康贝对隐性乳房炎奶牛红细胞免疫的影响

康贝对隐性乳房炎奶牛红细胞免疫的影响李睿文1,宋春丽1,李铁拴2,宫新城1,周平平1,池景志2,刘占民1 (1.河北农业大学中兽医学院,河北定州073000;2.河北农业大学动物科技学院,河北保定071001)
中图分类号:S857.2 文献标识码:B 文章编号:052926005(2005)0620023202
康贝是由北京东方联鸣科技发展有限公司从美国引进的一种高效生物活性制剂,是美国B i o system 公司利用最新的生物发酵工程技术突破传统的生产工艺而得到的产品,在美国应用5年并且通过美国农业部认证,是纯生物活性制剂,不含任何激素及抗生素。

康贝主要是由酵母菌、米曲霉、枯草杆菌、乳酸杆菌等组成的混合制剂,不仅含有多种消化酶如Α2淀粉酶、Β2葡聚糖酶、半纤维素酶和纤维素酶等,具有促进消化作用,而且康贝还含有奶牛机体必需氨基酸及多种维生素。

实际应用效果显著,可改善奶牛饲料适口性,提高干物质采食量,增加产奶量,改善乳汁品质。

前期实验研究中应用康贝防治奶牛隐性乳房炎取得了良好的效果,本文对康贝提高隐性乳房炎奶牛的免疫功能进行了初步研究,以探讨康贝防治奶牛隐性乳房炎的机理。

1　材料与方法
1.1　实验动物　河北农业大学标本园奶牛场和河北农业大学教学实验农场奶牛场中国荷斯坦奶牛168头,乳区658个。

1.2　药品与仪器　康贝(北京东方联鸣科技发展有限公司提供);肝素钠(天津生物化学制药厂,批号20000701);瑞氏2姬姆萨染液(自配),致敏性与非致敏性酵母多糖(上海昌海医院免疫室);离心机,显微镜,恒温培养箱等。

1.3　试验分组　采用C M T法、4%苛性钠法及体细胞计数法综合检测隐性乳房炎,诊断方法及判定标准参见《兽医产科学》。

随机选取年龄4～6岁,产后4～5个月,全身状况良好,无临床症状,乳房及乳汁无肉眼可见和临床异常的隐性乳房炎阳性奶牛20头作为治疗组(乳区76个,其中阳性乳区为38个),选取阳性奶牛8头作为阳性对照组(乳区30个,其中阳性乳区16个),符合上述要求的阴性奶牛6头作为阴性对照组。

治疗组每头奶牛口服康贝20g 天,试验期为2个月。

1.4　血样采集　从治疗组随机选取8头奶牛,于试验期间0、14、28、56天颈静脉采血,0天时除采治疗
收稿日期:2004204207
通讯作者:刘占民组与阳性对照组血样外,对阴性对照组也进行采血,进行生理值的测定。

1.5　红细胞免疫力的测定　应用改良酵母法测定,参照郭峰红细胞C3b受体花环(C3b RR)和免疫复合物花环(I CR)以及红细胞免疫调节因子活性测定原理和方法进行。

1.6　统计学方法　应用SA S及EXCEL统计学软件对数据进行统计学分析。

2　结果
2.1　隐性乳房炎阴性奶牛与阳性奶牛红细胞C3b受体花环率(E2C3b RR)及免疫复合物花环率(E2I CR)的比较　由表1可看出,隐性乳房炎阳性奶牛E2C3b RR 明显低于阴性奶牛,阳性奶牛E2C3b RR为11.08%±
1.06%,阴性奶牛E2C3b RR为18.67%±1.26%;E2
I CR明显高于阴性奶牛,阳性奶牛E2I CR为6.58%±1.16%,阴性奶牛E2I CR为4.82%±1.13%。

经统计学分析,隐性乳房炎阳性奶牛与阴性奶牛E2C3b RR、E2I CR差异极显著(P<0.01)。

表1　隐性乳房炎阴性奶牛与阳性奶牛E-C3b RR
及E-I CR的比较(%)
组别E2C3b RR E2I CR 阳性组(N=8)11.08±1.06336.58±1.1633
阴性组(N=6)18.67±1.264.82±1.13
注:33为差异极显著(P<0.01)。

2.2　康贝对隐性乳房炎奶牛E2C3b RR及E2I CR的影响　由表2可看出,治疗组喂服康贝后E2C3b RR 明显升高,投喂康贝4周后,E2C3b RR由投喂前的10.96%±1.18%升高到17.97%±1.23%。

经统计学分析,治疗组E2C3b RR投喂后与投喂前差异极显著(P<0.01),而对照组差异不显著(P>0.05)。

由表3可看出,治疗组喂服康贝后E2I CR明显降低,投喂康贝4周后,E2I CR由投喂前的6.32%±1.13%降低到4.97%±1.08%。

经统计学分析,治疗组E2I CR投喂后与投喂前差异极显著(P<0.01),而对照组差异不显著(P>0.05)。

2.3　康贝对红细胞免疫调节因子的影响　通过对E2 C3b RR促进率(R FER)和抑制率(R F I R)的检测,来反映红细胞免疫吸附促进因子和抑制因子活性的变化。

32
Ch inese Journal of V eterinary M edicine 中国兽医杂志2005年(第41卷)第6期
　表2　康贝对隐性乳房炎奶牛E-C3b RR的影响(%)
组别投喂前
投喂后(周)
246
治疗组(N=8)10.96±1.1815.37±1.6417.97±1.233318.37±1.4033
对照组(N=6)11.08±1.0610.64±1.2110.34±1.4010.34±1.09
33为差异极显著(P<0.01)。

表3　康贝对隐性乳房炎奶牛E-I CR的影响(%)
组别投喂前
投喂后(周)
246
治疗组(N=8)6.32±1.135.04±1.234.97±1.08334.82±1.1333对照组(N=6)6.58±1.166.54±1.516.56±1.256.15±1.20 33为差异极显著(P<0.01)。

2.3.1　隐性乳房炎阴性奶牛与阳性奶牛红细胞免疫调节因子的比较　由表4可看出,隐性乳房炎阳性奶牛R FER明显低于阴性奶牛,阳性组RR ER为75. 06%±7.62%,阴性组为94.64%±8.46%;R F I R明显高于阴性奶牛,阳性组为35.49%±2.35%,阴性组为20.49%±2.35%。

经统计学分析,
表4　隐性乳房炎阴性奶牛与阳性奶牛
红细胞免疫调节因子的比较(%)组别R FER R F I R
阳性组(N=8)75.06±7.623335.76±2.6733
阴性组(N=6)94.64±8.4620.49±2.35
33为差异极显著(P<0.01)。

差异极显著(P<0.01)。

2.3.2　康贝对红细胞免疫促进因子的影响　由表5可看出,治疗组喂服康贝后R FER明显升高,投喂康贝4周后,R FER由投喂前的76.23%±6.57%,经统计学分析,治疗组R FER投喂后与投喂前差异极显著(P<0.01),而对照组差异不显著(P>0.05)。

由表6可看出,治疗组喂服康贝后R F I R明显降低,投喂康贝4周后,R F I R由投喂前的36.76%±2.46%降低到20.37%±1.95%,经统计学分析,治疗组R F I R投喂后与投喂前差异极显著(P<0.01),而对照组差异不显著(P>0.05)。

表5　康贝对E-C3b RR促进率(RFER)的影响(%)
组别投喂前
投喂后(周)
246
治疗组(N=8)76.23±6.5789.56±7.5294.09±7.893395.07±8.0633
对照组(N=6)75.06±7.6274.67±6.7974.82±8.4672.34±7.94
33为差异极显著(P<0.01)。

表6　康贝对E-C3b RR抑制率(RF IR)的影响(%)
组别投喂前
投喂后(周)
246
治疗组(N=8)36.76±2.4626.56±2.0920.83±2.383320.37±1.9533对照组(N=6)35.49±2.3534.67±1.7937.82±1.4636.26±1.94 33为差异极显著(P<0.01)。

3　讨论
红细胞结构简单,没有细胞核和细胞器,只有细胞膜,因而过去一直认为红细胞只参与呼吸功能,没有免疫功能。

大量研究表明红细胞有识别、粘附、浓缩、杀伤抗原、清除免疫复合物的功能,参与机体免疫调控,并有完整的自我调控系统。

红细胞免疫黏附功能的最重要作用是通过C3b受体黏附循环免疫复合物。

当机体感染病原微生物或其他致病因素的侵袭下,机体产生大量的免疫复合物(I C),I C沉着于组织某些部位,激活补体系统,亦可造成组织损害。

红细胞膜具有CR1,通过CR1,红细胞与抗原2抗体2补体复合物结合,并将其运送至肝脾固定吞噬系统,I C从红细胞上解离,被吞噬细胞吞噬清除,释放I C后的红细胞可再回到血循环中,仍具有结合I C的能力。

清除I C为红细胞的功能之一。

红细胞可调控机体淋巴细胞和细胞因子的免疫能力。

N K细胞(N atu re k iller cell)在体内担负着重要的免疫监视功能,红细胞能直接增强N K细胞的免疫活性。

Siegel等在兔血清中发现了抑制红细胞免疫粘附的因子,该因子为一不耐热物质,58℃30m in可除去其活性,推测该因子为一大分子物质,机体通过控制该因子的合成来调节红细胞免疫功能。

Y in等发现该因子为一种球蛋白,对热不稳定,有与赖氨酸结合的位点,该因子可阻止I C粘附到红细胞上,降低红细胞粘附携带I C的能力。

郭峰等还发现血清中除存在红细胞免疫抑制因子外,还存在着红细胞免疫
42中国兽医杂志2005年(第41卷)第6期 Ch inese Journal of V eterinary M edicine
猪多杀性巴氏杆菌的分离鉴定及毒素检测
索绪峰,王建新,姚德标,王大林,张嗣华,李碧思,王美燕
(海南省海口市罗牛山兽医站,,海南海口571133)
中图分类号:S858.285.1 文献标识码:B 文章编号:052926005(2005)0620025203
多杀性巴氏杆菌(p asteu rella m u ltocida,Pm)在世界各地分布非常广泛,在畜禽中带菌率较高,有资料[1]指出,猪的鼻道深处和喉头内,带菌率为30.9%。

多杀性巴氏杆菌按荚膜的不同可分为A、B、C、D和E5个血清型,其中A、B和D型已在猪中发现;多杀性巴氏杆菌还有16个体细胞血清型,在猪中检测到的有血清3型与5型[2],两者结合起来形成更多的血清型,不同血清型致病性和宿主特异性有一定的差异。

产毒素多杀性巴氏杆菌(tox igen ic p asteu rella m u ltocida,T+Pm)是引起猪进行性萎缩性鼻炎(p rogressive atrop h ic rh in itis,PA R)的主要因素[2]。

海南省大部分猪场在生长猪阶段,均会出现不同程度的萎缩性鼻炎(面部变形、结膜炎和有严重泪斑)症状,这些猪一般生长迟滞,速度减缓,产生僵猪,饲料报酬低,生长速度降低10%～30%[2、6],对畜牧生产造成巨大的经济损失。

为了了解海南省规模化猪场生长猪萎缩性鼻炎发生的病原情况,给预防与控制该病提供资料,笔者对有PA R症状的猪只进行采样,然后分离多杀性巴氏杆菌,同时对分离的多杀性巴氏杆菌进行了鉴定、药物敏感试验以及毒素检测。

报告如下。

收稿日期:2005201203
作者简介:索绪峰(1968-),男,工程师,从事预防兽医学研究
通讯作者:王大林1　材料与方法
1.1　病料来源　主要采自全省各地区,有东片区、西片区、南片区。

对有面部变形、泪斑和结膜炎症状的猪,用75%酒精鼻盘外部消毒后进行采样,棉签样品放入保护液中,在4～8℃条件下24h内送到实验室接种,保护液用灭菌的PB S(p edersen1983)[2],采集的样本接种于T SA平皿,37℃培养18～24h后观察,挑取有蓝色荧光、细小的短杆菌,透明、光洁、湿润的菌落进行革兰氏与瑞氏染色,对其传代并进行纯化。

1.2　生化鉴定与接种鉴别培养基　对已经纯化好的细菌进行生化试验:葡萄糖、果糖、甘露醇、麦芽糖、乳糖、鼠李糖、吲哚、M.R.、V2P、硝酸盐还原,并同时接种麦康凯琼脂[1]。

1.3　PCR鉴定　由华中农业大学动物病毒室完成。

本实验所用PCR引物如表1。

以上引物参照文献[10～12]及N CB I上发布的序列设计,由上海生工合成。

1.3.1　模板　用接种环挑取单菌落,悬浮于含50Λl 无菌水的离心管中,100℃水浴中煮5～10m in,然后迅速置于冰上冷却5m in,10000r m in离心2m in,上清即为PCR模板。

1.3.2　反应体系(25Λl)　10×T aq B uffer
2.5Λl,
粘附促进因子,该因子耐热,58℃不能灭活。

在正常人血清中促进因子活性明显大于抑制因子,患者抑制因子活性上升,促进因子活性下降,因而认为机体内存在着红细胞免疫正负调节机制,该调节机制紊乱可能是某些疾病发生发展的原因。

最近还发现Β2内啡肽、胸腺素、转移因子等对红细胞免疫功能有促进作用,说明神经内分泌系统、白细胞系统亦参加红细胞免疫功能的调控。

在许多疾病免疫发病机理中,红细胞免疫缺陷占有很重要的地位。

据王秋芬等报道,奶牛隐性乳房炎的发生与红细胞免疫功能降低有关。

本试验中采用“E2C3b RR”和“E2I CR”来确定红细胞免疫粘附活性以及“R FER和P IER”试验确定血清红细胞免疫调节因子活性,来评价红细胞的免疫功能。

结果表明,隐性乳房炎阳性奶牛E2C3b RR明显低于阴性奶牛,E2I C明显高于阴性奶牛,差异极显著(<0.01);隐性乳房炎阳性奶牛的R FER低于阴性奶牛,而R F I R高于阴性奶牛。

这说明奶牛患隐性乳房炎时红细胞免疫力下降,致使炎症进一步发展。

治疗组喂服康贝4周后E2C3b RR明显升高,E2I CR明显降低;R FER明显升高,R F I R明显下降,差异极显著或显著。

而对照组变化不明显。

这一结果表明,康贝可提高机体红细胞免疫粘附能力,快速清除免疫复合物,使乳腺炎症消散。

这一结果较其他报道的数据偏高,可能与个体差异、测试温度、抗凝剂的用量有关。

志谢:河北农业大学动物科技学院李呈敏教授、钟秀会教授对本研究工作指导和帮助;在试验过程中得到河北农业大学实验农场二分场王铁征场长、奶牛场场长刘双玉、河北农业大学标本园池景志老师的帮助。

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Ch inese Journal of V eterinary M edicine 中国兽医杂志2005年(第41卷)第6期。