电泳凝胶银染法
SSR的聚丙烯酰胺凝胶电泳分离与银染检测技术实验报告
SSR的聚丙烯酰胺凝胶电泳分离与银染检测
技术实验报告
实验报告。
实验名称，SSR的聚丙烯酰胺凝胶电泳分离与银染检测技术。
实验目的，通过聚丙烯酰胺凝胶电泳分离技术，对SSR （Simple Sequence Repeat）进行分离和检测，利用银染技术对分离的片段进行可视化检测。
实验步骤：
1. 提取DNA样品并进行PCR扩增，得到含有SSR序列的DNA片段。
2. 准备聚丙烯酰胺凝胶电泳，将PCR产物加入样品槽中，进行电泳分离。
3. 取出凝胶，进行银染处理，使得SSR片段能够被可视化。
实验结果：
通过聚丙烯酰胺凝胶电泳分离，我们成功地分离出了含有SSR 序列的DNA片段，并进行了银染处理。
在凝胶上可以清晰地观察到SSR片段的条带，证明了我们的实验取得了成功的结果。
实验分析：
通过本次实验，我们成功地运用了聚丙烯酰胺凝胶电泳分离技术和银染检测技术，对SSR进行了分离和检测。
这为我们进一步研究SSR的应用提供了可靠的实验基础。
存在问题及改进措施：
在实验过程中，我们发现在PCR扩增时，需要对反应条件进行进一步优化，以提高PCR产物的质量和数量。
在电泳分离中，也需要注意凝胶的制备和运行条件，以获得更好的分离效果。
结论：
通过本次实验，我们成功地利用聚丙烯酰胺凝胶电泳分离技术和银染检测技术，对SSR进行了分离和检测。
这为我们今后进一步
研究SSR的应用提供了重要的实验基础。
编写人，XXX 日期，XXXX年XX月XX日。
双向电泳凝胶银染操作流程.
2.银染液成分：
(18cm 胶)每块用 500 ml 银染液
成分
(7cm 胶)
(18cm 胶)
(克，毫升,微升) 100 mlⅹ1 500mlⅹ1 500mlⅹ2 500mlⅹ3 500mlⅹ4
AgNO3
0.25 g
1.25 g
2.5g
3.75g
5.0g
1
北京基因组研究所-阳光
纯水
定容
定容
定容
定容
北京基因组研究所-阳光
双向电泳凝胶银染操作流程
目的：检测聚丙烯酰胺凝胶中的蛋白质。
原理：在碱性条件下，用甲醛将蛋白带上的硝酸银（银离子）还原成金属银，使
银颗粒沉淀在蛋白带上。
一、固定：过夜+10minⅹ3
1.方法：1）.固定 30min 后纯水洗 10minⅹ3。2）.固定过夜后纯水洗 10minⅹ3（推荐）。
1.24g
6.20 g
12.4g
18.6g
24.8g
纯水
定容
定容
定容
定容
定容
总体积
100 ml
500ml
1000 ml
1500 ml
2000 ml
K3Fe(CN)6：铁氰化钾，深红色菱形结晶，比重 1.845，在碱性介质中为强氧化剂； Na2S2O3·5H2O：易溶于水，水溶液呈弱碱性，不溶于乙醇。
Glycine
0.4 g
2g
4g
6g
8g
纯水
定容
定容
定容
定容
定容
总体积
100 ml
500ml
1000 ml
1500 ml
2000 ml
甘氨酸：Glycine，75.07（可以用 EDTA 代替，3.65g 的 EDTA.2H2O 相当于 1g 甘氨酸） 六、（补充）：脱色
SSR的聚丙烯酰胺凝胶电泳分离与银染检测技术实验报告
SSR的聚丙烯酰胺凝胶电泳分离与银染检测技术实验报告英文回答：Introduction。
Single-stranded RNA (SSR) is a type of RNA that is not double-stranded like most other types of RNA. It is found in some viruses and in some eukaryotic cells. SSR can be separated by polyacrylamide gel electrophoresis (PAGE) and visualized by silver staining.Materials and Methods。
SSR sample。
10% polyacrylamide gel。
Electrophoresis buffer。
Silver staining solution。
UV transilluminator。
Procedure。
1. Load the SSR sample onto the polyacrylamide gel.2. Run the gel at 100 volts for 2 hours.3. Stain the gel with silver staining solution for 30 minutes.4. Visualize the SSR bands under a UV transilluminator.Results。
The silver staining revealed several SSR bands in the gel. The bands were of different sizes, indicating that the SSR sample contained SSRs of different lengths.Discussion。
DNA的银染
（下列加液量以刚好覆盖凝胶为宜）
电泳完毕后，撬开玻璃板，将粘有凝胶的玻璃板置于塑料盘（ 不要碰凝胶表面！）
用蒸馏水漂洗两次，并取出玻璃板 去水后，用10%乙醇进行凝胶固定 10 min，轻摇 去乙醇，水洗、加入1%硝酸，轻摇5min 吸出硝酸，用蒸馏水漂洗2次
加入0.2%硝酸银溶液，轻摇20min 蒸馏水漂洗3次 去水后，加入显色液，在非直射光线下观察显色 观察区带出现，效果最佳时移除显色液 加入3%乙酸，轻摇5min 移除3%的乙酸溶液，10%乙醇洗涤1次 观察结果
聚丙烯酰胺凝胶中DNA的银染
原理
在弱酸环境下银离子可以与DNA结合，碱性甲
醛溶液可以将结合的银离子还原成金属银，显影成
DNA非变性PAGE胶 试剂及其功能：
10%乙醇 1%硝酸 0.2%硝酸银 显色液（3% Na2CO3，1%甲醛，新鲜配制）
3%乙酸
实验操作及注意事项
非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳及银染实验修改版
非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳及银染实验一变性聚丙烯酰胺凝胶电泳配制溶液：1、30% Acrylamide（14.5 g 丙烯酰胺，0.5g 双丙烯酰胺，加水溶解，定容至50 ml，4℃，棕色瓶中储存）2、10% 过硫酸铵（0.5g APS，溶于5ml 去离子水中，4℃可储存数个月）3、10 ×TBE 缓冲液（10.8g Tris,0.744g EDTA,5.5g 硼酸，定容到100ml）4、TEMED5、20-200 DNA marker实验步骤：1、配置10%的胶10ml：5.5 ml water3.3ml 30% Acrylamide1ml 10 ×TBE0.11ml APS（现配现用）0.01mlTEMED2、立即将胶倒入两块板间并插好梳子，放置，待凝固30min，时间可以适当延长。
3、向电泳槽加入1×TBE，拔出梳子并用注射针筒多次洗涤点样孔，尽可能排除未聚合的丙烯酰胺。
4、将DNA marker 加到点样孔中，以120V（10V/cm）进行电泳直到燃料走到靠近底部的三分之一处，大约需要60-90分钟。
二银染实验银染溶液的配置：实验之前准备4℃水1、固定液（10%醋酸）：20ml冰醋酸，180mlddH2O混匀（通风厨中进行）2、染色液：将0.1g AgNO3溶解于100 ml ddH2O中，使用前加0.15ml37%甲醛溶液，必须储存于避光瓶中，防止接触皮肤（通风厨中进行）3、显影液：将6g Na2CO3溶解于200ml ddH2O中，冷却至4℃，使用前加0.3ml37%甲醛溶液（通风厨中进行）30μl0.1M五水硫代硫酸钠；（0.1M Na2S2O3。
5H2O：将1.24g Na2S2O3。
5H2O溶于50ml ddH2O）。
放入冰箱中冷却到4摄氏度。
注意事项：1、染色液和显影液要现用现配；2、显影液必须在4℃使用且必须保存在4℃；3、甲醛蒸汽致癌，在通风厨内操作；4、实验室中柔和的背景光线有利于降低背景颜色；5、显色不能在透光的盒子中进行；6、溶液不能直接倒在胶面上，应使盘倾斜后将溶液倒在盘的角上，或者将每种溶液各方一盘，然后将胶从一个盘转到另一个盘；7、溶液的体积必须足够将胶全部浸没；8、显色过程中盘中须轻轻摇动。
PAGE银染方法
一、实验原理银染是一种重要的PAGE染色方法，由于其成本低，所用试剂安全、快速、灵敏度高而被广泛应用。
银染的原理是银离子在碱性pH 环境下被还原成金属银，沉淀在蛋白质的表面上而显色。
由于银染的灵敏度很高，可染出凝胶上低于1 ng/蛋白质点，故广泛的用在2D凝胶分析上，及极低蛋白含量测定的垂直凝胶中。
这里介绍的是一种实验室常用的银染方法，主要是用于垂直凝胶电泳中低丰度蛋白的检测。
二、实验试剂1. 乙醇、冰醋酸、乙酸钠、硫代硫酸钠、硝酸银、碳酸钠、甘氨酸或EDTA钠盐、去离子水、甲醛。
三、实验步骤1. 固定量取100ml 乙醇，25ml 冰醋酸加去离子水到250ml(视胶板大小情况，适当等比例配制，增加固定液量，以下相同。
)，使其终浓度达到 40% 乙醇，10% 冰醋酸。
将凝胶板浸入固定液中，固定30min以上。
2. 水洗去离子水浸泡。
3x 10 min。
2. 致敏生物科研提醒：量取75ml 乙醇，17g 乙酸钠或28.2g三水乙酸钠，0.5g硫代硫酸钠加去离子水到体积250ml。
将固定后的凝胶板拿起，浸入致敏液中，浸泡30 min。
4. 水洗去离子水浸泡。
3x 10 min。
5．银染0.625g AgNO3、100 ul 37%甲醛（在使用前加入）加去离子水到终体积250ml。
将胶板浸入银染液中，浸泡30 min。
6．水洗去离子水浸泡。
3x 20 sec。
注意把握时间，水洗时间长显色速度慢，点的颜色偏黄色。
水洗不充分，背景较深。
7．显色6.25 g Na2CO3、50 ul 37% 甲醛（在使用前加入）加去离子水到终体积250ml。
2-15min，显色时间视凝胶大小、厚薄情况而定。
看到各条带，即可将凝胶捞出。
8．终止3.65g EDTA钠盐或者1g 甘氨酸加去离子水到终体积250ml。
浸泡凝胶10 min。
9．保存1% 冰醋酸，4 ℃。
四、注意事项1．银染主要出现在胶的表面，用薄胶（0.5-0.75mm）可以提高灵敏度。
电泳银染色法
电泳银染色法
酸性染色法（5-10ng）
1固定液：(100ml)
50%乙醇
10% 乙酸
40% 蒸馏水
固定凝胶至少两小时或者过夜
2敏化液：(105ml)
醋酸钠 4.1g
无水硫代硫酸钠0.25g
乙醇25ml
戊二醛2ml （25%）1ml (50%)
双蒸馏水：75ml
敏化两小时, 然后洗涤2次，每次20分钟
3染色液：(100ml)
硝酸银0.1g
甲醛(分析纯) 0.1ml
洗涤几秒钟，然后浸泡30分钟，用水冲洗一下
4孵育液：(100ml)
无水碳酸钠 2.5g
孵育一分钟,时间要严格执行.用水冲一下。
5显影液：(100ml)
无水碳酸钠 2.5g
甲醛0.1ml
碳酸氢钠0.05g
显影5-20分钟显影明显时,立即倒入终止液,终止反应6终止液：(100ml)
EDTA 钠盐 1.86g
摇匀约15分钟终止反应,用蒸馏水冲洗.
7．保存液：1%冰醋酸于4℃条件下保存。
注意严格控制水温，常温即可。
保证所有染色器皿绝对的干净；水的纯度对染色结果好坏影响很大；染色过程避免用手去接触凝胶，必须戴上一次性手套或无粉乳胶手套;所用化学试剂一定是人分析纯(AR)。
SSR的聚丙烯酰胺凝胶电泳分离与银染检测技术实验报告
SSR的聚丙烯酰胺凝胶电泳分离与银染检测技术实验报告英文回答：Sodium dodecyl sulphate-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) and silver staining techniques experiment report。
Introduction。
Sodium dodecyl sulphate-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) is a technique used to separate proteins based on their molecular weight. The proteins are first denatured by boiling them in a solution containing SDS, a detergent that disrupts the protein's interactions and unfolds it. The denatured proteins are then loaded onto a polyacrylamide gel, which is a porous matrix that acts as a molecular sieve. When an electric current is applied to the gel, the proteins migrate through the gel at different rates, with smaller proteins moving faster than largerproteins.Silver staining is a sensitive technique used to visualize proteins on a polyacrylamide gel. The proteinsare first fixed to the gel by soaking it in a solution containing glutaraldehyde, a cross-linking agent that prevents the proteins from diffusing. The gel is then incubated in a solution containing silver nitrate, which binds to the proteins. The silver ions are then reduced to silver metal, which appears as a dark brown band on the gel.Materials and methods。
PAGE电泳过程及银染
PAGE 电泳过程及银染电泳过程1. 将玻璃板装入电泳槽，拧紧。
2. 做封口胶：称量2.5g琼脂，溶于125ml纯净水，放入微波炉大约2min，至冒大泡为止取出。
3. 用10ml的针管将琼脂打入电泳槽底部，左右晃一下使其密封好，待凝。
4. 一个槽的（8％）凝胶的配制：Acr:Bis(30%) 10ml5×TBE 0.75mlddH2O 20ml10%AP 400ulTEMED 20ul500ml Acri:Bis(30%)配制：丙烯酰胺（冷冻）142.5g甲叉丙烯双酰胺（冷冻）7.5g1000ml的5×TBE的配制：Tris 54g硼酸28gEDTA 3.72g 40ml的10%AP的配制：AP 4g配好后用枪头迅速搅动，倒入玻璃槽中，插梳子，待凝。
（动作要快）5. 从4℃冰箱中取出溴酚蓝缓冲液以及PCR产物，用排枪加入2ul 溴酚蓝缓冲液，1000rpm离心5s并编号使其在点样时与电泳仪上的编号一致。
溴酚蓝缓冲液的配制：溴酚蓝0.25g二甲苯青0.25gddH2O 60ml在磁力搅拌器上边加热边剧烈搅拌1至2h冷却蔗糖40g100ml中容量瓶中定容6. 凝胶20分钟后，将电泳槽装好，倒入1×TBE缓冲液，,准备点样。
1×TBE缓冲液用5×TBE稀释。
1000ml 5×TBE 加4000ml ddH2O7. 保证电泳槽奇数号码朝外，将PCR产物序号与电泳槽序号一一对应，开始点样，点样量为1.2ul，点完一个电泳槽后插上电线300V开始跑电泳大约跑25min。
继续点其它的电泳槽。
8. 全部点完后利用跑电泳的时间配溶液。
（1）固定液（小盘）：ddH2O 600ml无水乙醇40ml10%冰乙酸30ml（2）AgNO3溶液：AgNO3 1gddH2O 500ml（3）NaOH溶液：NaOH 9gddH2O 500ml（4）甲醛：甲醛6ml9. 电泳结束，拔下电源，全部跑完后关闭电泳仪电源。
电泳银染原理
电泳银染原理
电泳银染是一种常用的蛋白质分离和检测方法，广泛应用于生物学、生化学等领域。
其原理基于蛋白质的电泳分离和银离子还原反应。
电泳分离是将带电的蛋白质分子在电场作用下沿着凝胶中的孔道运移，从而实现蛋白质的分离和检测。
在电泳银染中，通常采用聚丙烯酰胺凝胶电泳分离，其原理是将蛋白质样品加入凝胶孔道中，在电场作用下，蛋白质分子根据大小、电荷等性质逐渐分离。
分离完成后，可以通过染色等方法进行检测。
银离子还原反应是电泳银染的核心步骤，其原理是在银离子存在的条件下，通过还原剂还原银离子成为固态银颗粒，从而实现蛋白质分子的染色。
常用的还原剂包括亚硫酸钠、甲醛等。
在电泳银染过程中，蛋白质分子与银离子结合形成银蛋白复合物，再通过还原剂的作用将银离子还原成银颗粒，最终形成黑色的银染带。
电泳银染的优点是灵敏度高、检测范围广、结果直观等。
但也存在一些缺点，如染色效果不稳定、重复性差、反应时间长等。
因此，在实际应用过程中需要根据具体情况进行调整和优化。
电泳银染是一种重要的蛋白质检测方法，其原理基于电泳分离和银离子还原反应。
虽然存在一些缺点，但其灵敏度高、检测范围广、结果直观等优点，使其在生物学、生化学等领域得到广泛应用。
银染操作步骤(精)
银染操作步骤1. 固定:电泳结束后,取凝胶放入约 100ml 固定液中,在摇床上室温摇动 20分钟,摇动速度为 60-70rpm 。
固定 40分钟以上甚至过夜可以进一步降低背景。
固定液的配制:依次加入 50ml 乙醇、 10ml 乙酸和 40ml MilliQ级纯水或双蒸水,混匀后即成 100ml 固定液,可大量配制室温存放。
2. 30%乙醇洗涤:弃固定液,加入 100ml 30%乙醇,在摇床上室温摇动 10分钟,摇动速度为 60-70rpm 。
30%乙醇的配制:70ml MilliQ级纯水或双蒸水中加入 30ml 乙醇,混匀后即成 100ml 30%乙醇。
3. 水洗涤:(洗 2次弃 30%乙醇,加入 200ml MilliQ级纯水或双蒸水,在摇床上室温摇动 10分钟,摇动速度为 60-70rpm 。
4. 增敏:(辅染现配现用弃水,加入 100ml 银染增敏液 (1X,在摇床上室温摇动 2分钟,摇动速度为 60-70rpm 。
银染增敏液 (1X的配制:99ml MilliQ级纯水或双蒸水中加入 1ml 银染增敏液 (100X,混匀后即为银染增敏液 (1X。
银染增敏液 (1X配制后需在 2小时内使用。
银染增敏液 (100X的配制:即 2.8%硫代硫酸钠溶液,需用黑袋包裹避光保存。
5. 水洗涤 (共 2次 :弃原有溶液,加入 200ml MilliQ级纯水或双蒸水,在摇床上室温摇动 1分钟,摇动速度为 60-70rpm 。
弃水,再加入 200ml MilliQ级纯水或双蒸水,在摇床上室温摇动 1分钟,摇动速度为 60-70rpm 。
6. 银染:弃水,加入 100ml 银溶液 (1X,在摇床上室温摇动 10分钟,摇动速度为 60-70rpm 。
银溶液 (1X的配制:99ml MilliQ级纯水或双蒸水中加入 1ml 银溶液 (100X,混匀后即为银溶液 (1X。
银溶液 (1X配制后需在 2小时内使用, 最好是现配现用。
DNA非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳银染配方及步骤
D N A非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳银染配方及步骤Hessen was revised in January 2021DNA非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳银染配方及步骤最近需要做DNA非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳,需要用银染显示条带,但是找不到具体的配方和步骤,不知和蛋白PAGE电泳银染有什么差别,哪位师兄师姐有配方可否发一份,十分感谢!一、电泳试剂：1、30％聚丙烯酰胺(29:1)丙稀酰胺29克，Bis1克，水100ml。
2、10％过硫酸胺过硫酸胺1克，水10ml。
3、TEMED4、5xTBETris 27克，硼酸克， EDTA(pH 10ml，定容至500ml。
二、银染试剂1、固定液：100ml无水乙醇，5ml冰醋酸，定容至1000ml。
2、% AgNO3：AgNO3 1克，水500ml。
3、% NaOH：NaOH 克，水500ml。
4、37％甲醛。
三、配胶(6%)：30％聚丙烯酰胺(29:1) 8ml，5xTBE 8ml，定容至40ml，加10％过硫酸胺 200ul；TEMED 20ul。
室温凝固时间>1小时。
四、银染：1、固定液固定10m。
2、水洗2m x3次。
3、% AgNO3 100ml ＋37％甲醛50ul，混匀，避光染色30～50m。
4、水洗 20秒x2次。
5、% NaOH 100ml，加37％甲醛，混匀，显色3～10m。
6、水洗若干次，终止显色。
电泳时间：150v x 3h，溴酚兰的位置相当于40bp。
银染后胶面积将膨胀10％。
在终止显色过程中，将依惯性继续显色，所以不等显色到位即可进行终止显色。
显色到位后立即拍摄，水浸泡过夜将使背景加深转贴！！！聚丙烯酰胺凝胶电泳是分子生物学常用的一种技术。
我们实验室应用该项技术进行基因组甲基化的筛选，取得了一定结果。
因为全基因组的筛选需要很高的灵敏度，背景干扰降到最低，因此在对凝胶进行染色时，往往采用同位素法或银染法，而且配制的胶往往很大，我们配制的是大约40×35cm的胶，厚。
SDS-PAGE 银染步骤
1. 电泳完成后，用超纯水洗胶2次，每次洗涤5分钟。
2. 固定：将凝胶浸泡在 25 ml 的固定液中，固定液充分覆盖胶。
放于摇床上室温摇动 15 分钟。
更换固定液，重复一次。
固定液的配制：超纯水：乙醇：冰醋酸=6:3:1.3. 固定完成后，配制 10%乙醇，洗胶 2 次，每次洗涤 5 分钟。
4. 再用超纯水洗胶 2 次，每次洗涤 5 分钟。
5. 配制银染增敏工作液：取 50 ul Silver Stain Sensitizer（500×）加入到 25 ml 超纯水中，混匀。
6. 将步骤 4 洗好的凝胶置于银染增敏工作液中，室温下准确孵育 1 分钟（这里时间可以适当延长的），之后用超纯水洗胶 3 次，每次洗涤 20 秒。
7. 弃去超纯水，将凝胶置于 Silver Stain 中孵育 30 分钟（我做的时候是孵育45min-1h）。
8. 配制终止液：5%冰醋酸。
9. 用超纯水快速洗胶 3 次，每次洗涤 20 秒（时间不用很准确）。
10. 立即将洗好的凝胶浸没在 Silver Stain Developer 中，室温孵育 2-3 分钟，直至蛋白条带显示清晰（我做的时候室温孵育时间比较长，因为我也是为了找到差异条带打质谱的，10分钟甚至更长都是可以的，建议最好一直在旁边看着，直至出现满意的结果）。
11. 用终止液洗去凝胶上的 Silver Stain Developer 后，将凝胶浸泡在新的终止液中反应10 分钟。
(注：孵育是摇床速度调到最小，洗涤时速度要加快，和western洗膜的速度一样就行)用一般的SDS-PAGE胶就可以。
1. 分离胶(12%)配制所需试剂所需体积分离胶(12％) 30％丙烯酰胺 6.0 ml1.5 mol/l Tris-HCl 3.8 ml10%SDS 150 μl10%过硫酸铵 150 μlTEMED 6 μl蒸馏水 4.9 ml2. 浓缩胶(5%)配制所需试剂所需体积浓缩胶(5％) 30％丙烯酰胺 1.3 ml1.5 mol/l Tris-HCl 1.0 ml10%SDS 80 μl10%过硫酸铵 80 μlTEMED 8 μl蒸馏水 5.5 ml3. 分离胶缓冲液(pH8.9)配制所需试剂所需体积分离胶缓冲液Tris 36.6 g1 mol/l HCl 48 ml蒸馏水补足至100 ml4. 浓缩胶缓冲液(pH6.7)配制所需试剂所需体积浓缩胶缓冲液（pH6.7）Tris 5.98 g1 mol/l HCl 48 ml蒸馏水补足至100 ml5. 30%丙烯酰胺(pH≤7.0)配制所需试剂所需体积30%丙烯酰胺（pH≤7.0）丙烯酰胺29 g甲叉-双丙烯酰胺 1 g蒸馏水补足至100 ml6. 10%过硫酸铵(W/V)：1g过硫酸铵溶于10ml水中，4℃保存数周，尽量现用现配。
实验十SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳（银染色法）
实验十 SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳（银染色法）实验目的1.通过实验了解蛋白质凝胶电泳银染色法的原理。
2.进一步熟悉SDS—PAGE操作，掌握银染色法的实验技术。
实验原理自1979年，Switzer等人提出银染色法后，又经许多学者不断改进，实验表明银染色法较考马斯亮蓝R250灵敏100倍，但染色原理尚不十分清楚，可能与摄影过程中Ag+的还原相似，也可能它对蛋白质分子中氨基酸具有较高的亲和力，从而使蛋白质染成黑色谱带。
试剂与器材(一)、试剂1.牛血清白蛋白（经微量凯氏定氮法测定蛋白含量）溶液准确称量牛血清白蛋白0.5mg，溶于连续系统SDS—PAGE样品溶解液2.5ml中。
2.0.05%考马斯亮蓝R250染色液内含20%磺基水杨酸3.固定液20%三氯乙酸及1%戊二醛各200ml。
4.氨银染色液此液应临用前配制，取0.1mol/LNaOH 20ml、浓氨水 1.4ml，混合摇匀得混合液，取4ml19.4%硝酸银溶液慢慢滴入混合液中，边滴加边摇动器皿，全部滴完后用重蒸馏水定容到200ml。
5.显色液此液应临用前配制，取40%甲醛50µL和1%柠檬酸0.5ml，混匀后加重蒸馏水定容至250ml。
6.脱色液(1).称NaCl 37g，CuSO4·H2O 37g,加重蒸馏水850ml,滴加浓氨水至溶液呈澄清的深蓝色,定容至1000ml.(2).称硫代硫酸钠21.8g,加重蒸馏水至100ml,4℃贮存.使用前将(1)和(2)等量混合后稀释30倍.(二)、器材夹心式垂直板电泳槽[凝胶模(135×100×1.0mm)],直流稳压电泳仪(300—600V，50—100 mA)，微量注射器，大培养皿（Φ18cm）。
操作方法(一)仪器安装配制连续SDS—PAGE 10%PAA，制胶后，加入含0.1%SDS的PH7.2 0.1mol/L磷酸盐电极缓冲液。
(二)加样加样量分别为2.5µl，5µl，8µl，10µl。
SSR的聚丙烯酰胺凝胶电泳分离与银染检测技术实验报告
SSR的聚丙烯酰胺凝胶电泳分离与银染检测技术实验报告英文回答：Polyacrylamide Gel Electrophoresis and Silver Staining of Single-Stranded RNA。
Introduction。
Single-stranded RNA (ssRNA) is a type of RNA that does not form a double helix. It is found in a variety of organisms, including viruses, bacteria, and eukaryotes. ssRNA can be separated by size and charge using polyacrylamide gel electrophoresis (PAGE). PAGE is a technique that separates molecules based on their size and charge. The molecules are placed in a gel and an electric current is applied. The molecules will migrate through the gel at a rate that is inversely proportional to their size and charge. The smaller and more negatively charged molecules will migrate faster than the larger and lessnegatively charged molecules.After the molecules have been separated by PAGE, they can be visualized using a variety of staining methods. Silver staining is a staining method that is used to visualize ssRNA. Silver staining is a sensitive method that can detect very small amounts of RNA.Materials and Methods。
银染aav纯度鉴定原理
银染aav纯度鉴定原理银染（Silver Staining）是一种常用的蛋白质染色技术，非常适用于核酸电泳分析和研究。
而纯度鉴定是确保蛋白质样品中目标蛋白的含量高，且无杂质的重要步骤。
在银染aav （Adeno-Associated Virus，腺相关病毒）纯度鉴定中，我们可以采用以下原理：1.样品制备：将含有目标aav的样品进行破碎和裂解，释放出其中的蛋白质。
经过离心等步骤，得到蛋白质上清液。
这是进行纯度鉴定的起点。
2.蛋白质凝胶电泳：将样品中的蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶上进行电泳分离。
通常使用的是SDS-PAGE（Sodium Dodecyl Sulfate Polyacrylamide Gel Electrophoresis）技术，它能够使蛋白质在电场中按照分子量进行迁移。
3.银染法：将经过电泳分离的蛋白质在凝胶上进行银离子反应，形成深紫色或黑色的沉淀，从而可视化蛋白质的分布情况。
银染法对蛋白质含量敏感，且具有较高的分辨能力。
4.分析结果评估：通过观察银染后的凝胶，我们可以根据目标aav蛋白与其他蛋白质之间的迁移距离和沉淀程度，来初步评估样品中目标蛋白的纯度。
较高的纯度将表现为目标蛋白清晰的单个带状沉淀。
5.图像分析：使用图像分析软件可以量化评估银染结果，测量蛋白质带状沉淀的强度和宽度，进而计算出目标蛋白的相对含量。
这种定量分析可以更精确地确定aav样品的纯度。
总结而言，银染aav纯度鉴定基于蛋白质的分离和银染反应，通过观察和分析蛋白质在凝胶上的迁移和沉淀情况，可以初步评估目标蛋白的纯度，并通过图像分析软件进行定量评估。
这种方法可帮助研究人员确保aav样品中目标蛋白质的高纯度和可靠性，为后续实验和应用奠定基础。
电泳 银染
小板8%聚丙烯酰胺胶电泳⑴封口 1%的Agarose或卡拉胶封口，每块板用5mL即可，凝固20min-30min⑵上板下部的3个旋钮用扳手拧紧一些，上面的2个手拧，这样不容易漏缓冲液制胶，每块胶灌20mL,灌完一槽插梳子，凝固40min-60min100mL 120mL（一般跑10个槽，制3瓶120mL即可）ddH2O 70mL 84mL10ⅹTBE 10mL 12mL40%聚丙烯酰胺 20mL 14mLTenmed 100uL 120uL10%APS 1000uL 1200uL天气热容易凝固，可以每次少配点，Tenmed，1%APS也可以少加些⑶向跑好PCR的96孔板中每管加入4ul的lodding buffer⑷倒入0.5ⅹTBE电极缓冲液，没过短玻璃，2边电极也要有一定量缓冲液，电泳过程中若有滴漏，及时补充接电泳仪，160V 跑2.5h 看指示剂大概都跑到胶底边即可⑸卸板，准备银染小板银染⑴固定2次6min 倒掉，第2次回收待用450mL ddH2O + 50mL 无水乙醇 + 2.5mL冰醋酸⑵银染 12min 倒掉500mL ddH2O + 1g AgNO3⑶清洗2次，倒掉500mL ddH2O 洗30s500mL ddH2O + 120uL Na2SO3 洗30s⑷显色到显色为止倒掉500mL ddH2O + 7.5g NaOH + 1500uL 甲醛⑸用固定液再洗一次，再用ddH2O洗一次⑹保鲜膜包盖，晾干，待观察，选择出多态性好的引物对大板6%聚丙烯酰胺胶电泳⑴洗短板和耳板，洗到水能自然留下，不挂水珠为洗干净⑵干净的一面朝上垫平，到上无水乙醇，用干净手纸，按从远到近一个方向擦拭到酒精蒸干⑶耳板上到亲和硅烷，短板上到剥离硅烷，用干净手纸，按从远到近一个方向擦拭到硅烷都蒸干⑷用擦过剥离硅烷的纸擦拭侧条，之后和耳板耳内缘对齐平放在耳板上，将短板盖在上面，对齐底边，2侧各夹2个夹子固定⑸配好的6%聚丙烯酰胺胶60mL10%APS 300uLTenmed 60uL混匀从耳板上部灌入，不时敲打让整个缝隙内都充满胶，上部不要近气泡，用梳子平头插入板间，梳子上的洞与短板平齐，凝固1-2小时待用⑹拔出梳子，将碎胶用纯水冲出，也可用梳子拨出，洗净板面，并擦干⑺上板，固定住，上下分别到入相应缓冲液，用洗耳球吹打，把气泡赶出，将梳子齿端插入胶一点，用洗耳球吹杂质，把气泡赶出，恒功率70w 20min 预电泳⑻向跑好PCR的96孔板中每管加入6ul的lodding buffer 变性剂 PCR仪 95℃ 5min 变性之后放入冰水混合物中降温，保持低温，准备点样⑼向梳子空隙单枪点样 8uL⑽恒功率 70w ，保证电压在 1300-1490V 电泳 1h⑾停止电泳仪，上下部缓冲也分别回收，卸板,准备银染大板银染每块板一个槽⑴固定 7min 取出1800mLddH2O + 200mL无水乙醇 + 10mL冰醋酸⑵银染 10min 取出2000mLddH2O + 3g AgNO3 + 3mL甲醛⑶清洗 10-15s 取出2000mL ddH2O⑷显色 5min 漂胶前停止取出2000mL ddH2O +30g NaOH + 4mL 甲醛⑸用⑴中固定液再洗一次 2min⑹清洗 5min 取出晾干2000mL ddH2O。
电泳银染原理
电泳银染原理电泳银染原理1. 介绍电泳银染是一种常用的蛋白质分析技术，可用于检测和定量蛋白质。
本文将从基本原理、操作步骤以及优缺点等方面进行介绍。
2. 基本原理电泳银染基于电泳分离原理，通过电场的作用将蛋白质分离成不同电荷的带点，并利用银离子与蛋白质结合形成可见的银颗粒，从而使分离出的蛋白质区域显现出染色。
3. 操作步骤电泳银染的操作步骤主要包括准备样品、电泳分离、固定蛋白质和银染。
准备样品首先，需要将待分析的蛋白质样品进行制备。
通常包括提取蛋白质、测定蛋白质浓度、标记蛋白质等步骤，确保样品浓度适宜且能与电泳介质配合良好。
电泳分离将准备好的样品加载到准备好的电泳介质中，通常是聚丙烯酰胺凝胶。
施加电场后，蛋白质根据其大小和电荷差异在凝胶中移动，实现分离作用。
固定蛋白质为了增强染色效果，需要将分离出的蛋白质固定在凝胶上。
使用甲醛等试剂固定蛋白质，使其与凝胶交联，以防止后续步骤中的蛋白质流失。
银染银染是电泳银染的核心步骤。
首先，将固定的蛋白质与银离子接触，银离子会与蛋白质中含有的亲银基团发生反应，形成可见的银颗粒。
然后，通过一系列洗涤、显色和停止反应的步骤，实现对银颗粒的增强和可视化。
4. 优缺点电泳银染作为一种常用的蛋白质分析方法，具有以下优点和缺点：优点•灵敏度高，可以检测低浓度的蛋白质。
•分辨率高，能够准确分离不同大小和电荷的蛋白质。
•操作相对简单，不需要使用昂贵的设备。
缺点•染色过程相对复杂，需要掌握一定的技术。
•染色结果呈现一定的变异性，不同实验条件下结果可能有差异。
•对于一些特殊的蛋白质，可能出现较大的染色偏差。
5. 结论电泳银染是一种可靠的蛋白质分析技术，以其高灵敏度和高分辨率备受广大科研人员的青睐。
虽然操作过程相对复杂，但掌握正确的操作步骤和技巧，能够得到准确的结果。
此外，对于染色结果的解读和分析也需要结合实验设计和其他技术手段进行综合评估。
6. 拓展应用除了在蛋白质分析领域，电泳银染还有一些其他的拓展应用。
BIO-RAD 聚丙烯酰胺凝胶银染方法
聚丙烯酰胺凝胶银染方法
（2块8*10cm厚0.75-1.0cm的小胶）
1、固定——20min
(1)固定液的准备：
(2)取出电泳后的聚丙烯酰胺凝胶，放入固定液中，置于摇床上，轻轻震荡20min。
注意：固定时间参照表1.
2、漂洗——20min
弃去固定液，加入400ml的去离子双蒸水，置于摇床上，震荡10min。
重复1次。
对于更大更厚的胶，用800ml的水漂洗。
3、染色——20min
染液的准备：（使用前5min之内准备）
35ml去离子水于一锥形瓶中
5.0ml Silver Complex Solution
5.0ml Reduction Moderator Solution
5.0ml Image Development Reagent
使用前快速加入50ml的室温的Development Accelerator Solution，充分混匀，倒入染色槽中，轻轻振荡，直至蛋白质条带具有足够的显色强度。
约15min。
4、终止——15min
准备5%的乙酸溶液。
将胶放入终止溶液中,置于摇床上，振荡15min，然后用超纯水中漂洗5min。
表1。
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Silver staining
Silver staining stock solutions
Silver stain fixing solution
(40% (v/v) ethanol 乙醇, 10% (v/v) acetic acid 醋酸)1L
Sensitizing solution敏化解决方案
(30% (v/v) ethanol, 6.8% (w/v) sodium acetate 醋酸钠, 0.2% (w/v) sodium thiosulphate 硫代硫酸钠, 0.125% (v/v) glutaraldehyde 戊二醛)
Sodium acetate, anhydrous 无水(FW分子量82.03)
Sodium thiosulphate,pentahydrate 五水(FW 248.18)
Store stock solution without glutaraldehyde at room temperature for up to 2 mouth. Within 1 h of use, add:25% glutaraldehyde 0.5 ml per 100 ml of solution used
Silver solution
(0.25% (w/v) silver nitrate 硝酸银, 0.015% (v/v) formaldehyde甲醛)1L
Silver nitrate (FW 169.87)
Store stock solution without formaldehyde in a dark bottle at room temperature for up to 2 mouth.
Within 1 h of use, add:37% formalde hyde 40 μl per 100 ml of solution used Developing solution
(2.5% (w/v) sodium carbonate 碳酸钠, 0.0074% (v/v) formaldehyde 甲醛) 1L Sodium carbonate,anhydrous (FW 105.99)
Store stock solution without formaldehyde at room temperature for up to 2 mo.
Within 1 h of use, add:37% formaldehyde 20 μl per 100 ml of solution used
Stop solution
(1.5% (w/v) Na2EDTA) 1 L
Na2EDTA (ethylenediaminetetraacetic acid,disodium salt) (FW 372.24)
Store at room temperature for up to 6 mo.
Preserving solution
(30% (v/v) ethanol, 4% (v/v) glycerol 甘油, 1 l)
Store at room temperature for up to 6 mouth.
Silver staining protocol 银染方案
procedure (up to 1 week).
† Monitor development and change the solution when protein bands are visible and the background is just starting to darken.
‡ Gels can be stored in this solution. The glycerol in the preserving solution will prevent the gels from cracking when dried.
Note: This protocol gives the best results when applied to standard SDS and native gels. High levels of background staining can be expected on IEF gels unless extra steps are taken to remove interfering carrier ampholytes before staining. When staining IEF gels, the silver staining protocol outlined above should be preceded by an additional 30-min fixing step in trichloroacetic acid fixing solution(20% TCA). Additional washing between the sensitizing step and the silver step may also be necessary.。