羔羊卵母细胞体外发育及成熟影响因素研究

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卵母细胞体外成熟的影响因素

卵母细胞体外成熟的影响因素乔利敏1,2 黄成定2　李向臣1　姚雅馨2　关伟军13 马月辉1(1中国农业科学院北京畜牧兽医研究所北京100094　2甘肃农业大学动物科技学院兰州730070) 【摘要】随着哺乳动物体外受精、细胞核移植技术的不断深入,人们对成熟卵母细胞以及哺乳动物胚胎需求量日益增加,卵巢内丰富的卵泡资源是胚胎工程迅速发展的基础。

本文从卵巢因素、供体、体外培养条件和成熟培养液中添加成分等对卵母细胞IVM的影响进行了分析,为胚胎的体外生产提供理论基础和科研依据。

关键词:卵母细胞;体外成熟;影响因素胚胎移植技术成熟与否是胚胎工程技术成败的基础,而卵母细胞体外成熟质量又是决定胚胎移植技术成功的关键。

IVM可以为体细胞核移植提供大量的受体细胞,也为体外受精提供大量的MⅡ期卵母细胞,因此IVM已经成为胚胎体外生产和体外受精的重要环节之一。

虽然近几年来在卵母细胞的体外成熟方面已经取得了飞速发展,但是卵母细胞的体外成熟还存在很多问题。

现就卵母细胞体外成熟的影响因素进行概述。

1　卵巢因素和供体对卵母细胞体外成熟的影响1.1　卵巢所处性周期的影响有学者研究表明,卵巢所处性周期阶段影响卵母细胞的成熟培养,在无黄体期卵巢上的卵母细胞比黄体期和黄体前期卵巢上卵母细胞成熟效果要好。

崔亚利等〔1〕根据卵巢上是否有明显突出卵巢表面的黄体,将卵巢分为黄体期和卵泡期,分别在两期卵巢上卵泡中抽取卵母细胞进行体外成熟培养发现,二者无统计学差异,但是卵泡期卵母细胞成熟培养效果(63.9%)较好,说明卵巢性周期阶段对卵母细胞体外成熟存在一定影响,但影响不大。

2000年郭继彤〔2〕对繁殖季节和非繁殖季节山羊卵母细胞进行研究发现,非繁殖季节可采集到比繁殖季节更多的可用卵母细胞,并且非繁殖季节的屠宰山羊卵巢卵母细胞成熟培养效果(74.1%)优于繁殖季节的屠宰山羊卵巢卵母细胞(67.7%)。

在非繁殖季节屠宰的山羊,几乎没有大卵泡的发生。

季节对绵羊卵母细胞体外成熟及胚胎发育能力的影响

［１１］ＷａｌＴｈｒｒｔｕｔｒｆｂｖｎｒｌｃｉＪ．ＥＳｌｓＭ．ｅｐｉｙｓｒｃｕｅｏｏｉｅｐｏａｔｉｍａｎ［］ＦＢ
Ｌｅ，９４，４（）：０ — ０ｔ１７４２２５２８．
ｄｎ叶一ｏｒｎｐｒｏｙｐｉｅａｐｔｃＮａＴＣｃｒｎｉｇＮａ。ＴＣｃｔａｓｏｔｐｌｐｅｔｄｎｄｈｅａｉ一ｏｔａｓ
６．９）异不显著（５７差Ｐ＞００）但以繁殖季节的成熟率较高。④ 湖羊的卵母细胞在非繁殖季节与繁．５，殖季节胚胎卵裂率（２２ｖ５４）桑葚胚率（６１ｖ４９）７．８ｓ７．３０、Ｖ３．４ｓ３．７差异不显著（００）繁殖Ｐ＞．５，
鬻篆盒硪甚技舔８项目≮ 蔑吼科镐２蛆
《２
．ｅＫｅｈｅｒｅｉｇｐｏｕｔｏ、鞣疆兵产学硒重警Ｓｉｅｉ３００Ｃｎｈｈｚ８２０，ｈｉａ：２ＴｈｙＳｅｐＢｅｄｎ＆Ｒｅｒｄｃｉｎ
ｕａｉｎｏｔｒａｅａｉｒｉａｓｓｅｏｄｄｐｎｅｃｈｒｏｌｔｏｆｍａｅｎｌｂｈｖｏｎｒｔ：ｔｒｉｅｅｄｎｅ，ｏｍｎｅ
响差异不显著（Ｐ＞Ｏ０）以Ｌ００ｐ／．５，Ｈ１．ｔｍＬ与Ｅ．，／ｇｚ１３／ｍＬ时卵母细胞成熟率较好。③ 湖羊和其ｇ

影响幼龄辽宁绒山羊超数排卵效果因素的研究

低于初次组（＜．）ＰＯ１，可用卵数显著低于初次组Ｏ（＜．）Ｐ００，体外成熟数低于初次组，但差异不显５
从表１的结果可以看出，随着周龄的增加，
三组幼羔的发育卵泡数逐步降低，４周龄组最著（０５，而体外成熟率高于初次组，差异也．）０
高，与７８周龄组比差异显著（＜．）～Ｐ０５。可用卵不显著（＞．）０Ｐ００。５数以５６周龄为最高，与其他两组比差异显著２５运输应激对羔羊超排效果影响设运输应～．（＜．）Ｐ０５；可用卵比率４周龄组最低，与另两组激组与对照组采用相同方法处理，结果见表５０。
第３国Ｓ＋ＭＧ１０．１８１＋８２￣．３．３２±．组（产ＦＰＳ）０２＋．９１．６９６２－１５．５Ｈ１７４．９．６９．３７＋
３讨论与结论
３１羔山羊周龄对超排效果影响不同发育阶．段的羔羊超排处理后卵巢的反应程度差异较大。
３３季节对羔羊超排效果的影响山羊是季节能减少重复超排间隔的时间，有利于提高供体羔．性发情动物，本试验结果也表明，春季采集的卵羊的利用效率。
（＞．）Ｐ００；体外成熟率第４组则显著高于其他三为辽宁绒山羊羔羊的适宜超排时期。５３２不同方案对诱导超数排卵效果的影响近．组（＜．５。Ｐ００）
２３不同季节对母羔超数排卵效果的影响分年来羔羊超排试验多选用进口激素，以加拿大和．

绵羊和山羊卵母细胞体外成熟研究进展

绵羊和山羊卵母细胞体外成熟研究进展王中伟，岳顺利，周佳勃∗东北农业大学生命科学学院,黑龙江哈尔滨（150030）E-mail:wzw006336@摘要：本文介绍当前在绵羊和山羊卵母细胞采集和体外成熟方面的研究进展。

卵巢经过促性腺激素处理后能够提高可采集卵泡的数量。

卵母细胞采集方法分为从死亡动物和活体采卵两大类。

死亡动物采卵主要有抽吸法和切割法。

缺点是得到的是不同发育阶段的卵母细胞，而且要牺牲供体的生命。

先进的活体采卵技术有两种分别是腹腔镜采卵和超声波引导阴道穿刺采卵。

它们优点是对母羊损伤小、利用率高。

卵母细胞冷冻保存有助于提高优质卵母细胞的利用率。

最后还阐述了影响卵母细胞质量和产量的因素，例如，激素、血清、卵泡液、生长因子等一些因素的作用。

关键词：绵羊，山羊，卵母细胞，采卵，体外成熟中图分类号：S8111 引言中国养羊业历史悠久，绵羊和山羊品种多样，羊产品也十分丰富。

绵羊和山羊不但具有经济价值，而且可以作为许多疾病研究的很好的实验动物模型。

近些年，国内外在家畜生殖技术研究，特别是在绵羊和山羊的生殖技术方面取得了很大进展，例如第一个体细胞核移植成功的动物就是绵羊。

此外，这些应用在绵羊和山羊上的生殖技术还可用于保护野生濒临灭绝的小型反刍动物[1]。

众所周知，卵母细胞体外成熟（IVM）是进行体外胚胎生产（IVP）、克隆以及辅助生殖（ART）的基础。

本文介绍了目前绵羊和山羊卵母细胞成熟技术的研究进展和影响因素。

2 卵母细胞的采集和保存2.1采集前的促性腺激素处理绵羊或者山羊卵巢经过促性腺激素处理后能够提高可采集卵泡的数量，性未成熟羔羊经促性腺激素处理后也可做为供体[2]。

研究表明，促性腺激素处理羔羊得到的卵母细胞数量高于同样处理的成年山羊，但是二者卵母细胞的体外发育的情况却相似[3]。

绵羊经FSH处理两天得到的卵母细胞的回收率和卵裂率大于处理三天。

在绵羊同步发情实验中发现，恒定剂量处理比递减剂量FSH处理获得的卵母细胞质量更好而且对冷冻保存的耐受能力更强[4]。

影响绵羊卵母细胞体外成熟因素研究进展

细胞的来源、培养条件和方法、成熟培养液及其它添加成分等。
关键词：绵羊；卵母细胞；体外成熟培养
中图分类号：￥８２６文献标识码：Ａ文章编号：１００２ — ２７６７（２０１３）０９ — ０１４７ — ０４
莓” ，扩大品牌市场占有率，把品牌做大做强。由省质监局、农委牵头，各相关市地县推进落实，以
保证黑龙江省蓝莓产业科学、持续地发展。
参考文献：
［１］任立新，伊春市蓝莓产品质量存在的问题及建议［Ｊ］．现代
黑龙江农业科学２０１３（９）：１４７～１５０
ＨｅｉｌｏｎｇＪｉａｎｇＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ
影响绵羊卵母细胞体外成熟因素研究进展
陆会宁，齐燕姣（西北民族大学生命科学与工程学院，甘肃兰州７３０１２４）
［７］吴兴壮，李利峰．越橘果实资源的开发利用现状及前景预
［２］李丽敏，吴林．中国蓝莓产业发展研究［Ｍ］．北京：中国农业
出版社，２０１１：１０９－１１７．
测［Ｊ］．辽宁农业科学，２００３（６）：２３ — ２４．［８］郑学益．构筑产业链，形成核心竞争力［Ｊ］．福建改革，

羔羊卵母细胞组蛋白H4K12乙酰化对其发育能力的影响

（１．河北农业大学动物科技学院，河北保定０７１００１；２．河北省牛羊胚胎工程技术研究中心，河北保定０７１００１）
摘要：为探讨羔羊卵母细胞体外发育能力较低的原因，本实验以４ — ６周龄道赛特与小尾寒羊杂交羔羊和成年
更为理想的卵泡诱导效果。研究发现，采用促卵泡
素（ＦＳＨ）对１～２月龄羔羊进行卵泡诱导，每次可由卵
巢上获得８０～１６０枚可用卵母细胞 …，而成年母羊进
行超数排卯后仅可获得１０～２０枚可用卵母细胞；如果不进行超数排卵，获得的可用卵母细胞则更少，仅
为３．６～６枚【３】。因此，将幼龄羔羊经外源激素卵泡诱
导后获得的卯母细胞经ＩＶＦ生产胚胎，再进行移植，
则能明显提高羊的繁殖能力，大大缩短世代间隔。但现有研究表明，羔羊卯母细胞发育能力低于成年
动物，比较羔羊与成年羊卵母细胞第一极体排出率、
孤雌激活后卵裂率、囊胚发育率及ＧＶ期卯母细胞
Ｈ４Ｋ１２乙酰化水平的差异，分析Ｈ４Ｋ１２乙酰化对羔
羊。Ｊｏｒｉｏ等Ｉ发现，随着年龄增长卵母细胞在体外的
绵羊卵母细胞为实验材料，比较羔羊与成年羊卵母细胞第一极体排出率、孤雌激活后卵裂率、囊胚发育率及生发泡期（ＧＶ期）卵母细胞Ｈ４Ｋ１２乙酰化水平的差异。结果表明：羔羊卵母细胞体外成熟后第一极体排出率显著

《羔羊与成年绒山羊卵母细胞发育能力及卵巢DNA转录组差异比较分析》范文

《羔羊与成年绒山羊卵母细胞发育能力及卵巢DNA转录组差异比较分析》篇一一、引言近年来，畜牧业持续发展，羊作为重要畜牧产业之一，其繁殖技术及育种研究备受关注。

在羊的繁殖过程中，卵母细胞的发育能力直接关系到胚胎的质量和数量，进而影响整个养殖业的效益。

而羔羊与成年绒山羊在生理、生长和繁殖等方面存在显著差异，因此，对羔羊与成年绒山羊卵母细胞发育能力及卵巢DNA 转录组差异进行比较分析，对于提高羊的繁殖效率和育种工作具有重要意义。

二、材料与方法1. 实验材料本实验选取健康、同龄的羔羊和成年绒山羊作为研究对象，采集其卵巢组织进行后续实验。

2. 实验方法（1）卵母细胞发育能力检测通过采集卵巢组织，获取卵母细胞，对其进行体外培养，观察其发育能力。

同时，记录卵母细胞的发育情况，包括减数分裂、第一极体排出等指标。

（2）卵巢组织DNA转录组分析提取卵巢组织DNA，进行转录组测序，分析不同年龄段山羊卵巢组织的基因表达情况。

三、实验结果1. 卵母细胞发育能力比较通过体外培养和观察，我们发现羔羊卵母细胞的发育能力明显高于成年绒山羊。

在减数分裂、第一极体排出等关键发育阶段，羔羊卵母细胞的成功率显著高于成年绒山羊。

这表明羔羊卵母细胞的发育潜力更大。

2. 卵巢DNA转录组差异分析通过对卵巢组织进行DNA转录组测序，我们发现羔羊和成年绒山羊的卵巢组织在基因表达上存在显著差异。

在羔羊卵巢组织中，与卵母细胞发育相关的基因表达水平较高，而在成年绒山羊中，则存在一些与卵巢功能维持和衰老相关的基因表达水平较高。

这表明羔羊和成年绒山羊在卵巢功能上存在差异。

四、讨论本实验结果表明，羔羊与成年绒山羊在卵母细胞发育能力和卵巢DNA转录组上存在显著差异。

这些差异可能受到多种因素的影响，如生理年龄、营养状况、内分泌等。

羔羊卵母细胞发育能力强，可能与其生理年龄较小、内分泌水平较高、营养状况良好等因素有关。

而成年绒山羊卵巢组织中与卵巢功能维持和衰老相关的基因表达水平较高，可能与其卵巢功能逐渐衰退有关。

《羔羊与成年绒山羊卵母细胞发育能力及卵巢DNA转录组差异比较分析》范文

《羔羊与成年绒山羊卵母细胞发育能力及卵巢DNA转录组差异比较分析》篇一一、引言随着现代生物技术的飞速发展，家畜繁殖技术逐渐成为研究的热点。

其中，卵母细胞的发育能力及其相关机制研究对于提高家畜繁殖效率具有重要意义。

本文以羔羊和成年绒山羊的卵母细胞发育能力为研究对象，采用DNA转录组学技术对其卵巢组织进行差异表达分析，旨在探讨两者在卵母细胞发育及卵巢功能上的差异，为家畜繁殖提供理论依据和实际应用。

二、材料与方法1. 实验动物与样本采集实验选用了同龄的羔羊和成年绒山羊作为研究对象。

在无菌条件下，采集其卵巢组织样本，分别进行卵母细胞发育能力和卵巢DNA转录组分析。

2. 卵母细胞发育能力检测采用成熟率、受精率等指标对羔羊和成年绒山羊的卵母细胞发育能力进行评估。

3. DNA转录组分析利用高通量测序技术对羔羊和成年绒山羊卵巢组织进行DNA 转录组测序，分析两者在基因表达水平上的差异。

三、结果与分析1. 羔羊与成年绒山羊卵母细胞发育能力比较实验结果显示，羔羊卵母细胞的成熟率和受精率均高于成年绒山羊。

这表明羔羊的卵母细胞发育能力相对较强。

2. 卵巢DNA转录组差异分析通过对羔羊和成年绒山羊卵巢组织的DNA转录组数据进行差异表达分析，发现两者在多个基因的表达水平上存在显著差异。

这些差异基因主要涉及卵母细胞发育、卵巢功能、生殖激素调节等方面。

3. 差异基因的功能富集分析对差异表达基因进行功能富集分析，发现羔羊和成年绒山羊在生殖激素信号通路、卵母细胞减数分裂、卵泡发育等生物学过程中存在显著差异。

这些差异可能与两者在卵母细胞发育能力和卵巢功能上的差异有关。

四、讨论本研究表明，羔羊和成年绒山羊在卵母细胞发育能力和卵巢DNA转录组上存在显著差异。

这些差异可能与两者在生殖激素调节、卵母细胞减数分裂、卵泡发育等方面的生物学过程有关。

这些差异可能导致两者在卵母细胞发育能力和卵巢功能上的差异，从而影响家畜的繁殖效率。

针对这些差异，我们可以从以下几个方面进行深入研究：一是进一步探讨羔羊和成年绒山羊在生殖激素调节方面的差异，以揭示其卵母细胞发育能力的机制；二是研究两者在卵母细胞减数分裂和卵泡发育过程中的差异，以了解其卵巢功能的差异；三是通过基因编辑等技术对相关基因进行敲除或过表达，探究其对家畜繁殖效率的影响。

山羊卵母细胞体外培养体系及冻存后体外培养的研究

庆大霉素的生理盐水洗净后进行体外培养。ｍＯａ进行体外培养，用ＳＦａ
４８ｈ记录卵裂数，～５７ｄ记录囊胚发育情况。
面的多余组织，然后用生理盐水洗净，用灭菌纱布擦再
干。最后置于盛有抽卵液的培养皿中。在培养皿中用手术刀片切开卵巢表面２５ｍ的卵泡，并用镊子将卵泡～ｍ
ｏｃｅｖｇ，ｅｅ３．ｆｌａａｅｗｒ５６％ａｄ５．ｎ８４％ｒｓｅｔｅｙｈｄｓｇｉｃｎｉｅｅｃＰＯＯ）ｅｐｃｉｌ，ａｉｎｆａｔｆｒｎｅ（＜．１．ｖｉｄｆ
Ｋｙｒｓｇａ；ｏｙｅｉｉｏｃｌｒｅｗｏｄ：ｏｔｏｃｔ；ｎｖｔｕｔｅｒｕ
７２７，．．用前置于Ｃ～４Ｏ培养箱中预先平衡２。ｈ
１３卵母细胞的体外成熟培养．
．
研究表明，岛素、铁蛋白、硒酸钠的混合制剂（ — 胰转亚ｉｎｓｌ —ｒｎｆｒｇｓｌｉＩＳｕｉｔｓｒｎ—ｅｎｍ，）具有提高胚胎发育率的ｎａｅｉｅｕＴ作用，且具有增强ＥＦＨ（ＳＬ和氨基酸的功Ｇ、ＭＧＦＨ＋Ｈ）
表１ＩＳＴ对山羊卵母细胞成熟的影响
熟及胚胎发育的效率和质量。
由于哺乳动物胚胎工程的快速发展，在大量的研究
中需要卵母细胞，Ｇ而Ｖ期卵母细胞来源较广，可随时在
卵裂率，％
培养液成分
ＣＣ数，Ｏｓ枚成熟率，％
取卵后进行冷冻，在需要时解冻体外培养。此外，根据相

幼羔胚胎体外生产技术研究进展

的解决：时在充分考虑幼畜体况、养水平及环境同营条件等因素下，从基因组及表观遗传学方面揭示幼
的影响，也没有成年羊卵巢上卵泡优势化的现象，因此对这个阶段的羔羊进行超排是一项高效率生产卵
母细胞的新途径。然而，由于４８周龄羔羊垂体机能～尚未健全，能分泌足够量的促性腺激素刺激卵巢活不动，卵泡不能最终发育成熟而排卵，此需要利用活因
［】ａｅｒｐｒｄｆｒｓｎａｉｔｔｅＡｅｉｎＡ．Ｐｐｒｐｅａｅｒｐｅｅｔｏａｈｍｒａｏｔｎｃ
四川畜牧兽医・０２１・２１・期总第２５期５
５０年代起就对开发幼龄母畜的繁殖潜力进行了大量
展，用幼畜生产胚胎成为可能。旭目干等利用羔羊利
通过幼畜激素处理获得大量的卵母细胞，然后在体外受精并经移植获得健康后代，现已成为一条新的快繁路线。但是，羔羊超排胚胎移植到母体子宫
ｍｎｒｈｒｃｒｔｓｎｓｉｅＪＡｉＳｉ２０，８ａｕｅｃａａｔｓｃｗｎ［．ｎｅｉｉｉ］ｍ．ｃ．ｎｅｏｉｓｂｌｙ［．ＡｉｎｈｉｒｓｏｓｎｄｇｔｉｔＪｎｍ．Ｐｙｉ．ｒｅｉｉ］ｈｓ１ｏ
Ａｎｍ．Ｎｔ．２０８８ — ３ｉｕｒ，０５，９：８９．

哺乳动物卵母细胞体外成熟培养中影响因素分析

外培养成熟、和胚胎发育的研究．．受精上海实验动物［３李子义，景和，兴参，．同激素剂量对幼鼠超排及６Ｊ谭孙等不
科学，０３４２０，．
超排卵质量的影响．ＪＩ．Ｊ黑龙江畜牧兽医，９９（）２４１９，：２．３
小试管小［１尹海林，陈秀兰．鼠卵母细胞体外培养成熟及 “ ６］鼠” 的研究．Ｊ［．Ｊ遗传，９９３１８，．郑凤娇．小鼠超数排卵的试验方法．ｌ【生物学通报，Ｊ［２杨慧，６Ｊ
２００２，２：．１４９
高敏芝，汪玉宝，吴晓云，小鼠生殖泡期卵母细胞体等．
层卵丘细胞合成物逐级传送给卵母细胞起重要作认为，卯母细胞的成熟率与采集ＣＣ时的卵泡直Ｏｓ用。弓超通过试验对牛卵母细胞不同形式的处理，讨径关系密切，卵母细胞体外培养过程中，在宜选择卵论细胞问隙连接对于其体外成熟的影响作用。在最巢发育正常的卵泡采集，不宜选择发育过大或过小适于卵母细胞体外成熟的浓度（．Ｉ／Ｌ条件下，的边际卵泡ｌ。在挑选卵母细胞时要尽可能挑选卵１ｍ）２Ｕ１２１
分挖掘优良母畜的繁殖潜力，加速良种家畜的繁殖纤维中心最多，但尚未发生致密化；到直径３～ｌ．５Ｉｍ５Ｔ和育种进程，而且为胚胎工程的其它研究以及拯救卵泡，颗粒细胞突起开始退化，卵母细胞微绒毛自透

影响绒山羊母羔卵母细胞体外成熟因素的研究

毛用羊产业技术体系（ｙｙｘ４６ｎｃｔｎｃｔ０１、ｙｙｘ
一
ＰＳ，即先肌肉注射ＰＳ０Ｕ以后每问隔ＭＧＭＧ４０Ｉ，１分别肌肉（２ｈ可在颈部肌肉或后肢内侧肌肉）注射ＦＨ４ｇＳ０ｍ，共３。次１．卵母细胞活体采集母羔在最后一．２４次超
司。
ｃ，０培养箱：ＨＲｅｌ５，美国；立体显１４实验方法ＥＡｅｌ１０．１．诱导母羔卵泡发育方法母羔超排用ＦＨ．１４Ｓ、
收稿日期：０卜ｌ２２１１５基金项目：国家科技支撑计划（０９ＡＡＢ２、困家绒２０ＢＤ５０）
细胞。本试验结果表明，１ｇｍ组，２ｇｍ０ｎ／ＬＨｏｎ／Ｌ
很多研究发现，卵泡直径、卵母细胞直径与ＥＦｂＩＧ组Ｐ率极显著高于对照组ＥＦｈｌＧ组Ｐ率显著其减数分裂能力以及进一步的发育能力有关。本高于１ｇｍ组＜００）０ｎ／Ｌ．５，表明ＥＦ卵母细胞Ｇ对试验结果显示，直径＜ｌ０组Ｐ率（２２％成熟有很大促进作用。刘丑生等在绵羊卵母细２加ｈＩ３．２）极显著低于其他组＜００）．１，直径＞１０组胞成熟液中添ＪＥＦ结果为５ｇｍ的ＥＦ３ｍＪＧ，Ｎ０ｎ／ＬＧ的成Ｐ率显著高于直径１０１０组（＜００）ｈＩ２～３ｍ尸．５。
率极显著高于对照组（Ｐ＜０１．），２ｇｍＬＥＦｂＩ（１３００ｎ／Ｇ组ｐ率７．％）显著高于１ｇｍＬＲ４０ｎ／￣

羔羊超数排卵与胚胎体外生产技术研究进展

（．安徽农业大学动物科技学院，安徽合肥２０３；２１３０６．安徽地方畜禽遗传资源保护与生物育种省级实验室，徽合肥２０３）安３０６
摘要：自从幼畜体外胚胎移植（ＩＴ）术问世以来，ＪＶＥ技因其在优秀种畜快繁、育种世代间隔缩短、传遗资源保护等方面具有广阔的应用前景，引起了很多科研机构的关注。为提高ＪＶＥ的生产效率，究人员ＩＴ研对该技术的多个环节进行了探索，总体效率还不是很高。论文就羔羊超数排卵与胚胎体外生产技术实施但中的关键环节，即羔羊超排供体的年龄、超排季节生殖激素的使用、羊超排反应、羔卵母细胞发育效率、卵母
上均无显著差异，３周龄～４周龄羔羊具有更好而
生约２０只后代（照现在报道的最高生产效率，５按每
只羔羊每次超排可以生产ｌＯ只后代，１只母羔出生后６个月最少可出生１Ｏ只后代，５只母羔后代计以算，而这５只母羔６个月后又可以产生５Ｏ只后代，
幼畜超数排卵与采卵、母细胞体外成熟、外受卵体精、胚胎体外培养和胚胎移植等繁殖技术集成综合的生物高技术体系。该技术的产生，得优秀种畜使扩繁、代间隔周期、世遗传改良进程等方面的效率大

绵羔羊卵母细胞体外发育能力的研究

绵羔羊卵母细胞体外发育能力的研究绵羊是我国重要的经济性家畜之一，其肉、毛产业在国民经济中占据重要地位。

然而，对于绵羊的繁殖技术仍存在一些问题，限制了其产业的进一步发展。

近年来，随着生物技术的不断发展，体外受精技术成为人们关注的研究领域之一。

体外受精技术可以通过体外培养卵子和精子，实现绵羊的繁殖，为提高绵羊产犊率和改良绵羊品质提供了新的途径。

绵羊的卵母细胞发育是实现体外受精的关键过程之一。

卵母细胞的体外发育需要克服许多挑战，包括合适的培养基、培养环境和培养时间等因素。

为了研究绵羊卵母细胞体外发育能力，许多科研机构投入了大量的人力和物力。

首先，研究人员需要获取绵羊卵巢组织，并分离出卵泡。

这个过程需要操作者具备一定的解剖技术和知识，以避免损伤和污染样本。

卵泡分离后，科研人员还需要用特定培养基培养卵母细胞。

传统的培养基往往会因为缺乏足够的营养物质和因子而使得卵母细胞无法正常发育。

为了解决这个问题，研究人员通过改良培养基的配方，添加适当的细胞因子和补充物，优化了绵羊卵母细胞的培养条件。

其次，培养卵母细胞时，科研人员需要注意培养环境的控制。

温度、湿度和氧气浓度等因素都会对卵母细胞的发育起到重要的影响。

为了确保培养环境的稳定，科研人员使用了高科技设备，例如培养箱和培养箱控制器，通过调节温度和湿度来模拟体内的环境。

此外，研究人员还通过控制培养环境中的氧气浓度，模拟不同的绵羊生育阶段，进一步促进卵母细胞的发育。

最后，科研人员需要确定合适的培养时间，以确保卵母细胞能够充分发育。

过长或过短的培养时间都会影响卵母细胞的发育，从而影响体外受精的效果。

为了确定最佳的培养时间，研究人员通过观察卵母细胞的形态变化和核发育程度来判断卵母细胞的发育状态。

综上所述，绵羊卵母细胞体外发育能力的研究是一项具有挑战性的工作，需要科研人员克服许多困难。

通过优化培养基的配方、控制培养环境和确定合适的培养时间等手段，绵羊卵母细胞的体外发育能力得到了一定的提高。

山羊卵母细胞体外成熟的研究

分 � , 因而不能确
理盐水冲洗 2�3次 , 再用含 3� � 取卵 � l B S A的3 9� D P B S( g 液) 液洗一次 , 然后在含取卵液的培养皿中用手术刀片轻轻划破卵巢表面 2�6�� 的卵泡 , 再用 5� l注射器吸取少量取卵液冲洗划破的卵泡 , 汇集冲洗液 , 放置在 3 静置 1�2 9� 恒温板上 , 分钟后在体视显微镜下检卵 � 根据试验需要吸取形态完整 , 细胞质致密 , 色泽均一 , 卵丘细胞在 3 层或 3 层以上 , 且包裹致密的卵丘卵母细胞复合体 ( ) 用于体外培养 � C OC � � � 卵母细胞成熟培养液配制 M 1 9 9 干粉 +2 . 2g 碳酸氢钠丙酮酸钠青霉素 +2 5� g +4 . 8gHE P E S+7 5� g + 5 0� g 链霉素按要求用双蒸水配成 10 , 用孔径为 0 0 0� l . 2� � 的微孔滤膜过滤除菌 , 存放于 4� 冰箱中 , 使用期为 1 5天 �F B S于5 6� 灭活3 分装成 5� � 瓶, 于 0 分钟后 , l 2 0 � 冰箱中保存 � 液体石蜡与等体积的双蒸水混合振荡洗涤 3�5 次 , 1 6 0� 灭菌 1 小时 � 血清培养液 � � � M 1 9 9+F B S( 1 0 %) + 1 0� � l F S H+2 0� � l LH+ � � 1� � l1 7� E 1 9 9+B S A1 0� � l+ g 2 和无血清培养液 M g � � � 均在无菌条件下 1 0� � l F S H+2 0� � lL H+1� � l 1 7� E g 2, 配制好 , 待用 � � � � C O C 成熟培养采用常规的微滴法培养 � 无菌条件下将

影响辽宁绒山羊母羔胚胎体外生产因素的研究

第３卷第６ｌ期
试验研究
影响辽宁绒山羊母羔胚胎体外生产因素的研究
豆兴堂ｌ，＇宋先忱，，郭丹张兴会一，
（．宁省辽宁绒山羊原种场有限公司，阳１１０；．１辽辽１００２辽宁省畜牧科学研究院，阳１１０）辽１００
ｃｅｖｇａｅａｄｂａｔｃｓｒｔｆＭＳＦＨｒｕｅｅｓｇｉｃｎｌｉｈｒｈｎｔｏｅｏＨＳＰＧｇｏｐ（Ｏ０）ｏｌａａｅｒｔｎｌｓｏｙｔａｅｏＧ＋ＳｇｏｐｗｒｉｎｆａｔｈｇｅａｓｆＰｉｙｔｈＦ＋ＭＳｒｕＰ＜．１，ｎ
ＴＬｏｐＰＯ１．ＡＰｇｕ（＜．）ｒＯ
ＫｙｒｓＬａｎｎａｈｒｏｔｉｉｏｆｒｌａｉｎｅｒｏｅｗｏｄ：ｉｏｉｇｃｓｍｅｅａ；ｖｔｔｉｔ；ｍｂｇｎｒｅｉｚｏｙ
自然情况下，成年母羊不经激素处理，活体采卵仅能
显著高于ＦＨＰＧ法（０Ｏ）但超排卵母细胞数差异不显著（０５；熟液添加２ｇＬＥＦ组极体Ｓ＋ＭＳ．１，Ｐ＞．）成００／Ｇｎｍ
率、囊胚率显著高于对照组（＜．）卵裂率差异不显著（００）ＳＦ受精体系卵裂率显著高于ＴＬ（＜ＰＯ０，５Ｐ＞．；Ｏ５ＡＰＰ
ｄｅｅｃｅｏｙｕｂｒ（＞．）ｐｌｏｙａｄｂａｔｙｔａ０ｇＬＥＦｇｏｐｅｇｉｃｎｙｉｅｉｒｎｅｎｔｃｔｎｍｅＰＯ５；ｏａｂｄｔａｌｏｓｒｔｉ２／Ｇｒｒｓｎｆａｔｇｒｆｉｈｏｅ０ｒｒｅｎｓｃｅｎｎｍｕｗｅｉｉｌｈｈ

山羊体外胚胎生产技术研究现状

破法、卵巢切割法。屠宰场获得的卵巢通过抽吸后每用第２，即将成熟培养液先在细胞培养皿中做成从种
个卵巢平均可获１．．枚可用卵母细胞，ｒｎ等５５～２１Ｍａｔｏｉ０～１０Ｌ的微滴或在四孔板中加入５０００Ｌ培养
０～０枚卵母细胞采用切割法回收卵泡卵母细胞，平均每个卵巢可获６液，上覆矿物油，培养密度为１２／０Ｌ培养液，３～３５Ｃ２１０于８９ｏ％Ｏ的空气中，和Ｃ、饱
维普资讯
黑龙江动物繁殖
第１５卷第６期
２００７年
９
山羊体外胚胎生产技术研究现状
邵庆勇，成文敏，琼花李卫娟，洪，赵智勇，红远杨
（．南省畜牧兽医科学研究所，南１云云昆明６０２；．南农业大学动物科技学院，５２４２云云南昆明６００）５２１
山羊卵母细胞的体外受精报道始于１８９４年，枚ＣＣ，抽吸法和刺破法高；ｎ等ｆ为对于羔Ｏｓ较Ｗａｉ３Ｉ认Ｈａａａ等于１８ｎｄ９５年首次利用山羊排出的成熟卵子进羊小卵巢卵泡，采用刺破法对于回收卯母细胞更为有行体外受精并得到羔羊，到１９才出生首例经卵效，但９２年而大卵巢通常采用抽吸法。总的来说，吸法获得抽
成熟卵母细胞体外受精的受精率以及卵裂胚的囊胚发量减少。育率都还较低ｆ而山羊作为转基因动物中的一个重要１Ｊ。活体采卵过程中通常采用抽吸法回收卵母细胞，的实验对象，特别是在作为生物反应器方面具有特殊为增加卵巢上直径大于２ｎ／卵泡的数量，ｌｌｌ在采卵前常的生物学意义，因此，续探索如何改进体外获能、继受采用促性腺激素处理供体以增加可用卵泡的数量，精及培养体系，从而提高受精率及囊胚发育率显得尤Ｇａ等ｆ用腹腔镜法活体采集经ＦＨ处理后的成年ｒｆ５ｔ利Ｓ

cAMP调节剂对卵母细胞体外成熟效果的调节机制研究进展

cAMP调节剂对卵母细胞体外成熟效果的调节机制研究进展齐雅天1，房晓欢1，李飒1，李俊杰1,2*（1.河北农业大学动物科技学院，河北保定 071000；2.河北省牛羊胚胎技术创新中心，河北保定 071000）摘要：卵母细胞体外成熟是家畜体外胚胎生产关键技术之一。

卵母细胞的环磷酸腺苷（cAMP）水平能够通过调节核质同步成熟进程影响卵母细胞发育能力，因此，cAMP对卵母细胞体外成熟质量的影响受到广泛关注。

本文针对常用的cAMP调节剂及其调节卵母细胞体外成熟的机制进行综述，以期为改善卵母细胞体外成熟效果提供依据。

关键词：卵母细胞；体外成熟；cAMP；进展中图分类号：S814.8 文献标识码：A DOI编号：10.19556/j.0258-7033.20200627-02卵母细胞体外成熟（IVM）是体外胚胎生产的关键技术之一，对于人类辅助生殖技术和优良种畜快速扩繁具有重要意义[1]，其成熟效果直接影响着后续体外受精、体细胞核移植、转基因、胚胎干细胞与胚胎移植等技术的效果，对于胚胎基因组激活和早期胚胎发育至关重要。

卵母细胞成熟包括细胞核与细胞质成熟2个方面[2]，但哺乳动物卵母细胞在常规IVM培养时，易导致细胞核成熟先于细胞质成熟，造成核质成熟不同步，影响卵母细胞成熟质量[3]。

研究发现，卵母细胞体内成熟时高水平的环磷酸腺苷（cAMP）是抑制核成熟的关键调节因子[4]。

因此，常在IVM前增加预成熟阶段升高cAMP，抑制核成熟，使细胞质充分发育，有助于提高卵母细胞发育能力[5]。

Zhang等[6]研究发现，使用cAMP调节剂可维持小鼠卵母细胞内高cAMP水平，从而抑制核成熟，提高卵母细胞核质同步成熟效果。

本文通过对卵母细胞内cAMP的动态变化、常用cAMP调节剂及其调节卵母细胞成熟的机制进行综述，以期为提高卵母细胞体外成熟效果提供依据。

1卵母细胞成熟过程中cAMP变化及对卵母细胞体外成熟的影响哺乳动物卵母细胞来源于胚胎期出现的卵原细胞，卵原细胞经多次有丝分裂发育为初级卵母细胞，后经2次减数分裂得到成熟的卵母细胞。

哺乳动物卵母细胞体外培养研究进展(发育生物学论文)

哺乳动物卵母细胞体外成熟研究进展生科1202班张文娅201224140212摘要：卵母细胞体外成熟培养已经成为现代胚胎生物技术的重要内容之一，是性别控制、体外受精、核移植和转基因等技术成功前提和关键[1]。

关键字：哺乳动物；卵母细胞哺乳动物卵巢内含有大量的原始卵泡，其数量因物种和发育阶段而不同，如出生小鼠大约为一万个，人和家畜约为几百万个。

到初情期后，小鼠约四千个，牛羊约十万个，猪约四十多万个，但大部分卵泡中途闭锁退化，在一个生殖周期中发生排卵的卵泡只有一个或几个[2]。

所以说，哺乳动物卵巢的开发潜力很大。

1 卵母细胞的获取卵母细胞体外成熟（in vitro maturation,IVM）是指从卵巢中获取未成熟卵，经过适宜的体外培养条件，卵母细胞发育成熟并具有受精和胚胎发育能力。

哺乳动物卵母细胞体外成熟质量对卵母细胞的激活、受精及其后继的胚胎发育均有重要影响[3]。

获取大量的优质卵母细胞是实现卵母细胞体外成熟培养的先决条件，也是胚胎生物技术研究的基础。

1.1 活体采集活体卵母细胞的采集主要有盲采法、内窥镜法和超声波法。

20世纪80年代初，Sirard首次将内窥镜用于牛卵泡卵母细胞的采集，同年Copata也以同样的方法获得成功；荷兰Pieterse等首次利用超声波技术通过子宫壁从活牛卵巢采集到卵母细胞。

盲采法由熟悉操作的人一只手通过操控采卵器进行阴道弯隆穿刺，另一只手直肠内配合引导采卵器并把握卵巢吸取含有卵子的卵泡液进行取卵[4]。

盲采法回收率达65%以上。

内窥镜法是在腹腔镜探头的观察下，通过操作杆和采卵针收集卵母细胞的方法。

内窥镜法对卵母细胞的回收率达40%-80%，超声波法回收率达60%。

盲采法是使用最多的一种方法。

活体采集对操作人员的技术要求比较高。

1.2 离体采集离体采集卵母细胞最大的优势在于取材方便，相比活体采卵技术，显著降低了卵母细胞的获取成本和对操作人员的技术要求，能够满足实验对大批量卵母细胞的需求。