华东理工大学仪器分析高效液相色谱法
高效液相色谱法测定清肺颗粒中甘草酸的含量
高效液相色谱法测定清肺颗粒中甘草酸的含量为了确保清肺颗粒中甘草酸的含量准确、快速的测定，本研究采用了高效液相色谱法(HPLC)进行分析。
HPLC是一种高效、高分辨率、准确度高、重现性好的分析方法，广泛应用于药物分析、环境监测、食品检测等领域。
本文将详细介绍清肺颗粒中甘草酸的含量测定方法及实验步骤。
实验仪器和试剂1. 仪器：采用Agilent 1200系列高效液相色谱仪2. 色谱柱：采用C18色谱柱，规格为250mm×4.6mm，5μm颗粒度3. 色谱条件：流动相A为0.1%甲酸水溶液，流动相B为乙腈；流速为1.0 mL/min；检测波长为254nm。
4. 试剂：甘草酸标准品、乙腈、甲酸、水等实验步骤1. 样品制备：取清肺颗粒10g，加入100 mL乙醇，超声提取30分钟，用乙醇定容至100mL，过0.45μm的微孔膜。
2. 色谱条件设置：打开色谱仪电源，启动色谱软件，设置初始条件为60% A溶液和40% B溶液。
流速1.0 mL/min。
3. 样品进样：取适量的甘草酸标准品，用乙酸乙酯稀释成不同的浓度标准溶液。
4. 色谱分析：将步骤1中制备的清肺颗粒提取液经过适当的稀释后进样，以甘草酸标准曲线来计算甘草酸的含量。
5. 数据处理：利用色谱软件对测定结果进行峰面积积分，计算出甘草酸的含量。
结果分析通过上述HPLC方法分析，清肺颗粒中甘草酸的含量为Xmg/g。
经过重复实验，结果具有良好的重现性和准确性。
本研究使用高效液相色谱法测定清肺颗粒中甘草酸的含量，该方法准确、快速，适用于批量样品的检测。
在实际生产中，可根据该方法对清肺颗粒中甘草酸的含量进行监测，保证产品质量。
本研究的方法还可以为其他中药含量测定提供参考。
柱前衍生高效液相色谱法测定四氢噻唑_2_硫酮_4_羧酸的光学纯度
不同反应时间取样进行 HPLC分析 , 0. 21 g甲苯作内标物 ,产品与内标物峰面积之比对时间作图 , 发现反应 2 h以上 ,这个比例不再改变 。所以反应时间定为 2 h。
3 结果与讨论
3. 1 二极管阵列紫外检测器和在线旋光检测仪对 TTCA 衍生物检测 在流动相为正己烷 ∶乙醇 ( 93 ∶7, V /V ) 、柱温为 35℃的 HPLC 条件下 , DNB 2Leucine手性柱对 TTCA
第 4期
余 荔等 :柱前衍生高效液相色谱法测定四氢噻唑 222硫酮 242羧酸的光学纯度
5 47
定不同温度下 TTCA 衍生物在 DNB 2Leucine拆分情况 ,结果如图 3所示 。温度对 TTCA 衍生物在手性固 定相上的分离具有一定的影响 。随着温度的降低 ,溶质在固定相和流动相之间传质速度变慢 ,两对映体 保留时间延长 ,分离因子 α也增大 。但是温度低时 ,保留时间较长 ,不适合于分析 。所以 ,确定实验温 度为 35℃。
1. 56 1. 49 1. 44 1. 37 1. 28 1. 15
正己烷 ∶异丙醇 Hexane∶isop ropanol
95 ∶5 90∶10 85∶15
13. 160 6. 651 3. 794
14. 776 7. 462 4. 220
1. 122 1. 123 1. 112
1. 32 1. 24 1. 09
衍生物对映体的拆分能达到基线分离 。用二极管阵列紫外检测器进行检测时 ,两个对映体峰的相关度 (0. 9998)很高 ,说明这两个峰可能是一对对映体峰 (如图 1) 。在线旋光检测仪的检测结果证实这两个 峰是对映体峰 (如图 2) 。
图 1 二极管阵列检测器对 TTCA衍生物的检测结果 Fig. 1 Chromatogram of 22thiothizaolidine242carboxylic acid ( TTCA ) derivative detected by photo2diode array de tec to r
高效液相色谱分析法.ppt
3.固定相及分离柱
气相色谱中的固定液原则上都可以用于液相色谱，其 选用原则与气相色谱一样。但在高效液相色谱中，分离柱 的制备是一项技术要求非常高的工作，一般很少自行制备。
二、分离类型选择
choice of separation types
三、 HPLC的应用
application of HPLC
影响分离的因素与操作条件的选择 一、影响分离的因素
factors influenced separation
1.
•
影响分离的因素与提高柱效的途径
在高效液相色谱中, 液体的扩散系数仅为气体的万分之一， H=A+Cu 故液相色谱H-u曲线与气相色谱的形状不同，如图所示。
则速率方程中的分子扩散项B/U较小，可以忽略不计，即：
3. 流动相选择
在选择溶剂时，溶剂的极性是选择的重要依据。 采用正相液-液分配分离时：首先选择中等极性溶剂， 若组分的保留时间太短，降低溶剂极性，反之增加。 也可在低极性溶剂中，逐渐增加其中的极性溶剂，使 保留时间缩短。 常用溶剂的极性顺序： 水(最大) > 甲酰胺> 乙腈> 甲醇> 乙醇> 丙醇> 丙酮> 二氧六环> 四氢呋喃> 甲乙酮> 正丁醇> 乙酸乙酯> 乙醚> 异丙醚> 二氯甲烷>氯仿>溴乙烷>苯>四氯化碳>二硫化碳> 环己烷>己烷>煤油(最小)
电导检测器，是测定混合阴离子的有效方法。
五、 离子对色谱(Ion pair chromatography)
原理：将一种（或多种）与溶质离子电荷相反的离子（ 对离子或反离子）加到流动相中使其与溶质离子结合形成疏 水性离子对化合物，使其能够在两相之间进行分配； 阴离子分离：常采用烷基铵类，如氢氧化四丁基铵或氢 氧化十六烷基三甲铵作为对离子； 阳离子分离：常采用烷基磺酸类，如己烷磺酸钠作为对 离子； 反相离子对色谱：非极性的疏水固定相(C-18柱)，含有 对离子Y+的甲醇-水或乙腈-水作为流动相，试样离子X-进入 流动相后，生成疏水性离子对Y+ X -后；在两相间分配。
高效液相色谱法测定和胃散中芍药苷含量
高效液相色谱法测定和胃散中芍药苷含量【摘要】目的建立测定和胃散中芍药苷含量的高效液相色谱法。
方法使用HYPERSIL-C18＜?sub＞色谱柱(150 mm×4.6 mm，5 μm)，以乙晴-0.1%磷酸溶液(14∶86)为流动相，流速为0.8 ml/min，检测波长为230 nm。
结果该方法测定芍药苷在75～125 μg/ml范围内线性关系良好( r = 0.999 0)。
平均回收率为99.5%，100.2%，99.7%；RSD为0.44%，0.42%，0.45%(n=3)。
结论该测定方法简单、精密度高、重现性好，是测定和胃散中芍药苷含量的可行方法。
【Abstract】Objective To establish a method for determinating paeoniflorin in Hewei powder by HPLC.Methods HYPERSIL-C18column (150 mm×4.6 mm，5 μm) was used，and the mobile phase consisted of acetonitrile-0.1%H3PO4 solution (14∶86).The flow rate was 0.8 ml/min and the determination wavelength was at 230 nm.Results A good linearity was obtained within the range of 75~125 μg/ml of paeoniflorin ( r=0.9990).The average recoveries ware 99.5%，100.2% and 99.7%；RSD ware 0.44%，0.42% and 0.45%(n=3).Conclusion This method is simple，rapid and accurate which can be used to determine paeoniflorin contents in Hewei powder.【Key words】Hewei Powder；Paeoniflorin；HPLC；Content determination和胃散是本院研制的治疗慢性胃肠炎、消化性溃疡的中药制剂，由肉桂、白芍、香附、当归、陈皮等10 味中药组成，经多年临床观察，疗效显著。
高效液相色谱实验报告
联苯、甲苯、萘和菲以及它们混样的高效液相色谱分析实验目的1.熟练掌握高效液相色谱相关仪器的操作流程。
3.通过谱图分析，掌握运用谱图数据处理目标物质的方法。
一、实验原理色谱分析是运用物质在固定相和流动相两相间的分配系数不同而达到分离，它是一种分离技术，主要目的是对混合物中目标产物进行分离并定量分析的一种技术。
二、实验内容运用高效液相色谱仪测定联苯、甲苯、萘和菲以及四者混合物的色谱，熟练仪器的相关操作流程，能从检测的谱图中定性的指认四者峰的归属，并能定量的描述四者混合物中各自的相对含量。
三、实验步骤1、打开仪器电源开关，让仪器预热一段时间，此时可准备待测样品；2、待仪器运转正常，打开测试软件，先用甲醇清洗柱子（在Load状态下进样，分析时在Inject状态下）；3、进样状态下插入微量注射器，切到装填状态，注入样品，切回到进样状态。
4、点击分析按钮，输入分析的样品名；5、数据分析，通过软件查看积分面积。
五、实验结果液相色谱图0.00.51.01.52.0 2.53.0 3.54.0 4.55.0 5.56.0min0.01.02.03.04.05.06.0mV(x100)Detector A:254nm1.722/156063.034/11168863.383/7097684.037/25429775.046/7069594（2）联苯0.01.02.03.04.05.06.07.08.09.0min0.00.51.01.52.02.53.03.54.04.55.05.56.06.5mV(x100)Detector A:254nm1.7312.5784.1475.2130.01.02.03.04.05.06.07.08.09.0min0.00.51.01.52.02.53.03.54.04.55.0mV(x10)Detector A:254nm1.7213.0433.4084.0845.152（4）甲苯0.01.02.03.04.05.06.07.0min0.00.51.01.52.02.53.03.5mV(x10)Detector A:254nm1.7213.0565.193（5）菲0.01.02.03.04.05.06.07.0min0.01.02.03.04.05.06.07.0mV(x100)Detector A:254nm1.7303.4065.075谱图分析：依据各个物种标样的色谱图可以知道他们各自的出峰时间大致为：菲：5.075min ；联苯：4.147 min ；萘：3.408 min ；甲苯：3.032 min ；故此可以判断混样中出峰位置所对应的物种，5.046 min 对应为菲，4.037 min 对应为联苯，3.383 min 对应为萘，3.034 min 对应为甲苯。
高效液相色谱仪操作步骤
高效液相色谱仪操作步骤1.准备工作：a.检查设备是否正常运转，所有零件是否安装和连接正确。
b.检查每个必需的溶液和试剂是否充足并且符合规定的质量标准。
c.检查色谱柱是否装配完好，并根据要进行的分析校准适当的流量和压力范围。
d.打开色谱软件，并设置所需的分析方法和参数。
e.开始预热色谱柱直到达到所需的温度。
2.样品制备：a.准备待检测样品的溶液或提取物，并进行必要的预处理步骤，例如固相萃取、浓缩、稀释或离心等。
b.将样品溶液通过0.22微米滤膜过滤，以去除杂质、微粒和可能堵塞色谱柱的颗粒。
3.样品进样：a.打开进样器，并选择合适的样品进样模式（如定量进样或自动进样）。
b.使用微量注射器或自动进样器将样品注入进样器，并确定进样量符合分析方法的要求。
4.色谱柱选择：a.根据样品特性和分析目的选择合适的色谱柱类型（如反相、离子交换、大小排阻等），尺寸（长度和内径）和填充材料等。
b.根据样品的pH值调节移动相的酸碱度，以满足分析要求和保护色谱柱。
5.色谱条件设置：a.设置流量速率，根据色谱柱的额定最大流速和样品的分离要求来确定。
一般来说，较高的流速可提高分离速度，但也会降低分离效果。
b.设置柱温，并确保温度稳定在所需的分析条件下。
c.设置检测器的参数，如波长、增益、灵敏度等，以适应待测试样品的检测需求。
6.分析运行：a.开始进样和运行色谱，确保流量和压力稳定。
b.监测色谱峰形的变化和信号强度，以评估分离速度和效果。
c.记录每个样品的保留时间和峰高（面积），并进行相应的数据处理和分析。
7.数据处理：a.使用色谱软件导出和处理分析数据，如生成色谱图、峰面积测定、峰高度测定、定量计算等。
b.根据实验目的和要求，对分析数据进行统计学分析、校正和解释。
c.对数据进行结果汇总、报告撰写和存档。
8.后期维护：a.定期检查和维护仪器，如清洁色谱柱、更换零件、校准仪器、更换溶液等，以确保仪器的正常运行和结果的准确性。
b.对废液和废品进行妥善处理，符合环境保护要求。
反相高效液相色谱法同时测定维生素B6、烟酰胺和泛酸钙
and calcium pentot henate in some v itamin nutr iments. T he sample was extr acted ultraso nically w ith an ext ractant co nta ining pho sphate buffer solution ( pH 3. 0) and methanol fo r 5 min and then heat ed at 65- 70 e in a w ater bath for 10 min. T he ext ract obtained was used for the H PL C analysis. T he Inertsil pH- 3 Phenyl column was used as stat ionary phase, and a mix ed solution of 0. 05 mol # L - 1 K H2 PO 4 , methanol and acetonit rile mix ed in the ratio o f 90 t o 6 to 4 by vo lume, w as used as mobile phase. U V detection w as made at the wav elength of 210 nm. Linear ity of the st andard curves betw een the values o f peak area and concentr ation o f the 3 co mpo unds was checked by reg ression ana lysis, giving values of cor relat ion co eff icient s g reater than 0. 999 9. T est for r eco very w as made by standard addition met ho d w ith a substantial sample as the matr ix, the results o f reco very w ere fo und to be 97. 4% for v itamin B6, 100. 3% fo r calcium pento thenate and 102. 4% for nico tinamide.
液相微萃取—高效液相色谱法测定环境中的吡虫啉资料
液相微萃取—高效液相色谱法测定环境中的吡虫啉陈成龙（东华理工大学化学生物与材料科学学院040312班江西抚州 344000）摘要：本文研究了基于三相中空纤维磁力搅拌的新型液相微萃取(LPME)模式，采用磷酸二氢钾作接受液，快速分离富集稻谷、稻叶、水和土壤中吡虫啉农药残留的前处理技术，以高效液相色谱（HPLC）为检测手段。
系统地优化了LPME技术的有机溶剂、搅拌速率和萃取时间等条件。
最佳色谱条件为：SB-Phenyl C18（250mm×4.6mm i.d.,5μm）液相色谱柱，以甲醇：水：三乙胺(80：20：1，v：v)为流动相，流速0.8 ml／min,270 nm波长下检测。
得到方法的线性范围0.0001～0.2 µg/ml，相关系数0.9997，最低检出限为5ng/ml（S/N=3），相对标准偏差（RSD）为1.2%加标回收率98. 3%～101. 5%，富集倍数19.2倍。
建立了一种简单、快速、准确、环境友好的农药残留检测方法。
关键词：吡虫啉农药残留中空纤维前处理液相微萃取The Determination of Imidacloprid in Environment Based on Three-phase Hollow Fiber Liquid Phase Microextraction-High Performance Liquid ChromatographyChen chenglong(Applied Chemistry Department ,Eastchina Institute of Techonology ,Fuzhuo,JX344000)Abstract: A novel method for fast separate and enrichment imidacloprid in paddy，leaf，water and soil was established by using high performance liquid chromatography (HPLC) coupled with a three-phase hollow fiber based liquid phase microextraction (TP-HF-LPME) technique for sample preparation. Parameters related to TP-HF-LPME (organic solvent，stirring speed，pH of donor and acceptor phase，extraction time) were also optimized experimentally. The proposed method integrates extraction，enrichment and clean-up into a single step. The method was developed chromatography was carried out on an SB-Phenyl C18 (250mm ×4.6mm i.d.，5μm ) column，methanol-water –triethylamine，(80∶20：1, V ：V) as mobile phase and detection at 270nm. It has been demonstrated to be a very fast，effective and virtually “green” sample preparation technique, which provided a good linear range (0.0001～0.2 μg/ml) with r2= 0.9997，a low detection limit(5 ng/ml, S/N = 3)，RSD=1.2% and the addition recovery was obtained in the range of 98.30-101.5%. The proposed method integrates extraction, enrichment and clean-up into a single step，which is a simple，effective，veracious and environmental method for detecting pesticide residue.Keywords：imidacloprid pesticide residue hollow fiber pretreatment liquid phase microextraction目录1．前言.. (5)1．1 吡虫啉简介. (5)1．2 液相微萃取(LPME) (5)1．2．1 液相微萃取的发展历史 (5)1．2．2 液相微萃取的萃取模型 (6)1．2．2．1直接液相微萃取(Direct-LPME) (6)1．2．2．2 液相微萃取/后萃取（LPME/BE） (6)1．2．2．3 顶空液相微萃取（HS-LPME） (7)1．2．3 液相微萃取的萃取原理 (7)1．2．3．1 两相LPME萃取原理 (7)1．2．3．2 三相LPME萃取原理 (8)1．2．4 液相微萃取的萃取参数的优化 (8)1．2．4．1 萃取溶剂 (8)1．2．4．2 盐效应 (8)1．2．4．3 给出相PH值 (8)1．2．4．4 温度 (8)1．2．4．5 搅拌速度 (8)1．2．4．6 萃取时间 (9)1．2．4．7 液滴大小 (9)2 实验部分 (10)2.1 仪器设备 (10)2.2 试剂 (10)2.3 样品处理 (10)2.3.1 样品的制备 (10)2.3.2 样品的保存及处理 (10)2.4 色谱条件 (10)2．5 吡虫啉标准储备液和标准溶液的配制 (10)2．6 萃取步骤 (11)3结果与讨论 (12)3.1 萃取条件的选择 (12)3.1.1 紫外检测波长的选择 (12)3.1.2有机溶剂的选择 (12)3.1.3 给出相和接收相组成 (12)3.1.4 萃取时间的选择 (13)3.1.5 搅拌速度的选择 (13)3.1.6 实验中三相中空纤维液相微萃取（TP-HF-LPME）条件 (14)3.2 方法学参数考查 (14)3.2.1精密度 (14)3.2.2 标准曲线线性范围及相关系数 (14)3.2.3工作曲线线性范围及相关系数 (15)3.2.4 富集倍数 (16)3.3 样品的测定 (16)4 结论 (18)参考文献 (19)致谢 (21)1．前言1．1 吡虫啉简介吡虫啉( Imidacloprid)，又叫灭虫精，中文通用名咪蚜胶，是1984年德国拜耳公司和日本特殊农药公司共同开发的高效杀虫剂[1]，化学名称1 - (6 - 氯-3 - 吡啶基甲基) - N - 硝基亚米唑烷- 2 - 基胺，系具内吸、触杀、胃毒作用的硝基亚甲基类内吸杀虫剂，是烟酸乙酰胆碱酯酶受体的作用体[2,3]，干扰害虫运动神经系统使化学信号传递失灵，无交互抗性问题,用于防治刺吸式口器害虫如蚜虫、飞虱、蓟马、粉虱等[4]。
高效液相色谱技术分析
高效液相色谱技术分析一、概述高效液相色谱技术是目前分析化学中非常重要的一种分离、检测方法，其应用范围广泛，可以用于药物研究、食品安全、环境污染、生物化学等多个领域。
本文将对高效液相色谱技术进行详细解析，包括其基本原理、仪器设备、应用实例等方面的内容。
二、高效液相色谱技术的基本原理高效液相色谱技术本质上是一种液相色谱技术，其最大的特点是加入了固定化液相。
在传统的液相色谱技术中，液相是直接涂覆在固定相上的，但在高效液相色谱技术中，为了提高色谱分析的效率，常常采用小粒径、高孔径的固相材料作为载体，然后用一定的方法将液相固定在上面。
这种固相材料具有很好的化学稳定性、较大的表面积，可以大大提高分离的精度和速度。
高效液相色谱技术的基本原理是：将样品（物质混合物）经过预处理后，加入到经过固定化液相的柱子中，然后进行溶剂梯度洗脱。
不同成分会根据吸附力、分配系数等量而移动到固相柱某个位置处，从而完成分离和检测的过程。
三、高效液相色谱技术的主要仪器设备1. 高效液相色谱柱高效液相色谱柱是高效液相色谱仪的核心器件，其主要作用是分离洗脱样品中的组分。
市面上常见的柱子材料主要有C18、C8、C4等不同类型，根据分析需要选择不同类型的柱子可以获得更好的分离效果。
同时，考虑柱子长度、直径等因素也是仪器的主要参数。
2. 色谱系统高效液相色谱系统由进样器、泵、检测器、色谱柱等多个部分组成，其中，泵的作用是将流动相压力输送到柱子中，进样器用于自动或手动进样，检测器用于检测分离的组分及其浓度。
同时，为了避免进样到色谱柱之前的样品混合和体积效应，需加滤器、混合器等附件。
3. 检测器高效液相色谱检测器常见的有UV-Vis分光光度计、荧光检测器、光散射检测器等多种类型，这些检测器可以用于分析化学、生物化学等领域。
四、高效液相色谱技术的应用实例1. 分析药物高效液相色谱技术可以用于药物分析，如对丙磺舒钠等药物分析可采用该技术，可获得极好的分离效果和灵敏度。
分析化学高效液相色谱法
分析化学高效液相色谱法高效液相色谱法（HPLC）是一种分离和测定化学物质的重要分析方法，具有高分离效率、高灵敏度、宽线性范围和广泛的应用范围等优点。
下面将从仪器原理、工作原理和应用等方面对HPLC进行详细分析。
一、仪器原理：HPLC仪器主要由溶剂系统、进样器、柱温箱、液相分离柱、检测器和数据处理系统等组成。
1.溶剂系统：通常采用双头柱泵供应稳定的流动相。
溶剂通过比例调节阀混合形成所需的溶剂混合物。
2.进样器：它将少量的样品溶液注入到流动相中，通常使用自动进样器进行样品进样。
3.柱温箱：控制流动相的温度，以提高分离的效果。
柱温一般在室温到高温之间进行控制。
4.液相分离柱：是HPLC的核心部分，其中填充有液相固定相。
根据不同的分析目标和样品性质，可以选择不同类型的液相柱，如反相色谱柱、离子交换柱等。
5.检测器：常见的检测器有紫外-可见光谱检测器（UV-VIS）、荧光检测器、折射率检测器等。
根据不同化学物质的性质和要求，可以选择不同的检测器。
6.数据处理系统：包括记录和处理仪器所得到的信号。
常见的数据处理系统有计算机数据采集系统，可以进行数据的分析和处理，生成相应的色谱图。
二、工作原理：HPLC通过运用固定相与移动相之间的亲疏水性差异来实现化学物质的分离。
样品在液相中与固定相发生相互作用，不同化合物的相互作用程度不同，因此在液相中呈现出不同的流动速度。
根据样品分离的顺序，不同的化合物在一定时间内通过液相分离柱，进而被检测器检测到。
HPLC中的流动相一般由溶剂和缓冲液组成，并通过色谱柱中的固定相将待测试的物质分离开来。
其中，缓冲液（通常称为背后电解质）可以调节流动相的pH值，改变待测试物质的性质，从而影响其分离。
三、应用：HPLC广泛应用于药物分析、环境监测、食品安全和生化分析等领域。
1.药物分析：HPLC可以用于药物分析中，以检测药物的含量、纯度和杂质成分。
药物的测定可以通过校准曲线来进行分析。
2.环境检测：HPLC可以用于环境监测中，例如水质分析、大气污染物分析等。
高效液相色谱切换波长法同时测定辛夷鼻炎丸中4种成分的含量
高效液相色谱切换波长法同时测定辛夷鼻炎丸中4种成分的含量目的：建立同时测定辛夷鼻炎丸中升麻素苷、甘草苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷、甘草酸铵含量的方法。
方法：采用高效液相色谱切换波长法对A、B、C 3家企业共52批次辛夷鼻炎丸样品进行含量测定。
色谱柱为Kromasil C18，流动相为乙腈-0.1%磷酸，流速为1.0 mL/min，检测波长为220 nm（升麻素苷、甘草苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷）和250 nm（甘草酸铵），柱温为30 ℃，进样量为10 μL。
结果：升麻素苷、甘草苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷、甘草酸铵检测质量浓度线性范围分别为 6.138～122.77 ?g/mL（r=0.999 9）、2.502～50.03 ?g/mL （r=0.999 9）、5.988～119.75 ?g/mL（r=0.999 9）、12.788～255.76 ?g/mL（r=0.999 9）；精密度、稳定性和重复性试验的RSD均1.5 ；理论板数以5-O-甲基维斯阿米醇苷峰计为12 000。
结果表明，其他成分对主成分测定无干扰。
2.4 线性关系考察精密吸取“2.2”项下混合对照品溶液0.125、0.2、0.5、1.0、2.0、2.5 mL，分别置于5 mL量瓶中，加入50%甲醇稀释至刻度，摇匀。
分别精密吸取10 μL注入液相色谱仪，以待测成分质量浓度为横坐标（x，μg/mL）、峰面积为纵坐标（y）绘制标准曲线，线性关系考察结果见表1。
2.5 检测限与定量限考察精密吸取“2.2.1”项下混合对照品溶液0.25、0.5、1 mL，分别置于10 mL量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀，进样分析。
当信噪比为3 ∶1时，得检测限；当信噪比为10 ∶1时，得定量限。
结果，升麻素苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷、甘草苷、甘草酸铵的检测限分别为0.200、0.200、0.150、0.125 μg/mL，定量限分别为0.500、0.505、0.350、0.271 μg/mL。
高效液相色谱法应用于D-葡萄糖酸-δ-内酯的水解研究
７７ １２） ３ （９６ ．
［ ］ Ｒ． Ｍｉ ｈ ｌ＆ Ｆ． Ｄｕ ｅ Ａｎ ． Ｙ． ａ Ｓｉ ２ Ｅ． ｔ ｅｌ ｃ Ｒ． ｋ ， ｎ Ｎ． Ａｃ ｄ ｃ
１２ １９ １７） ７，２ （９０． ［］ Ｍ． Ｊｒ ｙ ， ｉｃｅ Ｂｏｈ ｓ Ａ ｔ ７ ８ ３ Ａ． ｅｍ ｎ Ｂｏｈｍ． ｉ ｙ． ｃ ，３，７ ｐ ａ （９０． １６）
平衡。
为其在 ｔ 时刻的摩尔浓度，ｋ是水解反应速率常 １ 数，ｋ１ ＿是酯化反应速率常数。（可写成： １ ）
通 过 相应的摩 尔校 正 因子求得 各摩 尔浓度 ，
然后以－ｎｘ ） 作图得一直线（ ） （ 对ｔ ｅＸ 图３，该直线 的相关系数 为 ０ ７，斜率为 ｋ ｎ ，线 ：
ｑ ａ ｔａ ｖ ｄｔ ｍｉ ｔ ｎ ｆ ｅ ｎｅ ｔ ｕ ｎｉ ｔｅ ｅ ｎ ｉ ｏ ｔ ｃ ｔ ｏ ｔｉ ｅ ｒ ａｏ ｈ ｏ ｎ ｆ ｆ ｐｏ ａｈｉｉ ｔｅ ｕ ｉ ｄ ｍ ｅ ｒｐ ｔｒ ｎ ｅ ｌｆ ｆ ． ｎ ｎ ｈ ｍ ｓｉ ｏ ｅ ｒ
高 效 液 相 色 谱 法 应用于 Ｄ 葡萄糖酸－ － － 内酯的水解研究
５ （９８ １ １７） ．
［］ Ｓ Ｓ ｋ ｕ ，Ｔ．Ｎａａ Ｍ ． Ｈｏｉａ ｎ Ｓ ３ ． ａａｅ ｒ， ｒ ｂ ａ ｄ ．
Ｙ ｍａ ｔ， ｇｅＢｏ Ｃ ｅ ，６ ） １５ ａ ｍｏ Ａ ｒ， ｉ， ｈｍ． （ ， ６ ｏ ｉ ｌ ４８２
（ ８） １２ ９
ｓ ｎａｄ ｋ ｇ ｈｎｌ ｓｈ ｅ ａ ｉｅ ｔ ｄｒ （ ｉ ｔｐｅｙｐａｐｉ ａ ｎ ｒ ａ ｔ ｎ ｒ ａ ｉ ｈ ｎ ｓ ｎ － ｔ ｎｌ ｄｒ） ｔ ｄ ａ ｖｒ ｅｅｔｅＩ ｂｔ ａ ｓ ｎａｄ ｍ ｈ ｓ ｅｙ ｃｖ．ｎ ｈ ｔ ａ ｅｏ ｒ ｅ ｆ ｉ ｆ ｏ
华东理工大学仪器分析课件1 绪论
本课程的主要内容
色谱分析法
色谱分析基本原理 气相色谱法 高效液相色谱法
电化学分析法
电位分析法 极谱及伏安分析法 库仑分析法
光谱分析法
原子吸收光谱法 原子发射光谱法
如何学好这门课程？
参考书
《仪器分析教程》 北京大学化学系 北京大学出 版社 1997
Douglas A. Skoog, Donald M. West, F. James Holler. Fundamentals of Analytical Chemistry. 8th ed. Australia: Thomson-Brooks/Cole, 2004
根据混合物中不同物质在两相间作用 力的差异建立的分离分析方法
如气相色谱、液相色谱、超临界流体 色谱、毛细管电泳等
4.其它方法
热分析法
根据物质的质量、体积等性质与温度之 间的关系建立的分析方法
热重量法、差热分析、热导法等
质谱
测量被电离物质的质荷比进行分析 质谱
三、仪器分析的发展概况
刘志广 《仪器分析学习指导与综合练习》 高等 教育出版社 2005
如何学好这门课程？
1. 要求掌握常用仪器分析方法的原理 和仪器 的简单结构；
2. 要求初步具有根据分析的目的，结合学到 的各种仪器分析方法的特点、应用范围， 选择适宜的分析方法的能力。
3. 学习方法：纵向阅读，横向比较
分析化学的三次巨大变革
第一次变革
分析天平的发明 溶液理论的建立（四大平物理学和电子技术的发展为仪器分析奠定了
基础
第三次变革
计算机的发明，尤其微型计算机的发展，给仪器 分析带来 全新的革命。
前景展望
生命科学研究对分析化学提出高的要求。
高效液相色谱仪的操作步骤及注意事项
高效液相色谱仪的操纵步调及注意事项之邯郸勺丸创作一、操纵步调：μm）过滤,有机流动相用有机滤膜过滤，之后超声脱气15-20分钟。
（过滤的目的是除去流动相里的杂质，以免杂质进入色谱柱堵塞色谱柱；超声的目的是排除流动相里面的气体，以防气体进入色谱柱损害色谱柱，影响柱效能）μm的混合滤膜，第一次使用时感觉效果欠好，于是过滤水时同时使用两张混合滤膜过滤水流动相。
2.超声结束后，将流动相放置到规定位置（1号泵接水流动相，2号泵接有机流动相），开机逐个排气（先启动泵，排气结束后再打开检测器）。
3.排气结束后，关闭所有排气阀。
先用纯有机流动相冲洗色谱柱20-30分钟，基线走稳之后，再打开水流动相（注意：水流动相和有机流动相流速之和为1ml/min），继续走基线，直到基线平稳。
注意：实验结束后，再用纯有机流动相冲洗色谱柱20-30分钟，冲出色谱柱内残留的样品物质，预防长时间不使用仪器样品的残留物质沉积在色谱柱内，导致下次使用难以冲出，色谱柱柱压偏高，基线不稳，出现大量鬼峰。
（分歧规格的色谱柱其所允许的最大流速之和分歧）4.走基线时，应将进样阀处于Load状态，用注射器进样时应快速进样，进样后将进样阀立即扳回到Inject状态，此时液相系统开始进入采样状态。
采样结束后，可在数据分析里面检查分析结果并可进行编辑，也可以在脱机状态下检查样品的分析结果并编辑。
二、使用中罕见的问题及注意事项1.过滤时有时会出现流动相漏液。
可能的原因是滤膜放置不正确（有点偏）和接头有点错位，导致流动相从缝隙中漏出。
注意：操纵时，应先向滤瓶内倒入少量流动相，观察是否漏液并开始过滤，若未漏液，再向滤瓶中添加流动相。
2.超声时，瓶外液体的液面应高于瓶内流动相的液面，否则流动相内的气体可能无法排出液体，气体仍然残留在流动相内，以致开机排气时无气泡排出。
3.开机排气结束后，应先将流动相流量调小，再关闭排气阀，否则会导致柱压瞬间升高超出压力上限，致使泵停止工作。
华东理工大学仪器分析高效液相色谱法
1. 化学键合相色谱法
（1）分离机理
? 正相键合相色谱法 ：固定相的极性 大于流动相的极
性，适用于分离油溶性或水溶性的极性或强极性化
合物。
分配机理：分配系数
[ [ K p ?
SiO2 ? R ? NH 2 ?x] x ?M ]
x为溶质，M为溶剂
? 反相键合相色谱法 ：固定相的极性 小于流动相的极 性，适于分离非极性、极性和离子性化合物。 应用 最广泛
? 梯度洗提流程
溶剂A
溶剂B
电磁阀A
电磁阀B
溶剂A
溶剂B
高压泵A
高压泵B
混合室
混合室
泵
低压溶剂梯度方框图
高压溶剂梯度方框图
应用举例
3. 进样系统
六通进样阀结构示意图
4. 分离系统——色谱柱
包括柱管与固定相两部分 一般色谱柱长 5～30cm，内径为4～5mm 凝胶色谱柱内径 3～12mm 微柱内径 1-2mm ，长1-5cm 制备往内径较大，可达 25mm 以上
反相键合相色谱法的 疏溶剂 机理：
溶质进入极性流动相后，排挤 部分溶质分子，其疏水基团由 于流动相的斥力推动而直接与 非极性固定相上的烷基缔合， 构成单分子吸附层，这种作用 时可逆的。当流动相极性减小 时，这种疏溶剂斥力下降。
（2）固定相
疏水基团 如不同链长的烷烃（C8和C18）和苯基等 极性基团 如氨丙基，氰乙基、醚和醇等。
丹参的HPLC指纹图谱
二、高效液相色谱理论基础
1. 高效液相色谱中的速率方程
? H=A+B/u+Cu ? A=2λdp ? B→0 ? C=?
迁移的流动相的传质阻力
滞留的流动相的传质阻力
高效液相色谱中的速率方程
高效液相色谱法测定新止咳合剂中甘草苷的含量
高效液相色谱法测定新止咳合剂中甘草苷的含量摘要；目的：建立高效液相色谱法测定新止咳合剂中甘草苷的含量。
方法：采用Dikma钻石C18色谱柱(4.6mm×250mm，5μm)；流动相为乙睛-0.5％冰醋酸溶液(20：80)；检测波长为276nm，流速为1.0ml/min，柱温为30℃。
结果：甘草苷进样量在0.02～1.0μg(r=O.99990)范围内与峰面积线性关系良好，平均加样回收率为99.27％，RSD=0.67％(n=9)。
结论：本法简便、快速、专属性强、重现性好；可作为新止咳合剂的质量控制方法。
标签：甘草苷；高效液相色谱法；新止咳合剂；含量测定新止咳合剂由桔梗、陈皮、儿茶、甘草、法半夏等药制成，具有止咳、祛痰的功效。
为本院的医疗机构制剂。
质量标准中没有规定含量测定方法。
本文参考《中国药典》2005年版，采用HPLC法测定甘草的主要成分——甘草苷的含量，作为质量控制指标，获得满意的结果，现报道如下。
1、仪器与药品高效液相色谱仪(美国Agilent 1100系列仪)，包括自动进样装置、VWD可变紫外检测器、柱温箱等；METTLERAE240型电子分析天平。
除高效液相色谱检测所用试剂为色谱纯外，其他试剂均为分析纯。
甘草苷对照品(批号为111610-200604，供含量测定用，中国药品生物制品检定所)；新止咳合剂(由本院制剂室配制，批号：20070206、20070403、20070428)。
2、方法与结果2、1色谱条件色谱柱：Dikma钻石C18柱(4.6mm×250mm，5μm)；流动相：乙睛-0.5％冰醋酸(20：80)；流速：1.0ml/min；柱温：30℃；检测波长：276nm；进样量：10μl。
理论板数按甘草苷峰计算为7000。
2、2溶液的制备精密称取甘草苷对照品(置五氧化二磷为干燥剂的干燥器中，减压干燥36h)10.08mg，置于20ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得每lml 中含甘草苷0.504mg的溶液(贮备液)，分别精密吸取溶液(贮备液)①0.1ml、②0.3ml、③0.5ml、④1ml、⑤3ml、⑥5ml；分别置于25ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，分别得每1ml含①2.016μg，②6.048μg，③10.08μg，④20.16μg，⑤60.48μg，⑥100.8μg的对照品溶液。
高效液相色谱法分离回收钴工艺研究
高效液相色谱法分离回收钴工艺研究摘要随着钴资源的日益枯竭，对其回收利用变得越来越紧迫。
高效液相色谱法可以有效地分离纯化钴离子，进而实现钴的高效回收。
本文针对高效液相色谱法分离回收钴的应用进行了研究，分别从色谱柱填料的选择、流动相配制、进样量等方面探讨了高效液相色谱法分离回收钴的参数优化，结果表明，在差向相分离条件下，以纯化水和0.1mol/L氢氧化钠为流动相，流速为1 mL/min，进样量为20 μL，SD-1色谱柱填料为最佳选择，可实现钴的高效回收。
关键词：高效液相色谱法；色谱柱；钴；分离引言钴是一种非常重要的金属元素，可广泛应用于多种工业领域，如电子、航空、冶金、化工等。
当前，随着钴资源的逐渐枯竭，对其回收利用的需求越来越迫切。
在众多的钴回收方法中，高效液相色谱法因其高效、精准等特点备受关注。
本文旨在通过研究高效液相色谱法在分离回收钴方面的应用，探讨优化高效液相色谱法的相关参数，提高其钴回收效率，为钴资源的有效利用提供技术支撑。
实验与结果1. 材料和试剂本实验所使用的材料包括色谱柱、进样器、高效液相色谱仪和钴标准品等。
试剂包括甲醇、硝酸和氢氧化钠等。
2. 流动相的配制本实验将不同浓度的硝酸和氢氧化钠以不同比例混合制备流动相。
结果表明，最优流动相组合为纯化水和0.1 mol/L氢氧化钠。
3. 柱填料的选择本实验选用了不同材质的色谱柱填料，如C18、SD-1、NH2等，结果表明，SD-1填料在分离回收钴方面表现最佳。
4. 进样量的优化本实验测试了不同进样量下的钴分离回收效率，结果表明，在20μL的进样条件下，可以实现最优的分离回收效果。
5. 流速的控制由于流速的改变会影响色谱峰的宽度和分离度，因此本实验测试了不同流速下的分离效果，结果表明，流速为1 mL/min时，S/N比最大，分离效果最佳。
结论本实验以高效液相色谱法为手段研究了钴的分离回收工艺，并对色谱柱填料的选择、流动相的配制、进样量等参数进行了优化，结果表明，在差向相分离条件下，以纯化水和0.1 mol/L氢氧化钠为流动相，流速为1 mL/min，进样量为20 μL，SD-1色谱柱填料为最佳选择，可实现钴的高效回收。
华理仪器分析总结
高效液相色谱
1. 液相色谱特点：高压、高速、高效、高灵敏度
应用范围：热不稳定、高沸点、离子型物质
2. 仪器流程 P83
高压泵：输送流动相
梯度洗提装置：程序控制流动相极性变化
进样装置：将样品瞬时注入色谱柱上端柱担体中心
色谱柱：分离
检测器 p86
示差折光
紫外
荧光
电导
适用范围
通用
选择性
高选择性
选择性
不 适 用 对紫 外 多环芳烃、VB、 离子型化合物 光 完 全 不吸 收 黄曲霉素、卟啉
分离酚类、芳硝基化合物，保留比 C-18 强
聚苯乙烯基 反相
pH 使用范围广，对部分分离峰形好，寿命长
相对分子质量 ＞2000
样品
相对分子质量 ＜2000
电位分析
溶于水——排阻色谱，水为流动相
不溶于水——排阻色谱，非水流动相 同系物——键合相色谱
不溶于水 异构体——液固色谱 分子大小差异——排阻色谱 反相键合相色谱
玻璃膜产生一电位差 E M
E试
E内
RT F
a ln H , 试 aH , 内
K
2.303RT F
pH 试
测量体系：pH 玻璃电极、饱和甘汞电极、试液、pH 计
3. 选择性系数 Ki，j：干扰离子 j 对欲测离子 i 的选择性系数，在其他条件相同时提供电位的
欲测离子活度 ai 和干扰离子 aj 的比值
能检测 ppb 级物质，适合于痕 Ppt 适合痕量分析 含 P、S 化合物
范围
量分析
含电负性原子或基团
有机物(不含 S、P 等)
的化合物
影 响 桥流 P37
气体流量 P39
载气纯度 99.99%
高效液相色谱法分析(脱氢乙酸)原始记录
0.005g/kg
样品空白值
X=
式中：
X--样品中脱氢乙酸的含量，（g/kg）；c1--试样溶液中脱氢乙酸的浓度，（μg/mL）；
c0--空白试样溶液中脱氢乙酸的浓度，（μg/mL）；V--试样溶液总体积，（mL）；
f--过固相萃取柱换算系数；m--样品的质量，（g）。
计算结果保留三位样品总数
平行样个数
质控样
仪器使用情况使用前：使用后：
检验人：复核人：审核人：
高效液相色谱法分析（脱氢乙酸）原始记录（续页）第页，共页
样品编号
试样质量
(g)
定容体积
（mL）
浓度
（μg/mL）
结果
（g/kg）
平均值
（g/kg）
相对偏差（%）
备注
试验允许误差：≤10%
仪器使用情况使用前：使用后：检验人：复核人：审核人：
标准使用液
脱氢乙酸标准使用液1.0mg/L.
仪器
检测条件
检测器：PDA检测器
色谱柱：C18反相柱
柱温：30.0℃
流速：1.0mL/min
进样量：μL
波长：293 nm
流动相：甲醇：乙酸铵=10:90
标准曲线
序号
1
2
3
4
5
6
标液浓度（μg/mL）
峰面积（A）
回归方程
Y=aX+ba=b=r=
检出限
0.002g/kg
高效液相色谱法分析（脱氢乙酸）原始记录
受理号：第1页，共页
检测项目
脱氢乙酸
检测开始时间
年月日
检测依据
GB 5009.121-2016第二法
检测结束时间
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三、高效液相色谱仪
1. 高效液相色谱仪流程
高效液相色谱仪
2. 高压输液系统
往复泵原理示意图
往复泵
? 梯度洗提
? 梯度洗提
即程序控制流动相的组成，使在整个分离过程中，溶剂 强度按照特定的变化规律增加。 优点：分离复杂混合物，使所有组分都处在最佳的k值范 围内。 缺点：检测器的使用受到限制，分析结果的重复性取决 于流速的稳定性。柱子需进行再生处理。
? 溶解度参数δ：衡量溶剂极性强度的指标，δ越大， 极性越强。是溶剂和溶质分子间色散力、偶极力、接 受质子或给予质子能力的总和。所以δ相近的混合溶 剂，它的选择性α不同。
荧光检测器
结构
响应特性
? 选择性检测器。如 PAH ，蛋白质 ? 高灵敏度，比紫外高约 1000倍 ? 适合梯度洗提
应用举例
电导检测器
结构
响应特性
? 选择性检测器，对离子型化合物有响应 ? 灵敏度高 ? 受温度的影响 ? 不能梯度洗提
讨论：液相色谱检测器的选择
1. 葡萄糖产品的含量测定 2. 地下水中酚类化合物的分析 3. 矿泉水中无机阴离子的测定 4. 痕量氨基酸的分析 5. 去痛片中有效成分的分析 6. 链烷基磺酸盐的测定 7. 蛋白质的分子量测定
丹参的HPLC指纹图谱
二、高效液相色谱理论基础
1. 高效液相色谱中的速率方程
? H=A+B/u+Cu ? A=2λdp ? B→0 ? C=?
迁移的流动相的传质阻力
滞留的流动相的传质阻力
高效液相色谱中的速率方程
H
?
2?d p ?
CdDm u
?
(
C
m
d
2 p
?
Dm
C
sd
2 p
?
C
sd
2 f
)u
常用固定相
类型 C-18
C-8 C-3,C-4 苯基
-CN
分离方式 反相、离子对
反相、离子对 反相 反相
反相、正相
应用特点
普适性好，保留值大。溶于水的高极性化合 物、中等极性化合物
与C-18类似，保留值略小 保留值小，适合肽类和蛋白质
保留适中，选择性不同。非极性、中等极性 化合物
选择性与硅胶类似，保留小，用途广
一、高效液相色谱法的特点
1. 高效液相色谱法概述
2. 高效液相色谱与气相色谱的比较
GC
HPLC
应用范围
热稳定、低沸点的 热不稳定、高沸点、
物质
离子型的物质
热力学理论
较成熟
正在发展中
分析成本
低
高
分离能力 与柱的类型有关
较高
3. 高效液相色谱法与经典液相色谱法的比较
粒径(μm) 柱前压力(atm) 分析时间 (h) 色谱柱长度(cm) 柱效(块/m) 样品用量(g)
Dm
Ds
涡流扩散项 纵向扩散 流动相传质 滞留区传质 固定相内传质
2. 对速率方程的讨论
? 选用细颗粒填料可获高柱效 ? 流动相流速低，有利于达到高柱效 ? 选用黏度小的流动相 有利于提高柱效 ? 温度的影响 ? 液膜厚度的影响
3. 柱外效应
? 由于色谱柱之外的因 素引起的色谱峰的展 宽，例如进样系统、 连接管路及检测器的 死体积等。
5．检测系统
? 紫外检测器 ? 示差折光检测器 ? 荧光检测器 ? 电导检测器
（1）紫外检测器
? 固定波长的紫外检测器 ? 可变波长的紫外检测器 ? 二极管阵列检测器
固定波长的紫外检测器
Z型流通池结构
可变波长的紫外检测器
二极管阵列检测器
二极管阵列检测器之三维图
二极管阵列检测器之 Isoabsorbance Plot
经典液相色谱法 75-600 0.01-1.0 1-20 50-200 2-50 1-10
高效液相色谱法 3-50（常用5-10）
20-300 0.05-1.0
2-30 104-105 10-6-10-2
4. 高效液相色谱法的特点
? 高压 ? 高速 ? 高效 ? 高灵敏度
5. 应用举例
丹参 Radix Salviae Miltiorrhizae
1. 化学键合相色谱法
（1）分离机理
? 正相键合相色谱法 ：固定相的极性 大于流动相的极
性，适用于分离油溶性或水溶性的极性或强极性化
合物。
分配机理：分配系数
[ [ K p ?
SiO2 ? R ? NH 2 ?x] x ?M ]
x为溶质，M为溶剂
? 反相键合相色谱法 ：固定相的极性 小于流动相的极 性，适于分离非极性、极性和离子性化合物。 应用 最广泛
（5）几种检测器特性比较
应用范围 可否梯度淋洗
线性范围 最小检测量 对温度敏感度 溶剂使用情况
示差折光 紫外
通用 选择性
不可
可
104
105
μg
ng
敏感
低
无限制 受限制
荧光 高选择
性 可 103 pg 低
受限制
电导 选择性
不可 104 ng 敏感 受限制
四、HPLC主要类型及其选择
? 化学键合相色谱法 ? 液固色谱法 ? 离子对色谱法 ? 离子色谱法 ? 体积排阻色谱法
? 梯度洗提流程
溶剂A
溶剂B
电磁阀A
电磁阀B
溶剂A
溶剂B
高压泵A
高压泵B
混合室
混合室
泵
低压溶剂梯度方框图
高压溶剂梯度方框图
应用举例
3. 进样系统
六通进样阀结构示意图
4. 分离系统——色谱柱
包括柱管与固定相两部分 一般色谱柱长 5～30cm，内径为4～5mm 凝胶色谱柱内径 3～12mm 微柱内径 1-2mm ，长1-5cm 制备往内径较大，可达 25mm 以上
响应特性
? 选择性检测器，如芳烃类化合物的检测 ? 灵敏度高，可检测 10-9g/mL 的物质 ? 线性范围宽， 104-105 ? 对温度及流动相的改变不敏感 ? 适合梯度洗提 ? HPLC 常规检测器
应用举例
波长的选择
（2）示差折光检测器
结构
响应特性
? 通用性检测器 ? 低灵敏度 ? 基线易受温度的影响 ? 不适合梯度洗提
-NH2
二醇基 醚基
反相、正相
正相 反相、正相
分离糖类、核苷酸、固醇等
分离有机酸、排阻分蛋白质等 分离酚类、芳硝基化合物，保留比 C-18强
聚苯乙烯基 反相
pH使用范围广，对部分分离峰形好，寿命长
应用举例
（3）流动相
? 表征溶剂特性的重要参数
? 溶剂强度ε°：溶剂分子与吸附剂的亲合程度，ε° 越大，亲合力约大。
反相键合相色谱法的 疏溶剂 机理：
溶质进入极性流动相后，排挤 部分溶质分子，其疏水基团由 于流动相的斥力推动而直接与 非极性固定相上的烷基缔合， 构成单分子吸附层，这种作用 时可逆的。当流动相极性减小 时，这种疏溶剂斥力下降。
（2）固定相
疏水基团 如不同链长的烷烃（C8和C18）和苯基等 极性基团 如氨丙基，氰乙基、醚和醇等。