微生物大小及数量的测定
微生物细胞大小和数量的测定
实验程序
测定微生物的大小 测定微生物数量
实验程序Ⅰ （测定微生物的大小）
测定的工具：目镜测微尺 镜台测微尺
实验程序Ⅱ
（测定微生物的大小）
目镜测微尺的校正：在高倍镜下，看清镜台测微尺的刻度后， 转动目镜，使目镜测微尺与镜台测微尺的刻度平行，移动推动 器，使目镜测微尺的0点与镜台测微尺的某一刻度重合，然后， 仔细寻找两尺第二个完全重合的刻度。计算两刻度间目镜测微 尺的格数和镜台测微尺的格数。由于镜台测微尺的刻度每格长 10µm，所以可得： 目镜测微尺每格长度（ µm）=（镜台测微尺格数×10）/目镜 测微尺格数 注意：校正目镜测微尺必须针对特定的显微镜和附件（特定的 接物镜、接目镜、镜筒长度等）进行，而且只能在这特定的情 况下才可重复使用。
微生物细胞大小和数 量的测定
微生物细胞大小和数量的测定
目的要求 实验材料 实验程序 思考题
目的要求
学习使用目镜测微尺和镜台测微尺在显 微镜下测定微生物大小的方法。 学习使用血球记数板测定微生物数量的 方法。
实验材料
显微镜、目镜测微尺、镜台测微尺、细 菌染色片、血球记数板、酵母菌悬液、 盖玻片、无菌滴管、西水纸、擦镜纸、 香柏油、二甲苯。
（测定微生物数量）
本实验用血球计数板计数酵母菌的数量
1. 取清洁无油的血球计数板，在计数室上面加 盖玻片。
2. 取酵母菌液，摇匀，用滴管由盖玻片边缘滴一 小滴，使菌液自行渗入，计数室内不得有气泡。
实验九微生物菌体大小及菌群数量的测定
实验九微生物菌体大小及菌群数量的测定
生科15.2 周罡 201500181104
【实验目的】
1. 学习并掌握使用显微测微尺测定微生物大小的方法。
2. 学习并掌握使用血细胞计数板测定微生物细胞或孢子数量的方法。
【实验原理】
（一）微生物菌体大小的测定
微生物大小的测定，需借助于特殊的测量工具——显微测微尺，它包括目镜测微尺和镜台测微尺两个互相配合使用的部件。
镜台测微尺（图1）是一个在特制载玻片中央封固的标准刻尺，其尺度总长为1mm，精确分为10个大格，每个大格又分为10个小格，共100个小格，每一小格长度为0.01mm，即10μm。刻线外有一直径为Φ3，线粗为0.1mm的圆，以便调焦时寻找线条。刻线上还覆盖有厚度为0.17mm的盖玻片，可保护刻线久用而不损伤。镜台测微尺并不直接用来测量细胞的大小，而是用于校正目镜测微尺每格的相对长度。
图1 镜台测微尺图2 目镜测微尺
目镜测微尺（图2）是一块可放入接目镜内的圆形小玻片，其中央有精确的等分刻度，一般优彼等分为50小格和100小格两种。测量时，需将其放在接目镜中的隔板上，用以测量经显微镜放大后的细胞物像。由于不同显微镜或不同的目镜和物镜组合放大倍数不同，目镜测微尺每小格在不同条件下所代表的实际长度也不一样。因此，用目镜测微尺测量微生物大小时，必须先用镜台测微尺进行校正，以求出该显微镜在一定放大倍数的目镜和物镜下，目镜测微尺每小格所代表的长度。然后根据微生物细胞相当于目镜测微尺的格数，即可计算出细胞的实际大小。
（二）显微镜计数
显微技术法是将少量待测样品的悬浮液置于一种特定的具有特定容积的载玻片上（又称计菌器），于显微镜下直接观察、计数的方法。目前国内外常用的计菌器有：血细胞计数板、Peteroff-Hauser计菌器以及Hawksley计菌器等，它们可用于各种微生物单细胞（孢子）悬液的计数，基本原理相同。其中血细胞计数板较厚，不能使用油镜，常用于个体相对较大的酵母菌细胞、霉菌孢子等的计数，而后两种计数器较薄，可用油镜对细菌等较小的细胞进行观察和计数。除了用上述这些计菌器外，还有用已知颗粒浓度的样品如血液未知浓度的微生物细胞（孢子）样品混合后根据比例推算后者浓度的比例计数法。显微技术法的优点是直观、快速、操作简单，缺点则是所测得的结果通常是死菌体和活菌体的总和，且难以对运动性强的活菌进行计数。目前已有一些方法可以克服这些缺点，如结合活菌染色、微室培
微生物量的测定方法
微生物量的测定方法
常见的微生物量测定方法包括：
1. 平皿计数法：将样品按一定稀释倍数加入琼脂平皿中，培养后通过计数器统计微生物在平皿上的数量，以此计算原样品中微生物的数量。
2. 滤膜计数法：将样品过滤后将滤膜放在富含营养的琼脂平板上培养，通过计数器统计滤膜上微生物的数量，以此计算原样品中微生物的数量。
3. 光密度法：利用菌落浑浊作用测定微生物规模大小的方法，称为“比色法”，并以光密度来表示菌落数量的多少。
4. 电极测定法：利用特定的氧化还原反应来测定微生物量，例如，生物化学需氧量（BOD）和化学需氧量（COD）。
5. 溶解氧测定法：利用溶解氧在水中的含量来推算微生物的存在量。
6. 分子生物学方法：利用PCR、DNA芯片等技术检测微生物数量，也可通过它们的遗传物质（如rRNA）来推算微生物的存在量。
微生物大小的测定报告
微生物大小的测定报告微生物大小的测定报告
微生物是生物界中一类非宏观、非个体、非生物和非细胞的微小生物的总称。它们具有体积小、数量大、分布广、种类多、生命力旺盛等特点，与人类的生产、生活密切相关。微生物大小的测定是微生物学研究中的一项基本技术，对于了解微生物的种类、生长和繁殖等方面具有重要意义。本文将详细介绍微生物大小的测定方法、测定步骤以及结果分析等方面的内容。
一、测定方法
微生物大小的测定方法有很多，如显微测量法、压滤法、离心法等。其中，显微测量法是最常用的一种方法，其原理是利用显微镜对微生物的大小进行直接测量。具体步骤如下：
1.准备显微镜、血球计数板、盖玻片、吸管等实验器材。
2.用吸管吸取一定量的微生物培养液，轻轻滴在血球计数板上，然后盖上盖玻
片。
3.在显微镜下观察并计数，记录每个视野中的微生物数量和大小。
4.重复以上步骤多次，求平均值，即可得到微生物的平均大小。
二、测定步骤
1.准备试剂和器材
（1）试剂：无菌水、生理盐水、无菌玻璃珠、无菌平皿等。
（2）器材：移液器、无菌吸管、无菌涂布器、无菌镊子、电子天平等。
2.制备菌悬液
（1）用电子天平称取适量的细菌干粉，加入无菌生理盐水，摇匀。
（2）用移液器吸取上述菌悬液，加入无菌平皿中，加入无菌玻璃珠，摇匀。
（3）用无菌涂布器将上述菌悬液涂布到平皿表面，静置片刻，让细菌贴壁生长。
3.测定菌落大小
（1）在上述平皿中加入无菌水，让水面覆盖平皿表面。
（2）用无菌镊子将平皿翻转，让细菌接种到无菌水表面，涂布均匀。
（3）静置约30分钟，让细菌形成单个菌落。
微生物的大小及数量的测定
2
微生物试验报告
图 3 血球计数扳的构造 a. 平面图(中间平台分为两半，各半边有一个方格网) b. 侧面图(中间平台与盖玻片之间有高度为 0.1 毫米的间隙)
图 4 血球计数板计数网的分区和分格
三、 实验材料
1. 仪器 显微镜，目镜测微尺，镜台测微尺，血球计数板、盖玻片（22mm×22mm）、吸水 纸、计数器、滴管、擦镜纸，酒精灯 2. 材料 酵母菌液，枯草芽孢杆菌斜面培养物 3．试剂 美兰染液，结晶紫，蒸馏水等
8 1
7 1
8 2
7.67 1.33
枯草芽孢杆菌大小平均值＝3.91（长轴）×0.68（短轴）μ m² 4、血细胞计数板对酵母菌悬液计数结果
实验次数 1 47 48 各中格中菌数 39 32 30 总菌数 196 稀释倍数 5 平均值 39.2 菌数(个/mL) 4.90×10
7
5
微生物试验报告
六、 实验分析
参考文献
詹火元生物学通报 1995 年底 30 卷第 2 期 沈萍，陈向东.微生物学.第二版.北京:高等教育出版社，2006 沈萍，陈向东.微生物学实验.第 4 版.北京:高等教育出版社，2007
6
2、酵母菌的大小测定结果（10×100）
菌号 目镜测微尺的格数 （小格） 长轴 短轴 1 2 3 平均值
13 9
12 9
12 10
微生物实验五微生物数量的测定
三、实验器材
啤酒酵母菌悬液，显微镜，血球计数板， 载玻片，电吹风，盖玻片，接种环，0.1%、 0.05%吕氏美蓝染色液。
四、实验方法和步骤
1、菌悬液的制备 为便于计数，对样品进行适当稀释，稀释程度
以每小格内含5-10个酵母宜，可采用10倍系列 稀释法。 2、镜检计数室 在加样前，先对计数板的计数室进行镜检。如 有污物，则需清洗，用点吹风吹干后才能进行 计数。
死细胞数
死亡率=
×100%
细胞总数
Hale Waihona Puke Baidu
死亡率是单位体积内死亡的细胞数占总细胞数的 百分率。
7、计数完毕，将计数板在水龙头下冲洗干 净，切勿用硬物洗刷，洗完后自行晾干或 电吹风吹干。
五、实验结果
次数
1
中方格序号
细胞数
芽体数
细胞数/ml
芽体数/ml
出芽率
2
平均值
六、思考题
根据你的实验体会，说明用血球计数板进 行微生物计数时，其误差来自哪些方面？ 如何避免？
3、加样品 将清洁干燥的血球计数板盖上盖玻片，再用无菌的毛细滴
管将摇匀的菌悬液由盖玻片边缘让菌液沿缝隙靠毛细渗透 作用自动进入计数室，用吸水纸吸去多余菌液。样品要均 匀充满计数室，不可有气泡。
4、显微镜计数 加样后静止5min，然后将血球计数板置于显微镜载物台
微生物数量的测定方法
微生物数量的测定方法
微生物数量的测定方法
微生物是一类微小的生物体，包括细菌、真菌、病毒等。它们广泛存在于自然界中的土壤、水体、空气中，也存在于人体内外。了解微生物的数量对于环境监测、食品安全、医学诊断等领域具有重要意义。本文将介绍几种常用的微生物数量测定方法。
1. 直接计数法
直接计数法是最直接、最常用的微生物数量测定方法之一。它通过显微镜观察和计数来确定微生物的数量。首先，将待测样品制备成适当的悬浮液，然后在显微镜下观察，并使用计数器进行计数。这种方法适用于细菌和酵母等较大的微生物。但是，由于显微镜观察需要较高的技术水平和时间，所以无法快速测量大量样品。
2. 培养法
培养法是一种常用的微生物数量测定方法，它通过培养微生物并计数生长的菌落来确定数量。首先，将待测样品制备成适当的培养基，然后在恰当的温度和湿度条件下培养一段时间。培养基中的微生物会形成可见的菌落，通过计数菌落的数量来确定微生物的数量。这种方法适用于大部分微生物，但是它需要
一定的培养时间，并且某些微生物可能无法在常规培养基上生长。
3. 膜过滤法
膜过滤法是一种常用的微生物数量测定方法，它通过将待测样品过滤到膜上，并将膜培养在适当的培养基上来确定数量。首先，将待测样品通过特定孔径的过滤器过滤，然后将过滤后的膜放置在培养基上培养。培养基中的微生物会在膜上形成可见的菌落，通过计数菌落的数量来确定微生物的数量。这种方法适用于水样、空气样等液态和气态样品。
4. 分子生物学方法
分子生物学方法是一种新兴且快速发展的微生物数量测定方法。它通过检测和分析微生物DNA或RNA来确定数量。常用的
微生物量微生物大小及数量的测定
微生物量：微生物大小及数量的测定微生物量：微生物大小及数量的测定
微生物大小及数量的测定
一、实验目的
1.学习并掌握用测微尺测定微生物细胞大小的方法。
2.了解血细胞计数板的构造及计数原理。
3.掌握使用血细胞计数板进行微生物计数的方法。
二、实验原理
1.微生物大小测定原理
微生物细胞的大小是微生物的形态特征之一，也是分类鉴定的依据之一。其测量工具有目镜测微尺和镜台测微尺。镜台测微尺是中央部分刻标准刻尺的载玻片，其尺度总长为1mm，精确分为10个大格，每个大格又分为10个小格，共100小格，每一小格长度为0.01mm，即10μm。如图1。
图1镜台测微尺中央部分及镜台测微尺校正目镜测微尺
目镜测微尺，如图2，是一块可放入接目镜内的圆形小玻片，其中央有精确的等分刻度，一般有等分为50小格和100小格两种。测量时，需将其放在接目镜中的隔板上，用以测量经显微放大后的细胞物象。由于不同显微镜或不同的目镜和物镜组合放大倍数不同，目镜测微尺每小格在不同条件下所代表的实际长度也不一样。
图2目镜测微尺
2.血球计数板测定微生物数量的原理血细胞计数板是一块特制的载玻片，其上由4条槽构成3个平台。中间较宽的平台又被一段横槽隔成两半，每一边的平台上各刻有一个方格网，每个方格网共分9个大方格，中间的大方格即为计数室。计数室的刻度一般有两种规格，一种是一个大方格分成25
个中方格，
而每个中方格又分成16小方格（图5-2）；另一种是一个大方格分成16个中方格，而每个中方格又分成25个小方格，但无论是哪一种规格的计数板，每一个大方格中的小方格都是2400个。每一个大方格边长为1mm，则每一个大方格的面积为1mm，盖上盖玻片后，盖玻片
微生物大小及数量的测定
微生物大小及数量的测定 Prepared on 22 November 2020
微生物大小及数量的测定
一、实验目的：
1、学习并掌握使用显微镜测微尺测定微生物大小的方法
2、掌握对不同形态细菌细胞大小测定的分类学基本要求，增强对微生物细胞大小的感性认识
3、学习并掌握使用血细胞计数板测定微生物细胞或孢子数量的方法
二、实验器材
1、菌种：
枯草芽孢杆菌、酿酒酵母
2、溶液和试剂
香柏油、二甲苯、美兰染液
3、仪器和其他用品
目镜测微尺、镜台测微尺、普通光学显微镜、擦镜纸、软布、血细胞计数板、凹载玻片、盖玻片、接种环、酒精灯、试管、吸管、移液枪
三、实验原理
1、测微尺：
微生物大小的测定，需要借助于特殊的测量工具——显微测微尺，它包括目镜测微尺和镜台测微尺两个互相配合使用的部件。
镜台测微尺是一个在特制载玻片中央封固的标准刻尺，其尺度总长为1mm，精确分为10个大格，每个大格又分为是10个小格，共100个小格，每个小格长度为，即10μm。刻线外有一直径为φ3，粗线为的圆，以便调焦时寻找线条。刻线上还覆盖有厚度为的盖玻片，可保护刻线久用而不受损伤。。镜台测微尺并不直接用来测量细胞的大小，而是用于校正目镜测微尺每一格的相对长度。
目镜测微尺是一块可放入接目镜内的圆形小玻片，其中央有精确的等分刻度，一般有等分为50个小格和100个小格两种。测量时，需将其放在接目镜中的隔板上，用以测量经显微镜放大后的细胞物象。由于不同显微镜或不同的目镜和物镜组合放大倍数不一样，目镜测微尺每小格在不同条件下所代表的实际长度也不一样。因此，用目镜测微尺测量微生物大小时，必须先用镜台测微尺进行校正，以求出该显微镜在一定放大倍数的目镜和物镜下，目镜测微尺每小格所代表的相对长度。然后根据微生物细胞相当于目镜测微尺的格数，即可计算出细胞的实际大小。
微生物的大小及数量的测定
微生物的大小及数量的测定
一、实验目的
1.了解显微镜测定微生物大小与血球计数板测定微生物数量的原理。
2.学习并掌握显微镜下测定微生物细胞大小的技术，包括目镜测微尺、镜台测
微尺的校正技术与测定细胞大小的技术。
3.了解血球计数板的结构，学习并掌握血球计数板计数微生物数量的技术，包
括样品的点样、菌数计数的方法与计算。
二、实验原理
1.微生物大小测定原理
微生物细胞的大小，是微生物重要的形态特征之一，也是分类鉴定的依据之一。由于菌体很小、只能在显微镜下来测量。用于测量微生物细胞大小的工具有目镜测微尺和镜台测微尺。
（1）目镜测微尺（图1）
目镜测微尺是一块圆形玻片，在玻片中央把5mm长度刻成50等分，或把10 mm长度刻成100等分。测量时，将其放在接目镜中的隔板上(此处正好与物镜放大的中间像重叠)来测量经显微镜放大后的细胞物象。由于不同目镜、物镜组合的放大倍数不相同，目镜测微尺每格实际表示的长度也不一样，因此目镜测微尺测量微生物大小时须先用置于镜台上的镜台测微尺校正，以求出在一定放大倍数下，目镜测微尺每小格所代表的相对长度。
图 1 目镜测微尺图2 镜台测微尺
（2）镜台测微尺（图2）
镜台测微尺是中央部分刻有精确等分线的载玻片，一般将lmm等分为100格，每格长l0μm（即0.0lmm），是专门用来校正目镜测微尺的。校正时，将镜台测微尺放在载物台上，由于镜台测微尺与细胞标本是处于同一位置，都要经过物镜和目镜的两次放大成象进入视野，即镜台测微尺随着显微镜总放大倍数的放大而放大，因此从镜台测微尺上得到的读数就是细胞的真实大小，所以用镜台测微尺的已知长度在一定放大倍数下校正目镜测微尺，即可求出目镜测微尺每格所代表的长度，然后移去镜台测微尺，换上待测标本片，用校正好的目镜测微尺在同样放大倍数下测量微生物大小。
微生物数量的测定方法
微生物数量的测定方法work Information Technology Company.2020YEAR
微生物数量的测定
1.计数器测定法：
即用血细胞计数器进行计数。取一定体积的样品细胞悬液置于血细胞计数器的计数室内，用显微镜观察计数。由于计数室的容积是一定的(O.1mm3)，因而根据计数器刻度内的细菌数，可计算样品中的含菌数。本法简便易行，可立即得出结果。
本法不仅适于细菌计数，也适用于酵母菌及霉菌孢子计数。
2、电子计数器计数法:
电子计数器的工作原理是测定小孔中液体的电阻变化，小孔仅能通过一个细胞，当一个细胞通过这个小孔时，电阻明显增加，形成一个脉冲，自动记录在电子记录装置上。
该法测定结果较准确，但它只识别颗粒大小，而不能区分是否为细菌。因此，要求菌悬液中不含任何碎片。
3、活细胞计数法
常用的有平板菌落计数法，是根据每个活的细菌能长出一个菌落的原理设计的。取一定容量的菌悬液，作一系列的倍比稀释，然后将定量的稀释液进行平板培养，根据培养出的菌落数，可算出活菌数。
此法灵敏度高，是一种检测污染活菌数的方法，也是目前国际上许多国家所采用的方法。使用该法应注意：①一般选取菌落数在30～300之间的平板进行计数，过多或过少均不准确；②为了防止菌落蔓延，影响计数，可在培养基中加入O．001％2，3，5一氯化三苯基四氮唑(TTC)；③本法限用于形成菌落的微生物。
广泛应用于水、牛奶、食物、药品等各种材料的细菌检验，是最常用的活菌计数法。
4、比浊法
比浊法是根据菌悬液的透光量间接地测定细菌的数量。细菌悬浮液的浓度在一定范围内与透光度成反比，与光密度成正比，所以，可用光电比色计测定菌液，用光密度(OD值)表示样品菌液浓度。
微生物细胞大小和数量的测定
实验程序 Ⅲ
（测定微生物数量）
方法：活菌计数法——平板菌落计数法；总菌计数法——血 球计数板或霍瑟（Peroff Hausser）细菌计数板（二者原理 和部件相同，只是厚薄不同而已）。
实验程序Ⅳ 1
实 验 程 序IV 2
5. 计算方法：
酵母菌细胞数/mL=
（X1+X2+X3+X4+X5）X 5
25（或16）X
10
X
1000
x
稀释倍数
6.
注意事项：压在方格线上的菌体，以压在底线和右
侧线上的菌体计入本格内；遇到有芽体的酵母时， 若芽体和母体同等大，就按单个酵母计数。
7. 计数完毕后，血球计数板要立即清洗干净，并用 吸水纸吸干，最后用擦镜纸擦干净，并放回盒内。
微生物细胞大小和数 量的测定
微生物细胞大小和数量的测定源自文库
目的要求 实验材料 实验程序 思考题
目的要求
学习使用目镜测微尺和镜台测微尺在显 微镜下测定微生物大小的方法。 学习使用血球记数板测定微生物数量的 方法。
实验材料
显微镜、目镜测微尺、镜台测微尺、细 菌染色片、血球记数板、酵母菌悬液、 盖玻片、无菌滴管、西水纸、擦镜纸、 香柏油、二甲苯。
微生物大小的测定试验目的及要求
实验操作过程中的安全防范
实验服和口罩
在进行实验时，应穿着清洁的工作服，佩戴口罩，以防止微生物 和细菌的污染。
实验区域的清洁
保持实验室的清洁和整洁，定期进行卫生清洁，减少尘埃和微生物 的污染。
避免交叉污染
在实验过程中，要特别注意避免交叉污染，即一个样品不应与其他 样品接触或混合，以防止污染和交叉污染。
结果分析方法
平均值计算
根据整理后的数据，计算微生物 大小的平均值、中位数等统计指
标。
变异系数分析
分析测量值的变异系数，了解数据 分布的离散程度。
显著性检验
采用t检验、方差分析等方法，检验 不同样本组间是否存在显著差异。
图表展示与报告撰写
图表展示
根据分析结果，绘制柱状图、折线图、箱线图等图表，直观 展示数据分布和差异。
测量工具的校准
在使用测量工具前，应进 行校准，确保测量结果的 准确性。
测量操作
在显微镜下观察微生物样 本，使用测量工具进行测 量，记录测量结果。
04
实验结果解读与展示
数据记录与整理
数据记录
在实验过程中，需要详细记录每个微 生物样本的测量数据，包括测量时间 、样本编号、测量值等。
数据整理
将测量数据进行整理，按照测量时间 或样本编号进行排序，以便后续分析 。
探究微生物生长与环境因素的关系
微生物数量测定
微生物数量测定
在生物学和医学领域，微生物的数量测定是一个重要的实验技术。通过对微生物数量的测定，我们可以了解生物体在不同环境中的适应性和生存能力，评估环境的健康状态，以及监测和治疗疾病等。
微生物数量测定的基本原理是利用单位体积或单位面积上的微生物细胞数，通过统计和计算得到微生物的数量。常用的方法包括显微镜计数法、比浊法、平板计数法等。
显微镜计数法是一种直接计数法，通过显微镜观察并计数样品中的微生物数量。该方法需要将样品均匀涂布在载玻片上，干燥后进行染色和固定，然后使用显微镜观察并计数。该方法的优点是简单易行，适用于微生物数量较少的样品，但不适用于大量样品。
比浊法是一种通过测量样品的浊度来测定微生物数量的方法。该方法是通过将样品与标准曲线进行比较，得出微生物的数量。该方法的优点是快速、简便、准确度高，适用于大量样品的测定。但是，该方法需要使用标准曲线，对于某些微生物可能不太准确。
平板计数法是一种通过培养微生物并计数菌落数量来测定微生物数量的方法。该方法是将样品稀释后涂布在培养基上，培养一定时间后
统计菌落数量，然后计算出微生物的数量。该方法的优点是准确度高，适用于各种微生物的测定，但需要一定的培养时间和人力。
微生物数量测定的应用领域非常广泛，包括环境科学、医学、食品科学、农业科学等。例如，在环境科学中，微生物数量测定可以用来评估污染物的毒性对生态环境的影响；在医学中，微生物数量测定可以用来监测和治疗疾病；在食品科学中，微生物数量测定可以用来控制食品的质量和安全；在农业科学中，微生物数量测定可以用来了解土壤的健康状况和作物的生长情况等。
微生物大小测定
微生物大小测定
微生物是一类十分微小的生物，由于其体积太小，因此很难直接观察到其形态和大小。测定微生物大小是进行微生物学研究和应用的基础。本文将详细介绍微生物大小的测定方
法和技术，希望对读者有所启发和帮助。
1. 光学显微镜测定法
光学显微镜是常用的微生物大小测定仪器，通过调节放大倍数和聚焦，可以观察到微
生物的形态和大小。光学显微镜测定微生物大小要注意以下几点：
（1）选择合适的光学显微镜放大倍数：因为微生物大小差异很大，所以所需的放大倍数也不同。一般来说，液体培养物中的细菌大小为0.5-2微米，而真菌大小则在5-100微
米之间，不同的微生物需要的放大倍数也不同。
（2）确定稳定的视场：要测量微生物大小时，应先确定光学显微镜视场的大小，并通过调节光圈大小和放大倍数，使得视野中微生物的形态和大小清晰可见。此外，要注意使
用透明载玻片将样品承载在显微镜下方，以防止样品污染光学显微镜有机镜片。
（3）利用图像处理软件测量：利用计算机处理显微镜拍摄的图像是近年来常见的测量方法。这种方法可以利用计算机软件处理出微生物所占的像素大小，并将像素大小转换为
实际的微生物大小。
电子显微镜是一种高清晰度的显微镜，它可以通过高压电子束来投射样品的图像。相
对于光学显微镜，电子显微镜的分辨率更高，可以测量更小的微生物。电子显微镜测定微
生物大小的一般方法是：
（1）准备好样品：微生物样本需要表面光滑、无杂质、干燥，以保证电子束在样品上的投射质量。
（2）制备样品薄片：制备样品薄片是电子显微镜测量的一个重要步骤。一般情况下，微生物样本会先进行固定、去水、脱脂等处理，然后制备样品薄片。制备薄片时需要使用
微生物大小和数量的测定
镜台测微尺 目镜测微尺
第1页
目镜测微尺每格实际代表长度随 物镜放大倍数而改变，也会因使用不 一样显微镜而产生误差，所以在使用 前必须用镜台测微尺进行校正。
微生物大小和数量的测定
第2页
目镜测微尺校正
微生物大小和数量的测定
第3页
三、操作步骤 l． 目镜测微尺标定 把目镜上透镜旋开，将目
两条重合线间镜台测微尺格数×10
目镜测微尺每格长（μm）=
两条重合线间目镜测微尺格数
微生物大小和数量的测定
第4页
三、操作步骤
3．菌体大小测定 将镜台测微尺取下，换上酿酒 酵母玻片标本，分别在低倍镜和高倍镜下找到目标 物，测量10～20个菌体长和宽占目镜测微尺格数， 再以目镜测微尺每格长度计算出菌体长和宽。统计 结果,求出平均值。
微生物大小和数量的测定
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镜测微尺轻轻放在目镜隔板上，使有刻度一面朝下。将 镜台测微尺放在显微镜载物台上，使有刻度一面朝上。 先用低倍镜观察，调焦距，待看清镜台测微尺刻度后， 转动目镜，使目镜测微尺刻度与镜台测微尺刻度相平行 ，并使两尺左边一条线重合，向右寻找另外一条两尺相 重合直线。
2．标定公式： 计算两刻度间目镜测微尺格数和镜台测微尺格数。因 为镜台测微尺刻度每格长10µm，所以可得：
微生物大小和数量的测定
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姓名班级13级生命基地班学号同组者：
科目微生物学实验题目微生物大小及数量的测定组别3
【实验题目】
微生物大小及数量的测定
【实验目的】
1.了解显微镜测定微生物大小与血球计数板测定微生物数量的原理。
2.学习并掌握显微镜下测定微生物细胞大小的技术，包括目镜测微尺、镜台测微尺的校正
技术与测定细胞大小的技术。
3.了解血球计数板的结构，学习并掌握血球计数板计数微生物数量的技术，包括样品的点
样、菌数计数的方法与计算。
【实验器材】
1、菌种：
酵母菌液，枯草芽孢杆菌
2、试剂：
结晶紫，蒸馏水，香柏油，二甲苯等
3、仪器和用具：
显微镜，目镜测微尺，镜台测微尺，血球计数板、盖玻片、吸水纸、计数器、滴管、擦镜纸，酒精灯等
【实验原理】
一、微生物大小的测定
1、测微尺的构造
微生物细胞的大小，是微生物重要的形态特征之一，也是分类鉴定的依据之一。由于菌体很小、只能在显微镜下来测量。显微镜测微尺是由目镜测微尺和镜台接物测微尺组成。 目镜测微尺
目镜测微尺是一块圆形玻璃片，其中有精确的
等分刻度，在5mm 刻尺上分50 份，或把10 mm
长度刻成100等分。测量时，将其放在接目镜中的
隔板上(此处正好与物镜放大的中间像重叠)来测量
经显微镜放大后的细胞物象。由于不同目镜、物镜
组合的放大倍数不相同，目镜测微尺每格实际表示
的长度也不一样，因此目镜测微尺测量微生物大小
时须先用置于镜台上的镜台测微尺校正，以求出在
图1
姓名 班级 13级生命基地班 学号 同组者：
科目 微生物学实验 题目 微生物大小及数量的测定 组别 3
一定放大倍数下，目镜测微尺每小格所代表的相对长度。 镜台测微尺
镜台测微尺是中央部分刻有精确等分线的载玻片，一般将lmm 等分为100格，每格长l0μm （即0.0lmm
），是专门用来校正目镜测微尺的。校正时，将镜台测微尺放在载物台上，由于镜台测微尺与细胞标本是处于同一位置，都要经过物镜和目镜的两次放大成象进入视野，即镜台测微尺随着显微镜总放大倍数的放大而放大，因此从镜台测微尺上得到的读数就是细胞的真实大小，所以用镜台测微尺的已知长度在一定放大倍数下校正目镜测微尺，即可求出目镜测微尺每格所代表的长度，然后移去镜台测微尺，换上待测标本片，用校正好的目镜测微尺在同样放大倍数下测量微生物大小。
2、 球菌用直径表示大小；杆菌用宽和长来表示。
二、血球计数板测定微生物数量
镜检计数法适用于各种含单细胞菌体的纯培养悬浮液，如有杂菌或杂质常不易分辨。菌体较大的酵母菌或霉菌泡子可采用血球计数板；一般细菌则采用彼得罗夫·霍泽(Petroff Hausser)细菌计数板。两种计数板的原理和部件相同，只是细菌计数板较薄，可以使用油镜观察。而血球计数板较厚，不能使用油镜，故细菌不易看清。
血球计数板是一块特制的厚载玻片，载玻片上有4条槽而构成3个平台。中间的平台较宽，其中间又被一短横槽分隔成两半，每个半边上面各有一个方格网(图3)。每个方格网共分9大格，其中间的一大格(又称为计数室)常被用作微生物的计数。计数室的刻度有两种：一种是大方格分为16个中方格，而每个中方格又分成25个小方格；另一种是一个大方格分成25个中方格，而每个中方格又分成16个小方格。但是不管计数室是哪一种构造，它们都有一个共同特点，即每个大方格都由400个小方格组成(图4)。
每个大方格边长为1mm ，则每一大方格的面积为1mm 2，每个小方格的面积为1／400mm 2，盖上盖玻片后，盖玻片与计数室底部之间的高度为0.1mm ，所以每个计数室(大方格)的体积为0.1mm 3，每个小方格的体积为l ／4000mm 3。计数时，通常数五个中方格的总菌数，然后求得每个中方格的平均值，再乘上25或16，就得出一个大方格中的总菌数，然后再换算成1ml
目镜测微尺
镜台测微尺
图2： 目镜测微尺和镜台测微尺的校准
姓名 班级 13级生命基地班 学号 同组者：
科目 微生物学实验 题目 微生物大小及数量的测定 组别 3
菌液中的总菌数。 以25个中方格的计数板为例，设5个中方格中的总菌数为A ，菌液稀释倍数为B ，则：1mL 菌液中的总菌数=A/5×25×104×B=50000A ·B （个）同理，如果是16个中方格的计数板，1mL 菌液中的总菌数=A/5×16×104×B=32000A ·B （个）
图3 血球计数扳的构造
a. 平面图(中间平台分为两半，各半边有一个方格网)
b. 侧面图(中间平台与盖玻片之间有高度为0.1毫米的间隙)
c.
图4 血球计数板计数网的分区和分格
【实验内容及步骤】
1、目镜测微尺的校正
科目微生物学实验题目微生物大小及数量的测定组别3
把目镜的上透镜旋下（CX20、CX21型号显微镜），将目镜测微尺的刻度朝下轻轻地装入目镜的隔板上，把镜台测微尺置于载物台上，刻度朝上。先用低倍镜观察，对准焦距，视野中看清镜台测微尺的刻度后，转动目镜，使目镜测微尺与镜台测微尺的刻度平行，移动推动器，使两尺重叠，再使两尺的“0”刻度完全重合，定位后，仔细寻找两尺第二个完全重合的刻度，计数两重合刻度之间目镜测微尺的格数和镜台测微尺的格数。因为镜台测微尺的刻度每格长l0μm，所以由下列公式可以算出目镜测微尺每格所代表的长度。
两重合线间镜台测微尺格数×10
目测尺每格长度（um）= 两重合线间目镜测微尺格数
用此法分别校正在物镜倍数为10×，40×，100×下目镜测微尺每小格所代表的长度。
由于不同显微镜及附件的放大倍数不同，因此校正目镜测微尺必须针对特定的显微镜和附件（特定的物镜、目镜、镜筒长度）进行，而且只能在特定的情况下重复使用，当更换不同放大倍数的目镜或物镜时，必须重新校正目镜测微尺每一格所代表的长度。
2、细胞大小的测定
A.酵母菌的大小测定
1)取一滴酵母菌菌悬液制成水浸片。
2)移去镜台测微尺，换上酵母菌水浸片，先在低倍镜下找到目的物，然后在高
倍镜下用目镜测微尺来测量酵母菌菌体的直径占几格（不足一格的部分估计到小数点后一位数）。测出的格数乘上目镜测微尺每格的校正值，即等于该菌的直径。
3）选取普遍大小的酵母菌菌体进行测量，记录三组数据，取平均值。
B.枯草芽孢杆菌的大小测定
1)将载玻片洗净晾干后，在其中央滴一滴蒸馏水，然后通过无菌操作用接种针取少量枯草
芽孢杆菌的斜面培养物于蒸馏水中，然后干燥
2)单染色
用结晶紫染液对其进行单染色：
流程如下：
3)置于显微镜下镜检，用目镜测微尺测量枯草芽孢杆菌的长和宽，