磁分离酶联免疫法检测AFP
细胞与分子免疫学：酶联免疫吸附试验(ELISA)——测甲胎蛋白(AFP)
一、ELISA双抗体夹心法测AFP原理
用抗AFP抗体包被固相载体，加入待检标本， 标本中的AFP与固相载体上的抗体结合，再 加入酶标记的抗AFP抗体，形成抗体-抗原酶标抗体复合物，加底物显色，颜色的深 浅与相应AFP的量呈正相关。
二、试剂材料
2、37℃反应20min。
3、洗涤：各孔加入2滴洗涤液，混匀后倾去，用DW或自来水 加满各孔，甩掉，反复5次，最后在吸水纸上拍干酶标板。
4、每孔加入酶结合物2滴（37℃孵育15min）
5、洗涤：重复步骤“3”
6、显色：每孔加底物和显色液各1滴，轻轻振摇，室温暗处 避光显色5min，加入2M H2SO4 100l（2滴）终止反应。
1、AFP检测试剂盒 2、AFP参考标准液（0、25、50、100、200、
400ng/ml）。 3、DW 4、终止液（2M H2SO4）。 5、酶标测定仪、37℃温箱。 6、微量加样器、滴管、吸水纸等。
三、方法
1、加样：取一条包被好的酶标板（7孔），标记后，第1-6 孔分别加入AFP参考标准液（0、25、50、100、200、 400ng/ml）各100l。第7孔加入样品100l。
7、在波长（450nm）用酶标仪测OD值
四、结果判断
用酶标仪进行比色，以0 ng/ml标准孔 为空白孔，在波长450nm处分别读取各标准 孔和样本孔OD值，以OD值为横坐标，AFP含 量为纵坐标，在半对数坐标纸上画出标准 曲线，以测定孔的OD值在标准曲线上查出 相应标本的AFP含量。
参考范围：正常成人AFP含量＜20ng/ml。
酶联免疫吸附试验（ELISA） ——测甲胎蛋白（AFP）
原理：
抗原或抗体能结合到固相载体的表面仍保持其 活性；抗原或抗体与酶交联成酶标抗原或抗体 后，仍分别保持其免疫活性和酶活性。
高灵敏度化学发光磁酶免疫法检测人绒毛膜促性腺激素_刘军涛
高灵敏度化学发光磁酶免疫法检测人绒毛膜促性腺激素刘军涛1,2 刘儒平1,2 王蜜霞1,2 刘春秀1,2 罗金平1,2 蔡新霞*1,21(中国科学院电子学研究所传感技术联合国家重点实验室北京100190)2(中国科学院研究生院北京100080)摘 要 将磁性微粒与抗体的偶联,通过优化偶联条件提高了偶联效率,制备了高灵敏度的磁微粒生物探针;采用3-(2-螺旋金刚烷)-4-甲氧基-4-(3-邻氧酰苯基)-1,2-二氧杂环丁烷(AM PPD )--碱性磷酸酶(ALP )化学发光体系,建立了化学发光磁酶免疫检测方法;对检测方法进行了优化和改进,提高了系统的灵敏度和检测速度,并对HC G 样品进行相关检测。
结果表明,HCG 浓度在0.15~150I U /L 范围内,光强随HCG 浓度增大而增加,两者之间线性关系良好,相关系数r 为0.960;检出限可达0.15I U /L ;相对标准偏差(RSD )小于5%;检测总时间少于1h 。
本方法可以应用于其它免疫分子的检测,在临床免疫检测方面具有广阔的应用前景。
关键词 化学发光,磁性微球免疫分析,人绒毛膜促性腺激素2008-09-08收稿;2009-01-07接受本文由国家高技术研究发展计划项目(Nos .2007AA03Z428、2007AA042105)、国家自然科学基金项目(No .60801032)、中科院创新项目(No .KGCX2-YW-111-2)、中科院电子所创新项目(N o .08SQCX -9151)和中科院电子学青年创新项目(No .07QNCX -9240)资助*Em ai:l xxca@i m ai.l i e .ac .cn1 引 言人绒毛膜促性腺激素(H CG)是由滋养叶层的合体滋养细胞分泌的一种糖蛋白激素,存在于孕妇的血液、尿、初乳、羊水和胎儿体内,对维持正常妊娠有重要意义[1,2]。
妇女怀孕后,H C G 浓度会按一定规律变化。
医生可根据异常情况判断是否先兆流产、异位妊娠、葡萄胎等。
两种磁分离酶联免疫法检测血清甲胎蛋白
两种磁分离酶联免疫法检测血清甲胎蛋白徐兵;徐如梅;张建钫;沈菁;石英;伍严安【期刊名称】《国际检验医学杂志》【年(卷),期】2010(031)011【摘要】目的改进磁分离酶联免疫法(MEIA).方法采取预加微量标本、将磁铁置于微孔条侧壁和扣除上清液A值法,改良MEIA并建立了"差异磁分离酶联免疫法"(differential magnetic enzyme immunoassay,DMEIA).求DMEIA法的线性范围、回归方程、变异系数(CV),比较了MEIA和DMEIA配对检测100份血清AFP 结果差异.结果 DMEIA法检测AFP的回归方程Y=3.94X+16.45,r=0.992,线性范围5～500 ng/mL,批内CV=7.7%,批间CV=8.5%;DMEIA法和MEIA法测定血清AFP值差异无统计学意义(t检验,P>0.05),直线回归方程Y=3.418X+70,r=0.981,两法相关良好;检测原倍高浓度AFP时DMEIA法未出现(MEIA法出现)hook效应.结论 DMEIA法可克服hook效应,可用普通微孔板和酶标仪比色,可省去洗涤步骤,检测AFP结果(<500 ng/mL时)与MEIA法无明显差异.【总页数】3页(P1260-1261,1264)【作者】徐兵;徐如梅;张建钫;沈菁;石英;伍严安【作者单位】福州市传染病医院肝病研究所,福州,350025;福建省立医院检验科,福州,350001;福建省立医院检验科,福州,350001;福建省立医院检验科,福州,350001;福建省立医院检验科,福州,350001;福建省立医院检验科,福州,350001【正文语种】中文【中图分类】R446.61【相关文献】1.磁分离酶联免疫法检测IL-4方法的建立 [J], 王东琳;朱勇;李琦;刘振世;谢晶;欧阳为明;金伯泉2.差异磁分离酶联免疫法检测血清甲胎蛋白的研究 [J], 徐兵;陈纯美;徐如梅;张建钫;伍严安3.磁分离酶联免疫法检测AFP [J], 韩金利;陈立杰;康熙雄;周亚莉;张国军;王雅杰;方芳;吕虹;耿会娟;张果;刘振世4.磁分离酶联免疫法检测SCC-Ag的方法学研究 [J], 周敏;陆仁飞;杨旻5.酶联免疫法与电化学发光法检测血清甲胎蛋白肿瘤标志物结果的对比分析 [J], 李勇因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
酶联免疫法与电化学发光法检测AFP肿瘤标志物结果对比分析
酶联免疫法与电化学发光法检测AFP肿瘤标志物结果对比分析目的探讨酶联免疫法（ELISA）与电化学发光法（ECLIA）检测血清甲胎蛋白（AFP）肿瘤标志物的检测结果比较。
方法采用酶联免疫法和电化学发光法，对2012年1月至2012年6月期间采集的36例血清标本，进行甲胎蛋白的检测，并对两种检测方法的结果，进行比较和分析。
结果通过最小二乘法拟合直线方式，比较酶联免疫法（Y）与电化学发光法（X）检测结果，是否具有相关性，结果表明酶联免疫法与电化学发光法具有线性关系，并且具有高度相关性。
首先对两种检测方法的甲胎蛋白检测结果，进行正态分布分析，结果显示符合正态分布，然后对均值，进行t检验，结果显示，在95%的可信区间，双尾检验的P=0.2875，表明酶联免疫法与电化学发光法的检测结果不具有统计学意义。
结论酶联免疫法与电化学发光法都能较为准确的反应甲胎蛋白水平，对于肿瘤的诊断和治疗的预后，提供重要的理论依据。
标签：酶联免疫法；电化学发光法：甲胎蛋白；结果对比在健康人群血清中，甲胎蛋白（AFP）的含量较低，一般情况下低于20ng/ml。
检测甲胎蛋白含量，可以为原发性肝癌提高较为准确的诊断依据，还可以判断患者的预后质量[1]。
酶联免疫法（ELISA）作为经典的免疫方法，应用于甲胎蛋白的检测，而电化学发光法（ECLIA）作为新型检测方法，具有快速、精确、重复性高等特点，逐渐应用于甲胎蛋白的检测[2]。
本研究中，采用酶联免疫法和电化学发光法，对2012年1月至2012年6月期间采集的36例血清标本，进行甲胎蛋白的检测，并对两种检测方法的结果，进行比较和分析。
现将结果汇报如下，以供临床参考。
1资料与方法11一般资料2012年1月至2012年6月期间采集的36例血清标本，其中男12例，女24例，年龄36岁～69岁。
36例血清标本中，23例检测结果显示甲胎蛋白水平处于正常范围，而另外的13例超出正常范围。
12检测试剂、仪器及血样采集121酶联免疫法严格按照试剂盒操作说明书（购自武汉博世德科技责任有限公司），通过酶标仪，对甲胎蛋白水平进行检测。
酶联免疫法与化学发光免疫法检测AFP的比较
酶联免疫法与化学发光免疫法检测AFP的比较发表时间：2013-05-09T17:14:22.000Z 来源：《中外健康文摘》2013年第8期供稿作者：黄海深陈志通唐光定江伟河[导读] 化学发光免疫法检测结果的稳定性，灵敏度，精密度均优于酶联免疫法黄海深陈志通唐光定江伟河（广东省阳山县人民医院检验科 513100）【中图分类号】R446.6 【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2013）08-0125-02 【摘要】目的对甲胎蛋白(AFP)试验进行方法学探讨。
方法①对比实验用酶联免疫法和化学发光免疫法同时测定88例临床送检血清标本甲胎蛋白(AFP)的含量。
②线性实验将标准液按不同的浓度稀释后做线性实验。
③精密度实验用两法对低、中、高值质控品分别进行精密度实验。
结果①结果表明，两法无显著差异(P＞0.05)，相关系数r＝0.995，提示两法呈良好相关性。
②线性实验显示酶联免疫法和化学发光免疫法分别在5～400 ng/ml和2～900 ng/ml范围内呈良好的线性关系。
③精密度实验表明化学发光重复性好于酶联免疫法,特别是病理高值化学发光明显优于酶联免疫法。
结论化学发光免疫法的精密度和准确性均优于酶联免疫法。
【关键词】酶联免疫法化学发光免疫法甲胎蛋白比较【Abstract】 Object: The methodology investigate of Alpha-fetoprotein (AFP) test. Methods: ①Comparative experiments: The simultaneous determination of the serum samples of 88 patients censorship alpha-fetoprotein (AFP) levels by ELISA and chemiluminescent immunoassay. ②Linear experiments: the standard solution is diluted at different concentrations,then doing linear experiments.③Precision experiments: Doing precision experiments on low, medium and high-value quality control materials with the two methods. Results: ①The results show that no significant difference in the two methods(P＞0.05). The correlation coefficient of r = 0.995, these two methods showed a good correlation. ②The linear experiments show that the enzyme linked immunosorbent assay and chemiluminescence immunoassay showed a good linear relationship between the range in 5～400ng/ml and 2～900ng/ml.③Precision experiments show that the repeatability of chemiluminescent immunoassay is better than the enzyme-linked immunosorbent assay, specifically at the pathological high value. Conclusion: The precision and accuracy of the chemiluminescent immunoassay are better than enzyme linked immunosorbent assay.【Key words】 ELISA Chemiluminescent immunoassay Alpha-fetoprotein Comparison 甲胎蛋白（AFP）是哺乳动物胚胎期肝脏卵黄囊合成的一种糖蛋白，是辅助诊断原发性肝癌最常用的检测指标。
磁分离酶联免疫法检测AFP
磁分离酶联免疫法检测AFP韩金利;陈立杰;康熙雄;周亚莉;张国军;王雅杰;方芳;吕虹;耿会娟;张果;刘振世【期刊名称】《中国实验诊断学》【年(卷),期】2008(012)011【摘要】目的建立检测甲胎蛋白(脚)的磁分离酶联免疫法(Magnetic affinity inmlunoassay,MAIA).方法采用双抗体夹心法,用异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate,FITC)和碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,AP)分别标记识别不同表位的两种抗AFP单克隆抗体(mAb)4A3和5H7,以偶联羊抗Frrc mAb包被的免疫磁珠作为固相载体,单磷酸酚酞(phenolphthalein monophosphate,PMP)做显色底物,建立检测AFP的MAIA法.结果成功实现了用MAIA法对AFP的定量检测,其检测灵敏度0.2IU/ml,线性范围0.2-510IU/ml,批内CV5.5%-9.3%,批间CV1.6%-9.7%.添加回收率101.4%-104.9%,稀释回收率78.3%-123%.与雅培AxSYM及i2000的检测结果对比,相关系数分别为0.984和0.985.结论 MAIA法的性能优于现有的ELISA和RIA试剂盒,接近进口同类试剂的水平,有助于为市场提供一种高质量而价廉的AFP测定试剂盒.【总页数】4页(P1427-1430)【作者】韩金利;陈立杰;康熙雄;周亚莉;张国军;王雅杰;方芳;吕虹;耿会娟;张果;刘振世【作者单位】首都医科大学附属北京天坛医院实验诊断中心,北京,100050;安阳市肿瘤医院,检验科,北京,100050;北京倍爱康生物技术有限公司,北京,100050;首都医科大学附属北京天坛医院实验诊断中心,北京,100050;首都医科大学附属北京天坛医院实验诊断中心,北京,100050;首都医科大学附属北京天坛医院实验诊断中心,北京,100050;首都医科大学附属北京天坛医院实验诊断中心,北京,100050;首都医科大学附属北京天坛医院实验诊断中心,北京,100050;首都医科大学附属北京天坛医院实验诊断中心,北京,100050;首都医科大学附属北京天坛医院实验诊断中心,北京,100050;首都医科大学附属北京天坛医院实验诊断中心,北京,100050;北京倍爱康生物技术有限公司,北京,100050【正文语种】中文【中图分类】R392-33【相关文献】1.两种磁分离酶联免疫法检测血清甲胎蛋白 [J], 徐兵;徐如梅;张建钫;沈菁;石英;伍严安2.差异磁分离酶联免疫法检测血清甲胎蛋白的研究 [J], 徐兵;陈纯美;徐如梅;张建钫;伍严安3.磁分离酶联免疫法检测SCC-Ag的方法学研究 [J], 周敏;陆仁飞;杨旻4.化学发光免疫法与酶联免疫法检测AFP的比较 [J], 赵德臣;张瑜5.酶联免疫法和化学发光免疫法检测血清AFP的比较 [J], 洪霞;吴红波因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
分子生物学实验课：酶联免疫分析检测人甲胎蛋白(AFP)n
基本原理
它采用抗原与抗体的特异反应将待测物与酶连接， 然后通过酶与底物产生颜色反应，用于定量测定。 测定的对象可以是抗体也可以是抗原。
在这种测定方法中有3种必要的试剂：
•①固相的抗原或抗体（免疫吸附剂） •②酶标记的抗原或抗体（标记物） •③酶作用的底物（显色剂）
测量时，抗原（抗体）先结合在固相载体上，但仍保留 其免疫活性；
操作步骤
6.加酶标溶液：标准品组、待测样本组各孔中加入100ul的 HRP标记的抗AFP抗体，空白调零孔除外。37℃温育35分 钟。
7.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加300ul洗 涤液，静置1分钟弃去，如此重复5次，拍干。
8.显色：各孔加入显色剂A液50ul后，再加入显色剂B液50ul。 轻轻震荡混匀， 37℃ 避光显色15分钟.
试剂盒组成：
1.酶联板：一块（96孔） 2.标准品 3.HRP标记的抗AFP抗体 4.TMB显色 5.浓洗涤液 6.终止液
样本处理及要求：
1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20 分钟左右（2000-3000转/分）。
2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸 钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟 左右（2000-3000转/分）。
试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内。 4.请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本
中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔第一 孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍） 后再测定，计算时最后乘以总稀释倍数（×n×5）。
5.封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。 6.底物请避光保存。 7.严格按照说明书的操作进行，试验结果判定 必须以酶标仪读数为准.
然后加一种抗体（抗原）与酶结合成的偶联物（标记 物），此偶联物仍保留其原免疫活性与酶活性；
甲胎蛋白 AFP 操作规程
甲胎蛋白 AFP 操作规程一、测定原理两位点的免疫发光法（夹心法原理），两个不同的高度特异的单克隆抗体分别用于固相的（磁颗粒）包被及示踪物。
二、试剂组成2.3ml磁颗粒磁颗粒表面包被单克隆抗体1.0ml定标液，低1.0ml定标液，高23ml示踪物溶液：标记上异鲁米那的单克隆抗体25ml缓冲液；25ml稀释液三、操作步骤1.按仪器操作要求准备好仪器。
2.试剂准备在揭开密封纸之前，先轻轻地水平摇晃试剂整盒（为了防止泡沫形成！）。
揭开密封纸，来回地转动磁颗粒区的小轮，直到悬浮液的颜色变成棕色。
该步骤使磁颗粒重新悬浮。
将试剂盒放入仪器试剂区，等待30分钟。
在此期间，磁颗粒自动地被搅拌并完全地重新悬浮。
3.样本准备按标准程序采集离心样本，在2-8℃下可保存24小时，如需保存更长时期：冷冻至–20℃，避免反复冰冻和解冻，被保存的样本在使用之前应被彻底地混匀。
4.定标通过测量定标物，预先定义的主曲线上的每个定标点将被调整（重新定标）为一个新的、仪器特异的测量水平。
有下列情况需重新定标：每改变一次批号（指试剂整盒或者激发试剂而言）；每过两星期或每使用一个新的试剂盒；LIAISON分析仪的每次维护之后；当质控值不在期望范围之内时，房间温度的变化过大时。
5.编写标本号，选定项目AFP，放置标本，按下开始工作键。
6.结果的计算LIAISON分析仪借助于由主曲线两点定标而得到的一条定标曲线，自动地计算每一个样本的AFP浓度，结果以IU/ml表示。
1 ng AFP = 0.83 IU AFP。
五．测量范围LIAISON分析仪AFP试剂能准确测量的浓度值在0.2 – 1000 IU/ml 之间。
六．参考范围1.血清中的AFP值﹤20ng/ml。
2.怀孕期间，母体血液中的AFP值不断升高，在第28周与32 周之间达到最大值，第32 周之后再次下降。
七．干扰物质该方法不受黄疸（胆红素<12.5mg/dl）、溶血（血红蛋白<16mg/dl）、脂血（甘油三酯<12.5mg/ml）等干扰八．临床意义AFP来源于卵黄囊、未分化肝细胞和胎儿胃肠道。
甲胎蛋白检测方法
甲胎蛋白检测方法甲胎蛋白（AFP）是一种胚胎发育早期产生的糖蛋白，主要存在于胚胎和胎儿的肝脏、消化道和生殖系统。
在正常成人中，AFP的浓度极低，但在某些情况下，如肝癌、睾丸癌、卵巢癌和胎儿开放性神经管缺陷等疾病中，AFP的浓度可能异常升高。
因此，AFP的检测被广泛用于肿瘤诊断和产前筛查。
甲胎蛋白检测一般通过血清学检测，主要有酶联免疫吸附测定（ELISA）、放射免疫测定（RIA）和化学发光法（CLIA）等方法。
酶联免疫吸附测定（ELISA）是一种常用的AFP检测方法。
该方法使用特异性抗体与AFP结合形成免疫复合物，再通过底物与酶标记测定物质的结合来检测目标物质的浓度。
ELISA方法操作简单、快速、灵敏度高，并且可以同时检测多个样本，已广泛应用于临床实践中。
放射免疫测定（RIA）是另一种常用的AFP检测方法。
该方法利用同位素标记的特异性抗体与AFP结合，通过测量同位素放射性衰减来确定目标物质的浓度。
RIA方法灵敏度高、特异性好，但操作相对复杂，仪器设备要求高，并且涉及到放射性同位素的使用，对操作者的安全性要求较高。
化学发光法（CLIA）是一种新兴的AFP检测方法，利用特定的荧光信号来检测目标物质的浓度。
CLIA方法操作简单、灵敏度高、动态范围广，并且无需使用放射性同位素。
此外，CLIA方法还可以实现自动化检测，提高检测效率。
以上所提到的三种方法在AFP检测中都有各自的优缺点，具体选择使用哪种方法，应根据实际需要和实验条件来确定。
此外，不同的商业试剂盒和仪器也可能对结果产生影响，因此在进行AFP检测时，应严格按照说明书操作，并根据相关标准进行质量控制，以确保结果的准确性和可靠性。
除了血清学检测方法，还有其他一些检测AFP的方法，如尿液检测、组织切片免疫组化等。
尿液检测方法操作简便，但灵敏度相对较低；组织切片免疫组化方法可以直接观察AFP在组织中的表达情况，对于肿瘤的定量和定位有较大的帮助。
综上所述，甲胎蛋白检测方法主要包括血清学检测、尿液检测和组织切片免疫组化等方法。
甲胎蛋白测定方法
甲胎蛋白测定方法1.免疫比浊法：这是一种常见的甲胎蛋白测定方法，其基本原理是利用抗甲胎蛋白抗体与体液中的AFP结合，并通过免疫反应形成比浊溶液。
在一定条件下，通过比较反应溶液的滴度与标准质量的AFP溶液的滴度，即可计算出待测样品中的AFP浓度。
2.酶联免疫吸附试验（ELISA）：这种方法是在固相酶联免疫吸附试验的基础上改进的。
首先，将待测样品加入带有特异抗体的酶标板孔中，与抗体发生特异性结合。
然后，通过洗涤去除未结合的物质，并加入与甲胎蛋白结合的辣根过氧化物酶（HRP）标记的抗体。
最后，加入底物使酶催化发生显色反应，根据反应物浓度与显色强度的相关性计算出AFP的浓度。
3.免疫电泳法：免疫电泳法通过将待测样品与抗甲胎蛋白抗体混合，然后将混合物分离电泳，以检测AFP的浓度。
根据电泳后蛋白质条带的长度和强度，可以判断AFP的浓度高低。
4. Immuno-Polymerase Chain Reaction（IPCR）：这是一种新兴的甲胎蛋白测定方法。
它结合了免疫技术和聚合酶链反应（PCR）技术。
首先，通过PCR扩增样品中的AFP基因片段。
然后，采用特异性抗体结合PCR扩增产物，形成固定复合物。
最后，通过荧光素酶或放射性示踪剂对复合物进行检测，计算待测样品中AFP的浓度。
以上是目前常见的AFP测定方法，每种方法都有其优点和局限性。
选择合适的方法应根据实际需要、设备条件和诊断要求。
甲胎蛋白的测定方法对于一些疾病的早期诊断和治疗监测具有重要意义，然而，需要注意的是，单纯的AFP测定结果并不能作为其中一种疾病的确诊依据，还需要结合其他临床信息进行综合分析和判断。
人甲胎蛋白AFP酶联免疫分析
人甲胎蛋白（AFP）酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定人血清，血浆及相关液体样本中甲胎蛋白（AFP）的含量。
实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人甲胎蛋白（AFP）水平。
用纯化的人甲胎蛋白（AFP）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入甲胎蛋白（AFP），再与HRP标记的甲胎蛋白（AFP）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的甲胎蛋白（AFP）呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人甲胎蛋白（AFP）浓度。
样本处理及要求：1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。
3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
胸腹水、脑脊液参照实行。
4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。
离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清。
检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。
通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。
离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清。
保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
5. 组织标本：切割标本后，称取重量。
加入一定量的PBS，PH7.4。
用液氮迅速冷冻保存备用。
标本融化后仍然保持2-8℃的温度。
加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。
酶联免疫吸附试验测AFP——ELISA双抗体夹心法
实验材料与仪器
待检抗原原液、酶标抗体、抗原稀释液、 酶标稀释液、酶标板条、洗涤液、显色液 A、显色液B、终止液
滴管、吸管、微量加样器、移液管 酶标仪、温育箱
操作
在酶标板条的孔中加入相应浓度的抗原（100UL/孔）
↓37℃×30min
弃孔内液体，用洗涤液洗3遍，30s/次
↓拍干
加所设计的不同工作浓度的酶标抗体100UL/孔
第一组：边缘效应 第二组：叠加效应 第三组：温浴方式 第四组：加样方式 第五组：洗涤次数 第六组：温浴时间 第七组：试剂温度
小组讨论结束后每组写出一份具体的试验设计方 案，下节课上每组派代表上台讲述实验方案和可 行性，讲述时间为2-3分钟左右。
要求设计方案中包括： 实验对象、标本要求 操作条件、操作过程（可画出96孔加样示
实验设计要求
在实验本上绘出36孔设计图表
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
写出实验中选择的包被液的情况 写出实验中选择的包被抗体、酶标抗体、
检测抗原的浓度，和系列稀释方案。 写出最终测得的OD值并分析实验结果。
评价
双抗体夹心ELISA法简单易行，不需 复杂的仪器设备，特异性强、敏感性 高，其中一步法更简单、省时，但有 Hook效应的缺点。
↓37℃×30min
弃去孔内液体，同上洗涤三次
↓拍干
加底物A、B液各2滴(100UL/孔)
↓37℃×15min
显色后加终止液1滴(50UL/孔)
↓
酶标比色仪450nm读取OD 值
棋盘滴定法选择最佳工作浓度
选择标准：强阳性参考血清A值为0.8左右 阴性参考血清A值<0.1
（即：选择强阳性对照孔最接近0.8，且阴 性孔小于0.1的孔所对应的包被浓度和酶标 浓度为最佳的ELISA检测浓度。）谢！
酶联免疫法与化学发光免疫法检测AFP的对比分析
酶联免疫法与化学发光免疫法检测AFP的对比分析发表时间：2016-06-21T11:47:29.967Z 来源：《医药前沿》2016年5月第14期作者：刘翠[导读] 甲胎蛋白（AFP）是哺乳动物胚胎期肝脏卵黄囊合成的一种糖蛋白，是辅助诊断原发性肝癌最常用的检测指标。
刘翠（河南省直第三人民医院检验科河南郑州 450006）【摘要】目的：对酶联免疫法（ELISA）与化学发光免疫法对AFP的检测进行对比分析，总结二者的方法学性能。
方法：利用酶联免疫法与化学发光免疫法同时对临床送检的90例AFP血清标本进行检测，通过对比试验、线性试验及精密度试验，分析两组试验结果的准确性。
结果：对比试验表明，两种试验方法对AFP检测无明显差异（P＞0.05），线性试验表明在5～400ng/ml和2～900ng/ml 的范围内，酶联免疫法与化学发光免疫法呈良好的线性关系。
精密度试验表明病理高值化学发光优于酶联免疫法。
结论：在对AFP的检测中，化学发光免疫法具有高精密度和高准确性，较ELISA具有明显优势【关键词】酶联免疫法；化学发光免疫法；APF检测；对比分析【中图分类号】R446 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2016）14-0165-02甲胎蛋白（AFP）是哺乳动物胚胎期肝脏卵黄囊合成的一种糖蛋白，是辅助诊断原发性肝癌最常用的检测指标[1]。
目前临床上对AFP 的检测方法较多，常用的有放射免疫法（RIA）、酶联免疫法（ELISA）、荧光免疫法（FIA）及化学发光免疫法（ECLIA）。
ELISA检测迅速，简单方便，有实效性，在各级医院应用广泛。
ECLIA精确度高，且具有良好的可重复性，检测试剂无毒副作用，具有良好的应用前景。
本文通过对ELISA和ECLIA的对比分析，了解二者的方法学性能，现将统计分析结果报道如下。
1.资料与方法1.1 标本来源随机抽取90例我院2015年1月1日～2015年12月30日门诊及住院患者的血清标本。
酶联免疫法和化学发光法在测定肿瘤标志物AFP中的结果对比分析研究
酶联免疫法和化学发光法在测定肿瘤标志物AFP中的结果对比分析研究摘要】目的分析肿瘤标志物AFP在酶联免疫法和化学发光法测定结果中的稳定性、敏感性。
方法对120名患者采取空腹静脉血利用酶联免疫法和化学发光法测定肿瘤标志物AFP的含量，采用方差法分析比较这两种方法稳定性、敏感性。
结果化学发光法（CL）批内变异系数小于酶联免疫法（ELISA），并且稳定性高于酶联免疫法，P＜0.05。
结论在测定肿瘤标志物AFP方法中ELISA 的稳定性、敏感性及重复性均差于CL，但ELISA具有经济实惠，方法简单，适于一般医院检验科推广应用，有条件的医院检验科应该选用CL，有利于AFP准确定量，为临床提供更加准确有效的诊断依据。
【关键词】酶联免疫法化学发光法肿瘤标志物 AFP 对比分析【Abstract】objective analysis of tumor marker AFP in enzyme immunoassay and chemiluminescence method for the determination of thestability,sensitivity.Methods 120 patients taking fasting venous blood using enzyme immunoassay and chemiluminescence method for the determination of tumor markers in AFP content,using variance analysis to compare these two methods,the sensitivity of stability.The chemiluminescence(CL) within group variation coefficient is less than the enzyme immunoassay(ELISA),and stability than ELISA,P<0.05,Conclusion in the determination of tumor markers in the AFP method ELISA stability,sensitivity and reproducibility variation on CL,but ELISA with economic benefits,the method is simple,suitable for generalhospital laboratory application,conditionalhospital laboratory should choose CL,help AFP accurately and quantitatively,and provide more accurate and efficient for clinical diagnosis.【Key words】Enzyme Immunoassay Chemiluminescence tumor marker AFP comparative analysis肿瘤成为当今世界严重危害人类的疾病，死亡率仅次于心血管疾病居全球第二。
化学发光酶免疫分析法及酶联免疫吸附法检测AFP肿瘤标志物结果的对比分析
化学发光酶免疫分析法及酶联免疫吸附法检测AFP肿瘤标志物结果的对比分析罗琦【摘要】目的对化学发光酶免疫分析法及酶联免疫吸附法检测甲胎蛋白(AFP)肿瘤标志物结果进行对比和分析.方法选择2013年8月至2016年8月在长葛市人民医院进行治疗的肿瘤患者85例,分别采用化学发光酶免疫分析法和酶联免疫吸附法对其血清中AFP含量进行检测.结果化学发光酶免疫分析法检测与酶联免疫法吸附法检测方法之间存在明显的线性关系,相关性良好(r=0.946),检测结果比较差异无统计学意义(P>0.05);两种方法检测病理低值和中值精密度差异无统计学意义(P>0.05),而对于高值,化学发光酶免疫分析法的精密度明显优于酶联免疫法吸附法,差异有统计学意义(P<0.05).结论化学发光酶免疫分析法检测与酶联免疫法吸附法检测AFP肿瘤标志物无明显差异,具有较高的一致性,但化学发光酶免疫分析法检测的精密度要优于酶联免疫法吸附法.【期刊名称】《河南医学研究》【年(卷),期】2017(026)012【总页数】2页(P2220-2221)【关键词】AFP肿瘤标志物;化学发光酶免疫分析法;酶联免疫吸附法【作者】罗琦【作者单位】长葛市人民医院检验科河南许昌 461500【正文语种】中文【中图分类】R446.6肿瘤标志物是一种化学物质，可以反映机体内是否存在肿瘤，在正常人体组织中不存在或含量比较少，难以检测到，而在肿瘤细胞中含量则远远高于正常组织中，可提示肿瘤的性质，在临床检验中具有较高的诊断价值[1-2]。
本文旨在对化学发光酶免疫分析法及酶联免疫吸附法检测甲胎蛋白(AFP)肿瘤标志物结果进行对比和分析，以期为AFP肿瘤标志物的临床检验方法提供参考和依据。
1.1 一般资料选择2013年8月至2016年8月在长葛市人民医院治疗的肿瘤患者85例，其中男49例，女36例，年龄46～77岁，平均(61.3±4.8)岁。
1.2 方法入院后，抽取患者清晨空腹状态下静脉血3 ml，将其血清分离并在-20 ℃的冷藏室中保存以作备用。
酶联免疫法与电化学发光法检测 AFP 肿瘤标志物结果的对比分析
酶联免疫法与电化学发光法检测 AFP 肿瘤标志物结果的对比分析赵书存【摘要】目的：对比分析酶联免疫法与电化学发光法检测血清甲胎蛋白(AFP)肿瘤标志物的检测结果，为临床实践提供科学依据。
方法肿瘤患者65例，分别采用酶联免疫法与电化学发光法检测患者血清标本中的 AFP 水平，观察比较两种检测方法的检测结果，分析其相关性。
结果经过检测发现，酶联免疫法与电化学发光法均能够明确反映AFP 水平，二者检测结果存在高度相关性(P<0.05)，呈现线性关系；在95%可信区间内，两种检测结果经双尾检验差异无统计学意义(P>0.05)。
结论采用酶联免疫法与电化学发光法分别对 AFP 肿瘤标志物进行检测，检测结果均准确、可靠，临床可将两种检测方法相结合，作为临床中肿瘤患者的诊断依据。
【期刊名称】《中国实用医药》【年(卷),期】2015(000)033【总页数】2页(P42-43)【关键词】血清甲胎蛋白;肿瘤标志物;酶联免疫法;电化学发光法;相关性【作者】赵书存【作者单位】455000 安钢职工总医院【正文语种】中文为进一步研究AFP肿瘤标志物的最佳检测方法, 提高临床诊断的准确性, 本院选取65例患者血清标本作为研究对象并展开临床研究, 现将结果报告如下。
1.1 一般资料于本院2014年6月～2015年2月收治的肿瘤患者中随机选取65例作为本次研究对象, 其中男38例,女27例, 年龄35～72岁, 平均年龄(52.8±5.6)岁。
采集患者血清标本65例, 其中37例标本AFP水平在正常水平内, 28例标本AFP水平高出正常水平。
1.2 方法所有患者血清标本均分别采用酶联免疫法与电化学发光法对AFP水平进行检测。
1.2.1 检测仪器酶联免疫法：采用酶联免疫试剂盒(上海博谷生物科技有限公司提供)和原装配套试剂, 根据试剂盒上的试剂检测说明规范操作, 采用酶标仪检测血清AFP水平；电化学发光法：采用电化学发光自动分析仪(武汉科思特仪器有限公司提供)、原装配套试剂以及质控品和检测定标液对患者血清标本中AFP水平进行检测, 根据仪器和试剂盒检测说明规范操作。
酶联免疫吸附法和化学发光法对甲胎蛋白检测功效的比较
酶联免疫吸附法和化学发光法对甲胎蛋白检测功效的比较发表时间：2011-05-30T17:51:01.920Z 来源：《中外健康文摘》2011年第7期供稿作者：何彩华[导读] 肿瘤已成为当今世界严重危害人类的疾病，死亡率仅次于心血管疾病居全球第二。
何彩华（河源市妇幼保健院检验科广东河源517000）【中图分类号】R446.1 【文献标识码】A 【文章编号】1672-5085（2011）7-0096-03【摘要】目的比较ELISA (enzyme linked immuno-sorbent assay)和CL(chemi-luminescence)两种检测方法对AFP检测的稳定性、敏感性及重复性。
方法对110名患者血标本同时采用ELISA和CL两种方法进行AFP检测，对同一标本连续测定20次进行批内变异的比较；同时对标本每天测定1次，连续测定20天进行批间变异比较。
采用方差分析比较两种方法敏感性；并对两种方法进行线性回归分析，评价两种方法相关性。
结果CL批内变异系数和批间变异系数均较ELISA小，具有较好的重复性及稳定性；当AFP<400μg/L时，ELISA和CL法检测AFP敏感性相似，当AFP>400μg/L时，CL法敏感性高于ELISA（P<0.05）。
结论CL较ELISA稳定性好、敏感性高、重复性好，而ELISA 具有经济、在AFP浓度值低于400μg/L时也具有较好的敏感性。
【关键词】甲胎蛋白酶联免疫吸附法化学发光法【Abstract】Object：To compare the stability,sensitivity and reproducibility of ELISA and CL on the detection of AFP. Method：Enrolled 110 patients who were drawn blood samples to undertook ELISA and CL detections AFP totally 20 times to compare intra－assay coefficient variation and once every day for 20 days to compare inter－assay coefficient variation;analysis of variance was used to compare the sensitivity between these two methods，and we also used lineal regression analysis to compare the correlation between these two methods. Result:Intra-assay and inter-assay coefficient variation of CL were smaller than ELISA which indicated that the CL had a better reproducibility and stability. The sensitivity was similar between ELISA and CL when AFP <400μg/L whereas it was more sensitive in CL when AFP>400μg/L（P <0.05.）. Conclusion：CL was more stable ,more sensitive and better reproducibility than ELISA whereas ELISA was less expensive and had a similar sensitivity with CL when AFP concentration was smaller than 400μg/L. 【Keywords】AFP (alpha fetal protein) ELISA (enzyme linked immuno-sorbent assay) CL (chemi-luminescence) 肿瘤已成为当今世界严重危害人类的疾病，死亡率仅次于心血管疾病居全球第二。
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（． １首都 医科大学附属北京天坛医院 实验诊断中心 ， 北京 １０５ ； ． ０００ ２北京倍爱康生物技术有限公司 ；
３ 安阳市肿瘤 医院 检验科 ） ．
摘要 ： 目的 建立检测 甲胎 蛋 白（ Ｆ ） Ａ Ｐ 的磁分 离酶联免 疫法 （ ｇｅｃａｍｔ ｉｍ ｎａｓｙＭＡ Ａ 。方法 Ｍａｎｔ ｆ ｉ ｕｏｓ ， Ｉ ） ｉ ｙｍ ａ
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文章编号 ：０７ ２７ ２０） Ｉ ４７ ４ １０ —４８ （０８ ｌ 一１２ —０
磁 分 离 酶联 免 疫 法 检测 Ａ Ｐ Ｆ
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关键词 ： 甲胎 蛋白 ； 磁分离酶联 免疫法 ； 碱性磷酸酶
中 图分 类 号 ： ３２ ３ １ ９ —３ １ 文献 标 识 码 ： Ａ
Ｍｅｈ ｄ ｌｇｃｌＳｕ ｙＯｌ ｇ ｅ ｃＡｆｉ ｔ ｍｍｕ ｏ ｓａ ｏ ｔｃ ｎ Ｐ Ｈ Ｎ ｉ－ ， Ｈ ｔｏ ｏｏｉａ ｔ ｄ ｉＭａ ｎ ｔ ｆ ｙＩ ｉ ｍｉ ｎ ａｓｙｆｒＤｅｅｌ ｇＡＦ Ａ Ｊｎｌ ｉ ｉ Ｚ ＯＵ ａｌ Ｚ ＮＧ 卿 ， Ｙ － ， ＨＡ ｉ
率 １１４ 一１ ．％ ， ０ ．％ ０ ９ 稀释 回收率 ７ ．％ 一１３ ４ ８３ ２ ％。与雅培 Ａ Ｓ Ｍ及 ｉ１０的检测结果对 比 ， ｘＹ ２３ ０ 相关系数分别为 Ｏ９４和 ．８ Ｏ９５ ．８。结论 ＭＭＡ法的性能 优于现有 的 Ｅ ｔＡ和 ＰＡ试剂盒 ， ＬＳ ｄ 接近进 口同类试剂 的水平 ， 有助 于为市 场提供一种高 质量而价廉的 Ａ Ｐ测定试剂盒。 Ｆ
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抗体夹心法 ， 用异硫氰 酸荧光素 （ｕｒ ｃｉ ｉ ｔｏｙ ａｅｖｒ ） ｌ ｓ ｎｓｈ ｃ ｔ ｆ ｏｅ ｅ ｏ ｉ ｍａ ，ｒｃ 和碱性磷 酸酶 （ ｋｌｅｐｏｐａ ｓ， Ｐ 分别标 记识别不 ， ａｎ ｈｓｔｔｅ Ａ ） ａｉ ｒａ
同表位的两种抗 Ａ Ｐ单克隆抗体 （ Ａ ）Ａ Ｆ ｍ ｂ ４ ３和 ５ ７ 以偶联羊抗 Ｆｒ Ａ 包被的免疫磁珠作为固相 载体 ， Ｈ， ｒｃ ｍ ｂ 单磷酸酚酞
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