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生物化学检验常用技术(共66张PPT)

生物化学检验常用技术(共66张PPT)
4、Lambert-Beer定律的偏离现象
单色光 均匀介质 吸收物质无相 互作用
5、空白溶液的选择
在分光光度法中,为消除显色剂及样品中各种共存有色物质产生的干扰、抵消比色皿和 试剂对入射光的影响而用来调节仪器百分透光率为100%的溶液。

蒸 馏 水


含 待





显 色

1、溶剂空白:不加样品和任何试剂,用纯溶剂(如蒸馏水或其他有机溶剂)作参比溶液。 选择原则:当显色剂及其它试剂均无色,被测试样中又无其他有色离子时,选用溶剂参比。
常用的固定化技术有:吸附、试剂交联、共价键合、
包埋法(酶与载体聚丙酰胺混合后直接包在电极 敏感部分形成酶凝胶层)。
几种酶电极的品种与性能
测定物质

检测物 测定范围(mol/L)
葡萄糖 葡萄糖氧化酶
尿素(脲)
脲酶
胆固醇 胆固醇氧化酶
L-谷氨酸 谷氨酸脱氢酶 L-赖氨酸 赖氨酸脱羧酶
O2 NH3 H2O2 NH4+ CO2
单色器
滤光片
棱镜
光栅
吸收池
检测器
玻璃比色皿
石英比色皿
显示器
4
(一)、分光光度技术的基本原理
1、吸光度与透光度
当光线通过均匀、透明的溶液时可出现三种情况:一部分光被散射,一部分光 被吸收,另有一部分光透过溶液。设入射光强度为I0,透射光强度为I,I和I0之比称为透 光度,即:
入射光 I0
透射光 I
T = I/I0
10-4~2*10-2 10-5~10-2 10-5~10-2 10-4~10-1 10-4~10-1
离子选择性电极的分析方法

临床生物化学和生物化学检验-PowerPoint演示文

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各组织器官。以视网膜、胰腺及前列腺含锌量较高。
2、去路:由消化道、肾、肝、乳汁及头发排泄。失血是丢锌的主要途径。 (二)锌的生物学作用 1、锌作为多种酶的功能成分或激活剂。 2、促进机体生长发育。锌是调节DNA复制、转录DNA聚合酶的必需成分。缺
锌----伤口难愈合、性器官发育不全或减退、机体发育不良,儿童缺锌易导致 侏儒症。
导致输精管退变、精子减少、性功能减退以致不育。锰还是硫酸软骨素合成酶 的必需基团。锰缺乏可致软骨生长障碍。 (三)锰缺乏病 1、侏儒症。 2、贫血。
(四)锰中毒
1、非职业性中毒 服用高锰酸钾,轻者可引起恶心、呕吐、胃痛、口腔溃烂。
重者可呈现口唇粘膜肿胀糜烂、血便、腹剧痛,甚至死亡。
2、职业性中毒
矿工、油漆工、电焊工和生产电池、陶器的工人,长期接
(三)铜缺乏症 1、原因: (1)生长阶段,供给量不足;(2)长期腹泻和营养不良;(3)伴肠道 吸收不良病变;(4)肾综,铜丢失过多;(5)长期使螯合剂。 2、临床表现: (1)贫血,因为Cu2+的缺乏影响了铁的吸收、转运、利用以及细 胞色素与Hb的合成;(2)骨骼发育障碍, Cu2+缺乏导致骨质中胶原纤维合成障碍。 (3)生长发育停滞;(4)肝、脾肿大等。 (四)铜中毒 1、急性铜中毒 食用含铜丰富食物或误服铜盐等。表现为铜中毒、呕吐、上腹 部痛、腹泻、眩晕、金属味等,重者出现高血压、昏迷、心,甚至死亡。 2、慢性铀中毒 长期接触或食用铜含量丰富的食品。表现为胃肠道症状、呼吸 道症状、眼结膜剌激症状、皮肤病变等。
6、保护心血管和心肌。硒保护细胞膜结构功能、消除自由基的毒性、抑制脂质 的过氧化反应,从而保护心肌和血管功能。 7、调节Vit A、C、E、K的代谢。 8、对肿瘤有显著抑制作用。硒通过干扰致癌物的代谢达到抗癌作用。 (三)硒缺乏(了解) 缺硒或致克山病,一种以心肌坏死为主的地方病。表现为心力衰竭或心源性休克、 心律失常、心功能失代尝。 (四)硒中毒(了解) 表现为头晕、头痛、乏力、恶心、汗液蒜臭味、脱发和脱指甲、寒战、高热、指 颤等。

《临床生物化学检验》绪论 ppt课件

《临床生物化学检验》绪论  ppt课件

临床生物化学是利用物理学、化学、 生物学、遗传学、病理学、免疫学、生 物化学和分子生物学的理论与技术:
探讨疾病的发病机制 研究其病理过程中出现的: 特异性化学标志物 体内特定成分的改变
临床生物化学检验
• 国际临床化学学会(International Federation of Clincal Chemistry,IFCC) • “临床化学包含对人体健康和患病时化学状态 的研究以及对用于诊断、治疗和预防疾病的化 学实验方法的应用”。 • 临床化学是一门研究人体健康和疾病时生理生 化过程的医学基础理论学科。 • 又是一门应用各种技术和方法分析机体健康和 疾病时体液或组织样品中各种化学成分的医学 应用技术学科-生化检验技术学。
返回节
DNA双股螺旋模型
现代分子生物学的起源 应从1953年J. D. Watson与 F. H. C. Crick提出DNA双 螺旋结构模型开始。它是在 生物化学、遗传学和细胞生 物学的基础上发展起来的一 门新兴交叉学科,至今已有 40余年的历史。
自20世纪50年代以来 • 分光技术、离心技术、层析技术、电泳技术、 同位素和免疫学技术,特别是酶法分析的进步, 提供了更可靠更灵敏的检验技术。 70年代以来 • 重组DNA技术的建立,不仅促进了分子生物学 的发展,也促进了临床疾病的基因诊断和基 因治疗。
临床生物化学检验的发展史
• 1920年测定血清碱性磷酸酶用于肝脏功能和 测定血清淀粉酶用于胰腺炎诊断的报道 • 50年代火焰光度计的使用才使电解质的分析 方法产生了革命性的变化。比色计测定血清 尿素和糖, • 70年代放射免疫分析替代了非敏感、非特异 的激素测定方法使其了迅速发展。
第一节
临床生物化学的发展简史
检验医学是一门临床学科,它运用不断 发展的自然科学和医学科学技术对患者 血液、尿液和各种体液标本进行检验, 并以发展检验技术、提高检验质量为重 点,达到对患者疾病的诊断、病情观察 和预后判断等目的。

临床生物化学检验基本知识 ppt课件

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第二章 临床生物化学检验基本知识
全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验 (第二版)
第二章 临床生物化学检验基本知识
全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验 (第二版)
第二章 临床生物化学检验基本知识
二、检验工作流程
全国高等医药院校医学检验专业规划教材
5
临床生物化学检验 (第二版)
标准物质是一种特殊试剂,检验人员必须熟悉各种标准物质的 组成、性质、用途以及与患者标本的区别。
全国高等医药院校医学检验专业规划教材
15
临床生物化学检验 (第二版)
第二章 临床生物化学检验基本知识
(四)实验室检测系统
一般认为,完成一个检验项目的测定所涉及的 仪器、试剂、校准品、质控品、消耗品、操作程序、 质量控制程序等的组合称为检测系统。
全国高等医药院校医学检验专业规划教材
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临床生物化学检验 (第二版)
第二章 临床生物化学检验基本知识
实验室的设施与环境必须满足工作人员健康和安 全防护的需要,应按照本实验室要求最严格的仪器建 立环境控制限,使照明、能源、水质、通风、灰尘、 电磁干扰、辐射、温度、湿度、消毒、网络、声级和 震级等完全符合检验质量要求。
p 校准 p 标识
全国高等医药院校医学检验专业规划教材
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临床生物化学检验 (第二版)
第二章 临床生物化学检验基本知识
仪器和设备的标识
u“绿色”标识:经过校准、检定、厂家验收合格或检查功能 正常的仪器,表明该仪器设备为合格状态或正常状态。 u“黄色”标识:有部分缺陷,但不影响检测所需的某项功能, 经过校准、检定或质控仍然合格,表明该仪器设备为准用或 降级使用。 u“红色”标识:仪器设备处于维修状态或损坏、性能无法确 定或经检定/校准不合格,表明该仪器设备为停用状态。

生物化学检验ppt课件

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酶类CK-MB,α-AMY等。
底物/代谢产物类:包括TG,TC,HDL-C,LDL-C,UA, UREA,Cr,Glu,TP,Alb,T-Bil,D-Bil,NH4+,CO2 等。
无机离子类:包括Ca,P,Mg,Cl 等。
认识到了贫困户贫困的根本原因,才 能开始 对症下 药,然 后药到 病除。 近年来 国家对 扶贫工 作高度 重视, 已经展 开了“ 精准扶 贫”项 目
吸收曲线
波长从200nm-400nm 的电磁波,称为紫外光,波长从400nm-760nm 的电磁波,称为可见光。以波长(λ)为横坐标,以吸光度为纵坐标而绘 制出的一条曲线称为吸收曲线,在一段波长范围内,有最大吸收波长 λmax 和最小吸收波长λmin,在最大吸收波长处测定可获得最大的测 定灵敏度。
认识到了贫困户贫困的根本原因,才 能开始 对症下 药,然 后药到 病除。 近年来 国家对 扶贫工 作高度 重视, 已经展 开了“ 精准扶 贫”项 目
二、连续监测法
连续监测法属于动态法检测的一种,适用于酶活性测 定和代谢物检测,多有酶的参与。该法是通过适当的 仪器,连续测定酶促反应过程中某一反应产物或底物 的浓度随时间变化的情况。原理是:在酶反应的最适 条件下,用物理、化学或酶促反应的分析方法,在反 应速度恒定期(零级反应期)来连续观察和记录一定 时间内底物或产物量的变化,以单位时间酶反应初速 度计算出酶活力大小代谢物的浓度。计算方法有:1) 绝对法:酶活力(U/L)=△A×(反应液体积/样品体 积)×(1000/消光系数);2)相对法:酶活力 (U/L)=〔 △A (测定)/ △A (标准) 〕标准物的 活力或浓度。
两点终点法
两点终点法也称因定时间法,它可以用一种试剂或两 种试剂。这种方法是近年来,可加双试剂的生化分析 仪问世后,才被广泛应用。优点是可以消除样品、试 剂的颜色、浊度,以及一些干扰物对测定的干扰。原 理是:加入样品→试剂1 →读取A1 →试剂2 →读取 A2,其中要读取两次吸光度值,第一次相当于读出样 品空白的值,加入试剂2至第二次读数才是实际呈色 反应,因此A=A1-A2。比浊法也是一种终点法,不过 是一种浊度测定,而不是比色测定。比浊法可分为化 学比浊法与免疫比浊法,免疫比浊法又分为透射比浊 法和散射比浊法。免疫比浊法目前主要用于血清特种 蛋白的测定,如载脂蛋白(apoAI,apoB 等)、补体类(C3、

常用实验室检查生化ppt课件

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2. 临床意义 (1)急性心肌梗死:主要 用于急性心肌梗死的早期诊断,发病后2小 时内Mb开始升高,3~ 15小时达峰值, 18 ~ 30小时恢复到正常水平,但特异性 较差。(2)其他疾病:挤压综合征、肾衰 竭、心力衰竭和某些肌病。
四、血清脂类测定(一Fra bibliotek血清总胆固醇测定
总胆固醇( TC )包括其中30%的游离胆 固醇( FC )和70%的胆固醇酯( CE ),主要 结合场所是肝脏。胆固醇是合成胆汁酸、 肾上腺皮质激素、性激素及维生素等生理 活性物质的重要原料,也是构成细胞膜的 主要成分。
3. 参考值 血糖浓度:空腹<6.1 mmol/L;服糖后:0.5 ~ 1小时为7.8 ~ 9.0 mmol/L(应<11.1 mmol/L),2小时为 ≤7.8 mmol/L,3小时时应恢复至空腹血糖 水平。各时间尿糖测定结果均为阴性。
4. 临床意义
(1)诊断糖尿病 服糖后2小时血糖值 ≥11.1 mmol/L。
2. 参考值 ELISA法:cTnT为0.02 ~ 0.13μg/L,诊断临界值为﹥0.2μg/L;cTnI 为﹤0.02μg/L,诊断临界值为﹥1.5μg/L。
3. 临床意义 cTnT、cTnI增高和变化,对 急性心肌梗死、不稳定型心绞痛、围手术期 心肌损伤等疾病的诊断、病情监测、疗效观 察及预后判断,具有较高的临床价值。用于 急性心肌梗死的诊断,其灵敏度、特异度均 高。见表6-3-1。
参考值 3.5 ~ 5.5 mmol/L
3. 临床意义
(1)低血钾见于 ①摄入不足:营养不 良、胃肠功能紊乱、长期无钾饮食;②丢 失过多:频繁呕吐、长期腹泻、瘘管引流, 肾小管功能障碍导致大量钾随尿丢失,长 期使用强利尿剂使钾大量排出,肾上腺皮 质功能亢进促进钾的排泄;③葡萄糖与胰 岛素同时使用、碱中毒等,使钾过多转入 细胞内。

临床生物化学讲讲义义完整版PPT课件

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高血压与钠代谢
高血压与钾代谢
高血压与血脂代谢
钾离子对维持血压稳定具有重要作用,低钾血症可导致血压升高。
血脂异常与高血压的发生和发展密切相关,控制血脂水平有助于降低高血压风险。
03
02
01
心血管疾病与胆固醇
高胆固醇血症是心血管疾病的重要危险因素,降低胆固醇水平有助于预防心血管疾病。
肿瘤标志物检测有助于肿瘤的早期发现和诊断。
肿瘤标志物
如肌钙蛋白、B型钠尿肽等,用于心梗、心衰等疾病的诊断和预后评估。
心脑血管疾病标志物
如C反应蛋白、降钙素原等,用于感染性疾病的诊断和治疗效果评估。
感染性疾病标志物
如胰岛素、血糖等,用于糖尿病、甲状腺疾病等内分泌疾病的诊断和监测。
内分泌疾病标志物
临床生物化学与疾病
04
高盐饮食是高血压的重要危险因素,钠离子在高血压发病中起重要作用。
02
03
04
能够自动完成多项生化指标的检测,具有快速、准确、高效等特点。
能够自动完成血常规检测,包括白细胞计数、红细胞计数等。
能够自动完成免疫学指标的检测,如乙肝两对半、肿瘤标志物等。
能够自动完成尿液常规检测,包括尿蛋白、尿糖等。
如癌胚抗原(CEA)、甲胎蛋白(AFP)等,用于肿瘤的早期诊断、病情监测和预后评估。
临床生物化学检测可以为医生提供关于患者健康状况的客观数据,帮助医生准确诊断疾病。
诊断疾病
通过定期进行临床生物化学检测,可以监测患者的病情变化,为医生制定治疗方案提供依据。
监测病情
根据临床生物化学检测结果,医生可以制定针对性的治疗方案,并评估治疗效果。
指导治疗
通过了解疾病的生物化学机制,可以开发出有效的预防措施,降低疾病的发生率。

生化检验课件.ppt

生化检验课件.ppt
敏感的指标,其血清水平与冠心病发病率呈负相 关。急性心肌梗塞时,Apo-A 1 水平降低。Ⅱ 型糖尿病Apo-A 1 值常偏低,其心血管并发症 的发生率增高。脑血管病变,肾病综合征、肝衰 竭以及Apo-A 1 缺乏症时Apo-A 1 水平也降低。
二)载脂蛋白 B测定
[参考值] ELISA法:男为1.01±0.21g/L;女 为1.07±0.23g/L
血钾症,高于5.5mmol/L为高血钾症。
2、低血钾症见于: (1)摄取不足: (2)丢失过多: (3)葡萄糖与胰岛素同时使用,周期性麻痹
和碱中毒等,钾过多转入细胞内。
3、高血钾症见于: (1)摄入过多; (2)排泄困难; (3)细胞内钾大量释出; (4)细胞外液因失水或休克而浓缩,使血钾
[临床意义] 血清Apo-B水平升高与动脉粥样硬化、 冠心病发病呈正相关,Apo-B的上升较LDL-C和 CHO的上升对冠心病风险度的预测更有意义,此 外,家族性高胆固醇血症、对胰岛素有抵抗的Ⅱ 型糖尿病、胆汁淤积、肾病综合征和妊娠时, Apo-B也升高,Apo-B降低见于低β-脂蛋白血症、 Apo-B缺乏症、肝硬化。
[临床表现]
1、增高 见于动脉粥样硬化性心脏病、原发性高脂血症、 肥胖症、阻塞性黄疸、糖尿病、肾病综合征等。
2、降低 见于甲状腺功能减退、肾上腺功能减退及严重 肝衰竭。
二、血清脂蛋白检测
一 ) 脂蛋白电泳测定
[参考值]
电泳法:乳糜微粒( CM)为阴性,HDL为30%~40%, LDL为50%~60%,VLDL为13%~25%。
旁腺功能亢进症
(3)服用VitD过多 (4)骨病 (5)某些肿瘤:肾癌,肺癌,急性白血病等 (6)长期制动引起骨脱钙

临床生物化学妊娠的生物化学检验PPT课件

临床生物化学妊娠的生物化学检验PPT课件
检测方法
这些相关指标的检测方法与血清hCG和孕酮类似,通常采 用抽取静脉血液样本,然后使用化学发光法、酶联免疫法 等进行检测。
结果解读
这些相关指标的结果通常需要综合分析,并结合临床表现 和其他检查结果进行判断。例如,雌二醇水平过低可能提 示卵巢功能减退或胚胎发育不良等情况。
03
生化妊娠的预防与治疗
详细描述
感染通常发生在生化妊娠后,表现为发热、下腹痛、阴道分泌物异常等症状。处 理方法包括抗生素治疗、手术治疗等,同时需要加强护理和预防措施,避免感染 扩散和复发。
05
生化妊娠的注意事项
定期检查
定期进行生物化学妊娠相关指标 的检测,如HCG、孕酮等,以 便及时了解妊娠状态和胎儿发育
情况。
定期进行妇科超声检查,观察胚 胎着床和发育情况,排除宫外孕
环境因素
环境污染、辐射、药物、病毒 等环境因素也可能对胚胎发育
产生不良影响。
临床生物化学妊娠的诊断标准
临床表现
孕妇在孕早期出现阴道流血、腹痛等 症状,或孕晚期出现胎动消失等症状 。
实验室检查
通过血液hCG水平测定、孕酮测定、 超声检查等手段,可以确诊临床生物 化学妊娠。
02
生化妊娠的生物化学检验
预防措施
早期筛查
通过生物化学检验,早期发现可能导 致生化妊娠的高危因素,如遗传疾病 、内分泌失调等。
健康生活方式
保持健康的生活方式,包括均衡饮食 、适量运动、规律作息等,有助于降 低生化妊娠的风险。
避免有害因素
避免接触有害物质,如放射线、化学 物质等,以及戒烟、戒酒等,以降低 对胚胎的不良影响。
心理调适
检测方法
孕酮检测通常采用抽取静脉血液样本,然后使用化学发光法或酶联免疫法进行检测。

临床生化检验基础PPT课件

临床生化检验基础PPT课件
转速选择:RCF=1.118×L×(r/1000)2 RCF:相对离心力,在生化检验分析中的
标本相对离心力在1500~1800; L:离心半径,以mm计算,即离心管至旋
转轴中心距离; r:转子每分钟转速。
标本的处理
分离注意事项:
转速不够,离心不彻底,不能很好的将 血清分离,在血清中容易夹杂纤维蛋白,在测 试过程中容易堵针,影响测试。
主要内容
生化检验的概述 生化检验的对象 生化检验的手段
生化检验的作用
概述
临床生化检验:主要是运用物理学、化 学、生物学等实验室技术和方法,通过感官、 试剂反应、仪器分析和动物实验等手段,对 病人的血液、体液、分泌液、排泄物等标本 进行检验,以获得反映机体功能状态、病理 变化或病因等的客观资料。
对象
ε ×Vs×d ε ×d
VS
在临床测试中,外界环境因素、试剂本
检测方法
比浊法:
免疫比浊法: 免疫透射比浊法:是在光源的光路方向 测量透射强度,用终 点法测量。 用于血清特种蛋白的检测。 免疫散射比浊法: 常用于血凝仪中。
化学比浊法
校准品
定标:浓度和反应度关系,找K值。
K=C标准/(A标准-A试剂空白) 决定因素:
1、标准液浓度,最好是血清基质,否则 可能会因为基质效应而影响定标效果。
肝功能 胰腺炎 前列腺疾病
肾功能 无机离子 免疫性疾病
血糖
痛风
免疫炎症反应
血脂
中毒
心肌酶谱
检测试剂
常见生化项目之间的关系:
GLO=TP-ALB
A/G=ALB/GLO
O/P=AST/ALT
I-BIL=T-BIL-D-BIL
AⅠ/B=ApoAⅠ/ApoB CK-MM=CK-CK-MB
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❖ 1、制备标准液 ❖ 2、显色反应 ❖ 3、比色 ❖ 4、作图 ❖ 5、制作检量表。
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21
标准曲
1
线法
0.5
吸光度
0 0 20 40 60 80 100
标准曲线
浓度
将一系列浓度不同的标准溶液按照、 一定操作过程显色后, 分别测吸光度,以吸光度为纵坐标, 浓度为横坐标绘制标准曲线。 从标准曲线找出相对应的待测样品的浓度, 即标准曲线法。
第3章
临床生物化学检验常用技术
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1
本章主要内容
① 光谱检验技术 ② 电化学分析技术 ③ 电泳技术 ④ 干化学技术 ⑤ PCR技术
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2
精品资料
• 你怎么称呼老师?
• 如果老师最后没有总结一节课的重点的难点,你 是否会认为老师的教学方法需要改进?
• 你所经历的课堂,是讲座式还是讨论式? • 教师的教鞭
熟悉离心技术,其它电泳技术和层析技术 中的HPLC及亲和层析的原理和应用;免疫分析 技术、生物传感技术的概念和应用原理。
了解色谱、层析等常用生化技术的应用原 理和方法,生物芯片技术的概念和应用原理。
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5
第一节 光谱分析技术
分光光度技术的基本原理 分光光度计的基本结构 分光光度计的操作方法 分光光度技术的定性和定量方法
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制作和应用标准曲线时应注意下面几点:
(1)浓度范围足够大 (2)减少偶然误差 (3)当待测液吸光度超过线性范围时,应将标本稀释后再测定。
(4)标本测定的条件应和标准曲线制作时的条件完全一致。
(5)测定条件发生变化时(如更换标准品和试剂等),应重新绘 制。
(6)标准品应有高的纯度,标准液的配制应准确。
吸收光谱分析技术:紫外、可见光分光光度法,原子吸收分光光
度法和红外光谱法
散射光谱分析技术:比浊法
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8
一、分光光度技术的基本原理
(一)吸光度与透光度
当光线通过均匀、透明的溶液时可出现三种情况:一部分光 被散射,一部份光被吸收,另有一部分光透过溶液。设入射光 强度为I0,透射光强度为I,I和I0之比称为透光度,即:
A = KLC
(Lambert-Beer定律适用于可见光、紫外光、红外光和均匀非散射的液体。)
式中A为吸光度;K为比例常数,称为吸光系数;L为溶液 层厚度,称为光径;C为溶液浓度
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10

1.0 0.8 0.6 0.4 0.2
Y=ax+b
01


4C
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11
吸光系数的应用
❖ 1、定性 ❖ 2、判断方法的灵敏度 ❖ 3、定量测定物质浓度
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6
❖ 光的本性 光的描述:波长和能量 可见光:400nm~760nm 紫外光:200 nm~400nm 红外光: 760nm~1000nm
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7
n 光谱分析技术原理:
利用各种化学物质都具有发射、吸收或散射光谱谱系的特征, 以此来确定物质性质、结构或含量。
光谱分析技术分类:
发射光谱分析技术:火焰光度法、原子发射光谱法和荧光光谱法
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23
第二节电化学分析技术
电化学法概述
电化学分析:利用物质的电化学性质, 测定化学电池的电位、电流或电量的变 化进行分析的方法。主要有:电位法、 电导法、电容法。
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24
电位分析法基本原理
❖ 电位分析法是利用电极电位和浓度之间关 系来确定物质含量的分析方法。电极电位 由能斯特方程式确立。电极电位测定是通 过构建原电池电动势,其中一个电极的电 位随待测离子尝浓度改变而改变(指示电 极);另一电极电位不受试液影响(参比 电极),通过测定原电池的电动势便可求 得待测离子浓度。
2、调节波长
3、将空白液、标准液及样品液置于光路
4、空白调节T为0、100%
5、调A为0
6、重复4和5
7、测量标准和样品吸光度。
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(二)吸光度的校正
铬酸钾的标准液可用于校正分光光度计的吸光 度。在25℃,将4mg铬酸钾溶于100ml的0.05mol/L KOH中,放入比色池中,在不同波长下测定吸光 度值,与己知的标准吸光度校正表进行比较,可 检测仪器吸光度的准确度。
标准液的要求:其浓度尽量接 近于样品浓度。(双标准)
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❖ 2.标准曲线法 用途:
1、确定分析范围 2、减少系统误差 3、比较方法的灵敏度
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19
方法:
根据Lambert-Beer定律,液体的浓度在一定范 围内与吸光度成正比关系。配制一系列浓度的标准 品溶液(浓度应包含高、中、低浓度范围),按标 本处理方法作相同处理,在特定波长下测定吸光度, 以标准液浓度为横座标,以吸光度为纵座标,将对 应各点连成一条通过原点的直线,这条直线称为标 准曲线。待测溶液测定吸光度后,从标准曲线上可 查出其相应的浓度。
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12
❖ 1、光学因素
❖ 2、化学因素
❖ 3、为什么有的分光光度计使用双波长或双 光束?
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13
① 光源及光源要求
❖ 波长的选择原则:可按“吸收最大, 干扰最小”的原则进行。
❖ 2、单色器
❖ 3、比色杯及要求
❖ 4、检测器与显示器
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14
❖ 分光光度计的使用
1、开启电源,将比色池盖打开,通电20分钟 预热
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四、分光光度技术的定性和定量方法
(一)分光光度技术的定性方法 定性依据:
最大吸收波长λmax和摩尔吸光系数ε
1.最大吸收波长λmax方法 2.摩尔消光系数ε方法
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❖ 1、对比法 1、将已知浓度的标准品和待测溶液有同一
方法、在相同条件下同时进行测定。
2、当标准液与标本用量可能不同时的测定。
• “不怕太阳晒,也不怕那风雨狂,只怕先生骂我 笨,没有学问无颜见爹娘 ……”
• “太阳当空照,花儿对我笑,小鸟说早早早……”
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
教学目标和要求
掌握光谱分析中的对比法、摩尔吸收系数
法、比浊法测定的方法原理,在生化检验中的 应用及注意事项;区带电泳的原理、应用及影 响因素;离子选择性电极法测定的原理和注意 事项。
T = I/I0
T×100为T%称为百分透光度。透光度的负对数称为吸光度 即:
A = -lgT = -lgI/I0 = lgI0/I
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(二)Lambert-Beer定律
Lambert-Beer定律是讨论溶液吸光度同溶液浓度和溶液层 厚度之间关系的基本定律,该定律是分光分析的理论基础。其 表达式为:
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