血清肌酸激酶CKDGKC推荐方法测定作业指导书

血清肌酸激酶CKDGKC 推荐方法测定作业指导书
1. 实验原理
德国临床化学学会(DGKC)和国际临床化学学会(IFCC)
推荐的连续监测法。

ADP + 磷酸肌酸 肌酸 + ATP
ATP + 葡萄糖 ADP + 葡萄糖-6-磷酸
葡萄糖-6-磷酸+NADP +
6-磷酸葡萄糖酸+NADPH+H +
NADPH 在340nm 处有特异吸收，通过测定NADPH
生成速率计算出CK 活性。

2. 标本：
2.1 病人准备：无特殊要求。

2.2 类型：血清，肝素或EDTA 血浆。

3. 标本存放：稳定性：2～8℃保存稳定7天;15～25℃保存稳定1天;-20℃保存稳定4周（避光保存）。

3天内的活性损失：2～8℃保存24小时或18～22℃保存1CK 己糖激酶(HK)
(G6P-DH)
小时至少损失10%。

4. 标本运输：常温条件下保存运输。

5. 标本拒收标准：细菌污染的标本。

6. 实验材料
6.1 试剂利德曼CK测定试剂盒（试剂 1 6×64ml 试剂2 6×16ml）
6.1.1 试剂组成：
试剂1（R1）+试剂2（R2）：
咪唑缓冲液pH6.7 100mmol/L 磷酸肌酸30mmol/L
葡萄糖20mmol/L
N-乙酰半胱氨酸（NAC）20mmol/L
EDTA-Na22mmol/L
ADP 2mmol/L
NADP 2mmol/L
二腺苷-5'-磷酸10μmol/L 6-磷酸葡萄糖脱氢酶（G6P-DH）>1500U/L
已糖激酶（HK）>2500U/L
6.1.2 试剂准备：试剂为即用式。

6.1.3 试剂稳定性与贮存：试剂避光保存于2～8℃，若无污染，可稳定至失效期。

试剂不可冰冻。

6.1.4 变质指示：当试剂有看得见的微生物生长，有浊度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不能继续使用。

6.1.5 注意事项：试剂中含叠氮钠（0.95g/L）为防腐剂。

不可入口！避免接触皮肤及粘膜。

应采取必要的预防措施使用试剂。

6.2 校准品：使用DiaSys公司提供的TruCal U校准品对自动分析仪进行校准，具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。

6.3 质控品：具体参见生化检验校准品和质控品.SOP 文件。

7. 仪器：奥林巴斯AU1000生化分析仪
8. 操作步骤
8.1 项目基本参数：参见AU1000生化分析仪项目测定参数.SOP文件
8.2 仪器操作步骤：参见AU1000生化分析仪操作规程.SOP文件
9. 检验结果的判断与分析
10. 质量控制：在每一批标本中都应把非定值血清水平I与II质控做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。

质控规则参见室内质控操作规程.SOP文件。

11. 计算方法：以TruCal U复合校准品CK校准值校准仪器后，在病人结果可报告范围内，仪器直接报告可靠的检测结果。

不使用校准品进行CK活力检测，可以直接使用ΔA/min均值乘以计算因子得到结果，但是这样所得结果的可靠性不如使用校准品。

计算CK 活力的计算因子见下表：ΔA/min×因子= CK活力[U/L]
计算因子（37℃）：340nm 4127
334nm 4207
365nm 4729
12. 参考值范围[1]：（U/L）
成人：女性24～167
男性24～190
参考值因性别、年龄、饮食和地域的不同而有所差别。

根据好的实验室经验，每个实验室应建立自己的参考值。

13. 临床意义[1、2]：肌酸激酶（CK）主要由存在于肌肉中的同工酶（CK-M）和存在于脑中的同工酶（CK-B）组成。

在血清中CK形式为CK-MM，CK-MB，CK-BB和巨酶等的二聚物。

在心肌损伤或骨骼肌疾病时可以观测到CK活力的升高。

CK和CK-MB一起检测有助于心肌梗死的诊断和监视。

14. 操作性能
14.1 线性范围＜1200U/L
14.2 精密度：精密度的评估是根据NCCLS推荐的标准方法，AU1000批内精密度小于3%，总精密度小于3%。

用于分析的质控血清和数据处理符合以上的NCCLS的规则。

批内精密
度
n=20
x
(U/L)
s
(U/L)
CV
(%)
批间精密
度
n=20
x
(U/L)
s
(U/L)
CV
(%)
样品1 159 3.18 2.00 样品1 49.5 1.05 2.12 样品2220 1.54 0.70 样品2157 1.63 1.04 样品3508 3.69 0.73 样品3228 2.31 1.01 14.3 方法学比较：本公司的试剂盒(y)与某商品化试
剂盒(x)，同时对71个样品进行CK活力检测，将检测
结果作方法学比较，其统计结果如下：y=0.98x+0.02
（U/L）；r=1.000。

14.4 灵敏度：本试剂的检测限为5U/L。

14.5 病人结果可报告范围：5-1200U/L。

16. 病危报警值的处理：无。

17. 方法局限性
17.1本法对CK活力的线性上限为1200U/L，当测定值。