脯氨酸的检测方法

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乳制品中L-羟脯氨酸的测定

1 引言

皮革水解蛋白是由皮革废料或动物皮毛、脏器等水解生成的一种蛋白粉，将其掺入牛奶或奶粉中可提高蛋白质的含量。对于乳与乳制品中皮革水解蛋白的鉴定，主要是通过对L-羟脯氨酸含量的测定。L-羟脯氨酸是胶原蛋白（皮革水解蛋白）特有的氨基酸，在乳酷蛋白中则没有，所以一旦检出，则可认为含有皮革水解蛋白，即为“皮革奶”。本实验提供两种L-羟脯氨酸衍生方法，利用氨基酸分析柱，对L-羟脯氨酸进行分析检测，可根据实际情况进行选择。

2 仪器与试剂

2.1 仪器、器皿

2.1.1 HPLC+紫外检测器

2.1.2 Diamonsil AAA氨基酸分析柱（CAT#: 99751）。

2.1.3 11 mL水解瓶（CAT#: 55354）

2.1.4 1.5 mL塑料离心管。

2.1.5 20 mL玻璃具塞刻度试管。

2.1.6 5 mL玻璃具塞刻度试管。

2.1.7 0.22 μm针式过滤器（CAT#:37177）。

2.1.8 2 mL样品瓶（瓶：CAT#:5323，盖CAT#:5325）

2.2 试剂

2.2.1 甲醇（CAT#:50102）。

2.2.2 乙腈（CAT#:50101）

2.2.3 正己烷（CAT#:50115）

2.2.3 三乙胺（CAT#:50131）

2.2.4 冰醋酸（CAT#:50132）

2.2.5 三乙胺（CAT#:50131）

2.2.6 磷酸氢二钠（CAT#:50158）

2.2.7 磷酸二氢钠（CAT#:50157）

2.2.8 L-羟脯氨酸（CAT#:46587）

2.2.9 蛋白水解试剂：称取0.1 g苯酚置于100 mL容量瓶，加入50 mL浓盐酸（36%-38%，摩尔浓度约为12 mol/L），然后加水定容至100 mL。

脯氨酸的荧光激发波长

脯氨酸是一种重要的天然氨基酸，存在于多种生物体内，具有诸多生物功能和广泛的应用价值。脯氨酸的荧光激发波长是指当脯氨酸受到外界刺激时，所吸收的光的波长范围。下面将介绍脯氨酸的荧光激发波长及其影响因素。

脯氨酸的荧光激发波长主要受到两个因素的影响，一是脯氨酸的化学结构，二是环境因素。首先，脯氨酸的化学结构中，芳香环和酰基基团相互作用决定了其吸收和发射光谱。脯氨酸的吸收光谱范围为200-300 nm，发射光谱范围为300-450 nm。其次，环境因素也影响脯氨酸的荧光激发波长。例如，溶液的pH值、温度、离子强度等环境条件会对脯氨酸的吸收和发射光谱产生影响。

脯氨酸的荧光激发波长对于其生物功能和应用具有重要意义。首先，脯氨酸的发光特性可以用于生物物理学和生物化学研究中的分子探针和荧光标记。通过标记脯氨酸，可以用荧光显微镜观察其在细胞内的分布和运动轨迹，帮助研究者研究细胞生物学和生物化学过程。其次，脯氨酸的荧光激发波长还可以用于荧光检测和分析技术中。利用脯氨酸的荧光特性，可以实现对某些荧光物质的检测和分析，如荧光染料、荧光探针和生化分子等。

脯氨酸的荧光激发波长还受到多种因素的影响。首先，脯氨酸的光谱性质受到它的吸收效率和荧光发射效率的影响。脯氨酸的吸收效率与其分子结构和环境中的其他分子相互作用有关。例如，脯氨酸分子中的芳香环和酰基基团可以通过共振效应增

强其吸收效率。其次，溶液的pH值对脯氨酸的光谱性质也有

显著影响。在酸性条件下，脯氨酸分子的芳香环质子化，导致吸收和发射光谱发生红移。在碱性条件下，脯氨酸分子的芳香环解质化，吸收和发射光谱发生蓝移。另外，温度和离子强度等溶液条件也可以影响脯氨酸的光谱性质。例如，温度的变化可以引起脯氨酸分子结构的改变，从而影响其吸收和发射光谱。

脯氨酸(PRO)检测试剂盒(茚三酮比色法)

北京雷根生物技术有限公司 www.leagene.com
计算：
以系列脯氨酸标准(1-6 号管)含量(μg)为横坐标，以对应的吸光度为纵坐标，制作标准曲线，根据测定管的吸光度进而计算其脯氨酸含量。根据如下公式计算具体样品中脯氨酸的含量：
植物组织样品 PRO(μg/g)=C×VT/(W×VS) 式中：C=从标准曲线上查得的脯氨酸含量(μg)
组成：
编号名称试剂(A): 脯氨酸标准(100μg/ml) 试剂(B): PRO Lysis buffer 试剂(C): PRO Assay buffer 试剂(D): 茚三酮使用说明书
TO1113 50T
Storage
1ml 4℃
250ml RT
80ml RT
2 支 RT 避光
1份
自备材料：
Leagene 脯氨酸(PRO)检测试剂盒(茚三酮比色法)检测原理是脯氨酸游离于磺基水杨酸溶液中，前者与茚三酮共热发生反应，能产生稳定的红色产物，以分光光度计测定处吸光度，在一定范围内颜色深浅(即吸光度)与脯氨酸浓度成正比。该试剂盒主要用于测定植物组织中的游离脯氨酸含量。该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。
VT=脯氨酸提取液总体积(ml) W=样品鲜重(g) VS=测定时加入提取液体积(ml)
血清、尿液等样品 AA(μg/ml)=C×N/VS 式中：C=从标准曲线上查得的脯氨酸含量(μg) N=稀释倍数 VS=测定时加入提取液体积(ml)

脯氨酸含量的测定

脯氨酸是一种重要的氨基酸，由于其参与了生物体内多种代谢反应，因此在生物学、

医学、食品科学等领域都具有重要的应用价值。对于脯氨酸含量的测定，常用的方法主要

有生物化学法、色谱法、质谱法等。下面将详细介绍这些方法的原理和操作步骤。

一、生物化学法

生物化学法是一种常用的脯氨酸含量测定方法，其原理是利用苯酰亚胺与脯氨酸在强

酸条件下的酰化反应，生成具有紫色色素的N-苯酰脯氨酸，可通过分光光度计测定其吸收光谱来确定含量。

1. 操作步骤：

（1）样品制备

将待测样品粉碎并过筛，加入盐酸或硫酸等强酸，混合均匀，常温下反应数小时，将

反应溶液转移至滤袋中过滤，然后将滤液经旋转浓缩至干燥，加入适量的甲醇或氯仿等溶剂，振荡溶解，即可制备待测样品。

（2）标准曲线制备

取不同浓度的脯氨酸标准溶液，分别进行相同的处理方法，制备不同浓度的标准溶液。然后以标准溶液的吸收值为纵坐标，相应浓度为横坐标，绘制标准曲线。

（3）分光光度计测定

将待测样品和标准溶液分别置于分光光度计中，以标准曲线为参照，通过测定吸收光

谱来确定样品中脯氨酸的含量。

二、色谱法

色谱法多用于测定含量较低的脯氨酸，其原理是利用离子交换色谱分离脯氨酸，在检

测器中进行检测并计算。

将待测样品加入甲醇或氯仿等溶剂中，过滤经过滤纸，然后加入0.5N NaOH(或1N NaOH) 溶剂，混合并振荡，使脯氨酸完全转化为盐基态的氨基酸。

（2）色谱条件设置

利用离子交换色谱柱，设置流速，根据需求设置检测器(如紫外检测器)，调整溶液的pH值、离子强度等，使得脯氨酸能够被完全分离。

脯氨酸含量检测试剂盒说明书

脯氨酸（Pro ）含量检测试剂盒说明书

可见分光光度法

注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。货号：BC0290规格：50T/48S

产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

试剂名称规格保存条件提取液液体60mL×1瓶4℃保存试剂一液体45 mL×1瓶（自备）

4℃保存试剂二液体45 mL×1瓶4℃保存标准品

粉剂×1支

4℃保存

溶液的配制：

1．试剂一：自备冰乙酸。

2．标准品：脯氨酸10 mg ，临用前加入1 mL 蒸馏水，配成10 mg/mL 标准品。产品说明：

脯氨酸（Pro ）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，逆境条件下，植物体内Pro 含量显著增加。Pro 增加量在一定程度上反映了抗逆性，抗旱性强的品种往往积累较多的脯氨酸。因此，脯氨酸增加量可以作为抗逆育种的生理指标之一。

用磺基水杨酸（SA ）提取Pro ，加热处理后，Pro 与酸性茚三酮溶液反应生成红色，在520nm 测定吸光度。技术指标：

最低检出限：0.1791 μg/mL 线性范围：

0.5-40 μg/mL

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。需自备的仪器及用品：

可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、冰乙酸、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）1、细胞、细菌或组织样本的制备：

细菌或细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，弃上清；按照每500万细菌或细胞加入1mL 提取液，超声波破碎细菌或细胞（功率20％，超声3秒，间隔10秒，重复30次），之后置沸水浴振荡提取10min ；10000g ，常温离心10min ，取上清，冷却后待测。

脯氨酸的代谢

1. 脯氨酸的定义及其结构：

脯氨酸是一种异构氨基酸，其分子中有两个羟基，是一种含不对称的异构体。它的分子式为C5H9NO2，分子量为115.12，在水溶液中它的pKa为9.13。它有很好的水溶解性和营养抗性能，也是肌肉中最重要的氨基酸之一。

2. 脯氨酸的营养价值：

脯氨酸是重要的氨基酸，它是蛋白质的必需成分，对人体健康有着非常重要的作用。脯氨酸能为蛋白质提供硫醇所需的原料物质，能够防止肉类中脂肪囤积，调节肝脏胆固醇合成，促进免疫功能，增强新陈代谢，增加消化酶活性，增加消化酶吸收营养，并可以调节血液中的氨基酸含量，促进细胞再生成活力。

3. 脯氨酸的储存及检测：

脯氨酸由于其稳定性，在常温下储存，不易变质。在冷藏，干燥，避光的条件下，可保持较长的有效期，但氨基酸会发生氧化变质，因此在储存过程中应避免曝光在光线的作用。

脯氨酸的检测有多种方法，最常用的检测方法是通过液相色谱仪(HPLC)、分子筛、比色法和光源荧光技术等来实现，其结果可以为实验和工业生产提供重要参考。

4. 脯氨酸的代谢：

脯氨酸代谢在人体中发挥着重要作用。它被消化酶分解成谷氨酸、胱氨酸和末端丙酮酸，这些物质最终被肝脏分解成尿酸。高尿酸血症是一种与脯氨酸代谢异常有关的疾病，过多的尿酸可引发肾结石和关节炎。对脯氨酸代谢异常及其引起的疾病，应采取适当的措施积极治疗，以预防后续并发症的发生。

脯氨酸的检测方法

Coca-cola standardization office【ZZ5AB-ZZSYT-ZZ2C-ZZ682T-ZZT18】

脯氨酸的检测方法

1. 原理

样品用茚三酮处理，样品中的脯氨酸反应生成橙色物质，在520nm检测吸光度，并作空白对照实验。

2. 应用范围

本方法适用于蜂蜜、果汁和浓缩汁中的脯氨酸的检测。本方法在其它方面的应用必须经过个别论证。

3. 试剂及仪器

脯氨酸

3%茚三酮2-甲氧基乙醇溶液（茚三酮溶解于10ml 2-甲氧基乙醇，每天保持新鲜，即现用现配）

2-甲氧基乙醇

蚁酸(96%)，即甲酸

异丙醇（2-丙醇）水溶液：水：丙醇= 1：1

15ml旋盖玻璃离心管（确保离心管的边缘没有缺口，将有缺口的离心管丢掉）

分光光度计，检测吸光度设定在520nm下

1cm 玻璃比色皿

4. 样品准备

苹果，梨和大部分浆果的果汁用单一浓度（即原果汁浓度），橙汁用1：20的水进行稀释。其它的果汁应进行适当的稀释，以保证稀释后的样品中的脯氨酸的含量低于

50mg/L(见稀释表)。浓缩果汁用水稀释到单一浓度，然后再进一步进行适当的稀释。

蜂蜜的稀释，采用蜂蜜加50ml水。

将样品在分析之前离心5min左右，去除悬浮物，取上清液进行分析。

原果汁稀释表

样品类型稀释比例

颜色空白期望值

Apple 苹果1:1yes Apricot 杏21:1yes Aronia 野樱莓1:1yes Banana 香蕉1:1yes Blackberry 黑莓1:1yes Cherry 樱桃1:1yes Cranberry 蔓越莓1:1yes Grape 葡萄16:1yes Grapefruit 柚子21:1no Guava 番石榴3:1yes

脯氨酸检测试剂盒(茚三酮比色法)

脯氨酸(PRO)检测试剂盒(茚三酮比色法)

简介：

脯氨酸(Proline，Pro)是一种环状的α-亚氨基酸，呈中性，等电点为6.30，水中溶解度比任何氨基酸都大，水中可溶162g左右，易潮解不易得结晶，有甜味。与茚三酮溶液共热，生成黄色化合物，一旦进入肽链后，可发生羟基化作用，从而形4-羟脯氨酸，是组成动物胶原蛋白的重要成分。羟脯氨酸也存在于多种植物蛋白质中，尤其与细胞壁的形成有关，在正常情况下脯氨酸含量较低，但在逆境下(旱、热、冷、冻、盐碱等)，常有脯氨酸的明显积累，即积累指数与植物的抗逆性有关。在临床、生物材料、工业等方面均有广泛应用。

Leagene脯氨酸(PRO)检测试剂盒(茚三酮比色法)检测原理是脯氨酸游离于磺基水杨酸溶液中，前者与茚三酮共热发生反应，能产生稳定的红色产物，以分光光度计测定处吸光度，在一定范围内颜色深浅(即吸光度)与脯氨酸浓度成正比。该试剂盒主要用于测定植物组织中的游离脯氨酸含量。该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。

组成：

自备材料：

1、蒸馏水

2、研钵或匀浆器

3、离心管或试管

4、滤纸或纱布

5、水浴锅

6、比色杯

7、分光光度计

操作步骤(仅供参考)：编号

名称TO1113

50T

Storage

试剂(A): 脯氨酸标准(100μg/ml) 1ml 4℃

试剂(B): PRO Lysis buffer 250ml RT

试剂(C): PRO Assay buffer80ml RT

试剂(D): 茚三酮2支RT 避光使用说明书1份

1、准备样品：

①植物样品：取新鲜植物组织，清洗干净，擦干，切碎，迅速称取，加入PRO Lysis buffer 后匀浆或研磨，沸水浴(期间经常摇动)，混匀，用滤纸或纱布过滤，滤液即为脯氨酸提取液，4℃保存备用。

脯氨酸化学衍生化法液相测定方法-概述说明以及解释

脯氨酸化学衍生化法液相测定方法-概述说明以及解

释

1. 引言

1.1 概述

脯氨酸是一种重要的氨基酸，它在生物体内起着重要的生理功能。为了更准确地测定脯氨酸的含量，化学衍生化法被广泛应用于液相测定方法中。本文旨在探讨脯氨酸化学衍生化法液相测定方法的原理和步骤，以及分析其在实际应用中的优势和前景。通过对脯氨酸的化学性质和化学衍生化法的原理进行深入探讨，可以更好地理解该测定方法的操作过程和应用范围。希望本文能为相关研究和分析工作提供参考和借鉴。

1.2 文章结构

本文主要分为引言、正文和结论三个部分。在引言部分中，将介绍脯氨酸化学衍生化法液相测定方法的背景和意义，并明确文章的目的。在正文部分中，将详细介绍脯氨酸的化学性质、化学衍生化法的原理以及液相测定方法的步骤。在结论部分中，将总结脯氨酸化学衍生化法的优势，并展望其在未来的应用前景，最后得出结论。通过以上结构的安排，使读者能够清晰地了解脯氨酸化学衍生化法液相测定方法的相关知识，同时也使文章内容严谨有序、层次清晰。

1.3 目的

本文的目的在于介绍脯氨酸化学衍生化法液相测定方法的原理和步骤，

探讨其在实验室应用中的优势和前景展望。通过深入了解脯氨酸的化学性质和化学衍生化法的原理，可以更好地理解液相测定方法的操作步骤，从而为实验室分析提供可靠的参考和指导。同时，通过总结本方法的优势和未来应用前景，可以为相关领域的研究和应用提供重要的参考价值。

2. 正文

2.1 脯氨酸的化学性质

脯氨酸是一种常见的氨基酸，其化学结构为H₂NCH₂CH(NH₂)COOH。它是一种无色结晶粉末，在水中易溶解。脯氨酸在生物体内具有重要的生物功能，是蛋白质合成的重要组成部分，也参与许多代谢过程。

植物中脯氨酸含量的测定

实验目的：

通过测定植物中脯氨酸的含量，了解不同植物中脯氨酸的含量差异，

并探究影响因素。

实验原理：

脯氨酸是一种重要的氨基酸，在植物中起着多种生理功能。脯氨酸的

含量可以通过比色法进行测定。

实验步骤：

1.备制标准溶液。根据脯氨酸的浓度范围，分别取少量的脯氨酸标准品，用蒸馏水稀释至一系列不同浓度的标准溶液。

2.取适量植物组织，如叶片、茎或根部，切碎并加入适量的蒸馏水中。在水浴中加热至80°C，保持10分钟，然后过滤。

3.取一定量的植物提取液，加入适量的硫酸和重铬酸钾，混合均匀。

4.将混合液离心，收集上清液。

5.取一系列离心液标准溶液，以及植物提取液上清液，用比色皿分别

加入相同体积的苯酚与次氯酸钠混合溶液，并充分混合。

6.在室温下放置一段时间，然后使用紫外可见光谱仪检测各组样品的

吸光度。

7.依据标准曲线计算植物提取液中脯氨酸的含量。

实验结果：

通过实验测定，不同植物中脯氨酸的含量存在差异。以下为部分实验结果：

植物样品脯氨酸含量 (mg/L)

甜芸豆25.6

荠菜32.1

萝卜12.8

土豆18.3

实验讨论：

根据实验结果可知，不同植物中脯氨酸的含量差别较大。甜芸豆和荠菜中的脯氨酸含量较高，而萝卜和土豆中的脯氨酸含量较低。这些差异可能与植物的种类、生长环境、生长阶段以及其他生理因素相关。

结论：

通过实验测定，得出不同植物中脯氨酸含量不同的结论。这一结果有助于深入理解植物中脯氨酸的分布和功能，并为进一步研究提供参考。实验总结：

本次实验通过测定植物中脯氨酸的含量，探究了不同植物中脯氨酸含量的差异。实验结果表明，不同植物中脯氨酸含量存在显著差异。这一结果对进一步研究植物的生长和代谢过程具有重要意义。同时，实验中使用的比色法测定方法简单、快速、准确，可用于其他氨基酸的含量测定。

脯氨酸检测方法

PROLINE

Principle

The prepared sample is treated with ninhydrin. Proline in the sample reacts to form an orange derivative. Absorbance is measured at 520 nm versus appropriate reagent blank.

Applicability

This method is applicable to the determination of proline in honey, fruit juices and concentrates. Other applications of this method must be individually validated.

Reagents and Equipment

Proline 脯氨酸

3% ninhydrin in 2-methoxy ethanol (0.3 g of ninhydrin dissolved in 10 mL 2-methoxyethanol is satisfactory; make up fresh daily)

3%的茚三酮在2-甲氧基乙醇（0.3 g茚三酮溶解在10 mL 2-甲氧基乙醇；每天补充新的）

2-methoxy ethanol 2-甲氧基乙醇

formic acid (96%) 蚁酸(96%)（甲酸）

aqueous isopropanol (2- Propanol ) - diluted 1+1 水：异丙醇 1：1

现代植物生理学实验指南,脯氨酸含量的测定

现代植物生理学实验指南：确定线性内容。

在现代植物生理学实验中，前导线是植物应激耐受性的重要指标。确定植物的线性含量可以为了解植物对环境压力的反应和培养耐压力植物品种提供宝贵的信息。

确定植物组织中线性含量的实验方法涉及几个步骤。植物组织样本在适当的缓冲溶液中收集和同化。等离子体再进行离心，超纳特体用于线性测定。标线含量的确定采用以标线与酸性宁水素反应为基础的色度法，形成红色复合体，可进行光谱测量。

在进行预测性内容试验时应考虑若干因素。选择植物组织进行分析至关重要，因为线性含量在不同组织和器官之间可能有很大差异。缓冲溶液的选择，同质化技术，离心参数也可能影响预测测量的准确性。

对线性内容数据的解释对于了解植物的生理状况很重要。植物组织中的高标线水平往往与应激条件有关，如干旱，盐度，或特殊温度。然而，蛋白质也可以作为兼容的溶液，以保持细胞骨质平衡，保护蛋白质和膜免受压力引起的损伤。

确定线性内容是研究植物应激生理的宝贵工具。仔细的实验设计和准确的测量技术对于获得可靠的线性内容数据至关重要。预测性数据的

解释可以提供对植物应激反应的洞察力，并有助于培养耐压力作物品种。

植物体内脯氨酸含量测定

植物体内脯氨酸含量测定是评估植物生理状态的重要方法，也是研究植物逆境适应性的关键指标。脯氨酸是一种氨基酸，能够调节植物的生长发育和逆境响应。因此，准确测定植物体内脯氨酸含量对于探究植物生理机制和优化植物生长具有重要意义。

脯氨酸是一种含有羧基和氨基的氨基酸，通常以游离态的形式存在于植物体内。衡量植物体内脯氨酸含量的方法有多种，其中较常用的是酸水解法和直接检测法。

一、酸水解法

酸水解法是一种常用的测定植物体内脯氨酸含量的方法，具体步骤如下：

材料准备：样品、5%三氯乙酸溶液、2M氢氯酸溶液、0.2M醋酸钠缓冲液、酚酞指示液。

1. 取适量样品，磨碎成粉末，并过筛筛掉颗粒均匀的样品。

2. 取约0.2g的样品加入10ml 5%三氯乙酸溶液中，放在80℃恒温水浴中加热1小时。酸水解旨在将脯氨酸从蛋白质中释放出来。

3. 将样品冷却后，在离心管中以8000rpm的速度进行离心5分钟。

4. 从上层液体中取出约1ml的提取液，放在烧杯中加入1.2ml的2M氢氯酸溶液，并在水浴中加热沸腾10分钟，旨在保持脯氨酸的游离态。

5. 再将烧杯中的液体冷却后，在其中加入1ml醋酸钠缓冲液和2滴酚酞指示液，并加入1ml 1M氢氧化钠溶液，旨在使酸碱度中和。

6. 最后，以0.1M硼酸溶液进行稀释，将反应液稀释至适宜的浓度，使用分光光度计测量脯氨酸的吸光度值，然后按一定的公式计算出样品中的脯氨酸浓度。

二、直接检测法

材料准备：样品、4%硫酸溶液、10%二氧化硫溶液、巴氏试剂。

1. 取适量样品，磨碎成粉末，并称取约0.1g的样品加入10ml的4%硫酸溶液中，放在温度为80℃的恒温水浴中加热5分钟。

脯氨酸标准曲线的公式

脯氨酸标准曲线的公式是一个用于测定脯氨酸浓度的数学表达式。脯氨酸是一种氨基酸，是人体内重要的蛋白质组成部分之一。测定脯氨酸浓度对于研究蛋白质运输和代谢过程非常重要。

脯氨酸标准曲线的公式可以通过光谱法来计算，常见的方法是利用分光光度计或比色计检测样品吸光度。在建立标准曲线之前，我们需要先准备一系列不同浓度的脯氨酸标准溶液。

以下是脯氨酸标准曲线的一般公式：

A = m * c + b

其中，A代表样品的吸光度，m是斜率，c是脯氨酸的浓度，b是纯溶剂（例如水）所引起的空白吸光度。

为了建立标准曲线，我们需要分别测定一系列不同浓度的脯氨酸标准溶液的吸光度，并记录下对应的溶液浓度。然后，将吸光度与浓度数据输入到计算机软件或Excel中，进行数据处理和拟合。

常用的数据处理方法包括线性回归分析和最小二乘法。通过拟合标准曲线，我们可以得到斜率m和截距b的数值，从而可以通过测量样品吸光度，计算出脯氨酸的浓度。

需要注意的是，在进行脯氨酸浓度测定时，我们要进行质量控制，确保实验的准确性和可重复性。此外，在使用公式计算脯氨酸浓度时，仍需考虑到实验条件（如光程、波长等）和使用的仪器的独特性。

总结而言，脯氨酸标准曲线的公式是通过建立一系列脯氨酸标准溶液的吸光度与浓度之间的关系，来计算脯氨酸浓度的数学表达式。这个公式可以帮助科研人员和实验室进行准确测定和分析脯氨酸浓度，以进一步开展相关研究。

医院检验中心脯氨酸肽酶测定操作规程

医院检验中心脯氨酸肽酶测定(Prolidase Test Kit)操作规程

脯氨酸肽酶(PLD)是参与胶原蛋白胞内最后一步降解的酶，将富含(羟)脯氨酸的末端氨基二肽水解，富含于肝细胞浆中临床与实验研究均证实，血清PLD活性与肝纤维化有关，同时肝细胞炎症坏死时释放该酶，因而又可反映肝损害程度．故广泛用于各类急，慢性肝病的诊断和预后观察．（1）试剂组成：

1)样品稀释液：7Oml

2)基质液：使用前加5ml稀释液溶解

3)终止液：100ml

4)标准脯氨酸溶液：3ml

5)显色液：100ml 1瓶使用前摇匀。

二、操作方法：

1）样品稀释：取0．1ml血清加0.5ml稀释液，37℃水浴24h(稀释血清)

2）活性测定(单位： ul)

充分混匀，88—90℃水浴10min(准确计时)冷水冷却至室温用空白管调零，在分光光度计515nm比色(A) 3）活性计算：

A测定管—A对

照管

血清PLD活性(U/L)= ──────

─

[标准浓

度]

×24

A测定管（0.65）

4）正常人参考值：

932土236U/L,无明显性别，年龄差异。

（3）注意事项：

1)由于对照管A值平均0.010土0．005，常规检测时可

免设讨对照而按0.01计；

2)空腹静脉血清，—20℃保存半个月活性无变化，溶血

标本结果偏高；

3)当A测定管＞1．8时，血清宜用冰醋酸倍比稀释后再

测定.

脯氨酸检测方法

试验目的：在逆境条件下（旱、盐碱、热、冷、冻），植物体内脯氨酸（proline，Pro）的含量显著增加。植物体内脯氨酸含量在一定程度上反映了植物的抗逆性，

抗旱性强的品种往往积累较多的脯氨酸。因此测定脯氨酸含量可以作为抗旱育种的生理指标。另外，由于脯氨酸亲水性极强，能稳定原生质胶体及组织内的代谢过程，因而能降低冰点，有防止细胞脱水的作用。在低温条件下，植物组织中脯氨酸增加，可提高植物的抗寒性，因此，亦可作为抗寒育种的生理指标。

一、原理

用磺基水杨酸提取植物样品时，脯氨酸便游离于磺基水杨酸的溶液中，然后用酸性茚三酮加热处理后，溶液即成红色，再用甲苯处理，则色素全部转移至甲苯中，

色素的深浅即表示脯氨酸含量的高低。在520nm波长下比色，从标准曲线上查

出（或用回归方程计算）脯氨酸的含量。

二、材料、仪器设备及试剂

（一）材料：待测植物（水稻、小麦、玉米、高粱、大豆等）叶片。

（二）仪器设备：1. 722型分光光度计；2. 研钵；3. 100ml小烧杯；4. 容量瓶；

5. 大试管；

6. 普通试管；

7. 移液管；

8. 注射器；

9. 水浴锅；10. 漏斗；11. 漏斗架；12. 滤纸；13 剪刀。

（三）试剂1. 酸性茚三酮溶液：将1.25g茚三酮溶于30ml冰醋酸和20ml6mol/L 磷酸中，搅拌加热（70℃）溶解，贮于冰箱中；2. 3％磺基水杨酸：3g磺基水杨酸加蒸馏水溶解后定容至100ml；3. 冰醋酸；4. 甲苯。

三、实验步骤

1. 标准曲线的绘制

（1）在分析天平上精确称取25mg脯氨酸，倒入小烧杯内，用少量蒸馏水溶解，然后倒入250ml容量瓶中，加蒸馏水定容至刻度，此标准液中每ml含脯氨酸100μg。