溶剂诱导黑色素瘤抗原基因-2特定表位多肽异构的LCMS研究

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肿瘤微环境中单核细胞样髓源抑制细胞M-MDSCs的免疫抑制作用及其相关治疗的研究进展

doi：10.3969/j.issn.1000-484X.2021.20.019·专题综述·肿瘤微环境中单核细胞样髓源抑制细胞M-MDSCs的免疫抑制作用及其相关治疗的研究进展①苏琳朱杨壮壮焦肖宁侯怡飞邹纯朴胥孜杭（上海中医药大学基础医学院，上海201203）中图分类号R734.2文献标志码A文章编号1000-484X（2021）20-2523-08［摘要］肿瘤微环境（TME）在肿瘤发生发展中发挥重要促进作用。

广泛存在于TME中的髓源抑制细胞（MDSCs）是介导肿瘤免疫逃逸的主要效应细胞群。

单核细胞样髓源抑制细胞（M-MDSCs）作为MDSCs中除中性粒细胞样髓源抑制细胞（PMN-MDSCs）以外的另一主要亚型，因其具备PMN-MDSCs不具备的广谱免疫抑制活性和高度可塑性，即M-MDSCs在癌症初期被招募至肿瘤部位，对T细胞、NK细胞等发挥直接免疫抑制作用，另可分化为肿瘤相关巨噬细胞（TAM）、炎症性树突状细胞（Inf-DCs）和PMN-MDSCs，从而增加肿瘤治疗难度，故研究者逐渐把目光由数量上占主导的PMN-MDSCs转向占比较少的M-MDSCs。

根据M-MDSCs在TME中募集迅速、分化多样和功能复杂的特点，以其为靶点的免疫疗法可从耗竭数量、干预分化和抑制功能3方面入手，以期增强临床抗肿瘤疗效。

虽然国内外PMN-MDSCs研究颇丰，但聚焦于M-MDSCs的中文综述鲜有报道，本文拟从TME中M-MDSCs特点出发，首次对M-MDSCs免疫抑制作用及其靶向治疗进行综述。

［关键词］M-MDSCs；肿瘤微环境；免疫抑制；免疫治疗；中医药Research advancements of immunosuppressive effect and treatment of monocyte-type myeloid-derived suppressor cells in tumor microenvironmentSU Lin，ZHU-YANG Zhuang-Zhuang，JIAO Xiao-Ning，HOU Yi-Fei，ZOU Chun-Pu，XU Zi-Hang.School of Basic Medical Science，Shanghai University of Traditional Chinese Medicine，Shanghai201203，China ［Abstract］Tumor microenvironment（TME）played an important role in development of tumors.Myeloid derived immunosup‐pressive cells（MDSCs），which widely existed in TME，were one of main effector cell groups of tumor immune escape.Monocytic-my‐eloid derived immunosuppressive cells（M-MDSCs）were other major subtypes of MDSCs besides neutrophil-like myeloid-derived sup‐pressor cells（PMN-MDSCs），which had broad-spectrum immunosuppressive activity and high plasticity（diversified cell differentia‐tion ability）that PMN-MDSCs did not.M-MDSCs were recruited to tumor site in early stage of cancer，and exert direct immunosup‐pressive effects on T cells and NK cells and so on，which could also differentiate into tumor-associated macrophages（TAM），inflam‐matory dendritic cells（Inf-DCs）and PMN-MDSCs，increasing difficulty of tumor treatment.Therefore，researchers gradually turned their attention from number-dominant PMN-MDSCs to M-MDSCs.According to characteristics of rapid recruitment，diverse differentia‐tion and functional complexity in TME，treatment of targeted M-MDSCs could be started from three aspects of exhausting quantity，in‐terfering differentiation and inhibiting function，which assisted clinic to achieve better antitumor efficacy.Although there were many studies on PMN-MDSCs in domestic and overseas，there was still a lack of a Chinese review focusing on M-MDSC.Based on these characteristics of M-MDSCs in TME，this article for the first time，provided an overview of immunosuppressive effect and targeted ther‐apy of M-MDSCs.［Key words］M-MDSCs；Tumor microenvironment；Immunosuppressive；Immunity therapy；Traditional Chinese medicine①本文为国家自然科学基金（81804017）；上海市自然科学基金（20ZR1458500）；上海中医药大学杏林青年学者人才计划（B1-GY21-409-04-37）。

生物制药香苷对黑色素瘤细胞增殖的影响研究

精品合同，仅供参考，需要可下载使用！中国医科大学毕业设计（论文）芸香苷对黑色素瘤细胞增殖的影响研究学院名称学院名称专业名称生物制药学生学号学生学号学生姓名学生姓名指导教师教授姓名助理指导老师老师姓名202X年X月芸香苷对黑色素瘤细胞增殖的影响研究生物制药摘要：黑色素细胞瘤是源于表皮正常黑色素细胞或原有痣细胞的一种恶性肿瘤，当前对黑色素瘤的治疗主要是通过调节酪氨酸酶活性的调节和表达水平，为了探讨黄酮类物质芸香苷对黑色素瘤细胞增殖的影响，本文以芸香苷和小鼠B16黑素瘤细胞为试验对象，体外培养细胞并通过DAPI染色，对其细胞周期阻滞情况进行测定。

结果表明，经芸香苷处理的黑色素瘤细胞G2、M期细胞数量降低，G1期细胞比例上升，说明芸香苷能明显抑制小鼠黑色素瘤细胞增殖作用。

为后期研究芸香苷对黑色素瘤细胞的调控作用机制提供了研究方向和理论基础。

关键词：芸香苷；黑色素瘤细胞；增殖1前言黑色素细胞瘤是源于表皮正常黑色素细胞或原有痣细胞的一种恶性肿瘤，恶性程度高，且尚无有效的治疗方法，治愈率低，是皮肤癌致死的主要肿瘤（75%）。

以往的研究表明，恶性黑色素瘤与正常黑色素细胞相比，其酪氨酸酶表达会上调并产生明显的活性提高，说明黑色素细胞瘤的发病与酪氨酸酶的表达及活力具有直接关系。

因此，对酪氨酸酶活性的调节和表达水平的调控是当前治疗黑色素瘤的重要方式。

芸香苷（图1）是一种广泛存在于植物体内的黄酮醇配糖体，1g能溶于8L 水；200ml沸水；7ml沸甲醇，还能溶于二甲基亚砜和吡啶、甲酰和碱液，微溶于乙醇、丙酮和乙酸乙酯，几乎不溶于水、氯仿、醚、苯、二硫化碳和石油醚。

稀溶液遇三氯化铁呈绿色，无水物易吸潮。

具有使人体维持毛细管正常抵抗力和防止动脉硬化等功能，在医药上一直作为治疗心血管系统等疾病的辅助药物和营养增补剂。

具有平喘、止咳、抗菌作用，由于它对人体没有毒性，因此在食品工业上还可作为抗氧化剂和天然食用黄色素使用。

因此，为了探讨黄酮类物质对黑色素瘤细胞的活性，本文以芸香苷和小鼠B16黑素瘤细胞为试验对象，就芸香苷对体外培养的B16细胞增殖影响展开研究。

青蒿素缩环二聚体和PI3Kα突变体抑制剂的设计、合成和抗肿瘤活性研究

青蒿素缩环二聚体和PI3Kα突变体抑制剂的设计、合成和抗肿瘤活性研究众所周知,癌症是当前威胁人类健康的第一杀手,新型抗肿瘤药物的研发也一直是社会关注的重点。

由于肿瘤疾病的多样性和复杂性,许多抗肿瘤药物在临床使用中经常出现各类毒副作用。

因此提高抗肿瘤药物的靶向性和选择性,开发既可高效的杀灭肿瘤组织又可降低对正常组织毒副作用的抗癌药物具有重大而深远的意义。

基于此,本论文拟采用两种策略开展抗肿瘤药物研究工作。

其一,利用天然产物毒副作用小的优点,以其分子骨架为基础,设计天然产物的新型衍生物,并提高其抗肿瘤活性。

其二,针对肿瘤组织中某些特异存在的异常基因突变现象,通过高通量筛选技术获得先导化合物,然后进行结构优化得到全新骨架的小分子蛋白抑制剂。

这类抑制剂精准靶向突变基因表达的蛋白,具有较强抗肿瘤活性,同时毒副作用较低。

本论文分为以下几部分:Ⅰ.青蒿素五元缩环二聚体青蒿素及其衍生物是一类含三氧杂环倍半萜烯结构的具有多种生物活性的化合物。

目前,青蒿素及其衍生物已经成为抗疟疾临床治疗的一线用药,而且安全无毒副作用。

在抗肿瘤药物研发领域,青蒿素也被广泛关注。

但是相对较差的抗肿瘤活性和代谢稳定性是制约其在该领域广泛使用的最大障碍。

本论文第一部分工作以天然产物青蒿素为先导化合物,设计合成了一类新颖的青蒿素缩环二聚体结构,使用MTT法检测了这类结构在五株肿瘤细胞和一株正常肝细胞上的抗肿瘤活性。

并基于此,详细研究了这类化合物的构效关系,而且对代表性化合物的抗肿瘤生物机理和代谢稳定性进行了研究和讨论。

与青蒿素相比,大部分新合成的二聚体结构表现出更好的抗肿瘤活性,尤其是化合物A-8b对PC12细胞株表现出最佳的抗肿瘤活性(IC<sub>50</sub>=1.56μM),较青蒿素和二氢青蒿素提高了50倍。

进一步生物学机制研究结果表明,化合物A-8b可以阻断肿瘤细胞周期于G1期,同时通过上调Bad,Bax,caspase-3和caspase-9蛋白表达,抑制Bcl-xL的表达实现促凋亡作用。

紫花亚菊不同溶剂提取物对肿瘤细胞活性的影响

紫花亚菊不同溶剂提取物对肿瘤细胞活性的影响
张成栋;樊晓俞;李丽宁;卢玉滨;卓玛东智
【期刊名称】《西藏医药》
【年(卷),期】2024(45)1
【摘要】目的探讨藏药紫花亚菊不同溶剂提取物黑色素瘤细胞和卵巢癌细胞的抑制作用。

方法采用SRB体外检测法对紫花亚菊不同溶剂提取物的抗肿瘤细胞活性进行评价。

结果紫花亚菊70%乙醇、乙酸乙酯和石油醚提取物对肿瘤细胞活性均具有显著抑制作用,黑色素瘤细胞IC50值为0.109mg/mL、0.039mg/mL、
0.105mg/mL,卵巢癌细胞IC50值为0.118mg/mL、0.048mg/mL、
0.131mg/mL,水提物的抑制作用较弱,IC50值分别为0.598mg/ml、0.512mg/ml。

结论紫花亚菊提取物具有潜在抗癌活性,可在抗癌活性成分及作用机制研究方面进
行进一步探索。

【总页数】3页(P152-154)
【作者】张成栋;樊晓俞;李丽宁;卢玉滨;卓玛东智
【作者单位】西藏大学医学院
【正文语种】中文
【中图分类】R73
【相关文献】
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白屈菜红碱纳米粒的制备及体外抗黑色素瘤活性评价

白屈菜红碱纳米粒的制备及体外抗黑色素瘤活性评价作者：杨锦韩伟张永萍陈晓兰李哲刘杰吴静澜来源：《中国药房》2021年第24期中图分类号 R283.6;R979.1 文献标志码 A 文章编号 1001-0408（2021）24-2980-07DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2021.24.07摘要目的：制备白屈菜红碱纳米粒（CHE-NPs），对其处方进行优化，并评价其体外释药行为及对黑色素瘤的抑制作用。

方法：以甲氧基聚乙二醇-聚乳酸-羟基乙酸共聚物（mPEG-PLGA）为载体材料，采用纳米沉淀法制备CHE-NPs，采用高效液相色谱法和透析袋法测定包封率、载药量。

以二者的总评归一（OD）值为因变量，以CHE投药量、mPEG-PLGA质量浓度、泊洛沙姆188（F68）浓度为自变量，采用Box-Behnken响应面设计优化CHE-NPs处方。

检测最优处方所制CHE-NPs的粒径和Zeta电位，考察其体外释药特征，比较CHE原料药和CHE-NPs对小鼠B16黑色素瘤细胞存活率的影响并计算二者的半数抑制浓度。

结果：最优处方为CHE投药量2 mg、mPEG-PLGA质量浓度13 mg/mL、F68浓度1.8%。

以此所制CHE-NPs的平均包封率为（80.18±1.11）%，平均载药量为（11.36±0.28）%，平均OD值为0.96±0.04[与OD预测值（0.90）的相对偏差为6.67%]，粒径为（113.1±1.40）nm，Zeta电位为（-21.6±0.29）mV，多分散性指数为0.07±0.01（n=3）。

CHE对照品、CHE-NPs在孵育8 h时的累积释放率分别为90.87%、68.68%，后者的体外释药行为符合Weibull动力学模型。

CHE-NPs对B16黑色素瘤细胞的抑制作用显著强于CHE原料药，CHE-NPs和CHE原料药的24 h 半数抑制浓度分别为69.35、107.36 μg/mL。

科学家破解黑色素瘤治疗新药作用机制

科学家破解黑色素瘤治疗新药作用机制
佚名
【期刊名称】《流程工业》
【年(卷),期】2016(000)019
【摘要】来自美国弗吉尼亚大学医学院的一项研究表明，一种实验性癌症治疗药物已经表现出治疗黑色素瘤的巨大前景．可能对其他癌症也有作用。

该研究还发现这种药物可能对已经对其他治疗产生抵抗的黑色素瘤也比较有效。

【总页数】1页(P17-17)
【正文语种】中文
【中图分类】S858.28
【相关文献】
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3.靶向BRAF基因突变晚期黑色素瘤组合治疗新药——恩考芬尼(encorafenib)与比米替尼(binimetinib) [J], 陈本川
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国家级级项目

新型近红外超长余辉材料K2ZnAl3O8:xMn2+的发光物理学院创新训练性能及应用染料配基磁性微球亲和固定化酶的构建与应用药学院创新训练《静脉血管桥的生物力学研究》基于网络爬虫的高校资讯平台医学院创新训练
建工学院创新训练
农村金融与基层创业发展研究——以河北省为管理学院创新训练河北省城市老年贫困群体社会救助水平测算及管理学院创新训练趋势分析——基于扩展线性支出系统模型的测算 “华夏俊裔”互联网智慧旅游管理学院创新训练创新训练创新训练创新训练创新训练
河北大学2016年国家级省级创新创业训练计划项目结项成绩
项目编号
2015142 201510075014 201610075038 201610075039 201610075040 201610075041 201610075042 201610075043 201610075044 201610075045 201610075046 项目名称学院名称项目类型 HSYA对TGF-beta1在诱导A549EMT中的抑制机制探究医学院生命科学一株吡啶降解菌的分离与鉴定学院地域特色农产品特征分析及保护质监学院智能水凝胶作为胰岛素缓释体系的研究药学院预防医学碱性氨基酸卟啉光敏剂光动力治疗大鼠与卫生事业系保险与信贷联动促中小企业产业结构升级管理学院优化企业会计内部控制研究管理学院乡村旅游电子商务综合服务平台的设计与开发管理学院 90后大学生使用手机社交软件行为及其影响因素管理学院研究关于保定市精准扶贫政策实施效果的调查报告管理学院预防医学 AC3对小鼠出生后嗅觉神经元发育的影响及miR与卫生事 200调控机制业系预防医学离子液体修饰的磁性材料在雾霾颗粒中与卫生事业系纳微纳米多孔金属抗冲击力学行为研究建工学院《怀牛膝对大鼠生精细胞调亡的胰岛素通路关键医学院节点PI3K和AKT表达的影响》京津冀协同发展下河北省“涞易涞”品牌旅游区新闻传播传播影响力研究学院空心球状稀土发光材料的制备及光谱特性研究化学学院新型城镇化背景下提升新生代农民工文化融合度管理学院研究——以河北省保定市为例河北省城市社区老年宜居环境调查管理学院热源科技有限责任公司负责人姓指导教师项目其他成员信息名姓名贾思跃李燕飞，尹震，袁丽云，姚雅婷王宇李丹阳李晓杨赵高倩徐泽华张帅张洪硕齐佳丽张代琪杨嘉豪刘明琛尹洁璇,齐青宇,杨昊东,邢路瑶曹灿郝仪铭,王盼琳,王宽,李言冯屹东,韩旭、,袁玉龙回莹莹,张亚丽,李微朱安琪,董含星,张国春,杨杨孙磊夏立娅杨训赵占娟级别省级国家级省级省级省级省级省级省级省级省级省级成绩合格良好优秀合格优秀合格合格合格良好优秀良好

稳定表达组织因子的黑色素瘤细胞中血管内皮细胞生长因子的诱导

稳定表达组织因子的黑色素瘤细胞中血管内皮细胞生长因子的诱导白玲;陈保生【期刊名称】《基础医学与临床》【年(卷),期】2003(023)001【摘要】研究黑色素瘤细胞中多种信号传导途径的特异抑制剂与组织因子诱导血管内皮生长因子的关系,发现只有P44/42 MAPK激酶特异的抑制剂PD98059 对VEGF的表达有抑制效应.MAPK激酶的Western blot 检测表明PD98059完全抑制了组织因子稳定表达细胞的磷酸化的P44/42 MAPK激酶的表达,说明黑色素瘤细胞中组织因子通过P44/42 MAPK激酶途径诱导VEGF的表达.通过对VEGF的启动子区的不同片段对报告基因表达的研究表明,稳定表达组织因子的黑色素瘤细胞中VEGF启动子的活性可能部分依赖于转录因子AP-1的结合位点.【总页数】5页(P39-43)【作者】白玲;陈保生【作者单位】中国医学科学院,中国协和医科大学,基础医学研究所,北京,100005;中国医学科学院,中国协和医科大学,基础医学研究所,北京,100005【正文语种】中文【中图分类】R73;Q7【相关文献】1.PI3K/Akt/eNOS信号通路在葛根素抑制ox-LDL诱导的血管内皮细胞组织因子表达中的作用 [J], 邓华菲;李坚;周琴;谭玉林;谢明;张天杰;韩瑛;张文龙2.整合素αvβ3、组织因子及血管内皮细胞生长因子在实验性脉络膜新生血管中的表达 [J], 唐仁泓;龙剑锋;陈百华3.外源性硫化氢抑制ox-LDL诱导血管内皮细胞组织因子的表达与降低ROS产生和抑制NF-κB活化有关 [J], 邓华菲;任重;唐伟军;李雪飞;谭玉林;唐志晗;刘录山;王佐;姜志胜4.染料木黄酮对高同型半胱氨酸诱导的人血管内皮细胞组织因子表达的干预作用[J], 曹文东;杨涛;皮兴涛;续慧民;张建陶;闫盛;郝斌5.川芎嗪抑制凝血酶诱导血管内皮细胞组织因子表达的机制 [J], 成春英;孙勇;文志斌;何晓凡;王谷丰;林国强;蒋海河;唐先明;贺石林因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

华蟾素调控PI3K

２０２４－０２－２７接收基金项目：安徽省２０２１年重大疑难疾病（卵巢癌）中西医协同攻关
项目（编号：皖中医药发展秘〔２０２２〕７０号）；安徽省第十三批“１１５”产业创新团队作者单位：１安徽医科大学中西医结合临床医学系，合肥２３００３２２安徽医科大学第一附属医院中西医结合肿瘤科，合肥２３００２２作者简介：舒美玲，女，硕士研究生；张梅，女，副教授，主任医师，博士生导师，责任作者，Ｅｍａｉｌ：ｚｍ１３８５６９９００１９＠１６３．ｃｏｍ
１材料与方法
１．１实验材料人卵巢癌细胞株Ａ２７８０和人卵巢癌细胞株顺铂耐药株Ａ２７８０／ＤＤＰ购自中国科学院上海细胞生物所；顺铂注射液（货号：Ｈ２００１０７４）购自江苏豪森药业集团有限公司；ＣＢＧ注射液（货号：国药准字Ｚ３４０２０２７３）由安徽华润金蟾药业股份有限公司提供；ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴＩＮ２抑制剂（货号：２６８４４１２４１５）购自美国ＭＣＥ公司；ＲＩＰＡ１６４０培养基（货号：Ｃ１１８７５５００ＢＴ）和胎牛血清（货号：Ａ５６７０７０１）购自美国Ｇｉｂｃｏ公司；ＡＢＷ基质胶（货号：０８２７０４５）购自上海诺娃医药科技有限公司；ＥｄＵ试剂盒（货号：Ｃ００７１Ｓ）和Ｈｏｅｃｈｓｔ试剂盒（货号：Ｃ０００３）均购自碧云天生物技术有限公司；磷酸肌醇
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安徽医科大学学报ＡｃｔａＵｎｉｖｅｒｓｉｔａｔｉｓＭｅｄｉｃｉｎａｌｉｓＡｎｈｕｉ２０２４Ａｐｒ；５９（４）
３激酶（ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｉｎｏｓｉｔｉｄｅ３ｋｉｎａｓｅ，ＰＩ３Ｋ）（货号：Ｒ２７７６８）、丝氨酸／苏氨酸激酶（ＡＫＴ）又名蛋白激酶Ｂ（ｐｒｏｔｅｉｎｋｉｎａｓｅＢ，ＰＫＢ）（货号：Ｒ２３４１２）、Ｅ钙黏蛋白（货号：３４０３４１）、Ｎ钙黏蛋白（货号：３８０６７１）抗体购自成都正能生物技术责任有限公司；逆转录试剂盒（货号：Ｑ１１１０２）和ＲＴｑＰＣＲ试剂盒（货号：Ｒ２２２０１）购自南京诺唯赞生物科技股份有限公司。１．２方法１．２．１人卵巢癌细胞株的培养Ａ２７８０和Ａ２７８０／ＤＤＰ细胞贴壁培养于含１０％胎牛血清、１％青－链霉素和０１％支原体清除剂的ＲＩＰＡ１６４０培养基中，置于含５％ＣＯ２的３７℃恒温培养箱中。细胞密度达８０％时进行传代。此外，Ａ２７８０／ＤＤＰ细胞在传代贴壁后另给予１μｇ／ｍｌ顺铂以维持耐药性。１．２．２ＣＣＫ８法检测细胞增殖能力分别取对数生长期Ａ２７８０和Ａ２７８０／ＤＤＰ细胞，按照８×１０３个／孔的密度接种于９６孔板，细胞贴壁后按实验设计分别给药：ＤＤＰ（２５、５、１０、２０、４０、８０、１００、１６０μｍｏｌ／Ｌ），ＣＢＧ（２００、１００、５０、２５、１２５、６２５、３１２５ｍｇ／ｍｌ）于２４、３６、４８ｈ后每孔加入ＣＣＫ８溶液１０μｌ，避光孵育１５ｈ后读取５６２ｎｍ处光密度（ｏｐｔｉｃａｌｄｅｎｓｉｔｙ，ＯＤ）值。计算ＤＤＰ对Ａ２７８０和Ａ２７８０／ＤＤＰ细胞或ＣＢＧ对Ａ２７８０／ＤＤＰ细胞的半数抑制浓度（ｍｅｄｉａｎｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙｃｏｎｃｅｔｒａｔｉｏｎ，ＩＣ５０），并计算出Ａ２７８０／ＤＤＰ的耐药指数（ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｉｎｄｅｘ，ＲＩ）＝ＩＣ５０（Ａ２７８０／ＤＤＰ）／ＩＣ５０（Ａ２７８０）。ＣＢＧ（０、２、４、６ｍｇ／ｍｌ）处理２４ｈ后再加入梯度浓度ＤＤＰ（２５、５、１０、２０、４０、８０、１００、１６０μｍｏｌ／Ｌ），２４ｈ后加入ＣＣＫ８溶液１０μｌ，避光孵育１５ｈ后读取５６２ｎｍ处ＯＤ值，计算ＣＢＧ的逆转指数（ｒｅｖｅｒｓａｌｆｏｌｄ，ＲＦ）＝ＩＣ５０（０ｍｇ／ｍｌ）／ＩＣ５０（２、４、６ｍｇ／ｍｌ）ＣＢＧ［５］。实验独立重复３次，设３个复孔。１．２．３实验分组根据ＣＢＧ的ＩＣ５０值和逆转耐药指数设计实验分组：对照组（１２５μｍｏｌ／ＬＤＤＰ）、低剂量组（１２５μｍｏｌ／ＬＤＤＰ＋２ｍｇ／ｍｌＣＢＧ）、中剂量组（１２５μｍｏｌ／ＬＤＤＰ＋４ｍｇ／ｍｌＣＢＧ）、高剂量组（１２５μｍｏｌ／ＬＤＤＰ＋６ｍｇ／ｍｌＣＢＧ）、抑制剂组（１２５ μｍｏｌ／ＬＤＤＰ＋６ｍｇ／ｍｌＣＢＧ＋６ μｍｏｌ／ＬＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ抑制剂）。１．２．４平板克隆实验评估细胞的克隆增殖能力将Ａ２７８０／ＤＤＰ细胞按５００个／孔的密度接种于６孔板中，待细胞贴壁生长后按分组更换含药培养基。持续培养２周，期间每隔４ｄ换液。培养结束后，弃

神经生长因子受体介导的黑色素瘤抗原编码基因同源蛋白对牙髓细胞增殖的影响

神经生长因子受体介导的黑色素瘤抗原编码基因同源蛋白对牙髓细胞增殖的影响陆梦婷;颜娅楠;唐凤勤;祁胜财;张旭;徐远志【期刊名称】《口腔医学》【年(卷),期】2016(036)012【摘要】目的探索神经生长因子受体介导的黑色素瘤抗原编码基因同源蛋白(NRAGE)对人牙髓细胞(hDPCs)和小鼠成牙本质细胞(MDPC-23)细胞增殖的影响.方法重组慢病毒转染细胞稳定敲除hDPCs和MDPC-23的NRAGE表达,体外组织块法原代培养hDPCs和MDPC-23,进而检测NRAGE对hDPCs和MDPC-23的增殖影响.采用CCK-8法分析NRAGE对hD-PCs和MDPC-2细胞增殖的影响,流式细胞术分析NRAGE对hDPCs和MDPC-23的细胞周期分布和细胞凋亡影响.免疫荧光法检测NRAGE和NF-κB的表达和定位,分析NF-κB蛋白表达水平,并用IKK抑制剂处理细胞后,分析细胞周期和细胞凋亡.结果重组慢病毒转染后NRAGE 的mRNA和蛋白水平下降显着.NRAGE敲减后抑制了hDPCs和MDPC-23的增殖活性和凋亡.NRAGE敲减后显示hDPCs的G0G1期滞留显著,而对MDPC-23没有影响.同时,NRAGE敲减后激活NF-κB信号通路.IKK抑制剂可以抑制NRAGE 敲除后对hDPCs和MDPC-23的细胞凋亡的抑制作用.结论 NRAGE敲减后抑制牙髓细胞的增殖活性.NRAGE通过NF-κB信号通路调控hDPCs的细胞周期和凋亡.%Objective To investigate the effects of neurotrophin receptor-mediated melanoma antigen-encoding gene homology ( NRAGE) on proliferation of human dental pulp cells ( hDPCs) and MDPC-23. Methods Cells were infected by recombinant lenti-virus to stably knock down theexpression of NRAGE, then in vitro tissue explant method was used to conduct the primary culture of the hDPCs and MDPC-23, and the biological effects of NRAGE on the hDPCs and MDPC-23 were detected. Cell Counting Kit-8 was used to analyze effects of NRAGE on hDPCs and MDPC-23 proliferation, then the cell cycle distributions and apoptosis of hDPCs and MD-PC-23 were performed by flow cytometric analysis. Simultaneously, the cell cycle and apoptosis were also detected after cells treated with IKK inhibitor.Then, mRNA and protein levels of NRAGE and nuclear factor-κB ( NF-κB) protein expression were detected. Im-munofluorescence assay was used to detect expression and location of NRAGE and NF-κB. Results The mRNA and protein levels of NRAGE decreased significantly after infected by recombinant lentivirus. Knockdown of NRAGE inhibited the proliferation and apoptosis of hDPCs and MDPC-23. Knockdown of NRAGE showed significant G0G1 retention in hDPCs, while no significant difference in MD-PC- 23. Meanwhile, knockdown of NRAGE activated the NF-κB signaling path way. After treated with IKK inhibitor, the effect of NRAGE knockdown on apoptosis was reversed in both hDPCs and MDPC-23. Conclusion Knockdown of NRAGE can inhibit prolifer-ation of hDPCs and MDPC-23. NRAGE is a potent regulator for cell cycle and apoptosis of hDPCs. Knockdown of NRAGE can inhibit apoptosis of hDPCs and MDPC-23 through the NF-κB signaling pathway.【总页数】8页(P1057-1064)【作者】陆梦婷;颜娅楠;唐凤勤;祁胜财;张旭;徐远志【作者单位】南京医科大学口腔疾病研究江苏省重点实验室,南京 210029;南京医科大学口腔疾病研究江苏省重点实验室,南京 210029;同济大学附属第十人民医院口腔科,上海 200072;同济大学附属第十人民医院口腔科,上海 200072;同济大学附属第十人民医院口腔科,上海 200072;同济大学附属第十人民医院口腔科,上海200072【正文语种】中文【中图分类】R780.2【相关文献】1.转染针对黑色素瘤抗原编码基因的短发夹RNA真核表达载体对SGC7901细胞增殖及凋亡的影响 [J], 程传耀;黄忻;丁一;张娓;张钦宪2.微小RNA-145-5p靶向抑制同源形成素样蛋白2基因介导Notch信号通路对口腔鳞状细胞癌细胞增殖、凋亡的调控机制 [J], 冯素亚; 郭佳; 路学文3.卵巢浆液性癌组织中同源异型蛋白-6和白细胞分化抗原147表达及与细胞增殖相关性研究 [J], 王莉;蔡旺4.黑色素瘤抗原编码基因家族新成员MAGE-D1的组织表达谱研究 [J], 张成岗;贺福初5.慢病毒介导SHCBP1低表达对黑色素瘤B16细胞增殖的影响 [J], 孙志阳;冯光;雷静静;唐铖铖;孙晨皓;王令;路宏朝因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

在黑色素瘤中异常表达的MHC II类受体

在恶性黑色素瘤中MHC II类分子的异常表达吸引炎性肿瘤特异性CD4 +T-Cells并降低CD8+ T细胞的抗肿瘤反应Aberrant Expression of MHC Class II in Melanoma Attracts Inflammatory Tumor-Specific CD4+ T-Cells, Which Dampen CD8+ T-cell Antitumor Reactivity摘要在不存在局部炎症反应情况下，MHC类型Ⅱ分子表达主要限制在造血细胞和胸腺上皮细胞。

然而，某些肿瘤，如黑色素瘤，可能获得MHC II类的异常组成性表达。

在一组初级黑素瘤细胞群体的和相应地扩大了自体肿瘤浸润淋巴细胞（TIL）中，我们将展示在具有高度MHC II类分子特异性及肿瘤有特异性T细胞应答的黑色素瘤细胞中，MHC II是如何表达的。

值得注意的是，我们发现，肿瘤特异性CD4+ T细胞应答是由TNF产生支配。

在IFNγ丰富的环境中，TNF降低CD8+ T细胞激活类似肿瘤部位的能力。

相反，直接的CD4+ T细胞反应对无论是黑色素瘤细胞的增殖或活力无影响。

总之，我们的结果表明了一种被MHC II 类分子的异常表达激活的新免疫逃离机制的存在，这种机制靠吸引肿瘤特异性CD4 + T细胞引发肿瘤坏死因子主导的局部炎症反应转而去抑制CD8 +T细胞的反应。

Cancer Res; 75(18); 3747–59.2015 AACR.引言在没有局部的炎症反应的情况下，MHC II型表达主要限于造血细胞和胸腺上皮。

然而，某些类型的实体瘤，包括黑色素瘤亚单位，能从头组成表达MHC II类分子。

另外，通过暴露于细胞因子例如IFNγ的方法，MHC II类可在几种细胞类型(包括肿瘤细胞)中被诱导表达。

在黑色素瘤的MHC II类表达先前已发现与较短和较长的存活都相关联。

的确，MHC II 类表达可以使这些肿瘤被的肿瘤抗原特异性CD4 + T细胞直接检测。

一种抗黑色素瘤的CTL多表位肽及其应用[发明专利]

专利名称：一种抗黑色素瘤的CTL多表位肽及其应用专利类型：发明专利
发明人：孙树汉,单石,郭瀛军,章意亮,王越,刘音
申请号：CN201010534136.2
申请日：20101105
公开号：CN102030829A
公开日：
20110427
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明涉及医药生物学技术领域。

本发明提供一种抗黑色素瘤的CTL多表位DNA疫苗，其编码基因包括3个CTL表位一个Th通用表位和5个连接子，所表达的氨基酸序列如SEQ ID NO：5所示。

这种多表位编码基因与HBc(1-75aa)和HBc(75-144aa)相经PCR方法进行连接，组成嵌合基因，再与HLA-A*0201/K融合基因分别克隆到真核表达载体pIRES的多克隆位点A和B，构建成共表达载体，所述融合基因的诱导性表达质粒pc-HH，长度为9.3kb的环形双链。

本发明所提供的抗黑色素瘤CTL多表位疫苗具有肿瘤细胞特异性、能在体内稳定表达、制备简单，制备成本低廉等特点。

申请人：中国人民解放军第二军医大学
地址：200433 上海市翔殷路800号
国籍：CN
代理机构：上海德昭知识产权代理有限公司
代理人：丁振英
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黑色素瘤干细胞标志物研究及其相关治疗:认识与针对性

黑色素瘤干细胞标志物研究及其相关治疗：认识与针对性吴星;袁定芬【摘要】BACKGROUND: Melanomas, a highly malignant tumor of the skin, have no effective therapy to date. OBJECTIVE: To review the melanoma stem cell markers identified and existing therapies. METHODS: We retrieved database of CNKI and PubMed for articles addressing melanoma stem cell markers and targeted therapies, which were published from January 2010 to December 2016. The key words were"melanoma, cancer stem cell, marker, therapy" in Chinese and English, respectively. RESULTS AND CONCLUSION: Forty articles were included in the final review. It is important to separate cancer stem cells from tumor cells by tumor stem cell markers for the study of tumor growth, recurrence, metastasis and drug resistance. There are still no generally recognized markers of melanoma stem cells, but the generally studied markers are CD20, CD133, CD271, ABCB5 and SOX10. To date, we have a poor understanding of melanoma stem cell markers, and further investigations on the markers and targeted therapies are warranted.%背景:黑色素瘤是一种高度恶性的皮肤肿瘤,临床上缺乏有效的治疗手段.目的:就目前已发现的黑色素瘤干细胞标记物及其相关的治疗手段做一综述.方法:使用计算机在PubMed数据库和中国知网数据库检索2010年1月至2016年12月关于黑色素瘤干细胞标志物以及黑色素瘤干细胞治疗的相关文献,中文检索关键词为"黑色素瘤干细胞,标志物,治疗",英文检索关键词"melanoma,cancer stem cell,marker,therapy".结果与结论:共纳入符合标准的文献40篇.利用肿瘤干细胞表面标志物从肿瘤组织中筛选和分离出肿瘤干细胞对研究肿瘤的生长发展、侵袭转移以及复发耐药的机制至关重要.黑色素瘤干细胞尚无公认的标记物,目前研究较多的有CD20、CD133、CD271、ABCB5和SOX10.黑色素瘤干细胞的相关治疗则主要集中在针对其表面标志物、异常信号通路和微环境等方面.当前,对黑色素瘤干细胞标记物的认识仍十分有限,且其相关性研究也存在着针对性不强的问题,需待更进一步研究.【期刊名称】《中国组织工程研究》【年(卷),期】2018(022)001【总页数】6页(P152-157)【关键词】黑色素瘤;肿瘤干细胞;标记物;靶向治疗;CD133;CD271;ABCB5;微环境;信号通路;干细胞【作者】吴星;袁定芬【作者单位】上海交通大学附属第六人民医院皮肤科,上海市 200233;上海交通大学附属第六人民医院皮肤科,上海市 200233【正文语种】中文【中图分类】R394.20 引言 Introduction尽管早在1975年美国食品药品监督管理局(FDA)就批准达卡巴嗪(DTIC)用于晚期黑色素瘤的治疗，但由于其不良反应及耐药性，往往不能取得令人满意的疗效。

溶剂诱导黑色素瘤抗原基因-2特定表位多肽异构的LCMS研究

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乙醇溶解的表位多肽酸化后的总离子流色谱图（"）及子离子流色谱图（#）
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成的表位多肽进行梯度反相高效液相色谱（ DE$
［&］分析制备，以确保下一步细胞功能性 FEGH C L M）研究即细胞杀伤验证的特异性； <=>+$! 的众多表
位多肽都表现较强的疏水性，虽然分析制备前可供疏水肽选择的有机溶剂系统较多，但乙醇及甲醇溶剂系统可能最具代表性。用乙醇或甲醇溶解 <=>+$! 疏水性表位多肽样品进行色谱分析时发现，合成的 <=>+$! 表位多肽在检测波长为 !#; :, 时峰面积的百分比都偏小，显示其合成时氨基酸偶联率较低，由此结果推出的低偶联率与理论上单个氨基酸的平均偶联率（’’ N %J ）差距太大；下一步骤表位多肽的氨基酸组成分析也未发现有诸如半胱氨酸等可能导致折叠异构的氨基酸存在。为了解除这一困惑，本实验随机选用了固相合成的 <=>+$! 表，通过不同溶剂处理后，利用 GH C 位多肽（#)# B #)’） <@ 技术对其反相色谱行为作了初步的研究。