食用菌实验1

二、食用菌的制种程序
孢子分离 种菇 组织分离 接种→母种（一级） 接种→ →原种（二级） 接种→→栽培种（三级）
培养 培养
经过这样三级培养，食用菌菌丝数量大大增加。
一般1支试管菌种可繁殖4~6瓶原种，每瓶原种又 可扩大繁殖60~100瓶栽培种。
母 种
原种和 栽培种
三、菌种生产常用的设备和用具
担子菌纲食用菌
猴头菇
二、常见食用菌形态观察
姬松茸
担子菌纲食用菌
黑木耳
二、常见食用菌形态观察
草菇(麻菇, 杆菇)
担子菌纲食用菌
长裙竹荪
二、常见食用菌形态观察
担子菌纲食用菌
灰树花
担子菌纲食用菌
长根菇
牛肝菌
二、常见食用菌形态观察
担子菌纲食用菌
茶新菇
茶树菇
茶树菇 Agrocybe aegerita
母 种
四、母种生产技术
（一）母种培养基
（二）母种分离
孢子分离 有性 无性
母种分 离方法
组织分离
基质分离
1、孢子分离法
利用孢子在适宜培养基上形成菌丝来获得 纯菌种的方法。
1）单孢子分离法：培养基上只接种1个担 孢子，使它萌发成菌丝体而获得纯菌种的 方法。 如：双孢蘑菇、草菇单个孢子分 离得到菌丝便能结实。 （一个孢子→萌发→菌丝体→纯种） 2）多孢子分离法：许多孢子接种于同一培养 基上，使它们萌发自由交配来获得纯菌种的方 法。如：香菇、平菇、金针菇、毛木耳等。 （多个孢子→萌发→菌丝体→纯种）
参见P48
培养基
2、组织分离法
参见P45
组织分离：指通过菇体组织分离纯种。
优点：操作简便、取材广泛、不易变异， 保持原菌种优良种性。 方法：
①选择种菇（出菇早、无病虫害、柄短、 肉厚、大小适中、5~6分成熟） ②组织分离
2、组织分离法
参见P45-46
选 择 种 菇 → 表 面 消 毒 （ 75% 酒 精 或 0.1%升汞）→撕成两半→取菌柄菌盖交 界处→小块菌肉→移入PDA→培养→观 察→转管→纯种
孢子 分离 法
多孢子分离简单易行，生产上经常采用，多 孢子分离的具体操作方法有以下几种： ①整菇插种法：伞菌常用此法采得孢子。
即选择成熟度适当的优良种菇，在无菌操作 下，插入无菌孢子采集器内，置适温下让其自 然弹散孢子。用接种环取少量孢子，放入试管 斜面上培养。
种菇选择：菌丝生长健壮，无病虫杂菌，出菇 均匀，转潮较快，菇形圆整，菌盖肥厚，达八 九成熟。 参见P48
⑵扩大繁殖：提纯的母种或从有关单位引进的母种， 数量均很少，应扩大繁殖后再用。
担子菌纲食用菌
双孢蘑菇(白蘑菇)
盐渍双孢蘑菇
二、常见食用菌形态观察
担子菌纲食用菌
平菇
二、常见食用菌形态观察
担子菌纲食用菌
香菇
二、常见食用菌形态观察
担子菌纲食用菌
银耳（白木耳）
二、常见食用菌形态观察
担子菌纲食用菌
白金针菇
黄金针菇
灵 芝
二、常见食用菌形态观察
担子菌纲食用菌
灵芝
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二、常见食用菌形态观察
优点：省时、省燃料、 效果好
灭菌设备
Ⅰ高压蒸气灭菌锅
三、菌种生产常用的设备和用具
2、灭菌设备
Ⅱ 常压灭菌锅
目前农村生产栽培种的必备设备，实际上 是一种大型蒸笼式煮灶。底部为铸铁大锅， 上部为圆形木桶，桶内装数层供放培养基的 格架。桶盖装有活络搭及密闭的橡皮圈，由
于锅内温度最高是100℃，所以灭菌时间需维
参见52
实验二
常见食用菌形态观察和组织分离法
一、食用菌的概念
担子菌纲（多）：如蘑菇、香菇、 平菇、金针菇等 子囊菌纲（少）：如冬虫夏草、 羊肚菌等
1、分类地位
2、营养体：分枝状菌丝体。不含叶绿素， 不能光合作用； 3、繁殖体：形成大型子实体；
4、生活方式：以寄生或腐生方式生活。
二、常见食用菌形态观察
营养物质→调节pH（用HCl或NaOH）→分装试管→
塞上棉塞→捆扎→灭菌（高压蒸气灭菌15-30min）→ 制成斜面→检查灭菌效果（即28~30℃培养2~3d）
（3） 作业
（1）每人制5支试管斜面。
（2）什么叫食用菌菌种？它又有哪些类型？ （3）食用菌菌种生产常用的设备和用具有哪些？ （4）写出食用菌的制种程序。 （5）常用的消毒药品有哪些？
1、接种设备
⑴ 接种室
⑵ 接种箱
⑶ 超净工作台
超净工作台
三、菌种生产常用的设备和用具 2、灭菌设备
Ⅰ 高 压 蒸 气 灭 菌 锅
1）手提式：容量小，适于斜面试 管及玻璃器皿等；
2）立式： 容量大，投资大；
3）卧式：容量大，投资大；
4）家用24或26 cm压力锅：母种、 原种培养基 。
2）、3）一般在菌种场或研究所应用。
茶树菇 Agrocybe aegerita
鸡腿菇
鸡腿菇
Coprinus comatus
担子菌纲食用菌
真姬菇
担子菌纲食用菌
虎掌菌：Sarcodon imbricatus
猪苓菌：Grifola umbellata
别名：猪苓花、猪灵芝。 特征：子实体丛生，肉质，味道鲜美，地下部分的菌核即是中药材的 猪苓，菌核不规则、块状，棕黑色至黑色。 药用功效：猪苓及猪苓多糖对肝炎、肺癌、食管癌、白血病、乳腺癌 及淋巴肉瘤有显著的治疗效果。
杏鲍菇：Pleurotu seryngii
别名：刺芹侧耳、雪茸。 杏鲍菇是一种营养十分丰富、味道鲜嫩的新型品 种，菌肉肥厚，质地脆嫩，具有杏仁香味。
杏鲍菇：Pleurotu seryngii
榆黄蘑：Pleurotus citrinipileatus
榆黄蘑：Pleurotus citrinipileatus
四、母种生产技术
②综合马铃薯培养基
马 铃 薯 200g 、 葡 萄 糖 （ 或 蔗 糖 ） 20g 、 KH2PO4 2g、MgSO4 0.5g、维生素B1 10mg、 琼脂20g、H2O 1000ml、pH自然。
适合培养草菇、猴头菌、灵芝及各种食用菌菌 种分离、保藏。
四、母种生产技术
③胡萝卜葡萄糖琼脂培养基 胡萝卜200g、葡萄糖（或蔗糖）18~20g、
三、菌种生产常用的设备和用具 6、常用的消毒药品
⑷ 5%石炭酸：喷洒墙壁、地面及擦洗桌面等，也 可用来苏尔代替；
⑸ 2%来苏尔、新洁尔灭：用法同上； ⑹甲醛（福尔马林）：用于菇房和接种箱等空气消 毒； 方法：关闭门窗消毒，自行气化； 用量：10ml甲醛＋5g KMnO4／立方米。
四、母种生产技术
上述分离物在25℃下，经3d~5d可看到分离 物表面长出白色绒毛状丝，每隔1d~2d检查1 次，随时淘汰霉菌、细菌污染的培养物，培 养10d~15d，再作1次转管即得到纯种。
3、基内菌丝分离法（基质分离法）
参见P46-47 概念： 由菇木、耳木、培养料等食用菌生长基质
中的菌丝分离培养而成。这是利用潜在于寄
食用菌母种培养基的种类繁多，由于不同营养 类型的食用菌对营养物质的要求不同，所以，在 培养不同食用菌母种时，应选择适宜该菌种的培 养基。
母种培养基要求营养丰富、完全、氮源、维生 素的比例应高。
现将食用菌常用的母种培养基列举如下 ：
四、母种生产技术
（一）母种培养基 ①马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA） 马铃薯200g、葡萄糖（或蔗糖）20g、琼 脂20g、H2O 1000 mL、pH 6.5。 适用于一般食用菌母种分离与培养，但草 菇、猴头菌等在此培养基上生长不良。
三、组织分离法
参见P45-46
1、方法
选 择 种 菇 → 表 面 消 毒 （ 75% 酒 精 或 0.1%升汞）→撕成两半→取菌柄菌盖交 界处→小块菌肉→移入PDA→培养→观 察→转管→纯种
上述分离物在25℃下，经3d~5d可看到分离 物表面长出白色绒毛状丝，每隔1d~2d检查1 次，随时淘汰霉菌、细菌污染的培养物，培 养10d~15d，再作1次转管即得到纯种。
白灵菇：Pleurotus eryngii
白灵菇：Pleurotus eryngii
红菇：Russula lepida
二、常见食用菌形态观察
子囊菌纲食用菌
羊肚菌
羊肚菌
Morchella esculenta
子囊菌纲食用菌
冬虫夏草
冬虫夏草
冬虫夏草的蛹、成虫、虫卵 冬虫夏草的蛹
冬虫夏草的虫卵
持10~12h，才能达到灭菌效果。
三、菌种生产常用的设备和用具
3、培养设备
⑴ 培养室
⑵ 生化培养箱
三、菌种生产常用的设备和用具
4、培养菌种的容器
母 种 ： 试 管 ， 常 用 规 格 20×180~200mm ， 18×180mm等。
菌种瓶：盐水瓶、罐头瓶
原种、栽培种 菌种袋 聚丙稀袋
聚乙稀袋
规格有：12~15×30~35 cm， 17×35~45 cm
2、注意事项
⑴ 取组织块不要贪大，因组织块小易定植; ⑶不同的食用菌切取部位和消毒方法不同。
母 种
3、作业
（1）每人分离5支试管菌种。 （2）食用菌菌种分离方法有哪些？ （3）食用菌菌种质量如何检验？
实验三 菌种的纯化、扩大培养和菌种质量检查
菌种提纯与扩大繁殖
用孢子、组织或基质分离法得到的菌种，一般不 宜直接用于生产，必须经过提纯方可应用。 ⑴提纯：选稀疏单菌落→边缘取菌→接种试管斜面 （3~5支）→培养→纯菌种。
主组织内的菌丝体获得纯种的方法。
（常用于银耳及木耳菌种分离）
3、基内菌丝分离法（基质分离法）
参见P46-47
段木内菌丝分离法：
取1~2cm菇木、耳木（子实体着生部位）→
去皮→消毒（75%酒精或0.1%升汞浸泡1min）
→切去四周木块→切成火柴杆粗细，0.5 cm长 的小木梗→取1根放入试管斜面上→培养→取 菌丝→转管纯化
琼脂20g、H2O 1000ml、pH自然。
实验一
马铃薯葡萄糖琼脂（PDA）培养基配制
⑴ 配方
马铃薯200g、葡萄糖（或蔗糖）20g、
琼脂20g、H2O 1000ml、pH 6.5。
⑵ 配制方法
马铃薯（去皮、去芽眼）→切成片（玉米大小） →称取200g＋1000mL H2O→煮沸15-20min →双层纱 布过滤→取滤液并补足1000mL＋琼脂→熔化＋其它
菌种瓶
三、菌种生产常用的设备和用具
5、接种工具
移植菌种于培养基上的工具称接种工 具，主要有以下几种：
接种针、环、刀、钩、铲、锄、枪等；
三、菌种生产常用的设备和用具
6、常用的消毒药品
⑴ 70%酒精：一般用于手、种菇表面消毒；
⑵ 0.1%升汞：常用于玻璃器皿、非金属器械
及种菇表面消毒；
⑶ 0.1%KMnO4：一般用于用具、器皿消毒；
①整菇插种法 孢子采集器是用来采集食用菌孢子的一种装置。
搪瓷盘（大号培养皿）
孢子 采集 器 培养皿 种菇支架 玻璃钟罩（大漏斗） 参见P48
②悬钓法
此法主要用于耳类（黑木耳、毛木耳、 银耳等）孢子的采集。 耳片（表面消毒） → 悬挂于培养基上 12~24h 方→培养→→取出挂钩与耳片→培养→ 挑取先端菌丝→转管纯化→母种 耳片
4、菌种提纯与扩大繁殖
用孢子、组织或基质分离法得到的菌种，一般 不宜直接用于生产，必须经过提纯方可应用。
⑴提纯：选稀疏单菌落→边缘取菌→接种试管斜 面（3~5支）→培养→纯菌种。 ⑵扩大繁殖：提纯的母种或从有关单位引进的母 种，数量均很少，应扩大繁殖后再用。 在母种繁殖时，最好一次多移些，不易多次转 管，以免影响出菇率，降低产量和质量。 一支斜面母种可移接40支左右斜面试管。
5、质量检验
对分离、引进或转管扩大的菌种，应经过质量 鉴定，选优去劣，方可使用。 检验方法： ①外观鉴定
优良菌种：菌丝浓白、粗壮、富有弹性，则生命 力强。
老化菌种：菌种已收缩、干燥或菌丝体自溶产生 了大量红褐色液体，说明生活力弱，不可使用。
②显微镜检验 挑取少许菌丝于载玻片上，加蒸馏水1滴，盖 上盖玻片，观察菌丝形态是否为培育的菌种。 ③菌丝生长速度 将其接种到适宜斜面培养基上，在适温下培 养。凡菌丝生长较快、整齐、浓密而健壮的就 是优良母种。 ④出菇试验 进行子实体产量和品质评比。 经以上检验，通过综合评比，选出菌丝生长速 度较快，子实体生长健壮、品质好、产量高的 母种，即可供生产上使用。
第一章 食用菌菌种的生产
菌种，好比农作物的种子，是食用 菌生产的根本，其优劣直接影响食用 菌的产量和质量。因此，必须认真做 好菌种的培育工作。
一、食用菌菌种种类
人工培育的菌种有母种、原种和栽培种之分。
1）母种（一级菌种）：用孢子分离或组织分 离等培育的菌丝体称为母种。
2）原种（二级菌种）：把母种扩大到木屑、 棉籽壳等为主的培养料上的菌种称为原种。 3）栽培种（三级菌种）：由原种扩大培养成 为生产上使用的菌种称为栽培种。 4）菌种：实质上就是经过人工培养并进一步 繁殖的食用菌的纯菌丝体。