NC膜,PVDF膜和尼龙膜的区别
过滤膜的选择
过滤膜的选择
1.尼龙膜(Nylon)
特点：耐温性能良好，可耐121℃饱和蒸汽热压消毒30min，最高工作温度60℃，化学稳定良好，能耐受稀酸、稀碱、醇类、酯类、油类、碳氢化合物、卤代烃及有机氧化物等多种有机和无机化合物。
用途：电子、微电子、半导体工业水过滤、组织培养基过滤。药液过滤、饮料过滤、高纯化学制品过滤、水溶液和有机流动相的过滤的过滤。
2.聚偏氟乙烯膜（PVDF）
特点：膜机械强度高、抗张强度高，具有良好的耐热性和化学稳定性，蛋白吸附率低；具有较强的负静电性及疏水性；具有疏水和亲水两种形式。但不能耐受丙酮，DMSO，THF，DMF，二氯甲烷，氯仿等。
用途：疏水性聚偏氟乙烯膜主要应用于气体及蒸汽过滤、高温液体的过滤; 亲水性聚偏氟乙烯膜主要应用于组织培养基、添加剂等除菌过滤溶剂和化学原料的净化过滤，试剂的无菌处理，高温液体的过滤等。
3.混合纤维素酯
特点：孔径比较均匀，孔隙率高，无介质脱落，质地薄，阻力小，滤速快，吸附极小，使用价格成本低，但不耐有机溶液和强酸、强碱溶液。
用途：医药工业需热压灭菌的水针剂，大输液滤除微粒。
对热敏性药物(胰岛素ATP、辅酶A等生化制剂)的除菌，用0.45微米的滤膜(或0.2)溶液中微粒及油类不溶物的分析测定，及水质污染指数测定。应用于体细胞杂交和线粒互补预测杂种优势研究等科研部门。
4.聚丙烯
特点：无任何粘接剂，化学性能稳定，柔韧，不易破损，耐高温，能经受高压灭菌。无毒无味，耐酸碱。
用途：适用于制作各种粗、精滤器，折叠式滤芯。适用于饮料、医药等行业的板框压滤机滤膜。适用于反渗透膜，超滤膜的支撑及预处理。聚丙烯膜无毒性，可在医药、化工、食品、饮料等领域广泛应用；具疏水性，对气体过滤尤佳。5.聚醚砜(PES)
NC膜,PVDF膜和尼龙膜的区别
NC膜、PVDF膜、尼龙膜的应用及差别
硝酸纤维素膜(nitrocellulose filter membrane，简称NC膜)，NC膜在Northern Blot、Southern Blot、Western Blot中都需要用到，杂交技术有固相杂交和液相杂交之分。固相杂交技术目前较为常用，先将待测核酸结合到一定的固相支持物上，再与液相中的标记探针进行杂交。固相支持物常用硝酸纤维素膜。
PVDF膜即聚偏二氟乙烯膜（polyvinylidene fluoride）是蛋白质印迹法中常用的一种固相支持物。PVDF膜是疏水性的，膜孔径有大有小，随着膜孔径的不断减小，膜对低分子量的蛋白结合就越牢固。大于20000的蛋白选用0.45um的膜，小于20000的蛋白选用0.2um 的膜。PVDF膜使用是需预处理，用甲醇处理的目的是活化膜上的正电基团，使其更容易与带负电的蛋白结合。PVDF膜具有较高的机械强度，是印迹法中的理想固相支持物材料。
尼龙膜是一种合成的长链聚酰胺薄膜，对核酸和蛋白质具有很强的结合能力，能代替硝酸纤维素薄膜用于分子印迹和杂交实验。
NC膜、PVDF膜、尼龙膜的差别：尼龙膜是较理想的核酸固相支持物，有多种类型；硝酸纤维素膜是目前应用最广的一种固相支持物，价格最便宜；PVDF膜介于二者之间。
1. 就结合能力而言：尼龙膜结合DNA和RNA能力可达480－600μg/cm2，可结合短至10bp的核酸片段；硝酸纤维素膜结合DNA和RNA能力可达80－100μg/cm2，对于200bp 的核酸片段结合能力不强；PVDF膜结合DNA和RNA能力可达125－300μg/cm2。
WB常见问题2
2. 针对样品的常见问题
B. 做线粒体膜UCP2蛋白的Western Blot （以下简写成Western Blot），提取线粒体后冻存（未加蛋白酶抑制剂），用的博士德的一抗，开始还有点痕迹，现在越来越差，上样量已加到120μg，换了个santa cloz的一抗仍不行。是什么原因？蛋白酶抑制剂单加PMSF行吗？解答：怀疑是样品问题，可能是：1，样品不能反复冻融；2，样品未加蛋白酶抑制剂。同时，建议检查Western Blot过程，提高一抗浓度。对于加蛋白酶抑制剂来说，一般加PMSF就可以了，最好能多加几中种蛋白酶抑制剂。
C.细胞水平要做western blot，多少细胞提的蛋白够做western blot？解答：一般5×10^6就足够了
D.同一样品能同时提RNA又提蛋白么？这样对western blot有无影响？解答：能，没有问题，我们做过。
E. 同一蛋白样品能同时进行两种因子的Western Blot检测吗？
解答：当然可以，有的甚至可以同时测几十种样品。
F. 如果目标蛋白是膜蛋白或是胞浆蛋白，操作需要注意什么？
解答：如果是膜蛋白和胞浆蛋白，所用的去垢剂就要温和得多，这时最好加上NaF去抑制磷酸化酶的活性。
G. 我的样品的蛋白含量很低，每微升不到1微克，但是在转膜时经常会发现只有一部分蛋白转到了膜上，就是在转膜后染胶发现有的孔所有的蛋白条带都在，只是颜色变淡了，有什么办法可以解决？
解答：你可以加大上样量，没有问题，还有转移时你可以用减少电流延长时间，多加5－10％甲醇。
H. 想分离的蛋白是分子量260kd的，SDS-PAGE电泳的分离胶浓度多大合适？积层胶的浓度又该用多少？这么大分子量的蛋白容易作Western Blot吗？
蛋白核酸杂交转印膜(PVDF膜和尼龙膜)介绍
蛋白、核酸杂交转印膜（PVDF、尼龙膜）技术介绍
转印膜：用于蛋白质和核酸的转移和检验过程的微孔膜。
Southern blot：又称Southern 印迹杂交，是研究DNA 图谱的基本技术。
Northern blot：又称Northern 印迹杂交，与Southern blot 方法类似，是检测RNA
的基本技术。
Western blot：又称Western 印迹杂交，与Southern blot 方法类似，是蛋白质检测分析的基本技术。
转印膜在蛋白质和核酸的转移和检测过程中应用广泛，不同的转印膜规格和参数不同，选择正确、均一稳定的转印膜对达到最佳的实验结果起到关键性的作用。常用的转印膜对比：
常用的三种转印膜：硝酸纤维素膜（NC 膜）、带正电的尼龙膜（N66膜）、聚偏氟乙烯膜（PVDF
膜）。
C o
b e t t e
r
三种转印膜结合DNA或RNA的能力：带正电尼龙膜>PVDF膜>硝酸纤维素膜。
三种转印膜机械强度比较：硝酸纤维素膜较脆，易破碎，不能重复使用；尼龙膜和PVDF 膜机械强度较高，可重复使用。
带正电的尼龙膜可结合短至10bp核酸片段，因此是最理想的核酸杂交转印膜。PVDF膜机械强度高、耐高温，是蛋白印迹最理想的转印膜。
Cobetter专为蛋白核酸杂交研发了性能优良的转印膜，Cobetter杂交转印膜的种类如下：
r
e
t
t
e
b
o
C
⏹N66尼龙转印膜
⏹N66尼龙带正电荷转印膜
⏹PVDF疏水转印膜
⏹PVDF亲水转印膜
Cobetter转印膜孔径有0.45um、0.22um 两种。
Western-blot常见问题解答
Western Blot详解－常见的问题指南
实验常见的问题指南
《抗体技术实验指南》和Antibodies（a laboratory manual，wrote by Ed Harlow ，david lane）两本书不错。
2. 针对样品的常见问题
B. 做线粒体膜UCP2蛋白的Western Blot （以下简写成Western Blot），提取线粒体后冻存（未加蛋白酶抑制剂），用的博士德的一抗，开始还有点痕迹，现在越来越差，上样量已加到120μg，换了个santa cloz的一抗仍不行。是什么原因？蛋白酶抑制剂单加PMSF行吗？
解答：怀疑是样品问题，可能是：1，样品不能反复冻融；2，样品未加蛋白酶抑制剂。同时，建议检查Western Blot过程，提高一抗浓度。对于加蛋白酶抑制剂来说，一般加PMSF就可以了，最好能多加几中种蛋白酶抑制剂。
F. 如果目标蛋白是膜蛋白或是胞浆蛋白，操作需要注意什么？
解答：如果是膜蛋白和胞浆蛋白，所用的去垢剂就要温和得多，这时最好加上NaF去抑制磷酸化酶的活性。
G. 我的样品的蛋白含量很低，每微升不到1微克，但是在转膜时经常会发现只有一部分蛋白转到了膜上，就是在转膜后染胶发现有的孔所有的蛋白条带都在，只是颜色变淡了，有什么办法可以解决？
解答：你可以加大上样量，没有问题，还有转移时你可以用减少电流延长时间，多加5－10％甲醇。
H. 想分离的蛋白是分子量260kd的，SDS-PAGE电泳的分离胶浓度多大合适？积层胶的浓度又该用多少？这么大分子量的蛋白容易作Western Blot吗？
western blot试验操作指南
蛋白表达研究系列之——Western Blot试验操作指南
目录
目录 (1)
一、总蛋白的提取 (2)
1 试验类型和蛋白类型 (2)
2 样品组织类型 (3)
3 蛋白表达峰度判断 (4)
4 总蛋白提取的基本步骤 (4)
4.1细胞样品总蛋白的提取操作步骤 (5)
4.2组织样品总蛋白的提取操作步骤 (5)
二、总蛋白BCA定量 (6)
三、SDS-PAGE凝胶电泳 (7)
四、转膜 (8)
五、信号增强剂处理膜 (9)
六、封闭、一抗孵育、二抗孵育 (9)
1 封闭 (9)
2 一抗孵育 (9)
3 二抗孵育 (13)
七、曝光显色 (14)
八、灰度分析 (15)
九、抗体及相关溶液配制 (15)
1 抗体 (17)
2 相关溶液配制表 (17)
蛋白检测相对于DNA/RNA的检测来讲要困难许多，Western Blot作为蛋白检测的经典方法短时间内仍然无法被取代。Western Blot的原理并不复杂，网上有很多这方面的材料，这里不作过多的介绍。虽然原理、操作并不复杂，但做好Western Blot、得到满意的图片并非易事。其操作过程中涉及到：蛋白提取、电泳、转膜、杂交、显色、抗体的选择、试剂的选择、设备应用等诸多内容，其中每一个环节的差错对最后的试验结果都会产生不小的影响，最终导致试验失败。很多同学都在抱怨自己的Western Blot没有信号、目的条带太弱、杂带太多、条带弯曲、泳道中有涂抹状背景等诸多问题，大部分情况都会最终把矛头指向抗体，认为这个抗体质量不好。抗体质量肯定会对试验产生相当重要的影响，但绝不是全部。你的操作方法可能是对的，但，是否合理、是否适合你的试验要求，你可能未必了解。我们课题组Western Blot的任务量极重（每年ECL的用量都在5L以上），课题组里面的一些同学总是在不停的问我关于条件优化的问题，我不可能为每一个人找到问题的关键点，因此，写一份关于Western Blot的系统性材料非常有必要，希望你们可以针对自己的问题，自我分析、自我解决，这样也能锻炼你们独立解决问题的能力。
NC膜与PVDF膜的区别
NC膜与PVDF膜的区别
材料科学领域中，膜材料是一种关键的功能性材料，广泛应用于许
多行业。NC膜（聚醋酸纤维素膜）和PVDF膜（聚偏氟乙烯膜）是两
种常见的膜材料，它们在性能和应用方面存在着一些差异。本文将探
讨NC膜与PVDF膜的区别，并分析它们在不同领域的应用。
1. 化学性质：
NC膜是由聚醋酸纤维素制成的，聚醋酸纤维素是一种天然纤维素。NC膜具有较好的耐溶剂性和化学稳定性，能够在广泛的 pH 范围内使用，不易受到化学物质的影响。而PVDF膜是由聚偏氟乙烯制成的，
聚偏氟乙烯是一种合成高分子材料。PVDF膜在酸、碱和溶剂等各种化学物质的环境下都具有较好的稳定性。
2. 物理性质：
NC膜具有良好的热稳定性和机械强度，能够在高温和高压环境下
使用。它具有较高的热变形温度，能够在 200°C 以上的温度下保持稳定。PVDF膜也具有较好的热稳定性和机械强度，但其热变形温度较
NC 膜低，通常在 150°C 左右。
3. 水分通透性：
NC膜在水分通透性方面具有优势，它具有较高的水分透过率，可
以有效地过滤水溶性溶剂和溶剂蒸气。而PVDF膜在水分通透性方面
相对较低，透过率相对较小，适用于一些对水分透过性要求不高的应
用场景。
4. 分离性能：
NC膜和PVDF膜在分离性能上也有所不同。NC膜具有较好的分离性能，能够有效地分离溶剂和其他溶液成分。PVDF膜在分离性能方面相对较弱，适用于需要相对较低分离效率的应用。
根据以上的区别，NC膜和PVDF膜在不同领域有不同的应用。
1. NC膜的应用：
NC膜广泛应用于水处理、药物输送、食品加工等领域。由于其较高的耐溶剂性和化学稳定性，它被用于过滤和分离各种溶剂和溶液。在水处理领域，NC膜可以有效地去除水中的悬浮物和杂质，实现净水的目标。在药物输送领域，NC膜可用于控制药物释放速率，提高药物的疗效。在食品加工领域，NC膜可用于浓缩果汁、分离乳制品中的乳脂等。
WB实验问题
Western Blot问题指南
时间:2011-05-13 08:55来源:网络作者:admin 点击:3679次
根据问题的类型主要分成以下几类（以下资料权作参考，请勿盲目模仿！）; 1. 参考书推荐 A. 对初学者看什么资料比较好？解答：《抗体技术实验指南》和Antibodies（a laboratory manual，
根据问题的类型主要分成以下几类（以下资料权作参考，请勿盲目模仿！）;
1. 参考书推荐
A.对初学者看什么资料比较好？
解答：《抗体技术实验指南》和Antibodies（a laboratory manual， wrote by Ed Harlow ，david lane）两本书不错。
2. 针对样品的常见问题
B. 做线粒体膜UCP2蛋白的Western Blot （以下简写成Western Blot），提取线粒体后冻存（未加蛋白酶抑制剂），用的博士德的一抗，开始还有点痕迹，现在越来越差，上
样量已加到120μg，换了个santa cloz的一抗仍不行。是什么原因？蛋白酶抑制剂单
加PMSF行吗？
解答：怀疑是样品问题，可能是：1，样品不能反复冻融；2，样品未加蛋白酶抑制剂。
同时，建议检查Western Blot过程，提高一抗浓度。对于加蛋白酶抑制剂来说，一般
加PMSF就可以了，最好能多加几中种蛋白酶抑制剂。
C.同一蛋白样品能同时进行两种因子的Western Blot检测吗？
解答：当然可以，有的甚至可以同时测几十种样品。
D. 如果目标蛋白是膜蛋白或是胞浆蛋白，操作需要注意什么？
Western Blot(WB)分析法
Western Blot（WB）分析法
实验目的
检测目的蛋白的表达情况。
实验原理
Western Blot（WB）采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳，被检测物是蛋白质，“探针”是抗体，“显色”用标记的二抗。经过PAGE分离的蛋白质样品，转移到固相载体上，例如硝酸纤维素薄膜（NC膜），固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与酶或同位素标记的第二抗体起反应，经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分。
该技术也广泛应用于检测蛋白水平的表达。
实验步骤
（一）蛋白胶的配制
根据相关蛋白胶配制的说明书及目的蛋白的大小配制相适应浓度的分离胶和浓缩胶。
（二）跑胶
浓缩胶的电压为80 V，分离胶的电压为120 V。
跑完胶后可根据原核或真核表达来选择是否进行染色，原核表达量高，可通过考马斯亮蓝染色观察表达情况，真核不易看出。
（三）转膜
1. 转膜的定义
将电泳后分离的蛋白质从凝胶中转移到固相载体（例如NC膜）上，本实验室采用电泳印迹法。常用的电泳转移方法有湿转和半干转。两者的原理完全相同，只是用于固定胶/膜叠层和施加电场的机械装置不同。前者操作容易，转移效率高，但转移时间长；而后者适用于大胶的蛋白转移，所用缓冲液少。
2. 转移膜的选择
杂交膜的选择是决定Western Blot成败的重要环节。应根据杂交方案、被转移蛋白的特性以及分子大小等因素，选择合适材质、孔径和规格的杂交膜。用于Western Blot的膜主要有两种：硝酸纤维素膜（NC膜）和PVDF膜。
western 转膜及常见问题汇总
Western转膜实用技巧，赶紧Get起来
Western实验中，经过SDS-PAGE电泳分离后的蛋白质样品需经过“转膜”步骤，从PAGE 胶转移到膜上固定，才能用各种方法进行Western Blot的检测和显示，而且为了防止没有电场的情况下已经分离的蛋白条带扩散，转膜要尽快进行。转膜是对Western最终结果影响最大的一步，转膜质量的好坏直接决定了实验结果的好坏。下面介绍一些实用技巧，赶紧Get起来吧
1. 膜的选择
膜的选择主要从实验目的和实验要求来考虑，例如做分子量小于20kDa的小蛋白，0.45um的膜是不可取的，因为可能会使得蛋白因透过膜孔而造成膜结合的目的
蛋白含量不确定，从而影响最终结果的可靠性。通常小于20KDa的蛋白选择0.2um 的膜，而大于20KDa的蛋白选择0.45um的膜。常见的膜有NC膜和PVDF膜，区别如下：
2. 转膜条件
不同分子量的蛋白质选择的凝胶浓度和转膜时间也是不同的，原则上高分子量蛋白用低浓度胶，转膜时间较长，而低分子量蛋白用高浓度胶分离，采用较短的转
3. 转膜操作注意事项
（1）避免直接接触膜，全程戴手套并使用镊子，手指上的油脂与蛋白会封闭转膜效率并易产生背景污斑；
（2） PVDF膜具有疏水性，使用之前需用甲醇浸泡；
（3）排列三明治时，尽量用干净的玻璃棒或试管赶走胶和膜之间的气泡，避免转膜不均匀；
（4）确认裁剪的膜和滤纸与凝胶尺寸相同，否则会导致电流不能通过膜，从而转膜无效；
（5）鸡来源的抗体与PVDF和尼龙膜有较强的结合能力，从而产生较高背景，故如果选择鸡来源的抗体，最好使用**纤维素膜（NC膜）
Western Blot时该选择NC膜还是PVDF膜
Western Blot时最常用的两种膜是硝酸纤维素膜（nitrocellulose，NC膜）和PVDF膜（又称Positively charged nylon）（Polyvinylidene fluoride，聚偏二氟乙烯膜）。
这两种膜各自有什么特点？我们的实验中该选择哪一种呢？来看下面的文字。（摘自《Making and using Antibodies》）
A study of the performance of nitrocellulose, mixed ester, nylon, and covalent-binding PVDF memberanes after passive protein adsorption an
d also after electrotransfer was don
e with several different proteins labeled with 125Iodine. The membranes exhibited different binding cap acities in passive adsorption tests with labeled bovine serum albumin. The PVDF showed the least, and the regenerated cellulose and nylon m embranes showed the most protein binding. Nitrocellulose and mixed es ter membranes were midway between. In tests measuring protein retenti on, PVDF retained the most bound protein when washed with detergents
超滤各种膜材料比较
各种膜材料之间的比较
1.中空纤维超滤膜的主要材料有聚丙烯腈（PAN）、聚砜（PSF）、聚醚砜(PES）、聚偏氟乙
烯(PVDF）、聚氯乙烯（PVC）等
2.聚氯乙烯（PVC）湿膜机器里面的芯要用酒精浸泡来保持湿润状态，保持滤芯的性能
3.聚偏氟乙烯（PVDF）膜是抗高温最高140度的温度，过滤开水都可以，还有耐酸碱强
酸强碱都不怕（新加坡美能)
4.安达康用的材质是UPAN ，是最好的一种
膜材料PAN/PVDF/PES/PS比较
1。材料：PAN为亲水性材质，PVDF，PES与PS为疏水性材质;所以做成超滤膜，PVDF与PES、PS的跨膜压差要远高于PAN,PVDF与PES、PS更容易污堵；
2。PES与PS的抗氧化能力非常强,PVDF次之，PAN再次之；
3。PES与PS材料属于刚性材料,比较容易破损，断丝。所以PES与PS通常设计成内压式，如Norit,Hydracap，Koch 等,PES与PS对进水的要求相对较高，需要进水更干净。另外，PES 与PS的超滤通常不设计风机气洗，更重要的原因是造成断丝（刚性材料）.若有厂家宣称设计风机气洗或者外压式，工程公司或业主需要小心；
4。就跨膜压差（TMP—Transfer Membrane Pressure）来说，越低的跨膜压差意味着清洗越容易;
5. 就抗污染能力而言，PAN比较好；PES与PS次之;
6. 就材料的抗拉伸强度而言, PVDF，PES及PS比较好,PAN次之;
7. PAN与PVDF通常都可以设计成外压式，配风机气洗;但Omexell例外，以前的设计没有风机气洗，最近据说有风机的设计，但是否稳定,还需要时间考验;
玻璃纤维膜 nc膜 原理
玻璃纤维膜 nc膜原理
玻璃纤维膜和NC膜（硝酸纤维素膜）的原理如下：
1. 玻璃纤维膜的原理：
玻璃纤维膜是一种由连续玻璃纤维组成的非织造布，其原理基于玻璃纤维的优异性能和结构特点。玻璃纤维具有高强度、高模量、耐高温、耐腐蚀等特性，因此玻璃纤维膜具有优良的抗拉强度、抗撕裂性、耐磨损性和化学稳定性。此外，玻璃纤维膜还具有良好的透气性和过滤性能，能够有效地过滤和分离气体、液体中的固体颗粒和杂质。
玻璃纤维膜的应用范围广泛，包括工业过滤、环保治理、医疗卫生、食品加工等领域。在过滤和分离过程中，玻璃纤维膜通过其独特的纤维结构和表面性质，实现对固体颗粒和杂质的拦截和吸附，从而达到过滤和净化的目的。
2. NC膜（硝酸纤维素膜）的原理：
NC膜是一种由硝酸纤维素制成的薄膜材料，其原理基于硝酸纤维素的溶解和再生过程。硝酸纤维素是一种高分子化合物，具有良好的溶解性和成膜性。在制造过程中，硝酸纤维素溶解在适当的溶剂中，形成均匀的溶液。然后，通过流延、刮涂或喷涂等方法，将溶液涂布在基材上，经过干燥和固化后形成薄膜。
NC膜具有优良的机械性能、化学稳定性和生物相容性，因此广泛应用于生物分离、免疫检测、药物筛选等领域。在生物分离和免疫检测中，NC膜作为固相支持体，能够固定和吸附生物分子（如蛋白质、核酸等），从而实现生物分子的分离、纯化和检测。
总之，玻璃纤维膜和NC膜的原理分别基于玻璃纤维的优异性能和硝酸纤维素的溶解再生过程。这两种膜材料具有不同的特点和应用领域，但都能够在过滤、分离和检测等方面发挥重要作用。
五年western blot 实验经验总结
1.抗体的选择
对于国内的大多数实验室来讲，做western blot实验选择抗体是个头疼的问题。原因很简单，买进口抗体捉襟见肘，买国产抗体得需要大无畏的勇气，对于我所在的兰州地区的实验者而言，感触尤深。在这五年的western blot实验历程里，我先后用过进口抗体，进口抗体国内分装包装，国产抗体，质量良莠不齐。
进口抗体一般不会出现闪失：abcam品种全，质量过硬，但价高（3400元/100微升），而且说是100微升，但至多能吸出来90微升；Sigma的价最贵；比较有性价比的是CST的抗体，现在好像是2200元/100微升，我前后用过二十几种，1:1000的稀释比下，还没有失过手，100微升通常能完成所有的免疫组化和western blot实验，还有一个优点是通常量比100微升多出来10微升，唯一的不足是CST的品种实在不多。Santa的多克隆抗体质量可以，但是选用Santa的单抗还是有风险，估计这也是业界共识了吧。
进口抗体国内分装包装我也用过不少，呵呵，毕竟是穷人（420元/100微升），大概好抗体的比例约为50%，如果能做出来，也存在一个问题，就是抗体大多只能用一次。我曾经把Santa的原装抗体和分装抗体做过比对（抗体品种，货号等完全一致），在都能做出来的前提下，原装抗体能重复使用的次数要多出许多。具体原因我已经揣测了好几年，不敢说出来，我一直在想是不是冬天西瓜切成牙和整个卖，也会有所不同。揣测归揣测，假如只为了发论文毕业走人，可以考虑选用进口分装的多克隆抗体。
国产抗体比较知名的就几家，但质量确实不敢恭维。western blot能做出来的确实不多，而且杂带多，背景不干净。我们周边的实验室大多买国产抗体做免疫组化，怎么说呢，应付硕士论文够了。
NC膜PVDF膜和尼龙膜的区别
NC膜、PVDF膜、尼龙膜的应用及差别
硝酸纤维素膜(nitroc ellul ose filter membra ne，简称NC膜)，NC膜在No rther n Blot、Southe rn Blot、Wester n Blot中都需要用到，杂交技术有固相杂交和液相杂交之分。固相杂交技术目前较为常用，先将待测核酸结合到一定的固相支持物上，再与液相中的标记探针进行杂交。固相支持物常用硝酸纤维素膜。
PVDF膜即聚偏二氟乙烯膜（polyvi nylid ene fluori de）是蛋白质印迹法中常用的一种固相支持物。PVDF膜是疏水性的，膜孔径有大有小，随着膜孔径的不断减小，膜对低分子量的蛋白结合就越牢固。大于20000的蛋白选用0.45um的膜，小于20000的蛋白选用0.2um 的膜。PVDF膜使用是需预处理，用甲醇处理的目的是活化膜上的正电基团，使其更容易与带负电的蛋白结合。PVDF膜具有较高的机械强度，是印迹法中的理想固相支持物材料。
尼龙膜是一种合成的长链聚酰胺薄膜，对核酸和蛋白质具有很强的结合能力，能代替硝酸纤维素薄膜用于分子印迹和杂交实验。
NC膜、PVDF膜、尼龙膜的差别：尼龙膜是较理想的核酸固相支持物，有多种类型；硝酸纤维素膜是目前应用最广的一种固相支持物，价格最便宜；PVDF膜介于二者之间。
1. 就结合能力而言：尼龙膜结合D NA和RN A能力可达480－600μg/cm2，可结合短至10bp的核酸片段；硝酸纤维素膜结合DNA和RNA能力可达80－100μg/cm2，对于200b p 的核酸片段结合能力不强；PVDF膜结合DNA和RNA能力可达125－300μg/cm2。
超滤各种膜材料比较
超滤各种膜材料比较文件编码（008-TTIG-UTITD-GKBTT-PUUTI-WYTUI-8256）
各种膜材料之间的比较
1.中空纤维超滤膜的主要材料有聚丙烯腈（PAN）、聚砜（PSF）、聚醚砜
（PES）、聚偏氟乙烯（PVDF）、聚氯乙烯（PVC）等
2.聚氯乙烯（PVC）湿膜机器里面的芯要用酒精浸泡来保持湿润状态，保持滤芯
的性能
3.聚偏氟乙烯（PVDF）膜是抗高温最高140度的温度，过滤开水都可以，还有
耐酸碱强酸强碱都不怕（新加坡美能）
4.安达康用的材质是UPAN ，是最好的一种
膜材料PAN/PVDF/PES/PS比较
1. 材料： PAN为亲水性材质，PVDF,PES与PS为疏水性材质；所以做成超滤膜，PVDF与PES、PS的跨膜压差要远高于PAN，PVDF与PES、PS更容易污堵；
2. PES与PS的抗氧化能力非常强，PVDF次之，PAN再次之；
3. PES与PS材料属于刚性材料，比较容易破损，断丝。所以PES与PS通常设计成内压式，如Norit,Hydracap,Koch 等，PES与PS对进水的要求相对较高，需要进水更干净。另外，PES与PS的超滤通常不设计风机气洗，更重要的原因是造成断丝（刚性材料）。若有厂家宣称设计风机气洗或者外压式，工程公司或业主需要小心；
4. 就跨膜压差（TMP-Transfer Membrane Pressure）来说，越低的跨膜压差意味着清洗越容易；
5. 就抗污染能力而言，PAN比较好； PES与PS次之；
6. 就材料的抗拉伸强度而言， PVDF，PES及PS比较好，PAN次之；
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NC膜、PVDF膜、xx膜的应用及差别
硝酸纤维素膜(nitrocellulosefiltermembrane，简称NC膜)，NC膜在NorthernBlot、SouthernBlot、WesternBlot中都需要用到，杂交技术有固相杂交和液相杂交之分。固相杂交技术目前较为常用，先将待测核酸结合到一定的固相支持物上，再与液相中的标记探针进行杂交。固相支持物常用硝酸纤维素膜。
PVDF膜即聚偏二氟乙烯膜（polyvinylidenefluoride）是蛋白质印迹法中常用的一种固相支持物。PVDF膜是疏水性的，膜孔径有大有小，随着膜孔径的不断减小，膜对低分子量的蛋白结合就越牢固。大于200的蛋白选用
0.45um的膜，小于200的蛋白选用
0.2um的膜。PVDF膜使用是需预处理，用甲醇处理的目的是活化膜上的正电基团，使其更容易与带负电的蛋白结合。PVDF膜具有较高的机械强度，是印迹法中的理想固相支持物材料。
尼龙膜是一种合成的长链聚酰胺薄膜，对核酸和蛋白质具有很强的结合能力，能代替硝酸纤维素薄膜用于分子印迹和杂交实验。
NC膜、PVDF膜、xx膜的差别：
尼龙膜是较理想的核酸固相支持物，有多种类型；硝酸纤维素膜是目前应用最广的一种固相支持物，价格最便宜；PVDF膜介于二者之间。
1.就结合能力而言：
尼龙膜结合DNA和RNA能力可达480－600μg/cm2，可结合短至10bp的核酸片段；硝酸纤维素膜结合DNA和RNA能力可达80－100μg/cm2，对于200bp 的核酸片段结合能力不强；PVDF膜结合DNA和RNA能力可达125－
300μg/cm2。
2.就温度适应性而言：
尼龙膜经烘烤或紫外线照射后，核酸中的部分嘧啶碱基可与膜上的正电荷结合；硝酸纤维素膜依靠疏水性相互作用结合DNA，结合不牢固；PVDF膜结合牢固，耐高温，特别适合于蛋白印迹。
就韧性而言：
尼龙膜较强；硝酸纤维素膜较脆，易破碎；PVDF膜较强。
3.就重复性而言：
⑴、尼龙膜可反复用于分子杂交，杂交后，探针分子可经碱变性被洗脱下来；硝酸纤维素膜不能重复使用；PVDF膜可以重复使用。
⑵、NC膜的使用也很简便，比如不需要甲醛预处理，只要在无离子水面浸润排出膜内气泡，再在电泳缓冲液中平衡几分钟就可以了；比如NC膜很容易封闭，也不需要特别严谨的清洗条件。转移到NC膜上的蛋白在合适的条件下可以稳定保存很长时间，不过要注意的是纯的硝纤膜在比较脆，又容易卷，操作要小心，不适合用于需要多次重复清洗的用途。因为经不起多次“折磨”。选择硝纤膜时要注意的是选择合适的孔径，通常20KD以上的大分子蛋白用
0.45um孔径的膜，小于20KD的话建议选择
0.2um的，如果小于7KD的话最好选择
0.1um的膜。另外还要注意选择纯的NC膜混有含醋酸纤维(CM)的NC膜结合力会有所降低。
⑶、由于NC膜上结合的蛋白会因为一些去污剂而被代替，因此在封闭时最好使用较温和的Tween20，而且浓度不要超过
0.3%(据说
0.05%效果最好)。一般而言，NC膜越纯，其蛋白结合能力就越高，所以要增加WB的灵敏度和分辨率，提高所使用膜的纯度是个可以考虑的选择。如果NC膜搀杂一些醋化纤维素这在前面已经提到，会影响蛋白质结合⑷、与硝酸纤维素膜相比，PVDF膜在蛋白质截留能力，机械强度和化学相容性上都更优越的性能。市售硝酸纤维素膜的典型结合量是80-100μg/cm2,而PVDF膜结合量是
100-200μg/cm2(而结合强度PVDF比硝纤膜强6倍！)。但是PVDF膜最大的优点不仅于此：
更好的机械强度和化学耐受性使PVDF膜在各种染色应用和多重免疫检测中成为理想选择；而且单个凝胶的泳道复本可用于多种目的，特别是需要做N端蛋白测序，在相当“严酷”的清洗条件下，当尼龙或者硝纤膜已经降解的情况下PVDF膜依然保持本色，所以PVDF也是要做蛋白测序的唯一选择。但不适合荧光。PVDF膜特别注意的是需要100%甲醇预处理(不超过15秒)再用缓冲液平衡，才能用。