细胞生物学实验讲义
细胞生物学实验讲义
细胞内DNA和RNA的显示一、目的要求1、掌握显示细胞内DNA和RNA的方法。
2、熟悉细胞内DNA和RNA的分布位置。
二、实验原理核酸是酸性的，它们对于碱性染料派洛宁和甲基绿具有亲和力。
利用这两种染料的混合液处理细胞，可使其中的DNA和RNA呈现出不同的颜色，这种颜色上的差异由DNA 和RNA聚合程度的不同所引起，因为甲基绿分子上有两个相对的正电荷，它与聚合程度较高的DNA分子有较强的亲和力，可使DNA分子染成蓝绿色；而派洛宁分子中仅一个正电荷，可与低聚分子RNA相结合使其染成红色。
这样细胞中的DNA和RNA可被区别开来。
三、器材与试剂1、器材：光学显微镜、载玻片、盖玻片、染色缸、染色架、注射器。
2、材料：鸡血。
3、试剂：0.2mol/L醋酸缓冲溶液、2%甲基绿染液、1%派洛宁染液、甲基绿·派洛宁混合染液。
4、试剂的配制（1）2mol/L醋酸缓冲溶液：用2ml注射器抽取1.2ml冰乙酸加入到98.8ml蒸馏水中，混匀。
再称取醋酸钠（NaAC·3H2O）2.72g溶于100ml蒸馏水中，使用时按2：3的比例混合两液即成。
（2）2%甲基绿染液：称取2.0g去杂质甲基绿溶于100ml0.2mol/L的醋酸缓冲溶液中即成。
甲基绿粉中往往混有影响染色效果的甲基紫，它们必须预先除去，其方法是将甲基绿溶于蒸馏水中，放在分液漏斗中加入足量的氯仿（三氯甲烷）用力振荡，然后静置，弃去含甲基紫的氯仿，再加入氯仿重复数次，直至氯仿中无甲基紫为止，最后放入40 C温箱中干燥后备用。
（3）1%派洛宁染液：称取1g派洛宁（吡罗红）溶于100ml0.2/L醋酸缓冲溶液中混匀。
（4）甲基绿派洛宁混合染液：将2%的甲基绿液和1%的派洛宁液以5：2的比例混合均匀即可。
该液应现配现用，不宜久置。
四、内容与方法1、取鸡血一小滴在干净的载玻片一端，用另一载玻片的一端紧贴血滴，待血液沿其边缘展开后，以30~400角向玻片的另一端推去，制成较薄的血涂片，室温下晾干。
细胞生物学讲义
细胞生物学实验室规则与操作要求为获得较好的实验结果，避免发生差错与意外事故，特制定以下规则与要求，希望实验者能严格遵守。
（一）显微镜的使用及保护①显微镜是细胞生物学实验的主要观察工具，使用时必须注意保持外观整洁、防湿、防高温、防药品侵蚀，使用时勿使染液或其它溶液沾污镜头，一旦沾污，及时用擦镜纸蘸上镜头清洗液（无水乙醚：无水乙醇＝7：3）轻轻擦拭干净。
②带光源的显微镜待电压稳定后，将电源的光亮度调节器调至最小，再打开显微镜的电源，缓慢调节光亮度适当进行量度观察，观察完毕后，则先将光亮度调节器调至最小，然后再关闭显微镜电源开关。
③镜头的清洗：实验完毕后，镜头的清洗很重要。
用擦镜纸蘸取少量镜头清洗液，先从镜头的中央开始清洗，轻轻旋转擦至镜头的边缘部分，如此重复2－3次。
④载物台必须保持清洁，必要时亦可用擦镜纸蘸少量清洗液擦试载物台。
聚光器上的污物的去除亦可采用类似的方法。
⑤使用完毕后，玻片一律取下，套上布袋.放回原处。
本桌的显微镜一律不准搬离本实验桌。
若需使用者，可到该桌使用，使用后务必保持该显微镜的清洁。
如若发现违章使用情况，必追究使用者责任，本次实验作零分计。
（二）实验时，实验室内，一律不准高声喧哗整洁，保持室内安静，认真操作，仔细做好各项观察与记录。
（三）实验室内的一切仪器、物品必须爱护。
节约材料、药品，取用时不要过量。
公用物品不得独自占用，用后归还原处。
（四）注意安全。
使用有毒物品、强酸、强碱等，应严格按照操作规程。
易燃物品远离火源。
禁止湿手拿取电源开关或接触电源。
如发生触电等事故，及时报告。
（五）取用各种试剂，要用及时盖上瓶盖。
按献宝取出所需之药品或溶液后，不得将原液倒回瓶内。
滴管、玻棒、吸管不可混用。
（六）实验中如有丢失、损坏仪器设备及用具，及时登记并报告，凡违反操作规程造成不应有的损失者，视其情节轻重，态度好坏，按有关规定处理。
（七）本实验室欢迎各位实验者对每一实验本身提出新的看法与做法，至于能否采用，视具体情况而定。
细胞生物学实验讲稿 (16)
视频3.6 单个核细胞分离结果分析同学们好！我们在前面的视频中学习了“研磨法分离小鼠脾脏单个核细胞”和“密度梯度离心法分离外周血单个核细胞”的原理、操作等内容，本视频我们一并对两个实验结果加以分析。
首先，让我们先复习一下单个核细胞的概念及组成。
单个核细胞是指外周血和免疫器官中具有单个核的细胞，主要包括单核细胞和淋巴细胞等密度相近的几种免疫细胞。
其并非某种特定细胞类群。
因此，观察单个核细胞形态和计算纯度时要综合考虑这几种细胞。
1、密度梯度离心法正常分离效果：纯度， 80%左右；回收率，60%左右。
图1中细胞纯度接近80%，算比较好的分离结果。
图2中单个核细胞比率很低，混有大量红细胞和血小板。
2、脾脏单个核细胞理想分离效果：活细胞比率﹥90%，如图3。
图4则死细胞偏多。
3、外周血单个核细胞分离纯度低的原因：吸取单个核细胞层时操作不当。
（1）扰动了分层液，使沉于管底的红细胞上浮；（2）吸取上层含血小板液体太多。
4、外周血单个核细胞回收率低的原因（1）血液在普通玻璃或塑料容器中放置时间过长，部分细胞因贴壁而损失。
（2）吸取单个核细胞不完全。
（3）离心收集单个核细胞时速度偏低、时间偏短。
（4）用普通低速离心机离心时，部分细胞沉于管壁而非管底，吸弃上清和重悬时易损失。
5、脾脏单个核细胞活率低的原因（1）研磨力度过大。
（2）在同一位置反复研磨。
（3）没有及时用D-Hanks液将研磨游离的细胞冲入悬液。
6、改善外周血单个核细胞分离纯度的方法：吸取单个核细胞的吸管进入细胞悬液前先排出部分气体；缓慢进入单个核细胞层；小心吸取中间层细胞。
避免在液体中反复挤压吸管。
7、提高外周血单个核细胞回收率的措施（1）血液一经采集尽快分离。
（2）用聚丙烯离心管代替普通离心管盛装血液和分离细胞。
（3）有条件时使用水平离心机。
（4）淋巴细胞分离液密度较大，如吸入较多，应适当调大离心速度并延长离心时间。
8、改善脾脏单个核细胞活率的方法（1）组织块分割要小。
本科《细胞生物学实验》讲义
（3）载物台：戴物台为方形（多数）和圆形的平台，中央有一光孔，孔的两侧各装1个夹片，载物台上还有移动器（其上有刻度标尺），可纵向和横向移动，移动器的作用是夹住和移动标本用。
（4）镜臂：镜臂支撑镜筒、载物台、聚光器和调节器。镜臂有固定式和活动式 （可改变倾斜度）两种。
（5）滤光片：自然光由各种波长的光组成，如只需某一波长的光线，可选用合适的滤光片，以提高分辨率，增加反差和清晰度。滤光片有紫、青、蓝、绿、黄、橙、红等颜色。根据标本颜色，在聚光器下加相应的滤光片。
图1.普通光学显微镜
五、实验步骤及内容
1．低倍镜的操作
（1）置显微镜于固定的桌上。窗外不宜有障碍视线之物。
2．高倍镜的操作
（1）使用高倍镜前，先用低倍镜观察，发现目的物后将它移到视野正中处。
（2）旋动转换器换高倍镜，如果高倍镜触及载玻片立即停止旋动，说明原来低倍镜就没有调准焦距，目的物并没有找到，要用低倍镜重调。如果调对了，换高倍镜时基本可以看到目的物。若有点模糊，用细调节器调就清晰可见。
3．油镜的操作
4．用铅笔分别绘出各种细菌的形态图。
六、数据整理
七、实验过程中应注意事项及心得
1.取、送显微镜时要轻拿轻放，一定要一手握住弯臂，另一手托住底座。显微镜不能倾斜，以免目镜从镜筒上端滑出。不可把显微镜放在实验台的边缘，以免碰翻落地。取拿显微镜罩子的时候也一定轻取，以免将目镜从镜筒上带出摔坏。
2.显微镜的光学部分只能用特殊的擦镜纸擦拭，切忌乱用他物擦拭，更不能用手触摸透镜，以免汗液玷污透镜。
实验一、光学显微镜的基本使用方法
一、实验目的
1. 了解光学显微镜的结构、原理和保养方法；
细胞生物学实验讲稿 (7)
视频2.5 冰冻切片法制备小鼠脾脏组织细胞标本同学们好！冰冻切片法是利用冷冻切片机制备冰冻组织细胞标本的制片方法。
具有组织硬化快、制作省时、抗原保存效果好等优点，主要用于制备人与动物柔软组织的切片标本。
实验原理：利用物理降温法使柔软的组织材料硬化，然后利用切片机锋利的切面，将材料按照一定的厚度切成适合于显微观察的标本片。
冰冻切片机的组成主要有：1、操作室；2、冷冻台；3、标本台；标本头；4、防卷板；5、厚度调节旋钮；6、切片刀架；7、切片刀；8、操作室和冷冻头温度调节；9、手转轮；10、标本头冷冻回缩键。
操作流程：开机——设定冷冻温度——切片刀安装及调节——准备标本台——材料准备——材料包埋及冷冻——安装标本头——设定切片厚度——切片及观察使用操作：1.开机。
2.设定冷冻温度：开机后根据需要切片的材料特点，利用“+”和“-”键设定箱体和样品头的温度。
本次箱体温度设定为-20℃，标本头温度设定为-22℃。
3.切片刀安装及调节：将刀片固定锁钮向上扳动，取下旧刀片，将新刀片安装于刀座上；再将刀片固定锁钮向下扳动，锁紧刀片。
4.准备标本台：将干净的标本台插入座槽内，在其上均匀滴加适量的水或组织包埋剂，冰冻后形成小平台。
5.材料准备：用锋利刀片将新鲜小鼠脾脏切成一定大小的组织块。
6.材料包埋及冷冻：将准备好小鼠脾脏平铺在标本台的平台中央，然后，快速在样品上滴加OCT包埋剂，均匀地包埋住样品。
避免产生气泡。
继续在冷冻台上冷冻约30min。
7.安装标本头：将包埋有样品的包埋台安装到标本头上，旋紧锁钮。
8.设定切片厚度：设定切片厚度为40微米；接近待切组织后用手转轮微调。
9.切片及观察1）掀开防卷板，看清标本位置，用标本头“前进”和“回缩”键调节标本和刀片到合适距离。
2）转动手转轮，调整标本至待切平面。
3）将切片厚度调节到6微米，进行试切；用毛刷清扫切片垃圾；放下防卷板，开始切片；均匀旋转手转轮，每转动一周，切下一片；用手转轮固定锁将手转轮卡住。
细胞生物学实验讲义
程而损坏仪器设备及物品者要按有关规定赔偿。 6．在实验过程中仪器设备发生故障或损坏时，应首先切断电源，并立即报告任课教
师及时处理。 7．使用贵重仪器设备，一定要在老师的指导下操作，使用完毕，要进行登记。 8．实验中使用易燃、易爆、有毒试剂及传染性强的物品时，应严格操作，注意自我
的像再次放大，没有辨析能力。物镜一般有：4×、10×、 图1 显微镜的光路
40×和油镜(100×)，它们各有一定的放大率，不仅可以 放大标本，而且有辨析能力。
2.问：什么是光学显微镜？它的各部名称是什么？ 答：一般的普通光学显微镜如下图 2。它的各部名称如图 3 所示。镜座、镜柱、 镜臂、镜筒、物镜转换器(旋转器)、镜台(载物台)、调节器：粗调节器(粗螺 旋)和细调节器(细螺旋)、反光镜、集光器、显微镜目镜、显微镜物镜、开关、 光源等。
细胞生物学实验讲义
上海大学生命科学学院
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实验须知
一、实验须知 1．每个学生必须遵守实验室规则。 2．实验时不准迟到、早退或无故缺席，有病或有事需向任课教师请假。 3．进入实验室后要保持安静，不得在室内喧哗、打闹；不得抽烟、吃东西、随地吐
痰、乱丢纸屑和其他杂物。 4．不得将与实验无关的物品带入实验室；不得将实验物品带出实验室；不允许在食
1.问：在细胞生物学实验中，为何要使用光学显微镜？ 答：（1）所要观察的对象细胞的个体很微小，绝大多数细胞， 直径一般为 10-100 微米（1 微米＝1 / 1000 毫米），动物 的细胞更小，一般只有 10 微米左右，而细菌只是一个细 胞，这种细胞比动物细胞还小。所以肉眼无法看到这些微 小的生命体。 （2）人眼所能看到的物体的大小和人眼与该物体的距离有 关。视力 1.0（即对数视力表 5.0）的眼睛的分辨率是 1'； 2.0 的眼晴的分辨率是 0.5'。这样你就可以算出在一定距 离下人眼所能看到的物体的最大长度是多少了。一般肉眼 的分辨距离在 0.2mm 左右。 （3）视角过小时需要借助放大镜、显微镜或望远镜等加以 放大，才能看清物体了。光学显微镜：0.2um （4）显微镜有目镜和物镜。目镜一般有：8×、10×、15 ×、16×等种不同的放大倍数的目镜。目镜只能把物镜成
细胞生物学讲义概论
细胞生物学讲义概论细胞生物学是研究细胞的结构、功能和相互关系的学科，是现代生命科学的基础和核心。
它从分子水平到系统水平探究细胞的内部组成、外部相互作用以及生物体的发育、遗传和适应能力等方面的问题，涉及到细胞的形态学、生化学、遗传学、生理学等多个领域。
本讲义旨在介绍细胞生物学的基本概念和原理，以及细胞的结构、功能和相互关系等内容。
一、细胞的定义和分类1.细胞的定义：细胞是生物体的基本结构和功能单位，是由细胞膜包围的原核或真核质量，内含细胞器，并能进行代谢和遗传。
2.细胞的分类：根据细胞核的有无，将细胞分为原核细胞和真核细胞两大类。
原核细胞是没有真核膜包围的细胞核，如细菌和蓝细菌；真核细胞是有真核膜包围的细胞核，如动植物等真核生物。
二、细胞的结构和功能1.细胞的结构：细胞包括细胞膜、细胞质、细胞核、细胞器等结构。
细胞膜是细胞的外界界面，细胞质是细胞内质量，细胞核是细胞的遗传中心，细胞器是细胞内特定功能的结构。
2.细胞的功能：细胞能进行物质运输、能量代谢、遗传信息的传递和表达等多种功能。
其中，细胞膜起着物质进出细胞的调节作用；线粒体是细胞的能量中心，负责产生细胞所需的能量；细胞核负责细胞的遗传信息的储存和传递。
三、细胞的相互关系2.细胞的组织和器官：相同类型的细胞可以组织成组织，不同类型的组织可以组合形成器官，不同器官之间可以组成一个完整的生物体。
四、细胞的繁殖和分化1.细胞的繁殖：细胞能够通过有丝分裂和无丝分裂两种方式进行繁殖。
有丝分裂是指细胞对核和细胞质进行同步复制，然后进行分裂；无丝分裂则是细胞直接进行分裂，没有核和细胞质的复制过程。
2.细胞的分化：细胞分化是指细胞通过表达不同基因，进而形成不同的形态和功能。
细胞的分化过程是由基因表达调控网络控制的，而细胞分化后会形成不同功能的细胞类型，如肌肉细胞、神经细胞等。
细胞生物学是生命科学的基石，对于我们了解生命的本质、解读疾病机制和开发新药都具有重要意义。
细胞生物学实验讲义
植物组织培养一、实验目的1、掌握植物细胞无菌培养技术。
2、了解不同激素对细胞的不同诱导作用。
二、实验原理植物组织培养是20世纪60年代以来植物细胞生物学中发展起来的一项生物技术。
它是借用无菌操作方法，培养植物的离体器官，组织或细胞，使其在人工合成的培养基上，通过细胞的分裂、增殖、分化、发育，最终长成完整的再生植株。
植物组织培养技术的研究，不仅具有重大的理论意义，而且在生产实践中也已显示了广阔的应用前景。
组织分化与形态建成问题，快速繁殖与去除病毒，花药培养与单倍体育种，幼胚培养与试管受精，抗体突变体的筛选于体细胞无体系变异，悬浮细胞培养与次生物质生产以及超低温种质保存等方面的深入研究与实际应用，都必须借助植物组织培养技术的基本程序和方法，深刻理解植物细胞的全能性。
三、实验用品1、材料半夏无菌苗。
2、仪器卧式灭菌锅、超净工作台、烘箱、培养箱或培养室。
3、用具镊子、刀、牛皮纸、marker笔、棉线。
4、器皿试剂瓶(50、100、1000ml)、三角瓶(100ml)、刻度吸管(0.5、1、5、10ml)、培养皿(直径9～11cm)。
5、药品与试剂1).药品(见下表)2).70％酒精四、实验方法1、培养基的配制配制培养基前先要配制母液。
母液分大量元素、微量元素、铁盐及有机物质四类。
(各类成分浓度、用量详见下表)。
表1 MS培养基母液配制(单位：mg)1).大量元素母液(10倍液)分别称取10倍用量的各种大量无机盐，依次溶解于大约800ml热的(60～80℃)蒸馏水中。
一种成分完全溶解后再加入下一种，最后加水定容至1000ml后装入试剂瓶中，冰箱内贮存备用。
2).微量元素母液(100倍液)分别称取100倍用量的微量无机盐，依次溶解于800ml重蒸水中，加水定容至1000ml。
3).铁盐母液(100倍液)称取100倍用量的Na2-EDTA(乙二胺四乙酸钠)和FeSO4·7H2O溶于800ml重蒸水中，最后定容到1000ml。
细胞生物学实验讲义
细胞生物学实验一细胞分裂相的观察（综合性，3学时，生技、生工专业必修）一、实验目的1.掌握减数分裂标本的制备方法；2.掌握生殖细胞减数分裂发生过程及各个时期的染色体和细胞变化特点；3.了解植物生殖细胞的形成过程。
二、实验原理减数分裂是生殖细胞发生的一种特殊细胞分裂方式，特点是染色体复制一次，细胞分裂两次，形成4个子细胞，每个子细胞染色体数目减半。
经过受精作用后，染色体数目恢复，这样在物种延续过程中保证了遗传的相对稳定性和基因的多样性。
三、实验仪器、材料和试剂1.仪器、用具：眼科镊子、解剖针、刀片、吸水纸、显微镜、载玻片、盖玻片；2.材料：普通小麦(Triticum aestivum，2n=2x=42)或黑麦（Secale cereale，2n=2x=14）、大麦(Hordeum sativum，2n=2x=14)的幼穗（旗叶叶枕与幼穗顶部距离3～5cm，穗长约6～8cm）；或大葱（Allium fistolosum，2n=2x=16）花序（外包绿色总苞者，长2～3cm）；或玉米(Zea mays，2n=2x=20)幼穗（雄穗）。
3.试剂：苯酚品红、醋酸洋红。
注：以下染色剂的配制① 1％醋酸洋红（aceto carmine）：酸性染料，适用于压碎涂抹制片，能使染色体染成深红色，细胞质成浅红色。
配方：洋红1g ； 45％醋酸100ml。
煮沸2h左右，并随时注意补充加入蒸馏水到原含量，然后冷却过滤，加入4％铁明矾溶液1～2滴（不能多加，否则会发生沉淀），放入棕色瓶中备用。
②改良苯芬品红染色液（Carbol fuchsine）核染色剂。
配制步骤：先配成三种原液，再配成染色液。
原液A：3g碱性品红溶于100ml 70％酒精中。
原液B：取原A液10ml加入到90ml 5％石炭酸水溶液中。
原液C：取原B液 55ml，加入6ml冰醋酸和6ml福尔马林（38％的甲醛）。
（原液A和原液C可长期保存，原液B限两周内使用）染色液：取C液10～20ml，加45％冰醋酸80～90ml，再加山梨醇1～1.8g，配成10％～20％浓度的石炭酸品红液，放臵两周后使用，效果显著（若立即用，则着色能力差）。
细胞生物学实验讲稿 (4)
视频2.2 涂片法制备血细胞标本片及瑞氏染色同学们好！涂片法是用一张载玻片将细胞悬液均匀地涂布在另一张载玻片上制备细胞标本片的方法。
广泛用于血细胞及其他各种悬浮细胞材料标本片的制备。
实验原理：一定浓度的细胞悬液，用一张载玻片涂布于另一张载玻片后，可在载玻片上形成密度适可的单层细胞标本。
实验材料及用品有：抗凝全血；普通光学显微镜；酒精棉球缸；载玻片；吸水纸；蜡笔；吸管；废液缸；瑞氏染液；pH6.4的PBS缓冲液。
实验操作环节有：清洁载玻片——加样——涂片——干片——镜检涂片效果——瑞氏染色——细胞显微观察。
操作细节：1、清洁载玻片：用酒精棉球反复擦拭清洁载玻片；用吸水纸吸干表面水分和酒精。
2、加样：将载玻片平放在实验台上，用吸管吸取血液后与载玻片长轴一端距离边缘约1cm处接触，挤出1小滴血液。
3、涂片：另取一张载玻片，用其一侧短边接触加有血滴的载玻片；向后拖动使与血滴前沿接触；稍等，让血滴沿边缘展开；单方向匀速推动血样至载玻片另一侧。
4、干片：在空气中晃动细胞涂片，使其迅速干燥。
5、镜检涂片效果：显微镜下细胞应呈均匀分布的单层，密度适可。
6、瑞氏染色：用蜡笔在血涂片上画一个约3cm×2cm的椭圆形圈，作为堤防；向圈内连续快速滴加瑞氏染液至液面呈拱凸形；静置1min，使细胞固定；向瑞氏染液中缓慢滴加相同滴数的PBS缓冲液；水平轻轻旋动载玻片，至液面浮现一层黄色金属样物质；静置染色15~20min；蒸馏水冲洗标本除去浮液；用吸水纸吸干表面水分。
7、细胞显微观察。
注意事项1、要等血涂片干透后再进行染色。
否则，细胞在染色过程中容易脱落。
2、用蜡笔作堤防时切记画的圈要完整，以免染料从缺口处流失。
3、滴加瑞氏染液时要快速连续，并且一定要形成拱凸液面，以免因溶剂挥发至干导致染料颗粒沉积在血膜上。
细胞生物学实验讲义
《细胞生物学》实验指导目录实验一细胞大小测定和生物绘图法（验证性）2实验二细胞中过氧化物酶的显示（验证性）2实验三细胞内糖类的显示（验证性）2实验四细胞Feulgen反应（验证性）2实验五动物细胞培养（综合性）4实验六细胞膜通透性的观察和细胞活力测定（创新性）4实验一细胞大小测定和生物绘图法一、实验目的1. 掌握用测微尺测定细胞大小的原理和方法。
2. 掌握生物绘图的基本方法。
二、实验原理（一）测微尺的原理测微尺分物镜测微尺（简称物微尺或台微尺）和目镜测微尺（简称目微尺），两尺配合使用，可以测量细胞大小。
目微尺是一个可以放在目镜内的特制玻璃圆片，圆片中央刻有一条直线，此线分为若干格。
物微尺为一载玻片中央封固的小尺，长1mm，被等分为100格，长为0.01mm（10um）。
当测量细胞大小时，不能用物微尺直接测量细胞，而只能使用目微尺。
因目微尺测量的细胞是经物镜放大后的像，而它每格所代表的实际长度随物镜的放大率而变，在测量时需要先用物微尺来测定，求出某一放大率时目微尺每格所代表的实际长度，然后再用以测定细胞大小。
将物微尺放在显微镜的载物台上，小心转动目镜测微尺，移动物微尺使两尺平行，起点线重合，然后找出另一处两尺刻度重合处，记录起点线到重合线之间的各尺的刻度数（格数），按下式计算，在该放大系统下目微尺每格所代表的实际长度：物测微尺格数目微尺每格所代表的实际长度= ×10um目测微尺格数例如：目微尺是100倍，其对应的物微尺使80格，则目微尺每格所代表的实际长度为80/100=8um。
测量某一细胞时，如果目微尺测得其横径为5倍，则此细胞横径为8×5=40um。
（二）生物绘图的基本要求1. 具有高度的科学性，不得有科学性错误。
形态结构要准确，比例要正确，要求真实感，立体感，精美而美观。
2. 图面要力求整洁，铅笔要保持尖锐，尽量少用橡皮。
3. 绘图大小要适宜，位置略偏左，右边留着注图。
4. 绘图的线条要光滑、匀称，点点要大小一致。
细胞生物学重点讲义
《细胞生物学》重点讲义第1章—绪论1、概念：细胞生物学2、9世纪自然科学的“三大发现”：细胞学说、能量转化与守恒定律、达尔文进化论第2章—细胞基本知识概要1、概念：细胞2、如何理解细胞是生命活动的基本单位？3、病毒的结构及其增殖过程？第3章—细胞生物学研究方法略第4章—细胞膜与细胞表面1、概念：细胞膜、生物膜、细胞连接、胶原2、生物膜的基本结构特点是什么？这些特征与它的生理功能有什么关系？3、细胞连接有哪几种类型？各有何功能？第5章—物质的跨膜运输与信号传递1、概念：协同运输（共运输与对向运输）、细胞通讯、细胞识别、细胞信号通路、分子开关蛋白2、物质的跨膜运输方式与哪些？各有什么特点？3、Na+-K+泵的工作原理？4、胞饮作用与吞噬作用的比较？5、细胞有哪些方式进行通讯？各种方式之间有何不同?6、细胞有哪几种方式通过分泌化学信号进行细胞间相互通讯?第6章—细胞质基质与细胞内膜系统1、概念：蛋白质分选、信号肽、共转移、后转移2、信号假说的主要内容？第7章—细胞的能量转换—线粒体和叶绿体1、概念：呼吸、呼吸链、光合作用、光反应中心2、线粒体各结构上的标志酶分别是什么？3、光合作用的过程4、线粒体的氧化磷酸化与叶绿体的光合磷酸化的异同点5、氧化磷酸化偶联机制的化学渗透假说的内容第8章—细胞核与染色体1、概念：核孔复合体、染色体、染色质、核小体、常染色质、异染色质（结构异染色质和兼性异染色质）、2、核孔复合体的功能3、染色体DNA的三种功能元件第9章—核糖体略第10章—细胞骨架1、概念：细胞骨架、细胞核骨架2、微管和微丝的特异性药物第11章—细胞增殖及其调控1、概念：细胞周期、检验点、细胞周期同步化、联会、二价体、四分体、2、细胞周期中各个时期及其主要事件（包括有丝分裂和减数分裂）第12章—细胞分化与基因表达调控1、概念：细胞分化、细胞癌变、转分化、去分化、再分化、再生、细胞全能性、癌基因、抑癌基因2、细胞分化的影响因素3、癌细胞的基本特征4、良性肿瘤与恶性肿瘤的区别第13章—细胞衰老与凋亡1、概念：细胞衰老、Hayflick界限、细胞凋亡、细胞坏死2、细胞衰老的特征3、细胞凋亡的特征4、细胞凋亡与细胞坏死的区别。
细胞生物学实验讲稿 (10)
视频2.8切片结果分析同学们好！我们在前边的视频中，学习了“徒手切片法制备植物组织细胞标本片”和“冰冻切片法制备小鼠脾脏组织细胞标本”，均涉及切片技术，具有某些相似性。
因此，本视频将相关结果放在一起进行分析。
1、理想切片：细胞成单层且组织结构完整。
植物叶片上下表皮细胞、栅栏细胞、海绵层细胞等清晰可辩；小鼠脾脏组织的细胞、血管、脾窦等清晰可见。
2、不良切片（1）切片过厚：细胞重叠，难以分辨。
（2）切片结构不完整：组织边界模糊，细胞有破坏。
3、切片结构不完整原因（1）材料不新鲜。
（2）徒手切片时手持材料捏的过紧。
（3）冷冻切片时材料冷冻方法不当、切片机温度设定不合适、切片厚度设定太小。
4、不同冷冻方法及效果（1）直接冷冻法：在冷冻切片机内的标本台上加包埋剂直接冷冻。
流程：放置标本台——加液制作平台——放置组织——包埋组织——组织冷冻特点：冷冻速度较慢，一般需要几分钟，在冷冻过程易形成冰晶破坏组织细胞。
（2）液氮冷冻法：先在冷冻机内放好组织，再移入液氮速冻。
流程：放置标本台——加液制作平台——放置组织——移入液氮冷冻特点：冷冻速度快，只需数秒；组织结构保存好。
（参考文献：刘世新，实用生物组织学技术，科学出版社）5、改善直接冷冻法效果的方法先用20%蔗糖浸泡组织后再冷冻6、冷冻切片温度控制切片温度控制非常重要。
温度过高，组织块硬度不够，切片呈乳糜状，不能成片；温度过低，组织块脆性强，切片呈粉末状，也不能成片。
从下表可以看出，不同组织适宜的冷冻温度和时间不同。
在制作冰冻切片实践中，可以参考相关文献设定冷冻温度、时间、切片厚度等参数；但还需根据具体材料及切片效果灵活掌握与调整。
细胞生物学讲义瞿中和版
细胞生物学在现代生物学中的地位
基础学科
细胞生物学是现代生物学的基础学科 之一，为其他生物学分支提供基本理 论和实验技术。
医学应用
细胞生物学在医学领域具有广泛应用 ，如疾病诊断、药物研发和细胞治疗 等。
跨学科研究
细胞生物学与分子生物学、遗传学、 生物化学、生物物理学等学科相互交 叉，共同推动生命科学的发展。
细胞质的结构与功能
细胞质基质
充满于细胞质内的透明胶状物质 ，由水、无机盐、脂质、糖类、 氨基酸、核苷酸和多种酶等组成 ，是细胞进行新陈代谢的主要场
所。
线粒体和叶绿体
线粒体是细胞的“动力工厂”， 负责细胞呼吸和能量转换；叶绿 体是植物细胞进行光合作用的场
所，将光能转换为化学能。
内质网和高尔基体
内质网负责蛋白质的合成和加工 ，以及脂质的合成；高尔基体与 细胞的分泌活动和细胞壁的形成
信号转导途径
不同细胞器之间通过物质交换和 信息交流来协同完成复杂的代谢 过程。
05 细胞的增殖与分 化
细胞周期的基本概念
细胞周期的定义
指连续分裂的细胞从一次分裂完成时开始，到下一次分裂完成时 为止的整个过程。
细胞周期的阶段
包括间期和分裂期，间期又分为DNA合成前期、DNA合成期和 DNA合成后期。
呼吸作用
通过糖酵解、三羧酸循环和氧化磷酸化等过程，将有机物中的能 量释放出来，供细胞利用。
能量转换的偶联机制
如质子泵、电子传递链等，在能量转换过程中发挥关键作用。
细胞的代谢类型及其特点
自养型代谢
以无机物为原料合成有机物，如绿色植物和某些细菌的光合作用和 化能作用。
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《细胞生物学》实验指导目录实验一细胞大小测定和生物绘图法（验证性）2实验二细胞中过氧化物酶的显示（验证性）2实验三细胞内糖类的显示（验证性）2实验四细胞Feulgen反应（验证性）2实验五动物细胞培养（综合性）4实验六细胞膜通透性的观察和细胞活力测定（创新性）4实验一细胞大小测定和生物绘图法一、实验目的1. 掌握用测微尺测定细胞大小的原理和方法。
2. 掌握生物绘图的基本方法。
二、实验原理（一）测微尺的原理测微尺分物镜测微尺（简称物微尺或台微尺）和目镜测微尺（简称目微尺），两尺配合使用，可以测量细胞大小。
目微尺是一个可以放在目镜内的特制玻璃圆片，圆片中央刻有一条直线，此线分为若干格。
物微尺为一载玻片中央封固的小尺，长1mm，被等分为100格，长为0.01mm（10um）。
当测量细胞大小时，不能用物微尺直接测量细胞，而只能使用目微尺。
因目微尺测量的细胞是经物镜放大后的像，而它每格所代表的实际长度随物镜的放大率而变，在测量时需要先用物微尺来测定，求出某一放大率时目微尺每格所代表的实际长度，然后再用以测定细胞大小。
将物微尺放在显微镜的载物台上，小心转动目镜测微尺，移动物微尺使两尺平行，起点线重合，然后找出另一处两尺刻度重合处，记录起点线到重合线之间的各尺的刻度数（格数），按下式计算，在该放大系统下目微尺每格所代表的实际长度：物测微尺格数目微尺每格所代表的实际长度= ×10um目测微尺格数例如：目微尺是100倍，其对应的物微尺使80格，则目微尺每格所代表的实际长度为80/100=8um。
测量某一细胞时，如果目微尺测得其横径为5倍，则此细胞横径为8×5=40um。
（二）生物绘图的基本要求1. 具有高度的科学性，不得有科学性错误。
形态结构要准确，比例要正确，要求真实感，立体感，精美而美观。
2. 图面要力求整洁，铅笔要保持尖锐，尽量少用橡皮。
3. 绘图大小要适宜，位置略偏左，右边留着注图。
4. 绘图的线条要光滑、匀称，点点要大小一致。
5. 绘图要完善，字体用正楷，大小要均匀，不能潦草。
注图线用直尺画出，间隔要均匀，且一般多向右边引出，图注部分接近时可用折线，但注图线之间不能交叉，图注要尽量排列整齐。
6. 绘图完成后在绘图纸上方要写明实验名称、班级、姓名、时间，在图的下方注明图名及放大倍数。
三、实验材料和实验用品1. 实验材料：口腔黏膜上皮细胞，洋葱内表皮，西红柿，芹菜，韭菜，红辣椒2. 实验用品：普通光学显微镜、载玻片、盖玻片、镊子、消毒牙签、烧杯、吸管、0.9%生理盐水、0.1%亚甲基兰、蒸馏水、吸水纸，HB及2H或3H绘图铅笔、橡皮、直尺、绘图纸、铅笔刀、各种细胞标本玻片。
四、方法步骤（一）细胞形态结构的观察1. 涂片法：人口腔上皮细胞的观察：1）在洁净的载玻片中央，滴一滴生理盐水。
2）用消毒牙签的一端，在漱净的口腔侧壁上轻轻的刮几下。
3）把牙签上附有碎屑的一端，放在载玻片上的生理盐水滴中涂匀。
4）用镊子夹起洁净的盖玻片，将它的一边先接触载玻片上的生理盐水滴，然后，轻轻地盖在水滴上。
然后在盖片的一侧加一滴0.1%亚甲基兰染液，在盖片的另一侧用吸水纸吸取，染色后细胞核被染成深蓝色，细胞质浅蓝色。
5）用显微镜观察细胞形状，细胞呈扁平鳞状。
2. 西红柿果肉细胞涂片制作似人口腔上皮细胞，但将生理盐水换成蒸馏水，且不必染色就可直接观察。
细胞大小形状如何？3. 撕片法：撕一小片植物表皮（洋葱、芹菜和韭菜），放在盛有一小滴蒸馏水的载玻片上，用镊子展平，盖上盖玻片在显微镜下观察。
细胞大小和形状如何？4. 取红辣椒一片，用刀片刮去果肉，将表皮制成临时装片，用显微镜观察表皮细胞，能看见胞间连丝吗?（二）细胞大小的测定1. 将目微尺放于目镜内2. 将物微尺放在显微镜的载物台上3. 小心转动目镜测微尺，移动物微尺使两尺平行，起点线重合，然后找出另一处两尺刻度重合处。
4. 记录起点线到重合线之间的各尺的刻度数（格数），按下式计算，在该放大系统下目镜尺每格所代表的实际长度目镜尺每格所代表的实际长度=物微尺格数/目微尺格数×10um5. 将制作的各种细胞临时装片置于载物台上，测定细胞的大小（包括长径和短径）。
（三）生物绘图生物绘图的方法有多种，最长见的是点点衬阴法。
点点衬阴法即将图形画出后，用铅笔点出圆点，以表示明暗和深浅，给予立体感。
在暗处点要密，明处要疏，但要求点要均匀，点点要从明处点起，一行行交互着点，物体上的斑纹描出再点点衬阴，点点衬阴法要求不能用涂抹阴影的方法以代替点点，此点初学者要尤为注意。
线条的要求：线条要均匀、不可时粗时细；线条边缘要圆润、光滑，不可有深浅和虚实的区别。
点的要求：“点点衬阴”法可显示图像的立体感，更富有形象相生动性。
粗密点用来表示背光、凹陷或色彩浓重的部位；细疏点用来表示受光面或色彩淡的部位。
点点要圆，用笔尖垂直向下打点，根据明暗需要掌握点的疏密变化，切忌采用艺术画的写生画法，不可用涂抹表示树阴。
轮廓图（左）和细胞图（右）步骤：1.观察：绘图前要对被画的对象(植物细胞、组织、器官以及外形等)做细心观察，选择有代表性的、典型的部位起稿。
2.起稿：起稿是勾画轮廓的过程：注意位置、大小。
将绘图纸放在显微镜的右方，左眼观察显微镜图像，右眼看绘图纸绘图。
绘图起草时先用较软的铅笔(HB)，将所观察对象的整体和主要部分轻轻描绘在绘图纸上，下笔要轻．尽量少改不擦。
3.定稿：对照所观察的实物，全面检查起稿的草图，进行修正和补充，再用硬铅笔(2H或3H）将草图画出来，之后可将草图擦去。
4.按注图要求绘图，写上图名及班级、姓名等。
五、注意事项1. 制作临时装片时避免产生气泡。
2. 用物微尺标定的目微尺每格长度的数值代表在某一放大系统下的情况，这一数值会随物镜的放大率而改变。
因此，在什么放大倍数的物镜下标定的目微尺只能在同一放大倍数的物镜下测定细胞的大小。
3. 绘图前认真的观察标本，搞清实物标本的结构特点，切忌抄书或凭空想象。
六、作业绘出你所观察到的人口腔上皮细胞、洋葱表皮细胞核芹菜和西红柿果肉细胞（或红红辣椒、韭菜、韭菜表皮细胞）图，指出各部分的名称。
实验二细胞中过氧化物酶的显示一、实验目的1.观察过氧化物酶的分布2.掌握过氧化物酶显示方法的原理及操作步骤二、实验原理过氧化物酶在细胞中定位于过氧化物酶体内，其反应原理为：过氧化物酶将H2O2分解，产生的氧能把联苯胺氧化为联苯胺蓝，进而转变为棕色的联苯胺棕。
三、实验用品1. 材料：洋葱根尖2. 药品：0.1%钼酸胺，1%联苯胺，生理盐水（0.7%-0.9%）0.1%钼酸胺：取0.1g钼酸胺溶于100ml双蒸水中。
1%联苯胺：取1g联苯胺溶于100ml双蒸水中。
联苯胺混合液：联苯胺（研磨）0.2g溶于100ml蒸馏水，过滤，于滤液中滴加3% H2O22滴，储存于棕色瓶中。
3.仪器用品：显微镜、载玻片、盖玻片、解剖刀片。
四、实验步骤1. 取新鲜洋葱根尖于载玻片上压片。
2. 加1滴0.1%钼酸胺，置5分钟。
3. 加1%联苯胺溶液1滴，待其出现蓝色。
4. 用生理盐水冲洗1次。
5. 加盖玻片，观察。
五、观察结果过氧化物酶阳性细胞的细胞质中有棕黄色物质，因含酶的多少不同，颜色深浅不一，深者为过氧化物酶阳性细胞，浅者为过氧化物酶弱阳性细胞，而无色者为过氧化物酶阴性细胞。
实验三细胞内糖类的显示过碘酸雪夫氏反应(peIiodic acid schiff’s reaction，PAS反应)由McManus于1946年在Feulgen反应的基础上发展而来，是显示糖原的最经典、也是最直接的细胞化学方法。
该反应首先由强氧化剂过碘酸将多糖中葡萄糖的乙二醇基(CHOH-CHOH)氧化成两个游离醛基(-CHO)，然后，游离醛基再与Schiff's 试剂反应生成紫红色的化合物，颜色深浅与多糖含量成正比。
由于单糖在固定、脱水和包埋等组织化学操作过程中被抽提掉，故一般组织标本上所能显示的糖类主要是多糖，包括糖原、黏多糖、黏蛋白、糖蛋白、糖脂、淀粉和纤维素等，它们都是由D-葡萄糖的分支或直链组成，因此要确定此红色物质是否是糖原还需要同时进行对照实验。
糖原可被唾液淀粉酶水解，先用唾液淀粉酶作用再进行PAS显色，若反应为阴性，则表明是糖原，反之则为其他多糖。
【实验目的】掌握多糖鉴定的PAS法的原理与技术，并观察细胞内多糖的分布。
【实验器材、材料和药品】1．器材显微镜、剪刀、镊子、解剖针、染色缸、载玻片、盖玻片、吸水纸、恒温水浴箱、小烧杯（10ml）2．材料马铃薯块茎3．试剂及其配制Schiff试剂、0.5%过碘酸溶液、70%乙醇、pH4.2磷酸缓冲液、淀粉酶【实验方法和步骤】切取马铃薯块茎，放入过碘酸溶液中，10min后用70%乙醇漂洗一下。
将薄片放入Schiff试剂中20～25min。
取出薄片放入70%的乙醇中浸1min。
用70%乙醇中冲洗（将薄片放在载玻片上，用吸管吸乙醇滴片）。
加上盖玻片镜检。
对照薄片可于切下后，以pH4.2磷酸盐缓冲液配制的淀粉酶消化40min，再进入染液。
结果：块茎组织细胞内可见到紫红色或深红色淀粉颗粒，对照无色或色淡。
【作业与思考题】简述PAS法的反应原理，绘图描述细胞内多糖的分布。
实验四细胞Feulgen反应【实验目的】了解Feulgen反应的原理，掌握有关的操作方法。
【实验原理】DNA是由许多单核苷酸聚合成的多核苷酸，每个单核苷酸又由磷酸、脱氧核糖和碱基构成。
DNA经1N盐酸水解，其上的嘌呤碱和脱氧核糖之间的双键打开，使脱氧核糖的第一碳原子上形成游离的醛基，这些醛基与Schiff试剂反应。
Schiff试剂是由碱性品红和偏重亚硫酸钠相作用，形成无色的品红液，当无色品红与醛基结合形成紫红色的化合物。
因此凡有DNA的地方，都能显示紫红色。
紫红色的产生，是由于反应产物的分子内含有醌基，醌基是一个发色基团，所以具有颜色。
材料不经过水解或预先用热的三氯醋酸或DNA酶处理，得到的反应是阴性的，从而证明了Feulgen反应的专一性。
图4-1 Feulgen反应【实验仪器、材料和试剂】（一）仪器、用具显微镜、恒温水浴箱、温度计、解剖针、酒精灯、试管、烧杯、载玻片、盖玻片、吸水纸。
（二）材料洋葱鳞茎或根尖（三）试剂1．1N 盐酸的配制取82.5ml比重1.19的浓盐酸加蒸馏水至1000ml。
2．Schiff试剂的配制及保存称取0.5g碱性品红加入到100ml煮沸的蒸馏水中（用三角烧瓶），时时振荡，继续煮5分钟（勿使之沸腾），使之充分溶解。
然后冷却至50℃时用滤纸过滤，滤液中加入10ml 1N HCl，冷却至25℃时，加入0.5g Na2S2O5（偏重亚硫酸钠或钾），充分振荡后，塞紧瓶塞，在室温暗处静置至少24小时（有时需2～3天），使其颜色退至淡黄色，然后加入0.5g活性炭，用力振荡1分钟，最后用粗滤纸过滤于棕色瓶中，封严瓶塞，外包黑纸。