超高效液相色谱法测定血浆华法林浓度及临床应用
高效液相色谱法测定强的松血药浓度和临床应用研究
松线性范围为１０一１０００灿ｇ／１，最低检测限为５岭／１，批内ＣＶ为２．２５％，
批间ＣＶ为３．７６％，平均回收率为９８．７％，干扰实验显示：安定、维 生素Ｃ等药物对血液强的松测定无影响。
口服强的松后测定血液中强的松浓度，经统计学分析两组平均强 的松浓度有显著性差异（Ｐ＜Ｏ．０５），ＮＳ患者组平均强的松浓度高于对照 组，男、女性别之间平均强的松浓度无显著性差异（Ｐ＞ｏ．０５）；ＮＳ患 者组随着血液中强的松浓度的升高，血清Ｃｒ浓度下降；２ｈ后强的松 浓度开始下降，而ｃｒ浓度上升，提示血清ｃｒ浓度的变化随着强的松 浓度的变化而变化。
ｏｆＮＳ ａｎｄ ＴＤＭ ｒｅｓｅａｒｃｈ
硕士学位论文
英文摘要
ＫＥＹ ＷＯＲＤＳ：ＨＰＬＣ，ＮＳ，ｂｌｏｏｄ ｄｒｕｇ ｌｅｖｅｌ，ｃｕｒａｔｉｖｅ
ｅｆ琵ｃｔ
！Ｉｌ
缩略词
ＮＳ
ＴＤＭ
ＨＰＬＣ ＰＮ ＡＣＥ ＣＶ
ＭＳ
Ｃｒ ＧＦＲ ＧＣｓ
ｎｅｐｈｒｉｔｉｃ ｓｙｎｄｒｏｍｅ ｔｈｅｒａｐｅ／ｘｔｉｃ ｄｒｕｇ ｍｏｎｉｔｏｒ
ｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔｓ ｏｆ ｖａｒｉａｔｉｏｎ（ＣＶｌ ｗａｓ ２．２５％ａｎｄ ３．７６％ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ，ｔｈｅ
ａｖｅｒａｇｅ ｒｅｃｏｖｅｒｙ ｗａｓ ９８．７％．Ｔｈｅ ａｖｅｒａｇｅ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｒｅｄｎｉｓｏｎｅ ｉｎ １ ０ ＮＳ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗａｓ ｈｉｇｈｅｒ ｔｈａｎ ｔｈｅ ｃｏｎｔｒｏｌｓ ａｎｄ ｔｈｅｒｅ Ｗａｓ ｄｉｓｔｉｎｃｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ ｂｅｔｗｅｅｎ ｔｈｅｍ．Ｔｈｅｒｅ ｗａｓ ｎｏｔ ｄｉｓｔｉｎｃｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ ｂｅｔｗｅｅｎ ｍａｌｅ
RP_HPLC法测定人血清中华法林浓度的方法学研究
r药学研究rRP-HPLC法测定人血清中华法林浓度的方法学研究陈纭1,黄晓晖1,唐海沁2,杨维维2,朱燕舞1,金涌1,李俊1(1.安徽医科大学药学院,安徽合肥230032;2.安徽医科大学第一附属医院心内科,安徽合肥230022)摘要:目的建立一种简易的方法测定成人血清中华法林的含量,便于临床药物浓度监测。
方法采用H ype rs ilOD S C18色谱柱(150mm@4.6mm,5L m),流动相为(0.01m o l#L-1)磷酸二氢钾溶液-甲醇-磷酸(38B62B0.009),流速为1.0m l#m in-1,检测波长为205n m。
结果华法林保留时间为8.7m i n,标准曲线的线性范围为0.0625~4.0m g#L-1,r=0.9993,华法林的高、中、低日间、日内变异系数均在10%以下,回收率>90%。
结论该法简便、快速重现性好,灵敏度高,可用于人血清中华法林药物含量检测及应用于临床治疗药物监测。
关键词:华法林;反相高效液相色谱法;血清浓度Deter m inati on of warfari n i n hu man blood seru m by RP-HPLCC H E N Yun,HUANG X iao-hu,i TANG H a-i qin,YANG W e-i w e,i Z HU Yan-w u,JIN Yong,LI Jun(Co llege of Phar m ac y,A nhuiM edical Universit y,H efei230032)Abstrac t:A i m T o establis h an m ethod for de ter m i nati on o fw arfa ri n i n hu m an.s blood se ru m.M ethods RP-H PLC m ethod w as used,w it h C18co l u m n at the standa rd of150mm@4.6mm,0.01m o l#L-1KH2PO4m ethano-l H3PO4so l ution(38B62B0.009)as m ob ilephase.T he fl ow rate was1.0m l#m i n-1.UV detecti on w as de ter m i ned at205n m.R esu lts The reserve ti m e o fW arfa ri n i n hu m an b l ood se ru m was8.7m i n.T he linear ity rang e o f standard curv e was bet ween0.0625and4.0mg#L-1.The av erage recovery w as90%. R SD o f three consi stencies i nc l ud i ng the high,m i ddle and lo w var i ed i n less t han10%.Conc l u sion T he m ethod i s si m p le,fast and ac-curate fo r t he analysis o fw arfar i n i n hu m an b l ood serum.K ey word s:w arfar i n;RP-H PLC;se ru m concentrati on华法林是临床使用最广泛的双香豆素类抗凝药,可用于房颤等疾病的预防和治疗,心脏瓣膜置换的病人更需终身服用华法林。
高效液相色谱荧光检测法测定人血浆中草酸依地普仑的浓度及应用
２４ 回收率及精密 度试验 ： ． 取高 、 、 ３ 中 低 种浓 度 （５ １ 、． ２ 、０ １ ５ ｇＬ ， ，） 制作 提取前 和提取后的两组样品 ， 经色谱分析 ， 以峰面 积 比较 。 的提取 回收率均大于 ９ ％。按 “ ．” 得到 ０ ２３ 项下方法分
种浓度 （５、０ ２５ ｇ ） ２ ２ １ 、． ， 置一 ０℃冻存 ， Ｌ 备用 ， 即为质 控样 此 品。 每天检表 ２稳定性考察测血样品前须按照“ ．” ２３ 项方法制
避光保存 。 临用 时用 乙腈 ： （０ ０Ｖ Ｖ 稀释成所需浓度 的草 水 ５ ： ，／ ） ５ 酸依地普仑对照 品溶液 。盐 酸物等效性实验研究 。
１ 材 料
２ 样品处理 ： ｍ 含药血浆加至带塞 １ ． ２ １ ｌ ０ｍＬ玻璃锥形离心
管中， 加入 ３ ｌ ６ ｇ ０ ｌ ， Ｌ的盐 酸普 萘洛尔快速震荡 １ 。加 ０ｓ 入 ０３ｍＬ０１ ｌ ． ． ｍｏ Ｌ的氢氧化钠水溶 液震荡 ３ｓ加 ３ｍ 正 己 ／ ， ｌ
醇 溶液 ５ Ｌ ０ ，震荡 ５ｓ ，即得 ００５ １２５ ５ ７５ １ 、５ ５ 、 、 、．、 、．、０ ２ 、０
ｇＬ的草 酸依地 普仑血 浆样 品 ，按血样 处理 方法处理 。经 ，
ＨＰ Ｃ Ｆ Ｄ分析 。 Ｌ—Ｌ 测得 Ｅ Ｐ峰面 积与 内标 峰面 积之 比（ ） Ｔ Ｆ 作
１１ 仪 器 ： ｇｌｎｌ０ Ｌ 仪 配 荧 光 检 测 器 Ｇ１ ２Ａ， Ａ ｉ ｔ１０ ＨＰ Ｃ ｅ ３１
渣 ，０ ０ｒ ｎ离心 ２ｍ ｎ 吸取 ３ ｌ ３ ０ ｍｉ ／ ｉ， ０ 上清液进样。
２３ 标 准 曲线 的制备 ：取空 白血浆 １ｍ ，分别加 入 ０ ． ｌ ６份 、 １ 、０ ５ 、０ 、５ 、０ 、０ 、００ ｇＬ的 草 酸依 地 普 仑 甲 ０ ２ 、０ １０ １０ ２ ０ ５ ０ １０ ，
运用高效液相色谱法测定血液中4种抗癫痫药的浓度-药学论文-基础医学论文-医学论文
运用高效液相色谱法测定血液中4种抗癫痫药的浓度-药学论文-基础医学论文-医学论文——文章均为WORD文档，下载后可直接编辑使用亦可打印——PB、PHT 和CBZ 是传统的一线抗癫痫治疗药物, 由于这3 种抗癫痫药物的有效血药浓度范围较窄, 患者之间个体差异较大, 抗癫痫作用和毒性与在体内的血药浓度有很大的相关性, 需要进行血药浓度的监测和个体化给药。
LTG 是一种苯三嗪类的新型广谱抗癫痫药, 由于该药与目前常用的抗癫痫药如PHT、CBZ 等在药动学上存在相互作用, 导致个体间血药浓度差异较大, 临床使用时也需要进行血药浓度的监测和个体化给药。
高效液相色谱法同时测定血清中LTG、PB、PHT 和CBZ 浓度国内已有报道。
文献［1-3］中使用的流动相依次为甲醇-乙腈-0.1%三氟乙酸水溶液(20∶13.5∶66.5)、乙腈-磷酸盐缓冲液(30∶70)、甲醇-磷酸盐缓冲液(56∶44, V/V,pH5.5), 所用流动相多含有无机盐或酸, 在实际临床应用中操作繁琐, 不利于日常工作的开展。
本实验室采用甲醇-水(55∶45) 为流动相, 建立了更为简单、方便的高效液相色谱法,同时测定上述 4 种药物的血药浓度, 适用于医疗机构开展常见抗癫痫药物的血药浓度监测。
1仪器与试药1. 1仪器戴安P680 高效液相色谱仪, AUW120D 电子天平( 日本岛津), WH-866 旋涡混合器, TGL-16A(B) 高速离心机。
1. 2试药LTG 对照品( 中国食品药品检定研究院, 批号：100775-200401) ；PB( 中国食品药品检定研究院, 批号：1222-9602) ；PHT( 中国食品药品检定研究院, 批号：100210-201002) ；CBZ( 中国食品药品检定研究院, 批号：100142-201105) ；甲醇为色谱纯；水为重蒸水。
1. 3统计学方法采用DAS2.0 药物代谢动力学软件对数据进行回归分析。
RP-HPLC法测定人血清中华法林浓度的方法学研究
低 日间、 日内变异系数均在 １ ％以下 ， ０ 回收率 ＞ ０ ９ ％。结论
含量检测及应用于临床治疗药物监测 。
该法简便 、 速重现性好 ， 快 灵敏度 高 ， 可用于人血 清中华法林药 物
关键词 ： 华法林 ； 反相高效液相色谱法 ； 血清浓度
Ｄｅｅ ｍ ｉ ａ ｉ ｎ ０ ｒａ ｉ ｎ ｈ ｍ ａ ｏ ｄ ｓ ｒ ｍ ｙ ｌｐ— ｔ ｒ ｎ ｔ ｆｗａ ｆ ｒｎ ｉ ｕ ｏ ｎ ｂｌｏ ｅ ｕ ｂ ｉ ＨＰＬＣ
ｗｔ ｌｃｌｍ ｔｈ ａｄｒ ｆ ５ ｍ × ． ｍ，． １ｍ ｌ・ ～ Ｋ ２ Ｏ ｅ ａｏ— ３ Ｏ ｏ ｔ ｎ （ ８ ６ ： ． ０ ）ａ ｏｉ ｉ Ｃ８ ｏ ｎａ ｔｅｓ ｎ ａ ｏ １０ ｍ ｈ ｕ ｔ ｄ ４ ６ｍ ０ ０ ｏ Ｌ Ｈ Ｐ ４ｍ ｔ ｎｌ Ｐ ４ｓｌ ｉ ３ ： ２ ０ ０ ９ ｓｍ ｂ ｅ ｈ Ｈ ｕｏ ｌ
Ａｂ ｔ ａ ｔ Ａｉ Ｔ ｓａ ｌ ｈ ａ ｔ ｏ ｏ ｅｅ ｍｉ ａｉｎ ｏ ａ ｆｒｎ ｉ ｕ ｎ’ ｌｏ ｅ ｕ Ｍ ｅ ｈ ｄ Ｒ — Ｌ ｔ ｏ ａ ｓ ｄ， ｓｒ ｃ ： ｌ ｎ ｏ ｅ ｔｂ ｉ ｎ ｍｅｈ ｄ ｆ ｒ ｔｒ ｎ ｔ ｆｗ ｒａｉ ｈ ｍａ Ｓ ｂ ｏ ｄ ｓ ｒ ｍ． ｔ ｏ ｓ ｓ ｄ ｏ ｎ Ｐ ＨＰ Ｃ ｍｅｈ ｄ ｗ ｓ ｕ ｅ
ｃ ｒ ｔ ｒ ｈ ｎ ｌ ｓ ｆ ｒａ ｎ ｉ ｕ ｎ ｂ ｏ ｄ ｓ ｒ ｍ． ｕ ａｅｆ ｅ ａ ａｙ ｉ ｏ ｆ ｒ ｎ ｈ ｍａ ｌｏ ｅ ｕ ｏ ｔ ｓ ｗａ ｉ
Ｋｅ ｒ ｓ ｗａ ａｉ ； ・ Ｌ ｓ ｒ ｍ ｏ ｃ ｎ ｒｔ ｎ ｙ ｗｏ ｄ ： ｒ ｒ ｆ ｎ ＲＰ ＨＰ Ｃ； ｅ ｕ ｃ ｎ ｅ ｔａｉ ｏ
（５ １０ｍｍ× ． ｍ， Ｉ ， ６ｍ ５ ｘ 流动相为 （ ． １ｍ ｌ Ｌ ） ｍ） ００ ｏ ・ 磷酸二氢钾溶液． 甲醇一 磷酸 （ ８６ ：．０ ） 流速为 １０ｍ ｍ ｎ 检 测 ３ ： ２０ ０９ ， ． ｌ・ ｉ ～， 波长 为 ２５ｎ ０ ｍ。结果 华法林保 留时间为 ８ ７ｍ ｎ 标准曲线 的线性 范围为 ０ ０２ ４ ０ｍ Ｌ ｒ ０９ ９ ， ． ｉ， ．６ ５～ ． ｇ・ ～， ＝ ．９ ３ 华法林的高 、 中、
高效液相色谱法同时检测血浆中阿莫西林和克拉维酸的血药浓度
高效液相色谱法同时检测血浆中阿莫西林和克拉维酸的血药浓度林晶【摘要】目的建立同时测定血浆中阿莫西林和克拉维酸质量浓度的高效液相色谱法.方法分析柱为 Phenomenexluna C18柱(250mm×4.6mm,5μm),柱温为室温,流动相为磷酸盐缓冲溶液(pH=3.0)-乙腈(95∶5),流速为1.2mL/min,紫外检测波长为230 nm.结果克拉维酸和阿莫西林的保留时间分别为5 min和9 min左右,质量浓度线性范围分别为0.13～8.60 μg/mL(r=0.999 4)和0.21～13.20μg/mL(r=0.999 8),日内和日间精密度的RSD均小于15.0%(n=5).结论所建立的方法简便、准确,适用于阿莫西林和克拉维酸血药浓度测定.%Objective To establish a HPLC method for the simultaneous determination of amoxicillin and clavulanate in human plasma. Methods The chromatographic separation was carried out on Phenomenex Luna Cm column(250 mm x 4.6 mm, 5 |xm) with the mobile phase consisting of acetonitrile NatbPCK buffer(pH =3. 0) (95 :5),the flow rate was 1. 2 mL/min. The detecting wavelength was at 230 nm. Results Clavulanate and amoxicillin were eluted for about 5 min and 9 min. Cavulanate and amoxicillin showed the good linear correlation in the range of 0. 13 - 8. 60 |xg/mL (r=0.999 4) and 0. 21 - 13. 20 g/mL( r =0. 999 8) respectively. The intra-day RSD and inter -day RSD were both less than 15. 0% (n = 5). Conclusion The method is simple, accurate and suitable for the determination of plasma drug concentration of amoxicillin and clavulanate.【期刊名称】《中国药业》【年(卷),期】2011(020)022【总页数】2页(P30-31)【关键词】阿莫西林;克拉维酸;血药浓度;高效液相色谱法【作者】林晶【作者单位】北京市朝阳区妇儿医院,北京,100021【正文语种】中文【中图分类】R969.1;R978.1+1阿莫西林克拉维酸钾是一种可供口服、肌肉注射、静脉注射的β－内酰胺类和β－内酰胺酶抑制剂抗生素，主要用于敏感菌引起的呼吸系统、泌尿系统、皮肤及软组织感染，现广泛应用并作为抗菌感染的一线治疗药物。
高效液相色谱法测定阿司匹林和阿华法林的方法学研究
RP-HPLC法测定人血清中阿司匹林和华法林的方法学研究陈纭1,黄晓晖1,唐海沁2,王夏芹2,金涌1,李俊1(1.安徽医科大学药学院,安徽合肥 230032;2.安徽医科大学第一附属医院心内科,安徽合肥 230022)摘要：目的建立一种简易的方法测定成人血清中阿司匹林和华法林的含量,便于临床药物浓度监测。
方法采用Hypersil ODS C18色谱柱(150mm×4.6mm，5μm)，流动相为(0. 01 mol·L - 1 )磷酸二氢钾溶液-甲醇(40:60)，流速为1. 0m l·m in - 1，检测波长为279nm。
结果阿司匹林和华法林的线性关系良好，保留时间分别为3.0min，6.3min。
标准曲线的线性范为0.25～16 mg·L- 1，0.1～8 mg·L- 1，r =0.99942和r＝0.99954，阿司匹林和华法林的高、中、低日间、日内变异系数均在10%以下，回收率> 90%。
结论本法简便、快速重现性好，灵敏度高，可用于人血清中阿司匹林和华法林药物的含量检测及应用于临床治疗药物监测。
关键词：阿司匹林；华法林；反相高效液相色谱法;血清浓度Determination of aspirin and warfarin in human blood serum by RP-HPLC CHEN Yun,HUANGXiao-hui,TANGHai-qin,W ANG Xia-qin,JIN Y ong,LI Jun(College of Phamacy,Anhui Medical University,Hefei 230032)Abstract：Aim To establish an method for determination of aspirin and warfarin. Methods RP-HPLC method was used with C18 column at the standard of 150 mm×4.6 mm ，0.01 mol·L – 1 KH2PO4：methanol solution ( 40：60) as mobile phase. The flow rate was 1.0 m l·min- 1. UV detection was determined at 279nm.Results The reserve time of warfarin and aspirin was 3.0 min and 6.3 min. The linearity range of standard curve was between 0.25 and 16 mg·L -1，0.1 and 8 mg·L -1.The average recovery was 90%.RSD of three consistencies including the high，middle and low varied in less than 10%.Conclusion The method is simple，fast andaccurate for the analysis of warfarin and aspirin in human blood serum.Key words：Aspirin；Warfarin；RP-HPLC阿司匹林（乙酰水杨酸）抗血栓的机理是使血小板的环氧合酶，即前列腺素合成酶乙酰化，抑制环内过氧化物的生成，减少血栓素A2(TXA2)的生成，从而抑制血小板的聚集，减少血栓的形成。
高效液相色谱法测定人血浆甲氨蝶呤的浓度及临床应用
八床
血 应 目前测定 Ｍ Ｘ血药浓度的方法有荧光偏振免疫分析法［、 Ｔ
高效液相色谱法 （ Ｌ ）－、 Ｃ ＭＳ ］ 。荧 光偏振免疫分 ＨＰ Ｃ浆 ］ 用 Ｃ ［ Ｌ— ｓ ４ ７ 法等 析 法成 本昂贵 ， 且专一性差 ＿ 以推广 ， 而且 由于代谢产物 的 王Ｅ难 ｊ， Ｉ＿
ＨＬ Ｐ Ｃ法测定 ＭＴ Ｘ血药浓度的方法并用于 Ａ Ｌ患者 的监测 ， Ｌ
高， 操作复杂。而 Ｈ Ｌ蝶 ＰＣ 具有专属性高 、 、 、 灵敏 准确 适用性 强
１ ． 提取 回收率试验和精密度试 验 ： ．６ ２ 配制高 、 低不 同浓 中、 度 （Ｏ 、０ ０ ５ 咖 １的 Ｍ Ｘ对照溶 液各 ３份 ， １Ｏ １ 、 ． ０ ） Ｔ 得峰 面积 ， 配 制高 、 低不 同浓 度 （０ 、０ ００ ｇｍ ） Ｔ 中、 １０ １ 、．５Ｉ， １Ｍ Ｘ标准 血浆 ￣／ 各 ３份 ， “．．” 按 １ ２ 项处理后进样 ， Ｍ Ｘ的峰面积 。 组峰 面 ２ 得 Ｔ ２ 积进行 比较 ， 得提取 回收率 ， 见表 １ 。分别取高 、 低 ３ 中、 种浓
［］ 王 奇志 ， ６ 朱光 辉 ， 王增寿 ， 高效液相 色谱法测定 血浆 和脑脊 等． 液 中 甲氨蝶呤 的浓度 ．中国 医学生 物技 术应用 杂 志 ，０３３ ２０ ，
（ ）５ ． ２ ：３
测定患者给药后血 中 ＭＴ Ｘ的血药浓度 ， 结果发现对于不 同的患者 ， Ｘ血药浓度个体化差异 较大 ，不 良反应 的症状 ＭＴ 各异 ， 有轻有重。 明个体对 ＭＴ 证 Ｘ的代谢确实存在极大差异 ， 提示 临床 医生要根据患者各时相的血药浓度 ， 出 ＭＴ 找 Ｘ的合 理用量及 Ｃ Ｆ的解救 时ｆ和 剂量 。 司 实行个体 化给药 ， 才能得到
高效液相色谱法测定人血浆中氟康唑浓度及其应用
高效液相色谱法测定人血浆中氟康唑浓度及其应用目的:建立测定人血浆中氟康唑浓度的RP-HPLC法,并应用于临床药代动力学研究。
方法:采用二氯甲烷萃取,高效液相色谱法检测,以单硝酸异山梨酯为内标,Phenomenx C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,4 μm),流动相为乙腈-水-冰醋酸(25∶75∶0.2),流速为1.0 ml/min;检测波长为261 nm。
结果:血浆中内源性物质不干扰氟康唑的检测,氟康唑的线性范围为0.125～8.000 μg/ml,批内、批间精密度均小于15%,低、中、高浓度的(0.25 μg/ml、1 μg/ml和4 μg/ml)平均提取回收率分别为100.0%、98.8%、86.7%。
结论:该法操作快速、简单、准确,符合生物样品检测要求,可用于临床药代动力学研究中大批量血样的处理。
[Abstract] Objective: To establish a method for determining the concentration of fluconazol in human plasma. Methods: The Phenomenex C18 column(4.6 mm×250 mm, 4 mm) was used. The mobile phase was consisted of water, acetonitrile and glacial acetic acid (25∶75∶0.2), the flow rate was 1.0 ml/min and the detection wavelength was set at 261 nm. Results: The linear ranges of fluconazol was 0.125-8.000 μg/m l, The intra and inter day precision over the entire concentration range were less than 15%. The average recoveries were 100.0%, 98.8% and 86.7% respectively according to the low, middle, high concentrations(0.25 μg/ml, 1 μg/ml, 4 μg/ml). Conclusion: The m ethod is fast, reliable, accurate and can be used for mass hematoid treatment in clinical pharmacokinetics.[Key words] Fluconazol; High performance liquid chromatography (HPLC); Pharmacokinetics氟康唑(fluconazol)为三唑类广谱抗真菌药,通过高度选择性抑制真菌羊毛甾醇14α-脱甲基酶及真菌细胞内细胞色素P450的羟化反应,从而抑制真菌细胞膜上麦角固醇的生物合成,破坏真菌细胞壁的完整性,抑制真菌的生长繁殖。
超高效液相法测定卡马西平和苯妥英钠血药浓度及其临床应用
超高效液相法测定卡马西平和苯妥英钠血药浓度及其临床应用背景介绍卡马西平和苯妥英钠是临床上常用的药物，用于治疗各种疾病的药物。
但是，这两种药物在体内的浓度与剂量之间的关系并不是线性的，因此需要对其在体内的浓度进行精确的监测，以保证治疗的效果并避免药物过量或过少的情况发生。
超高效液相法（UPLC）是近年来发展起来的一种分析技术，由于其分离能力高、分析速度快、检测灵敏度高等特点，被广泛应用于药物分析、环境监测、生命科学等领域。
因此，将UPLC技术用于卡马西平和苯妥英钠的浓度监测具有很大的应用前景。
测定方法方法概述本实验采用UPLC法，测定卡马西平和苯妥英钠在血液中的浓度。
具体分析条件如下：•柱子类型：XBridge BEH C18柱（1.7 µm，2.1 × 50 mm）•流动相：乙腈-水（43:57）•流速：0.5 mL/min•检测波长：210 nm•注射体积：5 μL样品处理取被测血液样品0.5 mL，加入1.5 mL甲醇中，振荡均匀后离心10分钟，取上清液100 μL，用甲醇补足至1 mL，轻轻振摇后通过0.22 µm过滤器进行过滤，待用。
标准曲线制备准备不同浓度的卡马西平和苯妥英钠标准品，用同样的方法进行样品处理。
将处理后的标准品按不同浓度依次注入UPLC进行分析，绘制卡马西平和苯妥英钠的峰面积与浓度之间的标准曲线。
数据处理根据所绘制的标准曲线，对样品中卡马西平和苯妥英钠的浓度进行计算。
实验结果临床样品检测结果如下：样品编号卡马西平浓度 (µg/L) 苯妥英钠浓度 (µg/L)S001 140.23 105.64S002 89.73 68.51S003 120.64 83.92S004 99.34 74.34S005 115.81 93.51实验分析从实验结果可以看出，采用UPLC法对卡马西平和苯妥英钠进行浓度测定是可行的，可以提供较准确的浓度数值。
药物浓度监测在临床分析中的应用
药物浓度监测在临床分析中的应用随着医学科技的不断发展，药物浓度监测在临床分析中扮演着越来越重要的角色。
它能够帮助医生了解药物在患者体内的水平，从而进行个体化的治疗方案设计。
本文将介绍药物浓度监测的原理、方法以及其在临床分析中的具体应用。
1. 药物浓度监测的原理和方法药物浓度监测的基本原理是通过检测体内药物的浓度来了解其在体内的代谢和排泄情况。
一般来说，药物浓度监测分为血液浓度监测和组织浓度监测两种方式。
血液浓度监测：常用的血液药物浓度监测方法包括荧光免疫测定法、高效液相色谱法和质谱法等。
这些方法能够准确地测量药物在血液中的浓度，并且具有高灵敏度和高选择性的优势。
组织浓度监测：组织浓度监测一般通过组织取样和离体分析的方式来进行。
常用的方法包括活体组织取样、荧光成像和电化学检测等。
这些方法可以提供药物在特定组织中的浓度信息，有助于评估药物的疗效和副作用。
2. 药物浓度监测在临床分析中的应用药物浓度监测在临床分析中有着广泛的应用。
下面将详细介绍其在不同领域的具体应用。
2.1 肿瘤治疗中的应用药物浓度监测可以帮助医生了解抗肿瘤药物在患者体内的水平，从而进行个体化治疗。
通过监测药物浓度，医生可以调整给药剂量，避免过度治疗或剂量不足的情况。
此外，药物浓度监测还有助于评估治疗的疗效和副作用，提高治疗效果和减少毒副作用。
2.2 抗生素治疗中的应用抗生素是常见的临床药物，在临床上使用广泛。
然而，抗生素的疗效往往与其在体内的浓度密切相关。
药物浓度监测可以帮助医生确定抗生素的最佳给药剂量和给药频次，从而提高疗效并减少抗生素耐药性的风险。
2.3 心脏病治疗中的应用药物浓度监测在心脏病治疗中也发挥着关键作用。
例如，抗凝药物华法林的治疗需要对患者的凝血酶时间进行监测，以避免出血或血栓的风险。
另外，β受体阻滞剂和钙通道阻滞剂等药物的浓度监测，能够帮助医生调整给药量，以达到最佳的疗效。
3. 药物浓度监测的局限性和未来发展虽然药物浓度监测在临床分析中有着广泛应用，但仍然存在一些局限性。
高效液相色谱法测定人血浆中华法林浓度
高效液相色谱法测定人血浆中华法林浓度
李毅
【期刊名称】《中国中医药咨讯》
【年(卷),期】2010(002)001
【摘要】目的建立利用高效液相色谱法测定人血浆中华法林浓度的方法.方法采用二氯甲烷-正己烷(1∶1)对血浆样品进行萃取,高效液相色谱外标法进行含量测定.色谱柱为Diamonsil C18(250mm×4.6mm,5μm),流动相为乙腈-水-冰醋酸(65∶35∶1),流速1ml/min,紫外检测器检测波长308nm,柱温30℃.结果华法林的保留时间为8.2min,定量线性范围0.05-5.0μg/ml.血浆中华法林萃取回收率为85.3%89.8%(n=5),方法回收率101.3%103.6%(n=5),日内及日间RSD均小于8%(n=5).结论本方法快速准确,可用于华法林血药浓度监测.
【总页数】1页(P122)
【作者】李毅
【作者单位】湖南省安乡县人民医院,湖南,安乡,415600
【正文语种】中文
【相关文献】
1.高效液相色谱法测定人血浆中奥氮平的浓度 [J], 周本裕; 刘文清; 徐云庆; 蒋春香
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高效液相色谱法测定人体血浆中茶碱、多索茶碱的浓度
实验操作
精密度和准确度试验
分别精密制备含茶碱和多索茶碱的低、中、高三个 浓度的质控血样，按上述血浆样品处理方法处理后 进样。1d内测定5次，计算得各浓度血样茶碱和多索 茶碱的日内RSD均小于2%。同法制备上述三个浓度 的血样，连续测定3天，求得两者的日间RSD均小于 3%。准确度试验表明计算值与理论值的RE%均小于 5%。
离心10 min，吸取上清液至自动进样器样品瓶
中，进样20L，进行HPLC分析。
实验操作
专属性试验
取不同个体的空白血浆按上述血浆样品处理方 法处理后，进样分析，结果表明血浆内源性物
质对样品测定无干扰。
实验操作
空白血浆和加样血浆的色谱图
实验操作
线性试验
分别精密加入系列的茶碱和多索茶碱对照品贮备液 于1.5 ml离心管，以氮气流吹干后加入空白血浆200 μL，旋涡混匀，配成含茶碱和多索茶碱的浓度分别 为2.0、5.0、10.0、25.0、40.0、50.0μg·mL-1的标准 含药血浆，按上述血浆样品处理方法处理，制备一 条标准曲线，结果表明，血浆中两者在2.0~ 50.0 μg·mL-1范围内线性关系良好。
实验操作ters-C18柱(4.6mm×150mm，5μm) 检测波长：274 nm 流动相：甲醇:水=30:70 流速：1.0 ml/min 柱温：40 ℃
进样量：20 μl
实验操作
血浆样品处理
取血浆样品200 L于1.5 mL离心管中，加入 600 L甲醇，旋涡2 min，于12000 r· min-1高速
研究背景
高效液相色谱(HPLC)以液体为流动相，采用高 压输液系统，将具有不同极性流动相泵入装有 固定相的色谱柱，在柱内各成分被分离后，进
高效液相色谱法在血药浓度测定中的应用进展（论文资料）
·综述·高效液相色谱法在血药浓度测定中的应用进展姜自彬陈贯虹王贞丽于连生（济南军区药品检验所济南２５００２２）高效液相色谱法（ＨＰＬＣ）是６０年代末发展起来的一项新技术，具有分离效能高、重现性好、分析速度快、适用面广等优点，可广泛应用于药物的分析研究。
由于其特有的分离、分析功能，唧ＬＣ在检测血液药物浓度的应用日益广泛，现将国内近５年来大概应用情况作一综述。
１血样处理由于血液成分复杂，除被测药物外，还含有血浆蛋白等多种内源性物质，直接进样不仅干扰测定，影响色谱的分离和重现性，还会造成管路及填料的堵塞，降低色谱柱的使用寿命，所以必须对血样进行预处理。
常用的预处理方法有蛋白质沉淀法、液一液萃取法、液一固萃取法和柱切换法。
无论采用哪种方法，都要注意尽可能避免待测组分的损失，一般预处理过程的回收率不能低于９０％。
１．１蛋白质沉淀法使蛋白质产生沉淀的方法很多，沉淀血样中的蛋白质，一般是往样品中加入一定量的与水互溶的有机溶剂，使蛋白质表面失去水化层，而相互聚集产生沉淀析出，再经离心除去蛋白、萃取等步骤，最后进柱分析。
常用的蛋白质沉淀溶剂有三氯甲烷、甲醇、乙腈、高氯酸等。
１．２液一液萃取法液，液萃取法是根据分配定律的原理，往血浆或血清中加入有机提取剂进行萃取，萃取后，再将含有待测样品的提取溶剂放置在一适宜容器内，用氮气流将其吹干，最后用尽可能少的流动相溶解后进样分析。
萃取剂的选择要注意以下原则：（１）对待测组分有较大的溶解度，对杂质的溶解度较小；（２）极性强的待测物质用强极性溶剂提取，反之亦然。
最常用的提取溶剂为二氯甲烷、氯仿、己烷、叔丁基甲醚、乙醚、异丁醇、乙酸乙酯等。
１．３液一固萃取法液一固萃取，亦称固相萃取，即将待测样品置入一根常压色谱柱，然后用不同强度的溶剂洗脱，以去除杂质，纯化样品。
目前国内外都有商品预处理柱，实验室多使用自己装填的固相提取柱作预处理柱，由于样品中主要成分是水，故多采·２２６用疏水性填充剂，以便于待测组分在柱上的保留。
低密度分散相液-液微萃取联用高效液相色谱法测定人血浆中的华法林
低密度分散相液-液微萃取联用高效液相色谱法测定人血浆中的华法林摘要：采用的新一代分散液-液微萃取（DLLME）联用高效液相色谱法（HPLC）提取并测定一种广泛使用的抗凝药物-华法林在人血浆中的含量。
萃取过程是基于比水轻的萃取剂和一个特殊设计的萃取装置。
我们对一些重要参数进行了调查和优化，包括萃取溶剂种类和体积、分散剂、样品溶液的pH值，样品溶液盐浓度，萃取时间等。
优化条件为（150卩L正辛醇作为萃取液，150卩L甲醇作为分散剂,样品pH值为2.3,提取时间2分钟，，不添加盐），检测限（LOD）为5ng • mL-1和提取回收率91.0%; 校准曲线的线性范围为15 - 3000 mL-1，相关系数的（R2）为0.998。
基于五次提取及测定的重复性和再现性分别为 2.8%和6.5%。
该方法已成功应用在服用华法林患者血浆药物浓度的测定，，并具有灵敏、高效和方便的特点。
关键词：低密度溶剂；分散相液-液微萃取；法华林；HPLC ;样品前处理；血浆样品分析1.简介华法林是一种广泛使用于口服抗凝药物预防和治疗静脉、动脉血栓栓塞疾病的香豆素衍生物。
它能引起致命性出血，可作为杀鼠剂应用。
华法林通过减小维生素K的依赖性凝血因子的合成发挥抗凝血作用。
华法林的治疗窗很窄，超过了治疗窗会导致不必要的出血。
华法林的血浆浓度不但可以区分是否具有真正的抗凝血性能并且为临床决策、有效治疗严重中毒提供更加完善的参考价值。
因此,各种方法如高效液相色谱法（HPLC）和紫外检测器的液相色谱-串联质谱法（LC-MS / MS ）胶束电动色谱-电喷雾电离质谱（ESI-MS法）和毛细管区带电泳（CZE）都已用于测定华法林在生物样品的浓度。
由于低浓度的华法林基质较为复杂，不能直接使用以上方法。
这些方法一般使用液液萃取（LLE）或固相萃取（SPE）技术进行样品制备。
液液萃取有高重复性和高采样能力的优点，但它过程繁琐、耗时，易产生乳剂，需要大量有毒而昂贵的有机溶剂对其进行提取。
高效液相色谱法测定人血浆中利奈唑胺浓度及临床监测
高效液相色谱法测定人血浆中利奈唑胺浓度及临床监测张伦;方会慧;李兰;陈浩;黄晓晖【摘要】目的建立快速测定人血浆利奈唑胺浓度的高效液相色谱法,并用于重症感染者的治疗药物浓度监测.方法色谱柱为ZORBAX-SB-C18 (4.6 mm×150 mm,5 μm),流动相为乙腈-水(22∶78),流速为1.1 mL·min-1,柱温为25 ℃,检测波长为254 nm,内标为氯霉素.用该方法检测6例重症感染者静脉滴注600 mg利奈唑胺注射液后的血浆药物浓度,测得结果与最低抑菌浓度(MIC)比较,为临床应用利奈唑胺提供指导.结果利奈唑胺在0.25~20 mg·L-1内线性良好(r=0.999 2),最低定量限为250 μg·L-1.所测6例危重患者中,有2例患者出现利奈唑胺谷浓度小于最低抑菌浓度(2 mg·L-1)的情况.结论该方法准确可靠,操作简便,灵敏度高,可用于临床利奈唑胺血药浓度的检测,并能为制定个性化给药方案提供参考.%Objective To establish a rapid method for the determination of linezolid in human plasma by high performance liquid chromatography (HPLC) for the therapeutic drug monitoring in patients with severe infection.Methods Internal standard method (chloramphenicol) was adopted.Separation was performed on ZORBAX SB-C18 (4.6 mm×150mm,5 μm) column.The mobile phase consisted of acetonitrile-water (22∶78) with a flow rate of 1.1 mL·min-1.The column temperature was 25 ℃ and the detection wavelength was 254 nm.The plasma concentrations were determined of 6 patients with severe infection who were under the treatment of intravenous infusion of 600 mg linezolid.The results were compared with minimum inhibitory concentration (MIC),which provided guidance for the clinical application of linezolid.Results The calibration curve was in goodline ar relationship (r=0.999 2) in the range of 0.25 to 20 mg·L-1,and the lowest limit of quantification was 250 μg·L-1.Two of the six patients with severe infections had a linezolid concentration below the minimum inhibitory concentration (2 mg·L-1).Conclusions The method is accurate,reliable,simple and sensitive.It can be used for the determination of plasma concentration of linezolid,providing a reference for the formulation of personalized dosing regimen.【期刊名称】《安徽医药》【年(卷),期】2017(021)009【总页数】4页(P1601-1604)【关键词】利奈唑胺;高效液相色谱法;血药浓度;重症感染者【作者】张伦;方会慧;李兰;陈浩;黄晓晖【作者单位】安徽医科大学药学院,安徽合肥 230032;安徽医科大学第四附属医院药剂科,安徽合肥 230022;安徽医科大学药学院,安徽合肥 230032;安徽医科大学药学院,安徽合肥 230032;安徽医科大学药学院,安徽合肥 230032;安徽医科大学药学院,安徽合肥 230032【正文语种】中文利奈唑胺是第一个应用于临床的唑烷酮类全合成抗菌药，该药通过与细菌50s亚基上核糖体RNA 23s位点结合，阻止形成70s始动复合物，从而抑制细菌蛋白质的合成[1]。
高效液相色谱法测定华法令血药浓度
高效液相色谱法测定华法令血药浓度
郝润喜;贺娟
【期刊名称】《山西医科大学学报》
【年(卷),期】1997(028)003
【摘要】以甲醛－水－冰醋酸（７５０：２５０：０．５）为流动相，ＵＶ检测、在反相Ｃ１８柱上建立了人血中华法令浓度的ＨＰＬＣ测定方法，快速准确，最低检出浓度０．２ｍｇ／Ｌ，量大Ｐｓ≤６．３。
【总页数】2页(P179-180)
【作者】郝润喜;贺娟
【作者单位】山西医科大学中心实验室;山西省心血管研究所检验科
【正文语种】中文
【中图分类】R973.2
【相关文献】
1.超高效液相色谱法测定儿童布洛芬血药浓度 [J], 张丹;秦伟;刘慧芳;王晓雪;陈文倩;张相林
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者伏立康唑血药浓度监测中的应用 [J], 葛欣;刘妍妍;刘平
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高效液相色谱法测定人血浆中奋乃静的浓度
高效液相色谱法测定人血浆中奋乃静的浓度摘要】目的建立测定人血浆中奋乃静浓度的反相高效液相色谱法。
方法以钻石C18反相柱(150mm×4.6mm, 5µm)为色谱柱，流动相为0.03mol•L-1醋酸铵-甲醇（23:77）；流速：1.0 ml•min-1；柱温：40°C; 检测波长: 254nm。
以乙酸乙酯与二氯甲烷(80:20)为提取剂。
结果奋乃静的高、中、低（1000.0, 500.0，10.0µg.L-1）3种浓度平均回收率分别为104.28%, 97.60%，98.40%，日内、日间差RSD均低于7%（n=5）; 分析方法的检测限为5.0µg•L-1；线性范围为10.0-1000.0µg•L-1。
回归方程为:C=39.42F+2.56，r=0.9995（n=10）。
结论该方法灵敏、准确、简单、快速，可用于临床血药浓度监测和药动学研究。
【关键词】奋乃静血药浓度反相高效液相色谱法【中图分类号】R927.2 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2013）25-0038-02Determination of the concentration of perphenazine in plasma by RP-HPLC with UV detectionCHEN Qing-xia Wang li-xia LIU Wei-zhong (Department of pharmic ,The Second Affiliated Hospital, Sun Yat-sen University, Guangzhou510120,China.)【ABSTRACT】 Objective To establish a method for determining the plasma concentration of perphenazine by RP-HPLC Methods Blood plasma samples containing the drug were extracted with hexane for the removal of lipids and other interfering substances and thereafter extracted with ethyl acetate. The extract was then analyzedin a reverse phase HPLC system ( C18 column, 150mm×4.6mm, 5µm); mobile phase consisted of 0.03mol•L-1NH4AC-methanol (23:77); The detection wavelength was at 254nm. Results The average recoveries of perphenazine in high, mediun and low concentrations(1000.0, 500.0, 10µg•L-1) were 104.28%, 97.60% and 98.40%, respectively. The within-day and between-day precision of variation was less than 6%. The calibration curves of perphenazine had good linearity, r=0.9995（n=10）, over the range of 10.0-1000.0µg•L-1 .The regression equation was C=39.42F+2.56,r=0.9996(n=9). The minumum detectable concentration of perphenazine was 5.0µg•L-1. Conclusion The method provides a sensitive, accurate precise and reliable analytical procedure for clinical monitoring of perphenazine in plasma and its pharmacokinetics studies.【KEY WORDS】 Perphenazine Plasma concentration HPLC奋乃静(perphenazine，Phz)其化学名为：4-[3-(2-氯吩噻嗪-10亚基)丙基]-1-哌嗪乙醇。
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•实验研究•超高效液相色谱法测定血浆华法林浓度及临床应用唐江涛1 陈瑶2 白杨娟1 苗强1 邹远高1【摘要】 目的 建立超高效液相色谱法(ultra performance liquid chromatography，UPLC)测定血浆华法林浓度，探讨心脏换瓣术后患者华法林血药浓度与国际标准化比率(international normalizedratio，INR)测值的关系，以寻求更安全可靠的监测指标，指导临床抗凝治疗的合理用药。
方法 利用6-甲氧基萘乙酸作为内标，建立一种超高效液相色谱法，测定血浆中的华法林浓度。
同时对79例样本的INR、华法林剂量和血浆华法林浓度进行相关性分析。
结果 华法林和内标的保留时间分别是2.2和1.1 min，血浆中华法林的平均提取回收率为96.0%，华法林浓度在15.6~4000 ng/ml具有良好的线性(R2=0.9996)，方法回收率为98.5%~99.9%，最低检测限为5.0 ng/ml。
日内和日间精密度分别低于1.34%和2.69%。
79例患者INR和华法林剂量相关性为r2=0.006(P=0.481)，INR和血浆华法林浓度为r2=0.006(P=0.497)，华法林剂量和血浆浓度相关性为r2=0.298(P=0.001)。
结论 该方法是一种简便、快速、准确、灵敏的定量测定人体血浆中华法林浓度的UPLC方法，华法林血药浓度测定对于心脏瓣膜置换手术后患者的抗凝治疗具有指导意义。
【关键词】 华法林； 国际标准化比率； 超高效液相色谱法Determination of plasma warfarin concentration by ultra-high performance liquid chromatography andclinical application Tang Jiangtao1, Chen Yao2, Bai Yangjuan1, Miao Qiang1, Zou Yuangao1. 1Departmentof Laboratory Medicine, West China Hospital of Sichuan University, Chengdu 610041, China; 2Departmentof Clinical Laboratory, Women′s and Children′s Hospital of Sichuan Province, Chengdu 610000, ChinaCorresponding author: Zou Yuangao, Email: zouyg69@【Abstract】 Objective To establish a method to determine warfarin concentration in plasmaby ultra performance liquid chromatography (UPLC), and to explore the relationship between warfarinplasma concentration and international normalized ratio (INR) in patients after cardiac valve replacement,so as to seek more safe and reliable monitoring indicators and guide rational use of anticoagulant therapy.Methods An ultra performance liquid chromatography method has been developed for measuring warfarinconcentration in plasma by using 6-methoxy naphthaleneacetic acid (6-MNA) as internal standard (IS). Atthe some time, the correlation of INR, warfarin dosage and plasma warfarin concentration in 79 samples wasanalyzed. Results The retention time of warfarin and the IS were 2.2 and 1.1 min, respectively. The averageextraction recovery of plasma warfarin was 96.0%, The concentration of warfarin was 15.6~4000 ng/ml withgood linearity (R2=0.9996). The overall accuracy of the method was 98.5%~99.9% and the lowest detectionlimit was 5.0 ng/ml. The intra-and inter-day variations were less than 1.34% and 2.69%, respectively. Thecorrelation between INR and warfarin dose was r2=0.006 (P=0.481), INR and plasma warfarin concentrationwas r2=0.006 (P=0.497), and the correlation between warfarin dose and plasma concentration was r2=0.298(P=0.001) in 79 cases of samples. Conclusions A simple, rapid, accurate and sensitive UPLC methodfor quantifying warfarin levels in human plasma was validated. The determination of warfarin bloodconcentration has guiding significance for anticoagulant therapy of patients after heart valve replacement.【Key words】 Warfarin; International normalized ratio; Ultra performance liquid chromatographyDOI：10.3877/cma.j.issn.2095-5820.2019.03.002作者单位：610041 成都，四川大学华西医院实验医学科临床免疫室1；610000 成都，四川省妇女儿童医院检验科2通信作者：邹远高，Email：zouyg69@华法林(warfarin ，WFR)作为维生素K 的抑制剂，通过抑制肝脏内凝血酶原和凝血因子的合成起到抗凝作用，主要应用于心脏瓣膜置换术的病人的抗凝治疗[1-3]。
其抗凝疗效与患者术后出血或栓塞并发症、远期生存质量及生存率密切相关[4-5]。
目前，华法林的抗凝血效果通常通过测定国际规范化比率(international normalized ratio ，INR)来评估[6-7]，尽管INR 被认为是用于监测口服抗凝治疗的金标准，但只有50%-60%的患者能够达到他们的目标范围[8-9]。
不适当或过量的抗凝可能会显著增加因血栓栓塞并发症或出血而导致的发病率和死亡率的风险[10-12]，为了更客观、更准确地调整剂量，血浆华法林浓度的测定对临床决策和有效治疗具有重要意义。
本文参考国内外文献报道的方法进行改进[13-16]， 建立了超高效液相色谱法(ultra performance liquid chromatography ，UPLC)测定血浆华法林浓度，并用于探讨心脏换瓣术后患者华法林血药浓度与INR 测值的关系，以寻求更安全可靠的监测指标指导临床抗凝治疗的合理用药。
材料与方法一、材料1. 仪器与试剂：Waters 公司I-Class-UPLC 系统(包括二元梯度、自动进样器和柱温箱模块、I-Class TUV 检测器等)。
华法林和6-甲氧基-萘乙酸(6-methoxy naphthaleneacetic acid ，6-MNA)均购自美国Sigma 公司；甲基叔丁基醚、甲酸、乙腈均购自美国Thermo Fisher 公司；盐酸为分析纯；实验用水为超纯水。
2. 样品收集：收集79例心脏换瓣膜术后服用华法林患者，其中男性25例，女性54例，采集静脉血3 ml ，置肝素钠抗凝管中，2500 r/min 离心5 min ，分离血浆，于-70℃冰箱冻存备检。
二、方法1. 色谱条件：以BEH C18 (1.7 um ，2.1× 50 mm)色谱柱，流动相：0.02 mol/L NH4Ac(甲酸调PH3.0):乙腈=60:40，流速：0.3 ml/min ，柱温：40˚C ，检测波长308 nm 。
2. 标准溶液配制：精密称取华法林对照品 5.0 mg ，置50 ml 容量瓶中，用水配制含华法林 100 ug/ml 的对照品贮备液；取适量贮备液，用水精密稀释成2 ug/ml 的华法林工作液；精密称取 6-MNA 对照品(用作内标，IS)5.0 mg ，用1 ml 0.1 mol/L NaOH 溶解后，加水定容至50 ml ，临用前以水稀释成20 ug/ml 6-MNA 的内标工作液，置4℃冰箱保存备用。
3. 血样预处理：0.5 ml 血浆，再加入0.1 ml IS 工作液(含6-MNA ，2 ug)和1 mol/L HCI 0.5 ml ，混匀，再加入甲基叔丁基醚3 ml ，漩涡混合5 min ，2500 r/min 离心5 min ，分离上清液在50˚C 挥干，100 ul 流动相溶解，2500 r/min 离心2 min ，进样 4 ul ，在前述色谱条件下分析。
三、统计学分析采用SPSS 15.0对数据进行分析，通过非参数法对华法林剂量、INR 和血浆浓度之间的相关性进行评价。
结果显示为均值±SD ，以P ＜0.05为差异有统计学意义。
结 果1. 色谱检测结果：内标及华法林峰形尖锐且分离度良好，其保留时间分别为 1.1 min 及2.2 min ，见图1。