合后,引起颗粒 性抗原的凝集现象,常用的方 法有直接凝集、间接凝集等。
Байду номын сангаас
抗原抗体的分类
按作用对象分类
外源性抗原和内源性抗原。外源性抗原是指来自机体外部的抗原,如细菌、病 毒等;内源性抗原是指来自机体内部的抗原,如变性或损伤的组织细胞。
按功能分类
完全抗原和半抗原。完全抗原是指具有免疫原性和反应原性的抗原物质,能够 刺激机体产生免疫应答;半抗原是指仅有反应原性而无免疫原性的抗原物质, 不能刺激机体产生免疫应答。
影响因素
亲和力受到抗原和抗体分子间的电荷分布、空间构象、结合位点数目以及溶液环 境等多种因素的影响。
抗原抗体的特异性
特异性的含义
特异性是指抗原和抗体结合的专一性,即一种抗原只能与相 应的抗体发生特异性结合。
决定因素
抗原抗体的特异性是由其分子表面的化学基团决定的,这些 化学基团在空间构象上互补,使得抗原和抗体能精确地结合 在一起。

临床免疫学检验 抗原抗体反应PPT

临床免疫学检验 抗原抗体反应PPT
4. 疏水作用力 抗原抗体分子侧链上的非极性氨基酸(亮、缬、丙)在 水溶液中与水分子间不 形成氢键。当抗原表位与抗体结合点靠近时,相互间正、负极性消失,静电引力 形成的亲水层也消失、排斥两者之间的水分子,促进抗原抗体结合。疏水作用提 供的作用力最大,约占总结合力的50%。
第二节 抗原抗体反应的特点
抗原抗体复合物浓度 亲和常数=
游离抗原浓度×游离抗体浓度
K值表示亲和力,大表示结合牢固,不易解离。
二、亲水胶体转化为疏水自然沉淀, 其蛋白质含大量氨基与羧基残基,带电荷,静电作用下,其 周围形成带相反电荷的电子云、水化层,不致自行聚合、产 生沉淀。疏水胶体 — 抗原抗体结合 — 电荷减少,电子云消 失,再加入电解质,使疏水胶体相互靠拢,形成可见抗原抗 体复合物。
抗体预滴定,找出最适反应浓度。
二、环境因素
1.电解质 Ag+Ab结合后无电解质参与,不出现可见反应 常用0.85%的Nacl促使沉淀和凝集物的形成。 2. 酸硷度 抗原抗体反应一般在pH 6~8间。 pH达到或接近抗原的等电点,即使无相应抗体,也会引起颗粒性抗原非特异 的凝集,造成假阳性反应。 3. 温度 温度升高,分子运动加速,碰撞机会增多,抗原抗体反应加速 常为37℃,高于56℃,抗原抗体解离,甚至变性或破坏。 有 些 有 独 特 的 最 适 反 应 温 度 , 如 冷 凝 集 素 在 4℃ 左 右 与 细 胞 结 合 最 好 , 20℃ 反而解离。
溶性复合物,大多数动物属比型,家兔为代表。
H型抗体 — 合适比例较窄,抗原抗体过量均可形成可溶性复合物,人 和大动物属此型,马免疫血清为代表。
三、可递性(reversibility)
Ag + Ab
Ag + Ab

《抗原抗体反应》PPT课件 (2)

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7
3 半抗原(hapten)/不完全 抗原(incomplete antigen)
只具有免疫反应性而无免疫原性的物质 称为半抗原
半抗原与抗体结合
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8
4 抗原决定簇 (antigenic determinant)
又称表位(epitope),是指抗原性物质 表面决定该抗原特异性的特殊化学基团, 是免疫应答和免疫反应具有特异性的物 质基础
带现象(zonephenomenon):等价带前 后分别为抗体或抗原过剩则无沉淀物形 成。
前带(prezone):抗体过量
后带(postzone)精选:课件抗ppt 原过剩。
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Marrack(1934)网络学说
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30
3 可逆性reversibility
Ag + Ab
Ag-Ab
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交叉反应(Cross reaction)
抗原除与其相应的抗体发生特异性反应 外,还与其他抗体发生反应称为交叉反 应
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引起交叉反应的原因:
抗原异质性(用于免疫动物的抗原性物质 中含有多种抗原分子,任何其他物质只要 含有一种或多种与上述物质相同的抗原分 子,必将与上述多特异性的抗血清发生交 叉反应)
抗原抗体结合过程示 意图
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分两个阶段: 抗原抗体特异性结合阶段 可见反应阶段
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1 抗原抗体结合力
静电引力:带相反电荷的氨基和羧基, 与距离有关
范德华力:原子与原子、分子与分子相 互接近时分子极化发生的引力
氢键结合力:氢原子与氢受体原子间的 引力
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形成的沉淀物少,上清液中可测出游离的抗体或抗
原的现象。
➢带现象包前括带(prozone)抗体过量时称为。
后代(postzone)抗原过量时称为。
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四、阶段性
第一阶段:抗原与抗体发生特异性 结合阶段
特点:反应快 第二阶段:反应可见阶段
特点:反应时间较长
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第三节 抗原抗体反应影响因素
注意:解离后的抗原或抗体仍然保持其原有生物活性
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三、比例性(proportionality)
1、比例性是指抗原与抗体发生可见反应 遵循一定的量比关系。 2、以絮状沉淀实验为例,受抗原抗体比 例性的影响非常明显。
3、根据所形成的沉淀物及抗原抗体比例 关系绘制反应曲线。
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3
教学内容:
第一节 抗原抗体反应的原理 第二节 抗原抗体反应的特点 第三节 影响抗原抗体反应的因素 第四节 免疫学检测技术的类型
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4
第一节 抗原抗体反应的原理
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5
一、抗原抗体的亲和力和亲合力
* 亲和力(affinity):是抗体分 子上一个抗原结合点与相应的抗原决 定簇之间的相适应而结合的强度,是 抗原与抗体间固有的结合力。
2、原因:抗原抗体的结合是分子表面的非共价键 结合,因此形成的复合物不牢固。
3、抗原抗体反应动态平衡式如下:
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4、决定抗原抗体解离的因素
(1)抗体与相应抗原的亲合力。 亲合力低的抗体与抗原形成的复合物较易解离。
(2)环境因素对复合物的影响。 PH过高或过低、增加离子强度均可破坏
静电引力,使抗原抗体结合力下降,促使其 解离。
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Avidity
• The overall strength of binding between an Ag with many determinants and multivalent Abs
Keq =
104
Affinity
106 Avidity
1010 Avidity
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二、抗原抗体的结合力
• 概念:供氢体上的氢原子与受氢体原子间的引力。 • 供氢体:-COOH、-NH2和-OH • 受氢体:氧、氮
➢ 氢键结合力与供氢体和受氢体之间距离的6次方成反比。
➢ 最具特异性(必须供氢体和受氢体互补才能实现氢键的结合)
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四、疏水作用力(疏水键)
• 概念:两个疏水基团在水溶液中相互接触时,由于 对水分子排斥而趋向聚集的力。
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二、范德华引力
概念:抗原和抗体相互接近时,各自所携带的原子与 原子、分子与分子由于分子极化作用而出现的引力。
• 结合力的大小与两个相 互作用基团的极化程度的 乘积成正比、与它们之间 距离的7次方成反比。
• 作用大小取决于二者分 子空间构型的互补性
• 作用力最小
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三、氢键结合力
研究生课程抗原抗体反应类型
(antigen – antibody reaction)
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1
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2
抗原抗体反应:指抗原与相应抗体之间 所发生的特异性结合反应。
体内:体液免疫应答的效应作用 包括
体外:各种免疫学检测技术
本章讲述的抗原抗体反应,主要是指抗 原和抗体在体外结合所表现的反应
看书上76表7-1
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5、一组概念
➢最适比(optimal ratio):是指形成沉淀物最多,
上清液清晰,几乎无游离抗原或抗体的抗原抗体浓
度比。
➢等价带(equivalencezone):形成沉淀物最多的
抗原与抗体分子比例合适的范围。
➢带现象:在等价带前后,由于抗体和抗原过量,
• 抗原决定簇与抗体上 的结合点靠近,互相间 正、负极性消失,亲水 层立即失去。
• 结合力最强,约占总 结合力的50%。
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三、亲水胶体转化为疏水胶体
转化
NaCl
亲水胶体
疏水胶体
可见反应
血清学反应条件下, 当抗原与抗体结合使表面 在电解质作用下,中
抗原抗体均带负电荷, 使极化的水分子在其
➢不形成牢固的共价键,通过非共价键结合 ➢这种弱的结合力涉及几种分子间的作用力
1、静电引力 2、范德华引力
3、氢键
4、疏水作用力
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一、静电引力 概念:抗原和抗体分子带有相反电荷的氨基和 羧基基团之间相互的引力。又称库伦引力。
静电引力的大小与两个相互作用基团间的距
离的平方成反比。
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一、反应物自身因素 *抗原:理化特性、Ag决定簇数量和种类。 *抗体: 1、来源(如:R型抗体 > H型抗体) 2、特异性与亲和力(如:单克隆抗体) 3、浓度
学习交,
周围形成水化层,成 失去亲水性能,抗原抗体
为亲水胶体。
复合物成为疏水胶体
和胶体粒子表面的电 荷,使各疏水胶体之 间靠拢,形成可见的 抗原抗体复合物
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第二节 抗原抗体反应的特点
1.特异性 2.比例性 3.可逆性 4.阶段性
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一、 特异性(specificity)
1、概念:一种抗原分子通常只能与其刺激机体后
产生的抗体结合,这种抗原与抗体结合 反应的专一性称为特异性。
特 异 性 示 意 图
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19
2、决定因素: 由抗原决定簇和抗体分子超变区之间
空间结构的互补性决定的。
3、应用: 由于抗原抗体反应具有高度特异性,故
可用已知的抗原(抗体)来检测相应未知 的抗体(或抗原)。
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6
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7
抗体与抗原结合是可逆的反应,在平衡时其
亲和常数(K):
K值越大⇨抗体的亲和力越高⇨与抗原结合越牢固
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8
亲合力(avidity):是指一个抗体分子 与整个抗原表位之间结合的强度,与抗 体结合价直接相关。另外也与亲和力强 弱有关。
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4、交叉反应(cross reactions)
概念:两种不同的抗原分子具有部分相同或类似结 构的抗原表位,可与彼此相应的抗血清发生反应。
B
抗原抗体交叉反应示意图
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21
二、可逆性(reversibility)
1、概念:是指抗原与相应抗体结合成复合物后,在 一定条件下可解离为游离抗原与抗体的特 性称为抗原抗体结合的可逆性。
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