第20章浊度自动化仪器分析-2019

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抗体
• 抗体的质量
特异性强，效价高，亲和力强，R型
• 抗体的含量
抗体过量
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• 抗体的特异性
抗体只针对相应的抗原，非特异性的交叉反应会 引起伪浊度。
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• 抗体的效价
一个合格的比浊用抗体其效价必须在1：20（抗 体稀释度）以上，否则易形成伪浊度。
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第二十章 免疫检验自动化仪器分析
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本章重点
1．了解免疫检测自动化的基本概念 2．了解免疫检测自动化设计的基本原理 3．了解免疫检测自动化仪器在临床上的应用 4．掌握常用的几种免疫检测自动化仪器的检测 原理、应用以及评价，
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免疫检验自动化 (automation of immunoassays) 是将免疫学反应检测过程中的取样、加试剂、 混合、温育、固相载体分离、信号检测、数 据处理、打印报告和检测后的仪器清洗等步 骤由计算机控制，自动化进行。
式中Iθ为与入射光成θ角处散射光强度；λ和I0为入射光的波长和强度； dn/dc为校正因子，反映了溶液折射指数和颗粒浓度的变化；M为颗粒分 子量；c为浓度；N为阿佛加德指数；γ为颗粒到检测器的距离；θ为散射 光与入射光的夹角（散射夹角）。
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颗粒直径<1/10λ Rayleigh 散射 1/10λ<颗粒直径≤λ Debye 散射
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㈡速率散射比浊法（rate nephelometry） 速率散射比浊法是抗原抗体结合反应的动力学测定法。 所谓速率是指抗原抗体反应在单位时间内形成免疫复 合物的速度（不是免疫复合物累积的量），连续测定 各单位时间内复合物形成的速率与其产生的散射光信 号联系在一起，形成动态的速率散射比浊法，每项检 测仅1min～2min即可完成。
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第一节 自动化免疫浊度分析系统
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免疫浊度分析属液相沉淀试验，其基本原理是： 抗原、抗体在特定的电解质溶液中反应，形成小 分子免疫复合物（<19S），在增浊剂（如PEG、 NaF等）的作用下，迅速形成免疫复合物微粒 （>19S），使反应液出现浊度。在抗体稍微过量 且固定的情况下，形成的免疫复合物量随抗原量 的增加而增加，反应液的浊度亦随之增大，即待 测抗原量与反应溶液的浊度呈正相关。
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表 抗原抗体复合物形成的速率
累计时间（s） 形成IC总量 速率 累计时间（s） 形成IC总量 速率
5
8
－
35
10
13
5
40
15
25
12
45
20
60
35
50
25
150
90
55
30
230
80
60
300
70
3Leabharlann Baidu0
60
415
55
450
45
480
30
500
20
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• H型抗血清
以马为代表的大动物血清，如驴、骡、马等动 物的免疫血清。
该血清亲和力弱，抗原抗体结合后极易再解离 ，抗原过剩和抗体过剩皆易形成可溶性复合物。
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• pH：6.5~8.5 • 离子强度：在一定范围内，离子强度大，IC形
成快；离子强度过低或无电解质存在，则不易出 现可见的沉淀反应。
• 抗体的亲和力
亲和力强则抗体活性高，不仅可以加快抗原抗体 反应速度，而且形成的免疫复合物较牢固，不易 发生解离。
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• R型抗血清
以家兔为代表的小动物血清，如豚鼠、大白鼠 、家兔、家禽、羊等动物的免疫血清。
这类抗血清亲和力高，与抗原结合后不易再解 离，抗体过剩时易形成大而稳定的复合物，抗原 过剩时则形成可溶性复合物。
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一、免疫透射比浊法
【原理】 一定波长的入射光线通过抗原抗体反应 后的溶液时，被其中的免疫复合物微粒吸收、反射 和折射而减弱(图9-7)，在一定范围内，吸光度与免 疫复合物量呈正相关，而形成的免疫复合物量与参 与反应的抗原和抗体的量呈函数关系。与已知浓度 的抗原标准品比较，可确定标本中抗原含量。
颗粒直径≥λ Mile 散射
㈠定时散射比浊法（fixed time nephelometry） 定时散射比浊法是在保证抗体过量的情况下，加入待测抗 原，此时反应立即开始，在反应的第一阶段，溶液中产生 的散射光信号波动较大，所获取的信号计算出的结果会产 生一定的误差。定时散射比浊法是避开抗原抗体反应的不 稳定阶段，即散射光信号在开始反应7.5s～2min内的第一 次读数，专门在抗原抗体反应的最佳时段进行读数，将检 测误差降到最低。
抗原抗体反应速率的动态变化
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BN ProSpec全自动特定蛋白分析仪
• BNP防抗原过量的设计：
• 优化反应条件，令初始稀释度分析范围更宽，保 证抗原抗体反应呈最佳比例
• 预反应程序：IgM，LamU，AlbU，β2MU • VLinIntegral计算程序
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三、免疫散射比浊法
【原理】 粒子对光线的散射作用是溶液中的微粒子受 到光线照射后，微粒子对光线产生反射和折射而 形成散射光。悬浮微粒对光散射形成的散射光强 度与微粒的大小、数量、入射光的波长和强度、 测量角度等因素密切相关，其公式如下：
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Iθ＝ I0［4π2（dn/dc) 2 Mc(1+cosθ)］ Nγ2λ4
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二、免疫胶乳比浊法
原理 用抗体致敏的大小适中、均匀一致的胶乳颗粒（一般为 0.2 μm），在遇到相应抗原时，胶乳颗粒上的抗体与抗原特异结 合，引起胶乳颗粒凝聚 ，使透射光和散射光即出现显著变化。 如图所示：a为单个胶乳颗粒不阻碍光线透过，b为抗原抗体结 合形成的凝聚胶乳大颗粒使透射光减弱或散射光增强。
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定时散射比浊法测定原理示意图
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IMMAGE全自动特定蛋白分析仪
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抗原抗体反应的特点
一、特异性 二、比例性 三、可逆性
抗原抗体反应的影响因素
一、抗体来源：兔，羊，--二、亲合力 三、浓度 四、电解质，(增浊剂) 五、pH 六、温度
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3. 增浊剂的使用 为了提高抗原抗体复合物的形成速度，常常要加入 增浊剂，如分子量为6000～8000的3%～4% 聚乙 二醇（PEG）或吐温-20（tween-20），以消除蛋 白质分子周围的电子云和水化层，促进抗原抗体结 合。但PEG浓度过高，分子量过大会引起血清中其 他蛋白质（如IgM、α2巨球蛋白、脂蛋白）非特异 性沉淀，形成伪浊度。因此，使用恰当的增浊剂，