【精品】药品和生物制品无菌检查

药品无菌检查

药品无菌检查法
• 供试品的无菌检查
检验数量：一次试验所用供试品最小包装容器的数量出厂产品按表1，上市产品监督检验按表2 最少检验数量不包括阳性对照用的。
检验量：按表3，采用薄膜过滤法时，只要供试品特性允许，应将所有容器内的全部内容物过滤。
药品无菌检查法
• 1、薄膜过滤法 • 封闭式薄膜过滤器 • 只要供试品性状允许，应采用薄膜过滤 • 抗生素样品选用低吸附的滤膜 • 水溶性供试品过滤前先将少量冲洗液过滤
以润湿滤膜
• 油类供试品的滤膜和滤器在使用前应充分干燥
• 冲洗量一次一般为100ml，总冲洗量不得超过1000ml，以免膜上的微生物受损。总冲
药品无菌检查法
• 水溶性的液体-----直接过滤或混合至含不少于100ml适宜稀释液的无菌容器中，混匀，立即过滤，如供试品有抑菌作用，须冲洗一般不少于三次。
药品无菌检查法
• 混悬液等非澄清水溶液供试品取规定量，等量接种至各管培养基中
• 固体供试品取规定量，直接等量接种至各管培养基中，或加入适宜的溶剂溶解，或按标签说明复溶后，取规定量等量接种至各管培养基中。
• 非水溶性供试品加入适量的乳化剂及稀释剂使其乳化再接种，或直接接种至含乳化剂的培养基中
• 水溶性的固体----溶取规定量，加适宜的稀释液溶解或按标签复溶。
• 非水溶性供试品-----直接过滤，或乳化后（加吐温80等）立即过滤，用含0.1-1%吐温 80的冲洗液冲洗，培养基中可加入吐温80

药典三部(2015版)-通则-1101微生物检查法

1101 无菌检查法

无菌检查法系用于检查药典要求无菌的药品、生物制品、医疗器具、原料、辅料及其他品种是否无菌的一种方法。若供试品符合无菌检查法的规定，仅表明了供试品在该检验条件下未发现微生物污染。

无菌检查应在无菌条件下进行，试验环境必须达到无菌检查的要求，检验全过程应严格遵守无菌操作，防止微生物污染，防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检出。单向流空气区、工作台面及环境应定期按医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法的现行国家标准进行洁净度确认。隔离系统应定期按相关的要求进行验证，其部环境的洁净度须符合无菌检查的要求。日常检验还需对试验环境进行监控。

培养基

硫乙醇酸盐流体培养基主要用于厌氧菌的培养，也可用于需氧菌培养；胰酪大豆胨液体培养基用于真菌和需氧菌的培养。

培养基的制备及培养条件

培养基可按以下处方制备，亦可使用按该处方生产的符合规定的脱水培养基或成品培养基。配制后应采用验证合格的灭菌程序灭菌。制备好的培养基应保存在2～25℃、避光的环境，若保存于非封闭容器中，一般在3周使用；若保存于密闭容器中，一般可在一年使用。

1. 硫乙醇酸盐流体培养基

胰酪胨15.0g 氯化钠2.5g

酵母浸出粉新配制的0.1% 刃天青溶液

5.0g 1.0ml

无水葡萄糖5.0g 琼脂0.75g

L-胱氨酸0.5g 水1000ml

硫乙醇酸钠

0.5g

（或硫乙醇酸）

(0.3ml)

除葡萄糖和刃天青溶液外，取上述成分混合，微温溶解，调节pH为弱碱性，煮沸，滤清，加入葡萄糖和刃天青溶液，摇匀，调节pH，使灭菌后在25℃的pH值为7.1±0.2。分装至适宜的容器中，其装量与容器高度的比例应符合培养结束后培养基氧化层（粉红色）不超过培养基深度的1/2。灭菌。在供试品接种前，培养基氧化层的高度不得超过培养基深度的1/5，否则，须经100℃水浴加热至粉红色消失（不超过20分钟），迅速冷却，只限加热一次，并防止污染。

2015版药典无菌检查法与微生物鉴定

－
D级 3520000 29000 不作规定不作规定 200 100 50
－
无菌隔离系统的使用及验证
9206 无菌检查用隔离系统验证指导原则 •1.操作验证 •2.完整性验证 •3.灭菌验证 •4.灭菌循环验证 •5.内部洁净度验证 •6.仪器仪表验证
培养基的修订
• 我国药典无菌检查法与欧美药典的差异 • 2015版药典的修订
Dextrose(葡萄糖)............................................5.0 g Sodium Chloride(氯化钠).....................................2.5 g L-Cystine( L-胱氨酸) .......................................0.5 g Sodium Thioglycollate (硫乙醇酸钠)..........................0.5 g Agar( 琼脂).................................................0.75 g Resazurin( 刃天青) .........................................1.0 mg Water（水）............................................. ...1000ml

无菌检查法标准操作程序

精品资料

1目的

建立一个无菌检查法标准操作程序，保证实验的准确性、可靠性。

2范围

适用于原料、辅料及成品的无菌检查。

3职责

微生物检验员遵照执行。

4内容

无菌检查法系用于检查药典要求无菌的药品、生物制品、医疗器具、原料、辅料及其他品种是否无菌的一种方法。若供试品符合无菌检查法的规定，仅表明了供试品在该检验条件下未发现微生物污染。

无菌检查应在无菌条件下进行，试验环境必须达到无菌检查的要求，检验全过程应严格遵守无菌操作，防止微生物污染，防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检出。单向流空气区、工作台面及环境应定期按医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法的现行国家标准进行洁净度确认。隔离系统应定期按相关的要求进行验证，其内部环境的洁净度须符合无菌检查的要求。日常检验还需对试验环境进行监控。

4.1 培养基

硫乙醇酸盐流体培养基主要用于厌氧菌的培养，也可用于需氧菌的培养；胰酪大豆胨液体培养基用于真菌和需氧菌的培养。

4.1.1 培养基的制备及培养条件

培养基可按以下处方制备，亦可使用按该处方生产的符合规定的脱水培养基或成品培养基。配制后应采用验证合格的灭菌程序灭菌。制备好的培养基应保存在2〜25°C、避光的环境，若保存于非密闭容器中，一般在3 周内使用；若保存于密闭容器中，一般可在一年内使用。

4.1.1.1 硫乙酵酸盐流体培养基

胰酪胨15. 0g 氯化钠 2. 5g

酵母浸出粉 5. 0g 新配制的0. 1 % 刃天

无水葡萄糖 5.0g 青溶液 1.0ml

L-胱氨酸0. 5g 琼脂0. 75g

无菌检查法

无菌检查法-2015版中国药典

无菌检查法系用于检查药典要求无菌的药品、生物制品、医疗器具、原料、辅料、及其他品种是否无菌的一种方法。若供试品符合无菌检查法的规定,仅表明了供试品在该检验条件下未发现微生物污染。

无菌检查应在环境洁净度B 级背景下的局部A 级洁净度的单向流空气区域内或隔离系统中进行，其全过程应严格遵守无菌操作，防止微生物污染，防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检出。单向流空气区、工作台面及环境应定期按《医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》的现行国家标准进行洁净度确认。隔离系统应定期按相关的要求进行验证，其内部环境的洁净度须符合无菌检查的要求。日常检验还需对试验环境进行监控。

无菌检查人员必须具备微生物专业知识，并经过无菌技术的培训。

培养基

硫乙醇酸盐流体培养基主要用于厌氧菌的培养，也可用于需气菌培养；胰酪大豆胨液体培养基适用于真菌和需气菌的培养。培养基的制备及培养条件培养基可按以下处方制备，亦可使用按该处方生产的符合规定的脱水培养基。配制后应采用验证合格的灭菌程序灭菌。制备好的培养基应保存在2～25℃、避光的环境，若保存于非密闭容器中，一般在3周内使用；若保存于密闭容器中，一般可在一年内使用。

1. 硫乙醇酸盐流体培养基

酪胨 (胰酶水解) 15.0g 酵母浸出粉 5.0g

葡萄糖 5.0g 氯化钠 2.5g

L-胱氨酸 0.5g 新配制的 0.1% 刃天青溶液 1.0ml

硫乙醇酸钠 0.5g 琼脂 0.75g

(或硫乙醇酸) （ 0.3 ml) 纯化水 1000ml

生物制品无菌检验规程

生物制品无菌试验规程

生物制品不得含有杂菌（有专门规定者除外），灭活菌苗、疫苗不得含有活的本菌、本毒。在制造过程中应由制造部门按各制品制造及检定规程规定进行无菌试验，分装后的制品须经质量检定部门做最后检定。各种生物制品的无菌试验除有专门规定者外，均应按照本规程的规定进行。

1抽样

1.1原液及半成品

原液及半成品应每瓶分别进行无菌试验，其抽样量应至少为

0.1%，但不得少于

1.0ml。

1.1.1大罐稀释的制品抽样数量不得少于10ml。

1.1.2原液及半成品每开瓶一次，应如上法抽验。

1.2成品

每亚批均应进行无菌试验，样品应随机抽取，应具有代表性（包括分装过程的前、中、后样品）。

1.2.1分装量在100支（瓶）或以下者抽检不少于5支，101～500支（瓶）者抽检不少于10支（瓶），501～100支（瓶）者抽检不少于20支（瓶，10001支（瓶）以上者抽检40支（瓶）。

1.2.2每瓶装量20ml以上的冻干血液制品，每柜冻干200瓶以下者抽检2瓶，200瓶及以上者抽检4瓶。6～20ml抽检量加倍。5ml和5ml以下者按

1.2.1项抽检。

1.3凡规定需作支原体检查的制品，均应在半成品时按亚批进行检查，成品可不再做。

2无菌试验用培养基（培养基处方可附录1）

2.1检查制品中本菌是否存活应采用适于本菌发育生长的培养基（在半成品时检查，有专门规定者除外）。

2.2检查需氧性和厌氧性杂菌应采用硫乙醇酸盐培养基。检查不含汞类防腐剂制品中的需氧性和厌氧性杂菌时，该培养基中可不加硫乙醇酸盐。

检查霉菌和腐生菌应采用改良xx培养基。

无菌检查法-版中国药典-电子版

无菌检查法系用于检查药典要求无菌的药品、生物制品、医疗器具、原料、辅料、及其他品种是否无菌的一种方法。若供试品符合无菌检查法的规定，仅表明了供试品在该检验条件下未发现微生物污染。

无菌检查应在环境洁净度B 级背景下的局部A 级洁净度的单向流空气区域内或隔离系统中进行，其全过程应严格遵守无菌操作，防止微生物污染，防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检出。单向流空气区、工作台面及环境应定期按《医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》的现行国家标准进行洁净度确认。隔离系统应定期按相关的要求进行验证，其内部环境的洁净度须符合无菌检查的要求。日常检验还需对试验环境进行监控。

无菌检查人员必须具备微生物专业知识，并经过无菌技术的培训。

培养基

硫乙醇酸盐流体培养基主要用于厌氧菌的培养，也可用于需气菌培养；胰酪大豆胨液体培养基适用于真菌和需气菌的培养。培养基的制备及培养条件培养基可按以下处方制备，亦可使用按该处方生产的符合规定的脱水培养基。配制后应采用验证合格的灭菌程序灭菌。制备好的培养基应保存在2〜

25°C 、避光的环境，若保存于非密闭容器中，一般在 3周内使用；若保存于密闭容器中，一般可在一年内使用。

1. 硫乙醇酸盐流体培养基

葡萄糖

新配制的%刃天青溶液硫乙醇酸钠除葡萄糖和刃天青溶液外，取上述成分混合，微温溶解，调节

pH 为弱碱性，煮沸，滤清，加入葡萄糖和刃天青溶液，摇匀，调节 pH 值使灭菌后为土。分装至适宜的容器中，其装量与容器高度的比例应符合培养结束后培2养基氧化层（粉红色）不超过培养基深度的 1/2。灭菌。在供试品接种前, 培养基氧化层的高度不得超过培养基深度的 1/5,否则，须经100C 水浴加热至粉红色消失（不超过 20分钟），迅速冷却，只限加热一次，并防止被污染。除另有规定外，硫乙醇酸盐流体培养基置30〜 35C 培养。

药典三部2015版通则1101微生物检查法

1101 无菌检查法

无菌检查法系用于检查药典要求无菌的药品、生物制品、医疗器具、原料、辅料及其他品种是否无菌的一种方法。若供试品符合无菌检查法的规定，仅表明了供试品在该检验条件下未发现微生物污染。

无菌检查应在无菌条件下进行，试验环境必须达到无菌检查的要求，检验全过程应严格遵守无菌操作，防止微生物污染，防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检出。单向流空气区、工作台面及环境应定期按医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法的现行国家标准进行洁净度确认。隔离系统应定期按相关的要求进行验证，其内部环境的洁净度须符合无菌检查的要求。日常检验还需对试验环境进行监控。

培养基

硫乙醇酸盐流体培养基主要用于厌氧菌的培养，也可用于需氧菌培养；胰酪大豆胨液体培养基用于真菌和需氧菌的培养。

培养基的制备及培养条件

培养基可按以下处方制备，亦可使用按该处方生产的符合规定的脱水培养基或成品培养基。配制后应采用验证合格的灭菌程序灭菌。制备好的培养基应保存在2～25℃、避光的环境，若保存于非封闭容器中，一般在3周内使用；若保存于密闭容器中，一般可在一年内使用。

1. 硫乙醇酸盐流体培养基

胰酪胨15.0g 氯化钠

2.5g

酵母浸出粉 5.0g 新配制的0.1% 刃天青溶液

1.0ml

无水葡萄糖 5.0g 琼脂

0.75g

L-胱氨酸0.5g 水

1000ml

硫乙醇酸钠0.5g

（或硫乙醇酸）(0.3ml)

除葡萄糖和刃天青溶液外，取上述成分混合，微温溶解，调节pH为弱碱性，煮沸，滤清，加入葡萄糖和刃天青溶液，摇匀，调节pH，使灭菌后在25℃的pH值为7.1±0.2。分装至适宜的容器中，其装量与容器高度的比例应符合培养结束后培养基氧化层（粉红色）不超过培养基深度的1/2。灭菌。在供试品接种前，培养基氧化层的高度不得超过培养基深度的1/5，否则，须经100℃水浴加热至粉红色消失（不超过20分钟），迅速冷却，只限加热一次，并防止污染。

2020药典无菌检查法

无菌检查法系用于检查药典要求无菌的药品、生物制品、医疗器械、原料、辅料及其他品种是否无菌的一种方法。若供试品符合无菌检查法的规定，仅表明了供试品在该检验条件下未发现微生物污染。

无菌检查应在无菌条件下进行，试验环境必须达到无菌检查的要求，检验全过程应严格遵守无菌操作，防止微生物污染，防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检出。单向流空气区域、工作台面及受控环境应定期按医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法的现行国家标准进行洁净度确认。隔离系统应定期按相关的要求进行验证，其内部环境的洁净度须符合无菌检查的要求。日常检验需对试验环境进行监测。

培养基

硫乙醇酸盐流体培养基主要用于厌氧菌的培养，也可用于需氧菌的培养；胰酪大豆胨液体培养基用于真菌和需氧菌的培养。

培养基的制备及培养条件

培养基可按以下处方制备，亦可使用按该处方生产的符合规定的脱水培养基或商品化的预判培养基。配制后应采用验证合格的灭菌程序灭菌。制备好的培养基若不即时使用，应置于无菌密闭容器中，在2～25℃、避光的环境下保存，并在经验证的保存期内使用。

1.硫乙醇酸盐流体培养基

胰酪胨15.0g 氯化钠 2.5g 酵母浸出粉 5.0g 新配制的0.1%

葡萄糖/无水葡萄糖 5.5g/5.0g 刃天青溶液 1.0ml

L-胱氨酸0.5g 琼脂0.75g

硫乙醇酸钠0.5g 水1000ml

（或硫乙醇酸）（0.3ml）

除葡萄糖和刃天青溶液外，取上述成分混合，微温溶解，调节pH为弱碱性，煮沸，滤清，加入葡萄糖和刃天青溶液，摇匀，调节pH，使灭菌后在25℃的pH值为7.1±0.2。分装至适宜的容器中，其装量与容器高度的比例应符合培养结束后培养基氧化层（粉红色）不超过培养基深度的1/2。灭菌。在供试品接种前，培养基氧化层的高度不得超过培养基深度的1/3，否则，须经100℃水浴加热至粉红色消失（不超过20分钟），迅速冷却，只限加热一次，并防止被污染。

无菌检查

无菌检查和微生物限度检查操作规范

（中国药品生物制品检定所）

一、无菌室的要求：

无菌室是无菌检查、微生物限度检查的重要设备，面积不小于6平米，高度2.4-2.8m为宜。建筑材料要光洁，不吸潮，无凸起，耐腐蚀，易清洗。无菌室内部应六面光滑，无缝隙，里面连接处应呈凹凸形，不留死角。操作间和缓冲间的门不应直对，缓冲间两个。

无菌室内采光面积要大，照明灯应镶嵌在天花板内，光照应分布均匀，光照度不低于300lux，电源开关应设在室外。

无菌室、缓冲间和操作间均应设置紫外线杀菌灯，每立方米2-2.5瓦，距实验台高度不超过1米，并应定期检查辐射强度，距1米处应不低于70微瓦/平方厘米，无菌室内应安装空气除菌过滤层流装置及调温装置，控制温度18-26℃，相对湿度40%-60%，操作间或净化工作台的洁净空气应保持与相临环境形成正压，不低于4.9帕。操作区洁净度100级，操作间洁净度10000级，洁净度定期检查。

无菌室及缓冲间不得存放其他杂物，如培养箱。

用消毒液清洁无菌室操作台面，开启无菌室紫外灯和层流空气过滤30分钟以上。无菌室的无菌程度，常用的沉降菌测定方法为：取营养肉汤琼脂平板3个，置无菌室的操作区台面左、中、右位置上，开盖暴露30分钟，在30-35℃培养2天后，计算菌落数。用于无菌检查的无菌室或微生物限度检查的无菌室，细菌总数应小于3个，浮游菌每立方米应小于5个，否则，不能用于无菌检查和微生物限度检查。

二、培养基的准备

1、培养基的制备：

配制培养基的蒸馏水或去离子水应符合规定。再称取需气菌、厌气菌培养基、真菌培养基的干燥培养基，加水溶化后，调节PH值，使灭菌后需气菌、厌气菌培养基的PH值为7.0-7.3，真菌培养基的PH值为6.2-6.6，分装、盖塞、灭菌，待用。

药典无菌检查法

附录百A 无菌检查法

无菌检查法系用于检查药典要求无菌的生物制品、医疗器具、原料、辅料、及其他品种是否无

菌的一种方法。若供试品符合无菌检查法的规定,仅表明了供试品在该检验条件下未发现微生物污

染。

无菌检查应在环境洁净度10 000 级下的局部洁净度100 级的单向流空气区域内或隔离系统中进行，其全过程应严格遵守无菌操作，防止微生物污染，防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检出。单向流空气区、工作台面及环境应定期按《医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》的现行国家标准进行洁净度验证。隔离系统应按相关的要求进行验证，其内部环境的洁净度须符合无菌检查的要求。日常检验还需对试验环境进行监控。

无菌检查人员必须具备微生物专业知识，并经过无菌技术的培训。

培养基

培养基的制备

培养基可按以下处方制备，亦可使用按该处方生产的符合规定的脱水培养基。配制后应采用验

证合格的灭菌程序灭菌。制备好的培养基应保存在2C〜25 C、避光的环境，若保存于非密闭容器

中，一般在三周内使用；若保存于密闭容器中，一般可在一年内使用。

1. 硫乙醇酸盐流体培养基

酪胨（胰酶水解）15.0g酵母浸出粉 5.0g

葡萄糖 5.0g氯化钠 2.5g

新配制的0.1% 刃天青溶液 1.0 ml

L- 胱氨酸0.5g

硫乙醇酸钠0.5g琼脂0.75g

（或硫乙醇酸）（0.3 ml）水1000 ml

除葡萄糖和刃天青溶液外，取上述成分混合，微温溶解，调节pH 为弱碱性，煮沸，滤清，加

入葡萄糖和刃天青溶液，摇匀，调节pH 值使灭菌后为7.1 ± 0.2 。分装至适宜的容器中，其装量与容器高度的比例应符合培养结束后培养基氧化层（粉红色）不超过培养基深度的1/2 ，灭菌。

产品无菌检验操作规程

1.目的

2.范围

本操作规程适用于生物制品、医疗器械等无菌产品的无菌检验。

3.定义

3.1无菌状态：指产品中不存在可繁殖的微生物，无细菌、真菌、病

毒等微生物的存在。

3.2细菌菌落计数：针对产品表面的微生物菌落，用来评价产品表面

的微生物污染情况。

3.3结果解释：根据无菌检验的结果判断产品是否通过检验或被污染。

4.用具和试剂

4.1不锈钢操作台：用于操作无菌检验的工作台。

4.2灭菌器：用于对试剂、无菌操作的用具等进行灭菌处理。

4.3滑板培养基：可供细菌、真菌的培养和分离。

4.4特制无菌采样器：用于取样时保持无菌状态。

5.环境要求

5.1操作室温度控制在20-25摄氏度。

5.2操作室相对湿度控制在45%-60%。

5.3操作室应保持无尘、洁净状态，避免与其他非无菌产品接触。

6.操作流程

6.1准备工作

6.1.1检查操作台的无菌状态，保证干净无尘。

6.1.2检查灭菌器的工作状态，保证灭菌的效果。

6.1.3上岗前必须进行手部消毒，并将手部放入操作台内的空气幕进

行吹干。

6.2取样

6.2.1使用特制无菌采样器，取样前注意采样器的无菌状态。

6.2.2将特制无菌采样器放入培养基中，取出后使用。

6.2.3按照相应的取样方法进行取样，注意取样的过程中避免污染。

6.3培养

6.3.1将取样后的特制无菌采样器立即放入滑板培养基上，进行培养。

6.3.2滑板培养基进行按照接种方法进行培养，注意培养的温度和时间。

6.3.3培养后的滑板培养基进行观察和计数，记录细菌菌落的数量。

6.4结果解释

6.4.1根据滑板培养基上的菌落数量判断产品是否通过无菌检验。

药典三部(2015版)-通则-1101微生物检查法

1101 无菌检查法

无菌检查法系用于检查药典要求无菌的药品、生物制品、医疗器具、原料、辅料及其他品种是否无菌的一种方法。若供试品符合无菌检查法的规定，仅表明了供试品在该检验条件下未发现微生物污染。

无菌检查应在无菌条件下进行，试验环境必须达到无菌检查的要求，检验全过程应严格遵守无菌操作，防止微生物污染，防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检出。单向流空气区、工作台面及环境应定期按医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法的现行国家标准进行洁净度确认。隔离系统应定期按相关的要求进行验证，其内部环境的洁净度须符合无菌检查的要求。日常检验还需对试验环境进行监控。

培养基

硫乙醇酸盐流体培养基主要用于厌氧菌的培养，也可用于需氧菌培养；胰酪大豆胨液体培养基用于真菌和需氧菌的培养。

培养基的制备及培养条件

培养基可按以下处方制备，亦可使用按该处方生产的符合规定的脱水培养基或成品培养基。配制后应采用验证合格的灭菌程序灭菌。制备好的培养基应保存在2～25℃、避光的环境，若保存于非封闭容器中，一般在3周内使用；若保存于密闭容器中，一般可在一年内使用。

1. 硫乙醇酸盐流体培养基

胰酪胨15.0g 氯化钠

2.5g

酵母浸出粉 5.0g 新配制的0.1% 刃天青溶液

1.0ml

无水葡萄糖 5.0g 琼脂

0.75g

L-胱氨酸0.5g 水

1000ml

硫乙醇酸钠0.5g

（或硫乙醇酸）(0.3ml)

除葡萄糖和刃天青溶液外，取上述成分混合，微温溶解，调节pH为弱碱性，煮沸，滤清，加入葡萄糖和刃天青溶液，摇匀，调节pH，使灭菌后在25℃的pH值为7.1±0.2。分装至适宜的容器中，其装量与容器高度的比例应符合培养结束后培养基氧化层（粉红色）不超过培养基深度的1/2。灭菌。在供试品接种前，培养基氧化层的高度不得超过培养基深度的1/5，否则，须经100℃水浴加热至粉红色消失（不超过20分钟），迅速冷却，只限加热一次，并防止污染。

2015版无菌检查法

9
2015版无菌检查法
培养基接种直观区别
2010版
2015版
硫乙醇酸 9支金黄色葡萄球硫乙醇酸 7支
盐流体培
菌、铜绿假单盐流体培
养基
胞菌、枯草芽养基
孢杆菌、生孢
梭菌
改良马丁 5支白色念珠菌、胰酪大豆 7支
培养基
黑曲霉
胨液体培
养基
金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、生孢梭菌
枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉
无菌性检查每批培养基随机取不少于 5 支（瓶），置各培养基规定的温度培养 14天，应无菌生长。
6
2015版无菌检查法
培养基的适用性检查
灵敏度检查
菌液制备接种金黄色葡萄球菌、铜
7
2015版无菌检查法
培养基适用性检查直观区别
2010版 2015版
相应菌种接种所用培养基
金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌
胰酪大豆胨液体培养基用于真菌和需氧菌的培养。
制备好的培养基应保存在 2～25℃、避光的环境，若保存于非密闭容器中，一般在 3周内使用；
若保存于密闭容器中，一般可在一年内使用。
4
2015版无菌检查法
培养基PH区别
201百度文库版
2015版
改良马丁培养基调节 pH 值使灭菌后为 6.4 ± 0.2

2020中国药典1101无菌检查法

2020版中国药典中，1101无菌检查法是用于检查药典要求无菌的药品、生物制品、医疗器械具、原料、辅料及其他品种是否无菌的一种方法。试验环境的要求：试验环境应达到无菌检查的要求，试验全过程应严格遵守无菌操作，防止微生物污染。检验室应保持清洁，定期进行消毒处理，并应进行悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的监测。培养基的制备及培养条件：配制后应采用验证合格的灭菌程序灭菌。

无菌检查法-2015版中国药典-电子版

无菌检查法-2015版中国药典

无菌检查法系用于检查药典要求无菌的药品、生物制品、医疗器具、原料、辅料、及其他品种是否无菌的一种方法。若供试品符合无菌检查法的规定,仅表明了供试品在该检验条件下未发现微生物污染。

无菌检查应在环境洁净度B 级背景下的局部A 级洁净度的单向流空气区域内或隔离系统中进行，其全过程应严格遵守无菌操作，防止微生物污染，防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检出。单向流空气区、工作台面及环境应定期按《医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》的现行国家标准进行洁净度确认。隔离系统应定期按相关的要求进行验证，其内部环境的洁净度须符合无菌检查的要求。日常检验还需对试验环境进行监控。

无菌检查人员必须具备微生物专业知识，并经过无菌技术的培训。

培养基

硫乙醇酸盐流体培养基主要用于厌氧菌的培养，也可用于需气菌培养；胰酪大豆胨液体培养基适用于真菌和需气菌的培养。培养基的制备及培养条件培养基可按以下处方制备，亦可使用按该处方生产的符合规定的脱水培养基。配制后应采用验证合格的灭菌程序灭菌。制备好的培养基应保存在2～25℃、避光的环境，若保存于非密闭容器中，一般在3周内使用；若保存于密闭容器中，一般可在一年内使用。

1. 硫乙醇酸盐流体培养基

酪胨 (胰酶水解) 15.0g 酵母浸出粉 5.0g

葡萄糖 5.0g 氯化钠 2.5g

L-胱氨酸 0.5g 新配制的 0.1% 刃天青溶液 1.0ml

硫乙醇酸钠 0.5g 琼脂 0.75g

(或硫乙醇酸) （ 0.3 ml) 纯化水 1000ml