《动物毒理实验》课件：实验3 皮肤刺激性试验

皮肤刺激强度分级
皮肤局部反应
无刺激性 轻度刺激性
无异常改变 充血、红斑
中等刺激性
红斑，少量小出血点，水肿， 少量丘疹以及小水疱
强刺激性
红斑，皮下出血，水肿，有很 多小水疱并有可能合并成大水 疱，糜烂，表皮剥落，有溃疡 形成等
评分 0 <2
2~6
>6
方法评价
皮肤刺激试验的结果不仅与检测技术有关， 也与试验过程中的质量控制相关。
经4~8h后，除去斑贴物，每24h观察一次各小区皮肤的局部 反应，连续观察4d，按皮肤刺激反应评分（表1），定量地 评定受试化学物对皮肤局部刺激作用的强度。红斑通过肉眼 观察，水肿通过轻轻触摸的方法来评分。
表1 皮肤刺激强度反应评分
皮肤反应强度
评分
无红斑

极轻微红斑（勉强可见）
1
A.红斑和 边界清晰的红斑（明显红斑，淡红至鲜红色） 2
本法与局部全封闭斑贴法不同之处在于： 1.每组的白色家兔数不应少于3只； 2.采用纱布作斑贴物，在无刺激作用的前提下，用半封
闭敷料固定； 3.斑贴不需要在擦伤皮肤上进行； 4.斑贴4h，然后去掉斑贴并清洗皮肤，观察0.5h、1h、
24h、48h和72h后的皮肤反应。 皮肤刺激反应评分同全封闭法。
结果分析
皮肤刺激试验又称皮肤原发性刺激试验。
试验目的
了解受试化学物对皮肤的直接刺激作 用以及刺激强度。
试验材料——实验动物
实验动物：成年白色家兔或白色豚鼠， 首选白色家兔。
在皮肤刺激试验中，动物品种的选择 很重要。目前多选用兔和豚鼠，对于 强刺激或无刺激作用的化学物选用家 兔检测效果好，但对作用缓和的刺激 性化学物，选用豚鼠所获得的试验结 果较准确。
试验材料——受试化学物
受试化学物：应用受试化学物原液或 根据需要原液稀释成若干个不同浓度 的稀释液，也可应用受试化学物的细 粉。
每小区皮肤的应用剂量为液体受试化 学物0.3~0.5 ml（84液），粉状受试 化学物0.1~0.5 g （洗衣粉）。
试验材料——其他
脱毛剂
大头针、纱布、棉球、胶布、塑料薄膜 移液器、天平
凡是杀虫剂、杀真菌剂、杀鼠剂以及具有刺 激性的兽药等化学物均需进行局部皮肤刺激 试验，以保护接触人员的健康。
试验药物的量一般以0.5ml或0.5g为宜，评 价固体受试化学物时不一定要将其配成溶液， 具体可酌情而定。
试验方法——脱毛
在动物脊柱两侧或躯干中部用化学药 品脱去被毛准备好脱毛区。
脱毛方法：先将被毛剪短，然后在所 需部位涂上一薄层脱毛剂，2~3min 后用玻璃棒刮去被毛，并用温水清洗 脱毛剂，纱布擦干。
采用局部全封闭斑贴法或局部半封闭 斑贴法进行皮肤刺激试验。
试验方法——局部全封闭斑贴法
当以动物背部脊柱两侧的皮肤做受试部位时，先将其 两侧脱毛区分成若干个小区，小区面积的总和应约为 动物体表面积的1/10 。将其中一侧的各个小区，分别 用大头针在皮肤上划一“#”字形擦伤，以观察受试 化学物对损伤皮肤的刺激作用；另一侧用以观察受试 化学物对完整皮肤的刺激作用。
将表1中A项和B项评分结果相加，凡总分低 于2分者可视为无刺激性或轻度刺激性； 2~6分之间者具有中等刺激性；6分以上者 具有强刺激性。
刺激性极强的物质，试用前需经适当稀释后 再进行斑贴，如稀释用的溶剂本身具有刺激 作用，则需作溶剂对照试验。
另外，也可按表2中的标准来判断试验结果。
表2 皮肤刺激强度分级标准
实验三 急性皮肤刺激试验
目录
试验原理 试验目的 试验材料 试验方法 结果分析 方法评价
试验原理
局部刺激试验是毒理学试验中的一项重要内 容，对可能具有局部刺激作用的化学物必须 进行此项试验，但对具有强酸（pH≤2 ）或 强碱（pH≥11.5 ）性质的化学物不需做本 试验，因为这些化学物属于腐蚀性物质。另 外，已知具有高毒性的化学物也不必进行皮 肤刺激试验。
焦痂形成 中等至严重的红斑（鲜红至深红色）
3
极严重红斑（深红至紫红色），并有焦痂形成
（真皮层受损）
4
无水肿
0
极轻微水肿（勉强可见）
1
B.水肿形 轻度水肿（边缘明显地高出周围皮肤）
2
成
中度水肿（水肿区高出边缘皮肤约1mm）
3
严重水肿（水肿区高出边缘皮肤1mm以上，面 积超出斑贴区）
4
试验方法——局部半封闭斑贴法
将受试化学物原液及不同浓度的稀释液，分别直接涂 敷于受试皮肤的若干个小区，然后在各区皮肤上放一 块4~6层的纱布块或其他半吸水性惰性物 （1cm×1cm或直径为1cm）。
试验方法——局部全封闭斑贴法
固体药剂可直接加到皮肤上，再用湿纱布覆盖或是放于预先 浸湿的皮肤上，也可将糊状受试化学物涂于纱布块上，再将 其贴于皮肤上，然后在纱布块上覆盖一层较大的不透气的塑 料薄膜，用胶布和绷带固定。