实验七 平板菌落计数与接种
平板菌落计数法
平板菌落计数法
农资101 1031240125 周瑶
实验原理
平板菌落计数法是将待测样品经适当稀释之后，其中的微生物充分分散成单个细胞，取一定量的稀释样液接种到平板上，经过培养，由每个单细胞生长繁殖而形成肉眼可见的菌落，即一个单菌落应代表原样品中的一个单细胞。统计菌落数，根据其稀释倍数和取样接种量即可换算出样品中的含菌数。但是，由于待测样品往往不易完全分散成单个细胞，所以，长成的一个单菌落也可能来自样品中的2—3或更多个细胞。因此平板菌落计数的结果往往偏低。为了清楚地阐述平板菌落计数的结果，现在已倾向使用菌落形成单位(cfu)而不以绝对菌落数来表示样品的活菌含量。
平板菌落计数法虽然操作较繁，结果需要培养一段时间才能取得，而且测定结果易受多种因素的影响，但是，由于该计数方法的最大优点是可以获得活菌的信息，所以被广泛用于生物制品检验（如活菌制剂），以及食品、饮料和水〔包括水源水〕等的含菌指数或污染程度的检测。
实验方法
1、样品稀释液的制备
准确称取待测样品l0g，放入装有90ml无菌水并放有小玻璃珠的250ml三角瓶中，用手或置摇床上振荡20 min，使微生物细胞分散，静置20-30s，即成10-1稀释液；再用1ml 无菌吸管，吸取10-1稀释液lml，移入装有9ml无菌水的试管中，吹吸3次，让菌液混合均匀，即成10-2稀释液；再换一支无菌吸管吸取10-2稀释液1 ml，移入装有9ml无菌水的试管中，也吹吸三次，即成l0-3稀释液；以此类推，连续稀释，制成10-4、10-5、10-6、10-7、10-8、10-9等一系列稀释菌液。放菌液时吸管尖不要碰到液面，即每一支吸管只能接触一个稀释度的菌悬液，否则稀释不准确，结果误差较大。
平板菌落计数法水中微生物的检测
4）若所有稀释度的平均菌落数均小于30， 则应以按稀释度最低的平均菌落数乘以稀 释倍数报告之
5）若所有稀释度的平均菌落数均不在 30~300之间，则应以最接近30或300的平 均菌落数乘以稀释倍数报告之
6）平板出现大片菌苔不采用，菌苔小于平 板的一半，若另一半菌落分布均匀，则菌落 数× 2.
注意事项:
注意:作空白及取平行样(2-3组)
通常细菌、放线菌选择平均菌落数在30~300之 间者进行计算 ，霉菌选平均菌落数在10~100之 间。
3 菌落计数及报告方法 (实例)
不同稀释度的平均菌落数
10-1
10-2 10-3
两稀释度菌 菌落总数 报告方式 落数 之比
1 1365
164
20
---
2 2760
含细菌100-1000个/ml的水体为清洁 含细菌1000-10000个/ml的水体为不太清洁 含细菌多于10万个/ml的水体为极不清洁
含细菌1万-10万个/ml的水体为不清洁
二、基本原理
1、本试验采用平板菌落计数法对水样中的细菌计数， 这是一种测定水中好氧和兼性厌氧细菌密度的方法， 由于细菌在水体中，能以单个、成对、链状、成簇 或成团的方式存在，另外，没有单独的一种培养基 或某一环境条件能满足一个水样中所有细菌的生理 要求，所以由此法得到的菌落数，实际上要低于被 测水样中真正存在的活菌数。
实验七、理化因素对微生物生长的影响
显微镜直接计数法
优点： 优点： 简单、快速； 简单、快速；重复性高
不足： 不足： 不能区分死细胞和活细胞， 不能区分死细胞和活细胞，应用范围较窄 一些小的细胞在显微镜下很难看到； 一些小的细胞在显微镜下很难看到； 样品中菌液浓度不能低于10 样品中菌液浓度不能低于106个/mL 不能用于菌丝体或呈链状而不分散的微生物 测定。 测定。
实验报告要求
格式： 格式：按照正式发表论文格式
题目： 题目：环境中四大类细胞型微生物的分离和生物学性质研究 作者， 作者，学号 摘要： 摘要：主要方法和和主要结果 前言（为什么要进行该实验，要达到什么目的等） 前言（为什么要进行该实验，要达到什么目的等） 实验方法（培养基配制、采样、分离、纯化、性质研究（ 实验方法（培养基配制、采样、分离、纯化、性质研究（菌 株形态结构观察、大小测定、生理生化实验、 株形态结构观察、大小测定、生理生化实验、环境因素影响 等） 实验结果：分离实验结果、形态结构和培养特征观察结果、 实验结果：分离实验结果、形态结构和培养特征观察结果、 初步鉴定结果、革兰氏染色结果， 初步鉴定结果、革兰氏染色结果，大小测定结果和其他性质 研究结果等。 研究结果等。 分析与讨论 参考文献
平板菌落计数法
优点 灵敏度高 可以区分死活细胞 应用广 食品、 食品、饮料等 微生物检查 消毒灭菌效果 检查 ۞不足 不足 测定的结果误差也 较大。 较大。 操作也比较烦琐 需要的时间较长
微生物平板菌落计数法具体实验步骤
微生物平板菌落计数法具体实验步骤
2010-4-3 11:17
提问者：下雪的下雪|浏览次数：1760次
手头现在没有实验课本，故求微生物平板菌落计数法的具体实验步骤！详细的，包括稀释倍数及取样量！
2010-4-3 14:32
最佳答案
一、目的要求
学习平板菌落计数的基本原理和方法。
二、基本原理
平板菌落计数法是根据微生物在固体培养基上所形成的一个菌落是由一个单细胞繁殖而成的现象进行的,也就是说一个菌落即代表一个单细胞。计数时,先将待测样品作一系列稀释,再取一定量的稀释菌液接种到培养皿中,使其均匀分布于平皿中的培养基内,经培养后,由单个细胞生长繁殖形成菌落,统计菌落数目,即可换算出样品中的含菌数。
这种计数法的优点是能测出样品中的活菌数。此法常用于某些成品检定(如杀虫菌剂),生物制品检定以及食品、水源的污染程度的检定等。但平板菌落计数法的手续较繁,而且测定值常受各种因素的影响。
三、器材
大肠杆菌悬液,牛肉膏蛋白胨培养基, 1ml无菌吸管,无菌平皿,盛有4．5 ml无菌水的试管,试管架和记号笔等。
四、操作步骤
1．编号：
取无菌平皿9套,分别用记号笔标明10-4、10-5、10-6各3套。另取6支盛有4．5ml无菌水的
试管,排列于试管架上,依次标明10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6。
2．稀释
用1ml无菌吸管精确地吸取0．5ml大肠杆菌悬液放入10-1的试管中,注意吸管尖端不要碰到液面,以免吹出时,管内液体外溢。然后仍用此吸管将管内悬液来回吸吹三次,吸时伸入管底,吹时离开水面,使其混合均匀。另取一支吸管自10-1试管吸0．5ml放入10-2试管中,吸吹三次,……其余依次类推。整个稀释过程如图Ⅷ-3。
菌种检定操作规程
菌种检定操作规程
《菌种检定操作规程》
一、目的
菌种检定操作规程旨在规范菌种检定过程，确保检定结果准确可靠，保障实验室菌种质量。
二、适用范围
本规程适用于各类实验室对菌种进行检定的操作。
三、设备和试剂
1. 必备设备：无菌工作台、培养箱、平板计数器等。
2. 必备试剂：琼脂培养基、生理盐水、甘油等。
四、菌种检定操作流程
1. 取样准备：将待检菌种进行悬浮液制备或直接取样，保证单一菌种在接种时的质量。
2. 培养基接种：将取样溶液均匀涂敷于琼脂培养基表面，将琼脂培养基放入培养箱进行培养。
3. 孵化：将接种后的琼脂培养基置于培养箱中，进行相应的温度和时间的培养。
4. 菌落计数：使用平板计数器对菌落进行计数，记录结果。
5. 结果分析：根据计数结果，对菌种进行鉴别和鉴定。
五、结果确认与报告
1. 只有经过两名以上实验人员的确认，结果方可出具。
2. 将检定结果填写在检定记录表上，并进行备份存储。
六、质量控制
1. 定期对实验室设备和试剂进行检验、校正。
2. 定期进行内部质量控制，对检定结果进行复核和比对。
七、附则
1. 对于异常情况的处理：出现异常结果时，要及时进行排查并记录处理过程。
2. 本规程未尽事宜，由实验室主管负责进行详细规定。
以上即为《菌种检定操作规程》的内容，希望各实验室严格按照此规程进行菌种检定工作，确保实验室菌种质量及检定结果的准确性。
平板菌落计数法
平板菌落计数法之邯郸勺丸创作（一）目的要求
学习平板菌落计数的基来源根基理和方法。
（二）基来源根基理
平板菌落计数法是将待测样品经适当稀释之后，其中的微生物充分分散成单个细胞，取一定量的稀释样液接种到平板上，经过培养，由每个单细胞生长繁殖而形成肉眼可见的菌落，即一个单菌落应代表原样品中的一个单细胞。统计菌落数，根据其稀释倍数和取样接种量即可换算出样品中的含菌数。但是，由于待测样品往往不容易完全分散成单个细胞，所以，长成的一个单菌落也可来自样品中的2～3或更多个细胞。因此平板菌落计数的结果往往偏低。为了清楚地论述平板菌落计数的结果，现在已倾向使用菌落形成单位(colony-forming units，cfu)而不以绝对菌落数来暗示样品的活菌含量。
平板菌落计数法虽然操纵较繁，结果需要培养一段时间才干取得，而且测定结果易受多种因素的影响，但是，由于该计数方法的最大优点是可以获得活菌的信息，所以被广泛用于生物制品检验(如活菌制剂)，以及食品、饮料和水(包含水源水)等的含菌指数或污染程度的检测。
（三）器材
1．菌种大肠杆菌菌悬液。
2．培养基牛肉膏蛋白陈培养基。
3．仪器或其他用具1mL无菌吸管，无菌平皿，盛有4.5ml无菌水的试管，试管架，恒温培养箱等。
（四）操纵步调
l．编号
取无菌平皿9套，分别用记号笔标明10-4、10-5、10-6。(稀释度)各3套。另取6支盛有4.5mL无菌水的试管，依次标是10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6。
2．稀释
用lmL无菌吸管吸取lmL已充分混匀的大肠杆菌菌县液(待测样品)，精确地放0.5mL至10-1的试管中，此即为10倍稀释。将多余的菌液放回原菌液中。
细菌数量测定---标准平板计数法
统计菌落数，根据其稀释倍数和取样 接种量即可换算出样品中的含菌数。由 于待测样品往往不易完全分散成单个细 胞。所以平板菌落计数法结果往往偏低。 现在常使用菌落形成单位。
三、实训仪器和材料
1、仪器：恒温培养箱。高压蒸汽灭菌锅，
电热套、托盘天平 吸量管、烧杯、三角瓶、培养皿、试管、 试管架、酒精灯 2试剂：大肠杆菌悬液、牛肉膏蛋白胨培 养基（营养琼脂培养基），生理盐水、盐 酸、氢氧化钠、蒸馏水
1、编号 （1）无菌平皿7套，分别标记为10-4、105、10-6各2套，留一平皿做空白对照。 2、标记 (2）6支盛9mL生理盐水的灭菌试管一次 标记为10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6
（四）浇混接种
1、取样：用3支无菌吸管分别精确吸取 10-4、10-5、10-6的的稀释液0.2 mL，对号放入 编好号的培养皿中。
ຫໍສະໝຸດ Baidu 检验结果
稀释度
10-4
1 2 平均 1
10-5
2 平均 1
10-6
2 平均
菌落数
活菌数 /mL
活菌落数/mL=同一稀释度2个平皿上的菌落平均数×稀释倍数×5
在上述平皿中倒入熔化并冷却至50左右的琼脂培养基约1520ml置水平位置迅速旋动混匀待凝固后于37培养箱中倒置培养24h
细菌数量测定---标准 平板计数法
微生物限度-直接接种方法以及菌落计数
菌落总数百科名片
菌落总数就是指在一定条件下（如需氧情况、营养条件、pH、培养温度和时间等）每克（每毫升）检样所生长出来的细菌菌落总数。按国家标准方法规定，即在需氧情况下，37℃培养48h，能在普通营养琼脂平板上生长的细菌菌落总数，所以厌氧或微需氧菌、有特殊营养要求的以及非嗜中温的细菌，由于现有条件不能满足其生理需求，故难以繁殖生长。因此菌落总数并不表示实际中的所有细菌总数，菌落总数并不能区分其中细菌的种类，所以有时被称为杂菌数，需氧菌数等。
目录
菌落总数介绍
检验方法
说明（一）样品的处理和稀释：
（二）倾注培养
（三）计数和报告
菌落总数介绍
菌落是指细菌在固体培养基上生长繁殖而形成的能被肉眼识别的生长物，它是由数以万计相同的细菌集合而成。当样品被稀释到一定程度，与培养基混合，在一定培养条件下，每个能够生长繁殖的细菌细胞都可以在平板上形成一个可见的菌落。菌落总数测定是用来判定食品被细菌污染的程度及卫生质量，它反映食品在生产过程中是否符合卫生要求，以便对被检样品做出适当的卫生学评价。菌落总数的多少在一定程度上标志着食品卫生质量的优劣。
检验方法
菌落总数的测定，一般将被检样品制成几个不同的10倍递增稀释液，然后从每个稀释液中分别取出1mL置于灭菌平皿中与营养琼脂培养基混合，在一定温度下，培养一定时间后（一般为48小时），记录每个平皿中形成的菌落数量，依据稀释倍数，计算出每克（或每ml）原始样品中所含细菌菌落总数。基本操作一般包括：样品的稀释－－倾注平皿－－培养48小时－－计数报告。国内外菌落总数测定方法基本一致，从检样处理、稀释、倾注平皿到计数报告无何明显不同，只是在某些具体要求方面稍有差别，如有的国家在样品稀释和倾注培养进，对吸管内液体的流速，稀释液的振荡幅度、时间和次数以及放置时间等均作了比较具体的规定。检验方法参见：GB4789.2-94 《中华人民共和国国家标准食品卫生微生物学检验菌落总数测定》SN0168-92 《中华人民共和国进出口商品检验行业标准出口食品菌落计数》
平板菌落计数法计算公式 例题
平板菌落计数法计算公式例题
平板菌落计数法计算公式例题
一、引言
平板菌落计数法是微生物学实验室中常用的一种微生物计数方法，通过在琼脂平板上培养微生物，并根据菌落的形成情况来进行微生物数量的估算。在本文中，我将介绍平板菌落计数法的计算公式，并通过一个具体的例题来加深理解。
二、平板菌落计数法的计算公式
在进行平板菌落计数法时，通常使用以下计算公式来计算微生物的数量：
N = n/d * 1/V
其中，
N 代表菌落总数（CFU/g或CFU/mL）
n 代表在某一平板中被计数的菌落数
d 代表对数稀释倍数
V 代表每次接种的体积（mL）
这个计算公式是通过对每个平板上的菌落数进行统计，并根据稀释倍数和接种体积来进行微生物数量的推算。
三、例题分析
假设我们在实验室中进行了一次细菌计数实验，以确定某一食品样品中的细菌数量。我们首先进行了系列的稀释，并将不同稀释倍数的样品接种在琼脂平板上。在我们观察到的一张平板上，我们发现了以下菌落数：
- 在1:10稀释倍数下，菌落数为30
- 在1:100稀释倍数下，菌落数为18
- 在1:1000稀释倍数下，菌落数为5
假设每次接种的体积为1mL，则根据上述数据，我们可以进行如下的计算：
N = (30/10) * 1/1 + (18/100) * 1/1 + (5/1000) * 1/1
= 3 + 0.18 + 0.005
= 3.185
根据计算，我们可以认为在此食品样品中的细菌数量为3.185 CFU/mL。
四、总结与回顾
通过这个例题的分析，我们加深了对平板菌落计数法的理解。通过对不同稀释倍数下的菌落数进行计数，并根据计算公式进行推算，我们可以较为准确地确定样品中微生物的数量。在实际操作中，我们需要注意稀释倍数和接种体积的准确控制，以避免出现较大误差。
培养皿菌落计数方法---平板法
培养⽫菌落计数⽅法---平板法
（⼀）⽬的要求
学习平板菌落计数的基本原理和⽅法。
（⼆）基本原理
平板菌落计数法是将待测样品经适当稀释之后，其中的微⽣物充分分散成单个细胞，取⼀定量的稀释样液接种到平板上，经过培养，由每个单细胞⽣长繁殖⽽形成⾁眼可见的菌落，即⼀个单菌落应代表原样品中的⼀个单细胞。统计菌落数，根据其稀释倍数和取样接种量即可换算出样品中的含菌数。但是，由于待测样品往往不易完全分散成单个细胞，所以，长成的⼀个单菌落也可来⾃样品中的2～3或更多个细胞。因此平板菌落计数的结果往往偏低。为了清楚地阐述平板菌落计数的结果，现在已倾向使⽤菌落形成单位(colony-forming units，cfu)⽽不以绝对菌落数来表⽰样品的活菌含量。
平板菌落计数法虽然操作较繁，结果需要培养⼀段时间才能取得，⽽且测定结果易受多种因素的影响，但是，由于该计数⽅法的最⼤优点是可以获得活菌的信息，所以被⼴泛⽤于⽣物制品检验(如活菌制剂)，以及⾷品、饮料和⽔(包括⽔源⽔)等的含菌指数或污染程度的检测。
（三）器材
1．菌种⼤肠杆菌菌悬液。
2．培养基⽜⾁膏蛋⽩胨培养基。
3．仪器或其他⽤具1mL⽆菌吸管，⽆菌平⽫，盛有4.5ml⽆菌⽔的试管，试管架，恒温培养箱等。培养基
（四）操作步骤
l．编号
取⽆菌平⽫9套，分别⽤记号笔标明10-4、10-5、10-6。(稀释度)各3套。另取6⽀盛有4.5mL⽆菌⽔的试管，依次标是10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6。微⽣物培养基
2．稀释
⽤lmL⽆菌吸管吸取lmL已充分混匀的⼤肠杆菌菌县液(待测样品)，精确地放0.5mL⾄10-1的试管中，此即为10倍稀释。将多余的菌液放回原菌液中。
微生物平板菌落计数法具体实验步骤
微生物平板菌落计数法具体实验步骤
2010-4-3 11:17
提问者：下雪的下雪|浏览次数：1760次
手头现在没有实验课本，故求微生物平板菌落计数法的具体实验步骤！详细的，包括稀释倍
数及取样量！
2010-4-3 14:32
最佳答案
一、目的要求
学习平板菌落计数的基本原理和方法。
、基本原理
平板菌落计数法是根据微生物在固体培养基上所形成的一个菌落是由一个单细胞繁殖而成
的现象进行的，也就是说一个菌落即代表一个单细胞。计数时，先将待测样品作一系列稀释
再取一定量的稀释菌液接种到培养皿中，使其均匀分布于平皿中的培养基内，经培养后，由单个细胞生长繁殖形成菌落，统计菌落数目，即可换算出样品中的含菌数。
这种计数法的优点是能测出样品中的活菌数。此法常用于某些成品检定（如杀虫菌剂），生物制品检定以及食品、水源的污染程度的检定等。但平板菌落计数法的手续较繁，而且测定值常受各种因素的影响。
三、器材
5 ml无菌水的试管
大肠杆菌悬液，牛肉膏蛋白胨培养基，1ml无菌吸管，无菌平皿，盛有4 .
试管架和记号笔等。
四、操作步骤
1 .编号:
取无菌平皿9套，分别用记号笔标明10-4、10-5、10-6各3套。另取6支盛有4 . 5ml无菌水的
试管，排列于试管架上，依次标明10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6。
2 •稀释
用1ml无菌吸管精确地吸取0 • 5ml大肠杆菌悬液放入10-1的试管中，注意吸管尖端不要碰到液面，以免吹出时，管内液体外溢。然后仍用此吸管将管内悬液来回吸吹三次，吸时伸入管底吹时离开水面，使其混合均匀。另取一支吸管自10-1试管吸0. 5ml放入10-2试管中，吸吹三次，……其余依次类推。整个稀释过程如图忸-3。
食品大肠菌群的测定(平板计数法).
• 任务七 结果报告 • 经最后证实为大肠菌群阳性的BGLB管的百分比 乘以计数的平板菌落数，再乘以稀释倍数，即为 每g (mL)样品中大肠菌群数 。 • 例：10-4样品稀释液1ml在VRBA平板上有100个典 型和可疑菌落，挑取10个接种BGLB肉汤，证实6 个为阳性。则样品大肠菌群数为： 100×6/10×10-4/g(mL)=6.0×105cfu/g(mL)
加入46℃结晶紫中性红胆盐琼脂(VRBA)培养基 12~15ml待琼脂凝固后，再加3-4mL培养基覆盖。 挑选菌落接种BGLB
典型菌落为紫红色 , 菌 落周围有红色的胆盐沉 淀环。菌落直径为 0.5mm 或更大。
实践操作
任务一 仪器试剂准备
任务二 仪器试剂灭菌
任务三 样品稀释制备
全过程遵循无菌操作程序，考虑如何满足要求？ ⑴检样处理 以无菌操作取经过充分摇匀的检样25mL， 放入含有225mL灭菌生理盐水的灭菌广口瓶内做成1:10的 均匀稀释液。 ⑵样品稀释 用1mL灭菌吸管,吸取1:10稀释液1mL,沿管壁 徐徐注入含有9mL灭菌生理盐水或其他稀释液的试管内 （注意吸管尖端不要触及管内稀释液),充分振摇试管，使 之混合均匀,制备成1:100的稀释液。另取1mL灭菌吸管,按 上项操作顺序，作10倍递增稀释液,如此每递增稀释一次, 即换用1支1mL灭菌吸管。
任务五 典型和可疑菌落计数
• 选择菌落数在15~150之间的平板，分别计 数平板上出现的典型和可疑大肠菌群菌落。 • 典型菌落为紫红色，菌落周围有胆盐与酸形 成的沉淀环，菌落直径为0.5mm或更大。
平板菌落计数法
平板菌落计数法
平板菌落计数法
（⼀）⽬的要求
学习平板菌落计数的基本原理和⽅法。
（⼆）基本原理
平板菌落计数法是将待测样品经适当稀释之后，其中的微⽣物充分分散成单个细胞，取⼀定量的稀释样液接种到平板上，经过培养，由每个单细胞⽣长繁殖⽽形成⾁眼可见的菌落，即⼀个单菌落应代表原样品中的⼀个单细胞。统计菌落数，根据其稀释倍数和取样接种量即可换算出样品中的含菌数。但是，由于待测样品往往不易完全分散成单个细胞，所以，长成的⼀个单菌落也可来⾃样品中的2～3或更多个细胞。因此平板菌落计数的结果往往偏低。为了清楚地阐述平板菌落计数的结果，现在已倾向使⽤菌落形成单位(colony-forming units，cfu)⽽不以绝对菌落数来表⽰样品的活菌含量。
平板菌落计数法虽然操作较繁，结果需要培养⼀段时间才能取得，⽽且测定结果易受多种因素的影响，但是，由于该计数⽅法的最⼤优点是可以获得活菌的信息，所以被⼴泛⽤于⽣物制品检验(如活菌制剂)，以及⾷品、饮料和⽔(包括⽔源⽔)等的含菌指数或污染程度的检测。
（三）器材
1．菌种⼤肠杆菌菌悬液。
2．培养基⽜⾁膏蛋⽩陈培养基。
3．仪器或其他⽤具1mL⽆菌吸管，⽆菌平⽫，盛有4.5ml⽆菌⽔的试管，试管架，恒温培养箱等。
（四）操作步骤
l．编号
取⽆菌平⽫9套，分别⽤记号笔标明10-4、10-5、10-6。(稀释度)各3套。另取6⽀盛有4.5mL⽆菌⽔的试管，依次标是10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6。
2．稀释
⽤lmL⽆菌吸管吸取lmL已充分混匀的⼤肠杆菌菌县液(待测样品)，精确地放0.5mL⾄10-1的试管中，此即为10倍稀释。将多余的菌液放回原菌液中。
平板菌落计数实验报告注意事项反思
平板菌落计数实验报告注意事项反思
(1)如果稀释度大的平板上菌落数反比稀释度小的平板上菌落数高，则系检验工作中发生的差错，属实验室事故。此外，也可能因抑菌剂混入样品中所致，均不可用作检样计数报告的依据。
(2)如果平板上出现链状菌落，菌落之间没有明显的界限，这是在琼脂与检样混合时，一个细菌块被分散所造成。一条链作为一个菌落计，如有来源不同的几条链，每条链作为一个菌落计，不要把链上生长的各个菌落分开来数。此外，如皿内琼脂凝固后未及时进行培养而遭受昆虫侵入，在昆虫爬过的地方也会出现链状菌落，也不应分开来数。
(3)如果所有平板上都有菌落密布，不要用多不可计作报告，而应在稀释度最大的平板上，任意数其中2cm2个，除2求出每cm2内平均菌落数乘以皿底面积63.6cm2数，再乘其稀释倍数作报告。例如10-1～10-3稀释度的所有平板上均菌落密布，而在lO-3稀释的平板上任数2个cm2。内的菌落数是60个，皿底直径为9cm，则该检样每g(或m1)中“估计”菌落数为：60／2×63．6×1000=1908000或1.9×106。63.6cm2数系按皿底直径为9cm时计算而得，即：(9／2)2×3．14=63．6；如所用平皿的皿底直径不是9cm，则可按其直径的实际cm数代人圆面积公式求出。
(4)菌落计数中，如能使用国产JLQ-S。型菌落计数器，则比较方便，灯光由侧面射向平板，菌落易于观察。由于仪器带有电子音响讯号，用特制金属探笔点数中，在发出音响之下始显示数字增加，
不会发生差错。且灯光与平板之间夹有多用方格玻质规板(方格面积为lcm2)，也有助于对菌落密布的平板进行计数。
平板菌落计数法
平板菌落计数法
(一)目得要求
学习平板菌落计数得基本原理与方法。
(二)基本原理
平板菌落计数法就是将待测样品经适当稀释之后,其中得微生物充分分散成单个细胞,取一定量得稀释样液接种到平板上,经过培养,由每个单细胞生长繁殖而形成肉眼可见得菌落,即一个单菌落应代表原样品中得一个单细胞、统计菌落数,根据其稀释倍数与取样接种量即可换算出样品中得含菌数。但就是,由于待测样品往往不易完全分散成单个细胞,所以,长成得一个单菌落也可来自样品中得2～3或更多个细胞。因此平板菌落计数得结果往往偏低。为了清楚地阐述平板菌落计数得结果,现在已倾向使用菌落形成单位(cｏlony－ｆormiｎg uｎits,ｃfu)而不以绝对菌落数来表示样品得活菌含量。
平板菌落计数法虽然操作较繁,结果需要培养一段时间才能取得,而且测定结果易受多种因素得影响,但就是,由于该计数方法得最大优点就是可以获得活菌得信息,所以被广泛用于生物制品检验(如活菌制剂),以及食品、饮料与水(包括水源水)等得含菌指数或污染程度得检测、
(三)器材
1.菌种大肠杆菌菌悬液、
2、培养基牛肉膏蛋白陈培养基、
３.仪器或其她用具１mL无菌吸管,无菌平皿,盛有4.5ml无菌水得试管,试管架,恒温培养箱等、
(四)操作步骤
ｌ.编号
取无菌平皿9套,分别用记号笔标明10—4、10—5、10－6。(稀释度)各3套。另取6支盛有4。5mL无菌水得试管,依次标就是１０-
1、10-
2、10－
3、10－４、10—5、1０—6。
2.稀释
用lmL无菌吸管吸取ｌmL已充分混匀得大肠杆菌菌县液(待测样品),精确地放０、5mL至10-1得试管中,此即为1０倍稀释。将多余得菌液放回原菌液中。
平板菌落计数法实验报告结果分析
平板菌落计数法实验报告结果分析
实验结果分析
1.不同培养基和不同菌株的差异
通过实验结果可以看出，不同培养基和不同菌株会对菌落计数结果产生影响。在LB、NA和TSA培养基中，各菌株的菌落数均有所不同，其中TSA培养基能够提供最适宜的生长环境，因此在其中生长的菌落数最多，二氧化碳依赖菌的菌落数在MRS培养基中比在其他
培养基中多了很多。这说明菌落数受培养基种类的影响相应不同的菌株的适应范围也不同，因此合理选择培养基和菌株是十分重要的。
2.平板数量和加样量的关系
实验结果显示，在同一培养基中，对于同一菌株，平板数量与加样量成正比，平板数
量的增多意味着可检测到细菌的区域增多，因此能检出更多的细菌。但是，当平板数量增
多到一定程度时，检测的增加将非常有限。所以在操作中，不能太多样品一起处理，一定
要逐一进行。
3.不同培养条件对菌落计数的影响
实验结果表明不同培养条件对菌落计数有很大影响，其中温度和时间是最为关键的因素。在合适的温度下生长，细菌能够在适宜的营养条件下获得最大的生长速率。在实验中，25℃、30℃、37℃，不同温度条件下生长后的菌落数量明显不同。同时在不同时间下生长，能看出菌落数量的差异。因此，菌落计数需要根据菌株的特性和培养条件，针对性地进行
调整。
4.实验误差
在实验中，可能存在一些误差，如洗手或操作不当，或平移菌液的数量加减不准确，
都可能对结果产生一些误差。因此，在实验中要严格遵守操作规范，减少误差的产生，确
保结果可靠性。
结论
通过本次实验，我们了解了平板菌落计数法的检测原理、步骤和注意事项。在实验操
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图－1
菌液逐级稀释过程示意图
（二）微生物的接种
接种方法： 常用的有斜面接种法、平板接种法、液体接种法、 试管深层固体培养基的穿刺接种法。
接种工具：
常用的有接种针、接种环、接种钩、接种圈、接
种铲或接种锄、玻璃涂棒等。
（1）斜面接种法（1支试管/人）
使用黄豆饼粉斜面培养基，用接种环从平皿上挑取放线菌 或霉菌单菌落。
2、制备土壤稀释液：
称取土壤1g，制备10－2 土壤稀释液，再取4只 无菌 试管稀释制备10－3 、10－4菌液。
3、倒平皿与平板涂布：
取已熔化的牛肉膏蛋白胨培养基，倒入平皿中， 冷却凝固。分别吸取 0.1 ml上述制备的10－3或10－4菌液 玻棒涂布，室温静置5－10 min，使菌液吸附进培养基， 倒置于37 0C恒温培养24 h。
左手平托两支试管，拇指按住试管底部。外侧使是菌种试 管，内侧是待接的空白斜面。（两支试管的斜面同时向 上），右手将棉塞旋松，以便在接种时容易拔出。 右手拿接种环，在火焰上先将环端烧红灭菌，然后将有可 能伸入试管的其余部位也过火灭菌。 将两支试管的上端并齐，靠近火焰，用右手小指和掌心将 两支试管的棉塞一并夹住拔出，棉塞仍夹在手中，然后让 试管口缓缓过火焰。
菌落应代表原样品中的一个单细胞。统计菌落数，根据其
稀释倍数和取样接种量即可换算出样品中的含菌数。 为了清楚地阐述平板菌落计数的结果，现在已趋向使 用菌落形成单位(cfu)，而不以绝对菌落数来表示样品的活 菌含量。
三、实验材料
样品：取土 试剂和仪器： 无菌水、无菌培养皿、无菌吸管、记号 笔、接种环、接种针、酒精灯、标签纸、水浴锅 2人/组：
4、观察细菌菌落形态以及计数菌落： 培养24 h后，取出培养皿数菌落数，算出同一稀释度 三个平板上的菌落平均数，并按下列公式进行计算： 每ml 中菌落形成单位（cfu）＝同一稀释度三次重复的平
均菌落数×稀释倍数×10
5、计算出每g土壤中细菌的数量： 即用某一培养皿内细菌的菌落数乘以该培养皿接种液 的稀释倍数即得。
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37 0C恒温培养。
图4－8 穿刺接种：（a）水平穿刺接种；（b）垂直穿刺接种
五、实验任务
1、2人一组: 6只平皿稀释平板计数，做2个稀释度。24 h观察并计数。
2、每人： 做1支斜面接种（接放线菌或霉菌），1支 液体接种（接细菌），1支半固体穿刺接种 （接细菌）。
六、思 考 题
1. 结果 （1）将培养后菌落计数情况填如下表：
试管拔塞后过火灭菌和取菌
斜面划线法（a）和不同细菌直线接种长出的菌苔形态（b）
（2）液体接种法（1支试管/人）
使用牛肉膏蛋白胨液体培养基。
用接种环从平皿上挑取细菌单菌落，接入液体培养基。
放下环后，再将棉塞旋紧，在试管斜面上距试管口2～ 3cm处贴上标签。 37 0C恒温培养。
（在培养量比较大的情况下，液体接种宜采用移液管接种， 同时要求无菌操作。）
微生物学实验七——
平板菌落计数与接种
一、目的要求 二、实验原理 三、实验材料 四、实验过程 五、实验任务 六、思考题
一、目的要求
学习平板菌落计数的基本原理和方法
练习微生物接种和培养的基本技术，掌握无
菌操作技术
二、实验原理
将待测样品经适当稀释后，其中的微生物充分分散成 单个细胞，取一定量的稀释样液接种到平板上，经过培养， 由每个单细胞生长繁殖而形成肉眼可见的菌落，即一个单
将已灼烧过的接种环伸入外侧的菌种试管内。先冷却，而 后再用环沾取一定量的菌苔，将沾有菌苔的接种环抽出试 管。 迅速将沾有菌种的接种环伸入另一支待接斜面试管的底部， 轻轻向上划线（直线或曲线）。 接好种的斜面试管口再次过火焰，棉塞底部过火焰后立即 塞入试管内。 将沾有菌苔的接种环在火焰上烧红灭菌。先在内焰中烧灼， 使其干燥后，再在外焰中烧红，以免菌苔骤热，使菌体爆 溅，造成污染。 放下环后，再将棉塞旋紧，在试管斜面上距试管口2～ 3cm处贴上标签。 280C恒温培养。
稀释平板计数用：6只平皿、2根三角玻棒、2支装9ml无 菌水的试管、 4根无菌吸管、牛肉膏培养基；
接种用： 2支液体牛肉膏蛋白胨培养基、2支半固体牛 肉膏蛋白胨培养基、2支黄豆饼粉固体斜面培养基。
四、实验过程
（一）平板菌落计数 （二）微生物的接种
（一）稀释平板菌落计数
1、 编号与稀释: 每组取无菌平皿6只，一个稀释度做3只。标明10－3 和10－4各3只。
2. 为什么融化后的培养基要冷却至45 0C左右才能倒平板？
3. 要使平板菌落计数准确，需要掌握哪几个关键？为什么？
结
束
（3）穿刺接种（1支试管/人）
使用牛肉膏蛋白胨半固体培养基。用接种针从平皿上挑取 细菌单菌落，接入半固体培养基。
用接种针经火焰灭菌后，沾取少量菌种，垂直地穿入试管 固体培养基中心至底部，然后沿着原接种线将针拔出，要 做到手稳、动作轻巧迅速，最后塞上棉塞。再将接种针上 残留的菌体在火焰上烧掉。 在试管斜面上距试管口2～3cm处贴上标签。