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二甲基亚砜(DMSO)对泥鳅精子运动的影响

二甲基亚砜(DMSO)对泥鳅精子运动的影响

第29卷第4期2016年12月聊城大学学报(自然科学版)Journal of Liaocheng University(Nat. S ci.)Vol. 29 No. 4Dec. 2016甲基亚砜(DMSO)对泥鳅精子运动的影响°刘国翠胡家会(聊城大学生命科学学院,山东聊城252059)摘要泥紙(M i叹M rw wi awgMiZZicawiiaiM5 )的精子,在精装和等渗的电解质溶液中不运动,在 蒸馏水、低渗的电解质和非电解质溶液中与其它淡水鱼类精子运动没有明显区别.在高渗的二甲 基亚砜D M S0溶液中,泥鳅精子的运动表现为随着溶液浓度的升高,激活所需要的时间越来越长,最大运动率逐渐降低,运动时间相对延长.为此,提出渗透压调节精子运动的假说.关键词泥鳅,激活,精子运动,渗透压中图分类号 Q959 文献标识码 A文章编号 1672-6634(2016)04-0028-03泥嫩(MiigMrwMi awg"M iZZicaM<iaiM5)隶属于趣形目(C yfriw i/cirT O e5)、嫩科(Cotoiiiae),具有生长快和 适应环境广等特点的淡水经济鱼类,肉质细嫩、味道鲜美、营养丰富,经常食用还对多种疾病有显著的预防 和治疗作用,也是我国传统的外贸出口商品[1].由于国内外对泥鳅需求量的增加,自然繁殖远远不能满足 市场需求,为此不少学者对泥鳅的人工繁殖进行了研究[2].泥鳅精子运动能力是影响人工繁殖的重要因素 之一,只有少数学者对其进行了初步研究[3,4].鱼类是体外受精的典型水生动物,N aC K K C l等电解质对鱼类精子运动的影响有较多研究,而小分子 有机质对精子运动的影响研究较少.本文探讨二甲基亚砜(DMSO)对泥鳅精子运动的影响,以揭示泥鳅精 子运动的机理,为泥鳅人工受精及精子的冷冻保荐积累一些资料,并为提高种苗的繁育提供参考.1材料与方法1.1实验材料试验用泥鳅购于山东省聊城市交运农贸大市场,选购性腺丰满且发育成熟的个体.回到实验室后,先 在10 mg/L的KMn04溶液中浸泡10 m in杀菌消毒,饲养在曝气3 d以上自来水的玻璃缸内,每缸30尾 雄性泥鳅,连续充气,每天喂食两次、换水约1/5体积.1.2精液的获得与保存随机从玻璃缸中取健康、性成熟的泥鳅,在清水中冲洗,吸去体表的水,称重、测体长,解剖取精巢.按 1 : 10(W :V)将精巢放在保存液中,用眼科剪剪碎,让精子溢出,离心1mm(300转/mm),弃去组织碎 块,制成精子悬液,保存在4S C冰箱内,在24 h内完成实验.1.3精子激活液的配制参照H u等(2009)[5[的配制方法并加以改进.用双蒸水配制泥鳅精子保存液(精子保持静止),其保存 液含 135 mM NaCl、10 mM K C1、1mM CaCl2 和 10 mM Tris-HCl (pH7_ 5),渗透压约为 300 mOsm/kg.把一部分保存液用蒸馏水稀释,制成渗透压分别是50、150、250、270 mOsm/k g的泥鳅精子激活液(激活 精子运动).①收稿日期:2016-07-21基金项目:国家自然科学基金项目(31270458)资助通讯作者:胡家会,E-mail:hujiahui@.第4期刘播攀等:二甲基亚砜(DMS .Q )对泥鳅精子运动的影_响29150 250渗透压/毫渗图1泥鳅精子4^蒸馏水中的运动 图2泥鳅精子在稀释的保存液中的运动泥鳅精子在£〇和150 m Osm /kg 的稀释液中,与在蒸馏水的运动没有显著区别.随着稀释濬液渗透压的升高,精子运动'率逐渐降低,运动时问相对增长(图2).泥鳅精子在不同浓度(渗透压)D M SO 濬液中的运动,与在稀释的保存液和蒸馏水中的运动不同,在1%的DMSO I 容液(渗透應为140 mOsm /kg )中,精运动被立即激活;在2%的D M SO 溶液(渗透压为280mOsm /kg )中,经过5 s 后,精子才逐渐被激活,随着时f间的延长,精子运动率不断升裔,激活60 s 左右时.精予运动达到最大值左右X 随着D M SO 溶液浓度的进一步升高,运动激活所需要的时间越来越长,最高激活率越来越低,但运动的时间相对延长.舎1DM SO 溶液的浓度最高达8 %时,激活所需要的时间最长,最大激活率只有35 %左右运动速度减慢,但泥鳅精子的运动时间最长(图3).这一歲与D M S O 对玫瑰无须鈀精子运动祕幡果-图3泥鳅擀乎在_ DM S .0瑢液中的运动在预实验的基础上…用双蒸馏水配制不同浓度D M S O 的精子激活液,确定D M S O 溶液的浓度为2%、4氣8^体积分数)四个禅度,其:渗透压分规是相_于140、280、560和112〇111(33131/1^.1.4精子运动的观察首先,观察精子在精浆、保存液和蒸馏水中的运动情况,再观察精子在不同渗透压的保存液稀释中的 运动状态.最后,观察精子在不同渗透压DMSO 溶液中的运动百分数和运动时间,实验均在:室温(_24 TO 下进行.观察精子运动时,取5 泥鳅精子悬浮液*董于干净的载玻片上,与45 不同种类、不同渗透压的激活液混合,快速混匀,在光镜(/ 200)下肉眼观察精子运动情况.混合5 s 时,第一次宏观计数精子运动 百分数,然后每隔60 S 连续记^录精子运动,直到精子停止运动(即运动率小f >5 %时,视为不运动并记录 精子运动的时间.2实验结果实验用泥鳅,.平.均体重为C :8:.58 ± 〇..553办事均体长为(.1_2...:&_9 ± «X =S 1) cm _在靈温(24 'C )下,泥鳅精子在精浆中不运动,在保存液中也不运动._蒸馏水中,泥鳅精子的运动率高达似.2 ± 4最长运动时间为min (图1)>/s o o o 528456 1 1 2时 ■ ■ ■■o o o o o o o 7654321%/标烛屮軀o o o 5 43 2%/#标烛30聊城大学学报(自然科学版)第29卷3分析与讨论影响鱼类精子运动的因素有多种,外界溶液的渗透压是影响其运动的最重要因素[5].—般来说,硬骨 鱼类的精子在精浆中和等渗的电解质与非电解质溶液中均不运动,当淡水鱼的精液稀释到低渗的淡水中 或海水鱼的精液稀释到高渗的海水中时,不运动的精子立即被激洗,产生运动,当与同种的成熟卵细胞相 遇时,完成受精作用[7'8].3.1泥鳅精子在电解质溶液中的运动实验结果表明,泥鳅精子在蒸馏水和低于250 mOsm /k g 稀释保存液中的运动情况非常相似.当与实验溶液混合时,泥鳅精子运动立即被激活,随着激活时间的延长,精子运动率逐渐减少,同其它淡水鱼精子 在低渗的电解质溶液中的运动有非常相似的表现,即外界溶液的渗透压低于细胞内的渗透压时,精子吸水 即产生运动,但作用机理还没有进行深人探讨[9—11].3.2精子在非电解质溶液中的运动D SM O 是一种含硫有机化合物,具有很强的渗透性,能迅速透人细胞,降低冰点,提高细胞膜对水的通透性,延缓冻结过程,能使细胞内水分在冻结之前透出细胞外,在胞外形成冰晶,提高细胞内的电解质浓度,减少胞内冰晶,从而减少冰晶对细胞冻伤,在精子和卵细胞的冷冻保存过程中起到重要的作用[12as].泥鳅精子只能在低渗的电解质溶液中运动,为什么能在高渗的非电解质D M SO 溶液中运动呢?用现有的鱼类精子生物学知识还没法解释.为此,我们提出渗透压调节精子运动的机制假说(图4).在低渗透压的溶液中,泥鳅精子吸水,精子运动立刻被激活.当泥鳅精子稀释到高渗透压的D M SO 溶液 时,由于外界的渗透压高于细胞内的渗透压,所以精子细胞失水,D M SO 也不断进人精子细胞,这时精子 细胞保持不运动.由于水分子进人细胞的速度快,而D M SO 进人细胞的速度慢,当水分子达到细胞内外平 衡时,D M SO 分子还没有达到平衡.当D M SO 继续进人细胞时,水分子开始流出细胞(失水),这时精子运 动被激活.所以,在高浓度的D M SO 溶液时,精子运动启动的时间被延迟,D M SO 溶液浓度越高,延迟激 活的时间越长.当细胞内外D M SO 达到平衡时,水势也达到新的平衡,即精子运动停止.推测结论:细胞内外水势差的存在是精子运动启动的动力,当精子细胞内外存在水势且吸水时,水势 能直接或间接启动了细胞内A T P 的代谢途径,激活泥鳅精子产生运动.参考文献[1] 张继华.陆元康水中人参”—泥鳅[]].烹调知识.2006,4:14-15.[2] 李凤龙.谢宜涛.泥鳅养殖生物学及池塘养殖技术[]].吉林渔业.2G G 8.4:10-12.[3] 苏应兵.廖咏玲.杨代勤.等.3种单糖对大鱗副泥鳅精子活力的影响[]].长江大学学报:自然科学版.2011.12:242-244.[4] 阮国良.冯家斌.杨代勤.渗透压、p l l 和温度对泥鳅精子活力及受精率的影响[J ].湖北农学院学报.2004.1:22-25.[5] A lavi S M II,C o sso n J . Sperm m otility in fishes (II ) Effects of ions and o sm o lality : A review [J ]. Cell Biology Internation al , 2006,30: 1-14.[6] 张玉博.淡水鱼精子运动及其在有机磷农药急性毒性检测中的应用研究[D ].聊城:聊城大学,2010.[7] IIu J,Z h an g Y , Zhou R , et a l . C hanges in ex tracellu lar osm olality in itiate sperm m otility in fresh w ater teleost rosy barb PunLius co n -ch on iu s [J ]. T h eriogeno logy , 2009,72: 704-710.[8] Cosson J ,L inhart O , M im s S D . A n alysis of m otility param eters from padcllefish (P olyodon sp ath u la ) and shovelnose sturgeon(Scaph irhyn ch us platorynchus ) sperm atozoa [J ]. J Fish B io lo gy ,2000,56: 1 348-1 367.图4渗透压调节精子运动机制(下转第55页)第4期邱汉周等:西安浐灞生态区园林植物生态补偿效应研究55Xi?an Chanba Ecological Region Study on Ecological Effect of Landscape Plant QIU Han-zhou1,2,3ZHAO Gui-fang2YE Lei1(1. Post-doctoral Research Station of X i?an Chanba National Ecological District, Xi? an 710024 ,C hina;2. School of Life Sciences,Northwest U niversity, Xi?an 710127 ,China;3. A rts Department,Ningde Normal University»Ningde 352100 »China) Abstract Mechanism of effect of ecological compensation is to solve market failure caused by the ecological benefit of externalities,maintain social fairness development of ecological environment,and to maintain the eco­system function to motivate people and to maintain economic means,so as to protect the environment and eco­system balance.Article Xi?an Chanba biome necessity and urgency of the implementation of ecological compen­sation measures are studied and discussed,in the grasp of the current ecological environment benefit and effect of ecological compensation at home and abroad development model,according to the current existing theory achievement,field investigation,case analysis of a typical project,arrange biome ecological compensation effect of related theories and practical cases,draw lessons from successful experience,conclude that the Xi?an Chanba biota evolution and characteristics of landscape plants,and the Chanba biome probes into the mechanism of action of the surrounding environment and research,considering action Ba ecological system service value and the level of economic development,with ecological garden plant ecological externality and fairness as a starting point,discusses the area?s ecological construction,and the developed countries of the theory and practice of compensation for ecological benefits of experience are analyzed and summarized,finally combining Chanba biome own environmental characteristic,put forward the Chanba biome garden plant ecological compensation effect of research methods,hope to Chanba ecological construction,especially in garden plant will provide a scientific basis for ecological compensation effect.Key words Chanba ecological district,effect of ecological compensation,garden plants,planning and design(上接第30页)[9] Krasznai Z»Morisawa M,Krasznai Z T»et al. Gadolinium»a mechano-sensitive channel blocker»inhibits osmosis-initiated motility ofsea- and freshwater fish sperm, but does not affect human or ascidian sperm m otility[J]. Cell Motil Cytoskel, 2003,55: 232-243.[10] Morisawa M ,Suzuki K. Osmolality and potassium ion:their roles in initiation of sperm motility in teleosts[J]. Science,1980,210:1 145-1 147.[11]Morisawa M,Suzuki K,Morisawa S. Effects of potassium and osmolality on spermatozoa motility of salmonid Iishes[J]. J Exp Biol1983b, 107:105-113.[12] Cabrita E» Robles V» Alvarez R» et al. Cryopreservation of rainbow trout sperm in large volume straw s:application to large scalefertilization[J]. Aquaculture,2001, 201 :301-314.[13] Cabrita E» Alvarez R» Anel L» et al. Sublethal damage during cryopreservation of rainbow trout sperm[J]. Cryobiology, 1998, 37:245-253.The Discussing on Loach Sperm Motility Affected in Two Kinds ofSmall Molecule Organic SolventsLIU Guo-cui HU Jia-hui(School of Life Sciences, Liaocheng University, Liaocheng 252059, China)Abstract Loach sperm was motionless in the seminal plasma and isotonic fluid,and sperm motility in hyponotic electrolyte and non electrolyte solutions were no significant differences comparison with in distilled water.Loach sperm motility in hypertonic dimethyl sulfoxide solution showed that the activa­tion of sperm motility was more long time,and maximum rate of that was lower,and time of that was more long with the increases of the concentration of the solutions.To this end,the hypothetical mecha­nism that was osmotic pressure regulates sperm motility was proposed.Key words loach,activation,sperm motility,osmotic pressure。

硫酸铜对泥鳅的急性毒性实验

硫酸铜对泥鳅的急性毒性实验

硫酸铜对泥鳅的急性毒性实验何忠伟 09级水产养殖学摘要:采用改进寇氏法,分为预实验和正实验两部分。

用一定浓度梯度的硫酸铜溶液对泥鳅进行毒性实验,但并未得到预想的开始致死浓度、全部死亡时的最小浓度以及半致死浓度数据,实验以失败而告终。

但实验最后进行了讨论,希望能有借鉴之处。

实验目的:一、确定硫酸铜的毒性强度。

二、计算硫酸铜的治疗指数即安全浓度、全部死亡时的最小浓度和半致死浓度。

三、观察毒性症状,为临床检测硫酸铜的毒性提供参考和依据。

四、为亚急性、慢性毒性的实验设计提供参考资料。

1.材料与方法1.1 实验药物硫酸铜固体分析纯河北省保定化学试剂厂生产批号xk 13-001-0208-0126 1.2实验器具500ml、100ml、80ml烧杯各一个,2ml、5ml各一个,塑料盆7个,塑料桶1个。

1.3实验泥鳅及环境挑选健康、无病、无外伤的泥鳅作为实验用鱼,体重平均3.52g,平均体长8.8cm。

使用实验室的自来水。

1.3 实验方法首先进行预实验:先根据老师提供的以往实验浓度适当的扩大和缩小几个跨度很大浓度以及对照组进行实验。

找出2h内刚开始死亡和全部死亡时的浓度,得出ILL 和LC100。

再根据得出的ILL和LC100按等间距设置五个梯度浓度组和一个对照组,进行正实验。

实验所用药液采用先配制母液1/25(40.0ppm)。

根据所需要的浓度将母液稀释成所需要的浓度, 将实验泥鳅按低浓度到高浓度逐次放入, 实验开始时进行连续观察, 然后纪录各浓度的泥鳅活动状况、死亡数及存活数。

泥鳅死亡的标准以镊子夹住其口裂、腮盖、鳍条, 身体完全不动, 将其放入清水中, 5 min仍不动为死亡。

1.4 半致死浓度的计算LC50=lg-1[x m-i(∑p-0.5)]x m-最大剂量的对数i-相邻量计量的比值p-各组的死亡率,用小数表示2 结果与讨论2.1实验结果预实验数据分组 1 2 3 4 5 6 7泥鳅数量(条)10 10 10 10 10 10 10 加水容量(L) 4 4 4 4 4 4 4加母液量(ml)0.0 8.0 10.0 12.0 19.0 21.0 23.0 药品浓度(ppm)0 80 100 120 190 210 230泥鳅的活动状况活动正常,时而上游,时而静伏盆底,呼吸均匀。

遗传学论文3(1)

遗传学论文3(1)

Cu2+对泥鳅红细胞微核的影响张晋,王馨【摘要】采用硫酸铜对泥鳅进行染毒试验,用常规方法制备血涂片,以研究其不同浓度范围(0.05mg/L—0.4mg/L)对泥鳅红细胞核异常和微核的诱导效应。

结果表明:硫酸铜能不同程度地引起泥鳅红细胞核异常率的升高,各处理组泥鳅红细胞微核的出现率随铜离子浓的增加先增加后减少再增加的趋势,不具有一定的剂量-效应关系。

【关键词】Cu2+;泥鳅;红细胞微核;核异常近年来,大量工农业生产的废弃物被排到江河湖泊,其中的重金属在水体中不易被降解,重金属通过食物链在鱼体中积累,会对鱼类产生毒害作用。

微核试验是20世纪70年代由Heddle(1973)和Schmid(1975)分别独自创立的,是检测细胞遗传损伤的指标和检测化学物质毒性的一种常规方法。

该方法已经被广泛应用于检测和监察各种理化因子对机体的致癌、致突变效应。

泥鳅的血红细胞具核,在外来诱变剂的作用下会出现微核和各种核畸变现象。

近年来学者将泥鳅作为研究水体污染的材料,取得较好效果。

泥鳅在实验室易于饲养,分布广泛,取材容易,易于涂片,且具有较高的敏感性等优点,因而常被用于检测水体的污染情况。

因此,可用泥鳅作为评价水体污染和化学物质对水生生物遗传损害及毒理效应的指示生物。

泥鳅对环境中低浓度的污染物较为敏感,微核试验已广泛应用于化学物质、重金属、除草剂及食品添加剂等对泥鳅遗传毒性的影响的研究。

实验以泥鳅为研究对象,探讨Cu2+对泥鳅红细胞微核、核异常等遗传指标的影响,为环境监测提供参考和数据。

1 材料与方法1.1 材料1.1.1 实验动物泥鳅30条(泥鳅购大学城永辉超市,体长10±2.0)cm,在曝气的自来水中暂养3 d,实验时选用体重相近、体表无损、健康活泼的个体作为试验材料。

1.1.2 主要试剂分析纯CuSO4·5H2O用蒸馏水配置成10 mg/L母液,再稀释成所需的浓度;吉姆瑞氏混合染液,使用前用0.2 mol/L 磷酸缓冲液(pH值6.8)稀释10倍。

Fe2+对雄性泥鳅生殖毒性的研究

Fe2+对雄性泥鳅生殖毒性的研究

Fe2+对雄性泥鳅生殖毒性的研究摘要:以泥鳅(Misgurnusanguillicaudatus)精子为受试材料,应用计算机辅助精子分析(CASA)系统,研究了亚铁离子(Fe2+)对雄性泥鳅的生殖毒性。

在预实验的基础上,设置30、60和300μmol/L3个Fe2+浓度梯度。

泥鳅精子暴露0、0.5、1.0、2.0和4.0 h后激活,测定运动百分数、时间和速度等精子运动参数。

结果表明,60mol/L的Fe2+溶液明显影响泥鳅的精子运动时间和相对速度(P<0.05)。

高浓度的Fe2+能够抑制泥鳅精子运动,对泥鳅具有潜在生殖毒性作用。

关键词:亚铁离子(Fe2+);泥鳅;精子运动;生殖毒性Abstract:ReproductivetoxicityofFe2+onthespermofloach(Misgurnusanguillicaudatus)wasexaminedbyaComputer-AssistedSemenAnalyzer(CASA).Basedonthepreliminaryexperiment,theloachspermwasincubatedinpreservationsolutionscontainingFe2+(30,60,and300μmol/L)for0,0.5,1.0,2.0 and4.0 h,respectively.Thepercentage,duration,andvelocityofspermmotilityweredeterminedinactivatorcontainingthesameconcentrationofironionofpreservationsolutions.Theresultsshowedthatthedurationandrelativevelocityreducedsignificantly at60mol/LofFe2+(P<0.05).Theresultssuggestedthathighconcentrationofferrousionswouldsignificantlydamagethespermmotilityoftheloach,andmighthaveharmfuleffectontheloachreproduction.Keywords:ferrousion;loach;spermmotility;reproductivetoxicity铁是动物体内必需的微量元素,是血红素、细胞色素的重要组成部分,可参与多种生命活动过程,机体内的铁代谢平衡是保证生命活动正常进行的基础[1]。

答辩有机磷和重金属对泥鳅精子的细胞毒性

答辩有机磷和重金属对泥鳅精子的细胞毒性
有机磷对泥鳅精子运动影响
结论 有机磷农药降低
泥鳅精子运动 能力 ➢ 敌敌畏、马拉 硫磷、辛硫磷 及甲拌磷对精 子运动表现显 著抑制作用浓 度分别是 250、50、25 和10 M 。 ➢ 四种有机磷农 药对泥鳅精子 运动百分数影 响不显著。 ➢ 在时间维度 上,有机磷对 精子运动影响 较小。
运动率/%
药品处理
活性
运动能力
酶系统
存 活 率
细胞计数法
运 动 率
运 动 时 间
相 对 速 度
运 动 轨 迹
精子运动计算机辅 助分析(CASA)
SOD 活 性
羟胺法
污染物生物检测体系指标筛选和优化
答辩有机磷和重金属对泥鳅精子的细胞毒性
脂质过氧化 细胞损伤
MDA 积 累 量
TBA法
检测指标 检测方法
第4页
三 结果与讨论
鱼类生殖
研究意义:
➢ 为铜、铁离子在水产养殖中应用提供理论依据。 ➢ 为有机磷和重金属毒性评价补充基础资料。 ➢ 为鱼精子毒理学在环境检测中应用补充基础资 料,以完善相关指标体系。
答辩有机磷和重金属对泥鳅精子的细胞毒性
第3页
喂养鱼
二 材料与方法
1.2 技术路线
取精巢
精子悬液
取材
重金属 有机磷农药
暴露
Cu2+
答辩有机磷和重金属对泥鳅精子的细胞毒性
第11页
有机磷和重金属对泥鳅精子脂质过氧化作用
MDA/10-8nmol
45 40 35 30 25 20 15 10
5 0
DDV
图表标题
control 50µM
5µM 500µM
malathion
Phoxim

几种化学物质对蟾蜍蝌蚪生存及生长发育的影响

几种化学物质对蟾蜍蝌蚪生存及生长发育的影响

几种化学物质对蟾蜍蝌蚪生存及生长发育的影响摘要:在室内条件下,采用单因子急性和慢性毒性实验法,分别研究了水环境中的pH、洗涤剂、除草剂、重金属离子(Pb2+、Cu2+、Hg+)对黑眶蟾蜍蝌蚪的毒性效应。

结果表明,这些水体污染物不但对蝌蚪的生存造成危害,还对蝌蚪的红细胞有致畸作用;而其慢性毒害表现为蝌蚪身体畸形,肤色变浅,生长发育迟缓等.据此,可以利用黑眶蟾蜍蝌蚪对水污染进行监测。

关键词:化学物质;生长发育;蝌蚪;黑眶蟾蜍水体污染对水生生物造成极大的危害。

消除或减轻污染,关键问题在于对环境进行有效的监测。

两栖动物具有水陆两栖独特的生活周期,依赖水环境而生存,所以水体的质量将会对蝌蚪的生长发育产生巨大的影响,通过观察蝌蚪的形态行为特征,可以对水体进行质量评价。

蝌蚪是两栖动物变态前的幼体阶段,因其细胞分裂旺盛,对环境的变化极为敏感,因此是监测环境的适宜指示物种。

国外学者较早利用蛙类及蝌蚪对农药污染进行监测。

美国在1989年就明确提出将两栖动物作为环境质量监测的指示生物。

国内此类研究起步较晚,直到20世纪90年代初才见报道,并且已有的研究主要是对水体中的某一重金属及除草剂等有害物质的监测,贺维顺等用国产洗衣粉进行了对蝌蚪红细胞微核率影响的致突变研究,发现其有一定的剂量效应关系,且能诱发染色体损伤,而对水体的酸碱度的监测报道则很少。

本文报道了不同pH的水体、不同浓度的除草剂、洗涤剂以及重金属溶液对黑眶蟾蜍蝌蚪的存活与生长发育的情况以及对红细胞微核产生的影响,从宏观和微观不同层次上综合分析污染危害程度,为环境评价,污染预报和污染物危险性提供依据,也为保护两栖类和其它水生动物以及探寻更为有效的环境生物学监测方法提供科学依据。

1材料与方法1.1 实验材料春季在华南师范大学生物试验场捕捉成熟的雌雄黑眶蟾蜍(aufo melanostictus Schneider),将其放于孵化池中产卵,以蝌蚪作为实验材料。

蝌蚪喂以混合性饲料(含面粉,鱼粉,大豆粉,维生素等),每日早晚各一次。

锌_铜_硒对动物生殖的影响

锌_铜_硒对动物生殖的影响

上海实验动物科学19(4):236~238,1999·综 述·锌、铜、硒对动物生殖的影响沈志明1 富群华2(1上海第二医科大学实验动物科学部,上海200025;2上海实验动物研究中心) 生物机体约由30种元素组成。

动物必需元素包括常量元素和微量元素两大类。

习惯上,人们把含量低于0.01%的元素称为微量元素,高于0.01%的元素称为常量元素。

已知必需常量元素有钙、磷、钾、钠、氯、硫、镁等7种;必需微量元素有铁、碘、铜、锰、锌、硒、钴、钼、铬、氟、镍、钒、硅、锡等14种,其中锌、铜、硒是影响动物生殖的最重要的微量元素[1]。

1.锌、铜、硒对雄性动物生殖的影响(1)锌 人和动物的精液中含有大量的锌,浓度高至0.2%。

缺锌能影响精子的形成、精子的代谢和活动力[2]。

在精子成熟之前大量的锌进入精子内,不仅对精子生成是必要的,而且对维持精原上皮的健康也是必要的[3]。

成年个体睾丸中锌的含量较高,而前列腺中的锌含量是所有器官中最高的。

锌缺乏首先影响血管紧张肽转化酶(ACE)的活性,转而导致睾酮耗竭和精子发生的抑制。

锌缺乏常使大鼠的精子发生一些缺陷,足量的锌有助于延长精子排出体外后的功能寿命[1]。

缺锌后动物对睾丸酮的反应低下,因而使睾丸的类固醇生成也低下。

锌缺乏可延缓男性第二性征发育,在大鼠上的组织病理改变为曲细精管萎缩、睾丸发育减缓,此外,附睾及前列腺的发育也减慢,睾丸精原上皮萎缩,锌缺乏还使成年动物发生性腺萎缩及纤维化[3,4]。

但锌的过量摄入也会损害雄性生殖器官,如给鸡、鹌鹑、大鼠及仓鼠的睾丸内注射锌制剂(如ZnCl2,Zn(NO3)2或ZnSO4),可发生睾丸癌肿及畸胎瘤。

不过,在一般情况下,动物不易发生锌的过量摄入。

(2)铜 铜对受精、胎儿发育是必需的。

铜含量过低能抑制雄性动物发情,使繁殖力减退。

O'Dell等首先发现铜缺乏可使大鼠精子活力下降[5]。

各种动物中,绵羊和未成熟牛对过量铜特别敏感,易受过量铜的危害,影响精子形成[6]。

泥鳅人工授精

泥鳅人工授精

泥鳅人工授精的方法时间:2010-06-29 16:16:45 来源:新民养殖网作者:冬冬人工催产后的泥鳅,可以再网箱中让其自行产卵受精,也可进行人工授精。

人工授精的优点:可获得更多的受精卵,提高亲鳅的利用率。

泥鳅人工授精的方法:一、适时人工授精。

认真观察网箱中亲鳅的动静,若发现雌、雄亲鳅追逐渐频,特别是雌鳅呼吸急促,则说明发情高潮来临了,这时候挤压雌鳅腹部会流出金黄色的卵子,卵子游离。

亲鳅的授精时间到了,应马上做好准备,进行授精。

二、制备精液。

剖腹取出贴在背椎两侧的泥鳅精巢。

解剖后将2条乳白色的精巢用镊子轻轻取出。

然后将其放入研钵中研磨,并以1尾雄鳅精液加入15毫升林格氏液的比例将林格氏液立即冲入即可。

三、人工授精。

制备好精液后,人工授精可立即进行。

将雌泥鳅的体表水用干净毛巾擦干,一人用毛巾将成熟的雌泥鳅裹住,露出肚皮,用手轻轻挤压雌鳅腹部,将成熟卵子挤入干燥的白搪瓷盆;另一人将规格为20毫升的注射器(不用针头)吸取配好精液浇在卵上;第三人一手托住白瓷盆轻轻摇晃,另一手用羽毛轻轻搅拌,数秒钟后,加入少量清水,以增强精子的活力,使卵子与精子充分结合。

然后将完成授精操作的卵子漂洗几次,倾出血水,放入孵化设别中孵化。

泥鳅人工授精技术(图)来源:未知时间:2009-5-13 16:43:09 查看次数:1069次文章导读:人工授精,就是让人来给泥鳅注射催产激素,然后用人工授精的方法得到受精卵的过程。

如果让泥鳅自然产卵,每条雌鳅产卵的时间不同,有早有晚,有的从4月下旬就产卵了,而有的能拖到8、9月份才产卵,这样很不方便生产管理,费时费力费工。

人工繁殖可以使亲鳅集中产卵,使卵集中孵化,可以得到大量的、规格一致的鳅苗,有利于规模华生产。

所以,有技术、有经验的养殖户,最好实行泥鳅的人工繁殖。

1.准备人工催产工具进行泥鳅催产,应准备的常用工具有:小研钵2个,用来研磨脑垂体和精巢;1~2毫升注射器数个和4号注射针头数只,用来注射催产药物;剪子、手术刀、镊子各2把,用来摘取雄鳅精巢;家鹅的硬羽毛数支,用来搅拌精液和卵子;500毫升或1000毫升棕色玻璃瓶1个,用于存放格林氏液;10毫升或20毫升吸管2支,用于吸取格林式液;500毫升烧杯数只,用于存放卵和精液;数条毛巾,用于注射时包裹亲鳅;木桶或水盆数只,用于催产前存放亲鳅(图6)。

硫酸铜引起鱼类中毒的原因

硫酸铜引起鱼类中毒的原因

硫酸铜引起鱼类中毒的原因硫酸铜是治疗鱼病的常用药物,但因一些使用者不谙药性,常造成一些危害。

1病例例1:1987年3月,莲塘水产场用硫酸铜0.7g/m3杀灭亲鱼池青苔,三天后亲鱼全部死亡。

水质分析,氨含量0.35g/L。

例2:1999年8月30日至31日,南昌县八一乡养殖户所养的一口0.67hm2,水深1m的肥水鱼种池,因天气闷热,暴雨,连续两天死鱼,每天约10kg,主要是鲢鱼、草鱼种。

31日因检查有少量车轮虫而施硫酸铜4kg(合0.6g/m3)及晶体敌百虫3kg(合0.45g/m3)。

9月1日、2日大面积死鱼,共计约1000kg。

检查鱼体,未见其他症状。

例3:江西省农科院一口0.5hm2,水深0.9m,多年未清淤的鱼种池,1999年8月30日至9月3日死鱼共计145kg,主要为鲢鱼。

因水质较肥,3日中午施硫酸铜8kg(合1.5g/m3)杀藻类,4日~5日全池死鱼共计580kg。

死鱼先后依次为白鲢、鲤鱼、鲫鱼、草鱼,淡水白鲳死亡极少。

经检查除鳃部充血外,体表未见有其他异常病状。

例4:1999年9月1日,南昌县万湖水产场的两口面积共0.67hm2,水深3m的成鱼池,施硫酸铜11.5kg(合0.6g/m3),治疗指环虫病,翌日造成死鱼达500kg。

我们在现场注意观察到濒临死亡的鱼,呼吸明显加快,有些鱼体尚伴有痉挛症状。

例5:1999年7月25日,南昌县富山乡三山村专业户官兵,在承包的一处水面6.67hm2,水深2m 的封闭式老河道使用硫酸铜100kg(合0.75g/m3),当泼洒完硫酸铜后,即发现大批草鱼、鲤鱼、团头鲂、鲫鱼死亡,达1500kg,而未见鲢鳙鱼死亡。

翌日也再未发生死鱼现象。

以上几例所用硫酸铜,有效含量均为92~96%。

除一例外,其余均未超过常规用量。

2中毒原因2.1复合型中毒主要在高温、缺氧条件下引起。

例1、例2是典型例子。

国内有学者曾对白鲢作过试验,在水温16~30℃范围内,温度升高10℃,硫酸铜毒性增加1.7~1.8倍。

CuSO4对泥鳅胚胎发育的影响

CuSO4对泥鳅胚胎发育的影响

CuSO4对泥鳅胚胎发育的影响作者:邓万国来源:《农家科技下旬刊》2014年第09期摘要:本文研究了CuSO4对泥鳅胚胎发育的影响,结果表明:CuSO4对胚胎早期致畸作用不明显;对胚胎中后期(尾芽期)致畸作用明显,表现为尾芽变短,眼囊和头部发育不完全,身体弯曲,黑色素不明显;在相同的条件下,随着CuSO4浓度增大,泥鳅胚胎的成活率和孵化率降低,死亡率和畸形率上升;硫酸铜对泥鳅的24hLC50为1.362 mg/L,48hLC50 为1.132mg/L,安全浓度SC为0.2823mg/L。

关键词:泥鳅;CuSO4;胚胎发育泥鳅Misgurnus anguillicaudatus 属于鲤形目鳅科泥鳅属,味道鲜美,肉质细嫩,营养丰富。

如人们俗语所说:“天上的斑鸡,地上的泥鳅”,它是有名的美味佳品,素有“水中人参”之称。

目前CuSO4作为杀虫、灭藻、消毒药在水产养殖上广泛应用。

也有学者对泥鳅毒性试验有详细的报道,但CuSO4对泥鳅胚胎的影响没见详细研究报告。

为了进一步了解硫酸铜对泥鳅胚胎的毒性作用,我们做了硫酸铜对泥鳅胚胎发育的相关研究,提供有关基础数据。

一、材料与方法(一)材料试验用的泥鳅购自荣昌梅石坝养殖场,挑选体形端正,体质健壮,无病无伤,体色正常,性腺成熟,雄鳅在10~13cm体重达12g以上,雌鳅在15cm体重达18g 以上。

催产药物:绒毛膜促性腺激素(HCG),每尾注射600IU,雄性减半,CuSO4:其含量以CuSO4·5H2O计% ≥ 98.5%,9%的甲醛,曝气自来水,显微镜1台,培养皿18个,吸管1个,200mL量筒1个。

(二)方法于2014年5月人工催产、授精,获得受精卵。

受精卵在20±2℃室温条件下孵化,选择正常发育到原肠早期的胚胎进行试验。

1.试验分组:试验设5个药物浓度组和一个对照组,各浓度分别设3个重复,处理时间5 min;CuSO4浓度依次为0.5、1.0、1.5、2.0、2.5mg/L,对照组为曝气自来水。

硫酸铜在渔业生产中的危害

硫酸铜在渔业生产中的危害

产 生 一定 比例 的死 亡 率 , 果不 即时使 用增 氧 机 或 如
开增 氧 的时机 掌握不 好会 造 成大批 鱼苗 死亡 。 使 用硫 酸铜 后 由于 C 2 u+ 的毒 性 将 水体 的藻 类 、
浮 游植 物 完全 杀 灭 , 尸体 在 水体 中腐 烂分 解污 染 其 水体 , 耗氧 因子增 加 , 水 体 中 的造 氧生 物 消失 , 使 致 使水 体 严重 缺 氧 ,施 用 C z 3d内水 体 中溶 氧均 u+ 后 在 1 / . mg 5 L以下 , 使 鱼类 处 于失 去 生 理平 衡 的应 致 激状 态 , 掌握 不好 造成 苗种 死亡 率 高。
缓 胚 胎发 育时 间 ,对胚 胎 和 初孵 仔 鱼造 成 畸形 ; 对 仔 鱼 的毒性 主 要表 现 在活 力差 , 去 平 衡 和致 死 等 失 方 面 ; 鱼 苗 毒 性 可诱 导 鱼 类 细 胞 凋 亡 , 现 出较 对 表 高 毒 性 , 毒 性作 用 还受 到 其 他 因素 的 影 响 , 温 其 如 度 ,H值 和碱 度 ,u+ 引起 稚鱼 中毒 , 表 分 泌 黏 D C2 可 体 液增多 , 眼球 突 出 , 颅 和 鳃 充 血 , 脏 和 肠 道 淤 脑 肝
响 , 表现 出较 强 的毒性 , 可 引起 鱼类 中毒 死亡 。 中 国水 产 科 学 研 究 院 南 海 水 产 研 究 所 蔡 文 超 研 究 员 进 行 了重 金 属 离 子 铜 对 鱼 类 早 期 发 育 阶 段 的毒 性研 究 ,表 明 C 2 u+ 可穿 过 绒 毛膜 进 入胚 胎 、 对 鱼类 受精 卵 的毒性 作用 主要 表现 在 降低 孵 化率 、 延
杀 效果 很好 。在 渔业 生产 中 , 疗鱼 类寄 生纤 毛虫 、 治 鞭 毛虫 病 时常用 硫 酸铜 。有 时添 加 硫 酸亚 铁 ( e— FS

硫酸铜对泥鳅的急性毒性试验

硫酸铜对泥鳅的急性毒性试验

硫酸铜对泥鳅的急性毒性试验张淑红,谢卫兵大连水产学院,辽宁大连(116023)摘要:水温17.0~19.0℃,研究了硫酸铜对泥鳅的急性毒性作用。

结果表明:硫酸铜对泥鳅的24hLC50为4.17mg/L;48hLC50为2.06mg/L;96hLC50为1.25mg/L;安全浓度为0.125mg/L。

关键词:硫酸铜,泥鳅,耐受性硫酸铜是水产养殖中的常用药物,如使用不当会引起鱼的肾小管扩大,肾组织坏死,造血组织破坏,肝脂肪增加;并且铜可残留于鱼鳃、肌肉及肝内,并可妨碍胰蛋白酶、淀粉酶等肠道酶的正常活动,从而影响摄食及生长。

本试验通过研究硫酸铜对泥鳅的急性毒性,以期为泥鳅养殖生产安全用药提供参考。

1. 材料与方法1.1 材料1.1.1 受试生物的选取试验泥鳅购自信阳新华市场,规格整齐、无病无伤,活力强健康。

每个浓度组试验鱼为10尾。

泥鳅体长9.0~12.0cm,体重4.5~8.0g。

试验前将试验鱼在室内水族缸中暂养一周,并投喂饲料,试验期间停食。

1.1.2 试验条件与测定方法:试验容器为36.6cm×25.5cm×24.0cm的鱼缸,试验用水经过充分曝气的自来水,水温17.0~19.0℃,试验期间用气泵充气。

实验用水的理化指标测定均按海洋监测规范进行。

溶解氧为7.5mg/L~13.1mg/L,pH:7.07.5、总硬度3~50H G。

用碘量法测定溶解氧,精密酸度计pHS~2F型测定pH,EDTA容量法测定总硬度。

1.2 试验方法1.2.1 实验设计首先进行预试验确定100%成活率的浓度,和全死的浓度[1],在此区间内,按照等对数设置5个硫酸铜梯度,分别为1.00,1.50,2.24、3.34、5.00mg/L,以不加硫酸铜作为空白对照组。

受试时间为96h。

试验开始后按时间观察记录泥鳅的反应;并同时测定水温。

1.2.2 泥鳅死亡的判断以鳃盖是否停止活动和对轻微刺激有无反应作为判断依据。

泥鳅实验报告

泥鳅实验报告

泥鳅的催青、人工授精和胚胎发育的整体观察11级生科三班程旖、陈晓凤、杨祖勤、苏巧、巩雪、程程、张金萍、陈宇霖、崔凯一、实验目的掌握泥鳅的催青和人工授精技术,观察鱼类胚胎发育过程的形态变化。

二、实验原理HCG(人绒毛膜促性腺激素)可促进雌雄性腺的发育而产卵或排精。

人工获取精子和卵子并使两者在体外融合形成受精卵的过程即称为人工受精。

在显微镜下可观察到受精卵在孵化过程中出现细胞数目和形态的显著变化。

三、材料用具和试剂1.材料用具泥鳅(8条雌性,2条雄性)、塑料盆2个、漏盆1个、培养皿8个、纱布1块、吸管2支、解剖剪、镊子、注射器2.试剂HCG、曝气水四、实验步骤1.催青5月9日晚19:00取雌鱼,在腹部注射HCG(浓度为500µl/ml),150µl/条。

2.人工授精5月10日早8:00取雌性泥鳅,用右手指由前向后挤压鱼的腹部挤出鱼卵,置于培养皿中。

取雄性泥鳅剪掉头部,从泄殖孔剪开腹部。

用镊子取出背部的两条白色精巢,放在干净的培养皿中(不要有水),用剪刀剪碎。

精子加水激活,倒到装有卵的培养皿中进行授精(1~2min内完成)。

3.整体观察在显微镜4x物镜下观察受精卵发育过程,并拍照记录。

五、观察结果表1 泥鳅的胚胎发育时序表(水温: 20~25℃)序号发育时期各发育时期简要特征记录时间历时(h: min) 图序1 受精卵圆粒状,淡黄色,卵质分布均匀0:002 胚盘期胞质集中到动物极,胚盘隆起3 2细胞期第1次卵裂,纵裂为2个细胞9:21 14 4细胞期第2次卵裂,纵裂为2排4个细胞9:56 25 8细胞期第3次卵裂,8个细胞分列2排10:08 36 16细胞期第4次卵裂,16个细胞分列4排10:23 47 32细胞期第5次卵裂,产生32个细胞10:49 58 64细胞期第6次卵裂,产生64个细胞11:13 69 多细胞期细胞越分越小,由单层变为多层11:26 710 高囊胚期囊胚层隆起12:02 811 低囊胚期囊胚层下降14:36 912 原肠早期胚层下包1/3~1/2 15:03 1013 原肠中期胚层下包1/2~2/3 15:32 1114 原肠晚期胚层下包2/3~5/6 15:59 1216 神经胚期胚层下包5/6,形成卵黄栓16:37 1317 胚孔封闭期胚孔完全封闭17:53 1418 肌节出现期胚体头部增大,肌节出现19:21 1519 眼囊期出现眼囊21:09 1620 尾芽期尾端伸出锥状尾芽00:11 1721 肌肉效应期肌肉微抽动03:12 1822 嗅囊出现期眼前端出现嗅囊04:34 1923 心脏原基期心脏原基出现,尾向上弯至头部05:43 2024 耳石出现期听囊出现2颗耳石06:42 2125 心脏搏动期心脏有节律搏动,尾部剧烈摆动,胚08:00 22体在卵膜内转动26 孵出期胚体破膜而出,初孵仔鱼全长4mm 12:18 23泥鳅胚胎发育图1. 2细胞期;2. 4细胞期;3. 8细胞期;4. 16细胞期;5. 32细胞期;6. 64细胞期;7.多细胞期;8.高囊胚期; 9.低囊胚期; 10.原肠早期; 11.原肠中期; 12.原肠晚期; 13.神经胚期; 14.胚孔封闭期; 15.肌节出现期; 16.眼囊期; 17.尾芽期; 18.肌肉效应期; 19.嗅囊出现期; 20.心脏原基期;21.耳石出现期; 22.心脏搏动期; 23.孵出期(备注:有些时期的照片由于拍得不清楚或无法展示动态过程而不能完全反映胚胎的形态特征,如肌肉效应期,心脏原基期,耳石出现期,心脏搏动期等。

饲料铜水平对黄鳝生长、组织铜蓄积和血清生化指标的影响

饲料铜水平对黄鳝生长、组织铜蓄积和血清生化指标的影响

动物营养学报2020,32(4):1800⁃1808ChineseJournalofAnimalNutrition㊀doi:10.3969/j.issn.1006⁃267x.2020.04.038饲料铜水平对黄鳝生长㊁组织铜蓄积和血清生化指标的影响刘㊀瑜㊀隗黎丽㊀周秋白∗㊀杨㊀鑫㊀姜文灏㊀胡重华㊀张文平㊀王自蕊(江西农业大学动物科学技术学院,南昌330045)摘㊀要:本试验旨在探究黄鳝对饲料中铜的需求量及铜在黄鳝组织中的蓄积规律,为确定黄鳝配合饲料中铜水平和保障黄鳝食品安全提供依据㊂试验以五水硫酸铜为铜源,采用等对数间距的形式在基础饲粮中分别添加0㊁10.0㊁36.8㊁135.7㊁500.0mg/kg的铜,实测饲料铜水平分别为14.21㊁23.95㊁37.01㊁135.63㊁499.63mg/kg,在相同的养殖条件下投喂初重为(62.09ʃ1.07)g黄鳝60d后测定生长指标㊁形态参数㊁体成分㊁组织铜蓄积量和血清生化指标㊂每种饲料投喂4个养殖箱(重复),每个养殖箱投放30尾黄鳝㊂结果显示:随着饲料铜水平的升高,黄鳝的增重率㊁特定生长率均为先升高后降低,饲料系数则表现为先降低后升高,在饲料铜水平为37.01mg/kg时,增重率㊁特定生长率及饲料系数均表现最佳㊂饲料铜水平对黄鳝全鱼㊁肝脏㊁肠道㊁脾脏及皮肤铜蓄积量有显著影响(P<0.05),而对肾脏和肌肉铜蓄积量无显著影响(P>0.05),且各组黄鳝肌肉铜蓄积量均维持在较低水平㊂黄鳝不同组织铜蓄积量表现为肝脏>肠道>脾脏>全鱼>皮肤,其中499.63mg/kg铜组肝脏铜蓄积量超过国家食品中铜安全限量标准(50mg/kg)㊂饲料铜水平对黄鳝血清谷草转氨酶(GOT)㊁碱性磷酸酶(AKP)及溶菌酶(LZM)活性无显著影响(P>0.05)㊂随着饲料铜水平的升高,黄鳝血清谷丙转氨酶(GPT)㊁铜锌超氧化物歧化酶(Cu⁃ZnSOD)活性和总抗氧化能力(T⁃AOC)先升高后趋于平稳,其中血清GPT活性表现为135.63㊁499.63mg/kg铜组显著高于14.21㊁23.95㊁37.01mg/kg铜组(P<0.05),血清Cu⁃ZnSOD活性和T⁃AOC表现为37.01㊁135.63㊁499.63mg/kg铜组显著高于14.21㊁23.95mg/kg铜组(P<0.05)㊂由此得出,摄食适宜铜水平的饲料可提升黄鳝机体的抗氧化能力,铜摄入不足或过量均会降低黄鳝的生长性能㊂铜主要蓄积于黄鳝肝脏及肠道,摄食高铜饲料会引发黄鳝肝脏铜蓄积量超标,并存在肝脏损伤风险,但对肌肉的食用安全性未见显著影响㊂以饲料系数及增重率为评价指标,60 95g的黄鳝对饲料中铜的需求量为44.29 45.84mg/kg㊂关键词:黄鳝;铜水平;生长性能;组织铜蓄积;血清生化指标中图分类号:S963㊀㊀㊀㊀文献标识码:A㊀㊀㊀㊀文章编号:1006⁃267X(2020)04⁃1800⁃09收稿日期:2019-10-29基金项目:国家特色淡水鱼产业技术体系(CARS⁃46);国家自然科学基金项目(31960729,31360641);江西省现代农业协同创新计划专项(JXXTCX201602⁃02);江西省重点研发计划(20161ACF60020);江西省大宗淡水鱼产业技术体系(JXARS)作者简介:刘㊀瑜(1995 ),江西瑞金人,硕士研究生,研究方向为水产动物健康养殖㊂E⁃mail:nydxliuyu@163.com∗通信作者:周秋白,教授,博士生导师,E⁃mail:zhouqiubai@163.com㊀㊀铜(copper)是所有动物必需的微量元素之一,其以含铜酶或含铜蛋白的形式广泛参与机体造血㊁免疫及抗氧化等诸多生理过程[1]㊂饲料铜缺乏可能导致动物发育异常㊁生长受阻,影响动物的生产性能及经济价值,铜过量则会对动物产生毒性作用,并且铜在动物体内过量蓄积会增加食品安全隐患[2]㊂研究发现饲料铜水平与鱼类生长发育之间关系密切,在适宜铜水平下,斑点叉尾[3]㊁黑带石斑鱼[4]㊁斜带石斑鱼[5]及黄颡鱼[6]获得了较好的生长性能和饲料效率;饲料铜水平过4期刘㊀瑜等:饲料铜水平对黄鳝生长㊁组织铜蓄积和血清生化指标的影响低时,斑点叉尾[3]㊁黑带石斑鱼[4]表现出明显的生长缓慢现象;饲料铜水平过高时,斜带石斑鱼[5]和黄颡鱼[6]的增重率及饲料效率显著降低㊂此外,研究还表明饲料铜缺乏会降低鱼类铜锌超氧化物歧化酶(Cu⁃ZnSOD)活性且造成总抗氧化能力(T⁃AOC)下降[4,7-8],而饲料铜过量则通过芬顿反应形成大量羟自由基,引起生物大分子过氧化,导致鱼类生长减慢㊁存活率及繁殖力降低[9-10]㊂㊀㊀黄鳝(Monopterusalbus)属合鳃目,合鳃科,因其具有营养丰富㊁味道鲜美㊁无肌间刺且含肉率高等特点而广受消费者欢迎㊂近年来,黄鳝养殖业得到了长足的发展,现已成为我国重要的水产养殖品种之一[11]㊂为获得更好的养殖效益,人们对黄鳝营养需求进行了诸多研究,但以往的研究多集中在黄鳝蛋白质及脂肪需求方面[12-13],对其矿物质需求的研究则鲜有报道㊂因此,本试验拟通过研究不同铜水平饲料对黄鳝生长㊁血清生化指标和组织铜蓄积的影响,探究黄鳝的适宜铜需求量,为确定饲料中铜水平和保障黄鳝食品安全提供参考㊂1㊀材料与方法1.1㊀试验设计及材料㊀㊀于江西农业大学水产养殖基地挑选600尾均重为(62.09ʃ1.07)g的无病无伤㊁体质健康㊁活力较佳的黄鳝作为试验动物㊂将黄鳝随机分为5组,每组4个重复,每个重复30尾,以重复为单位在规格为88cmˑ66cmˑ64cm的蓝色塑料箱进行静水养殖,在养殖箱内放置水葫芦,试验开始前7天消毒,养殖用水为曝气后自来水㊂㊀㊀试验采用五水硫酸铜(CuSO4㊃5H2O,分析纯,西陇科学股份有限公司产品)作为饲料铜源,其余饲料原料均购于江西大佑农生物科技有限公司㊂为使试验饲料铜水平涵盖低铜至高铜,饲料铜水平梯度设计为等对数间距(log10),在基础饲料中分别添加0㊁10.0㊁36.8㊁135.7㊁500.0mg/kg含量的铜,实测饲料铜水平分别为14.21㊁23.95㊁37.01㊁135.63㊁499.63mg/kg㊂所有原料均粉碎过80目,制粒时先将五水硫酸铜加入预混料充分混匀,逐级混匀所有原料后调质制粒㊂试验饲料组成及营养水平见表1㊂1.2㊀养殖管理㊀㊀试验养殖工作在江西农业大学水产养殖基地进行,试验时间为2019年4月6日至2019年6月5日,共60d㊂养殖期间保持养殖箱内水质良好㊁自然水温(21 30ħ),水葫芦覆盖面积占水面的2/3㊂每日投喂1次,投喂时间为18:00,饲料每次投放于固定位置,投喂时先投喂部分饲料,根据黄鳝吃食状态酌情补料,使黄鳝将饲料全部吃完,记录每次投料量㊂1.3㊀样品采集及分析方法1.3.1㊀生长性能与形态参数测定㊀㊀养殖试验结束后取样,取样前停食1d㊂称取每个养殖箱黄鳝总重及条数,计算增重率(WGR)㊁特定生长率(SGR)㊁饲料系数(FCR);从每个养殖箱中随机抽取4尾黄鳝(每组16尾),称重㊁测量体长后采血,采血完成后将黄鳝置于无菌工作台上进行低温解剖,依次取内脏团㊁肝脏㊁肠道㊁脾脏组织称重,计算脏体比(VSI)㊁肝体比(HSI)㊁肠体比(CI)㊁脾体比(SI)㊁胴体率(CP)和肥满度(CF)㊂相关指标计算公式如下:增重率(%)=100ˑ(W2-W1)/W1;特定生长率(%/d)=100ˑ(lnW2-lnW1)/t;饲料系数=F/(W2-W1);脏体比(%)=100ˑWV/W;肝体比(%)=100ˑWH/W;肠体比(%)=100ˑWI/W;脾体比(%)=100ˑWS/W;胴体率(%)=100ˑWC/W;肥满度(g/cm3)=W/L3㊂㊀㊀式中:W1㊁W2分别代表试验黄鳝初均重和末均重(g);t代表养殖天数(d);F代表摄食量(g);WV㊁WH㊁WI㊁WS㊁WC及W分别代表取样黄鳝内脏团㊁肝脏㊁肠道㊁脾脏㊁胴体及全鱼重(g);L代表取样黄鳝体长(cm)㊂1.3.2㊀营养成分含量㊀㊀黄鳝和饲料水分含量测定参考GB/T6435 2014,粗灰分含量测定参考GB/T6438 2007,粗脂肪含量测定参考GB/T6433 2006,粗蛋白质含量测定参考GB/T6432 1994㊂1.3.3㊀饲料铜水平及黄鳝各组织铜蓄积量测定㊀㊀饲料铜水平及黄鳝各组织铜蓄积量测定方法参照GB5009.13 2017中第2法(火焰原子吸收光谱法),采用湿法消解进行样品前处理,原子吸收器型号为TAS-990A(北京普析通用仪器有限责任公司)㊂1081㊀动㊀物㊀营㊀养㊀学㊀报32卷表1㊀试验饲料组成及营养水平(干物质基础)Table1㊀Compositionandnutrientlevelsofexperimentaldiets(DMbasis)%项目Items铜水平Copperlevel/(mg/kg)14.2123.9537.01135.63499.63原料Ingredients鱼粉Fishmeal45.0045.0045.0045.0045.00豆粕Soybeanmeal16.0016.0016.0016.0016.00小麦Wheat20.0020.0020.0020.0020.00玉米Corn10.0010.0010.0010.0010.00复合蛋白Compoundprotein1)3.003.003.003.003.00卵磷脂Lecithin1.001.001.001.001.00鱼油+豆油Fishoil+soybeanoil(1ʒ4)1.501.501.501.501.50预混料Premix2)1.501.501.501.501.50磷酸二氢钙Ca(H2PO4)22.002.002.002.002.00合计Total100.00100.00100.00100.00100.00额外添加五水硫酸铜AddingextraCuSO4㊃5H2O10.036.8135.7500.0营养水平Nutrientlevels3)粗蛋白质Crudeprotein45.3945.4545.5045.4645.11粗脂肪Crudelipid8.598.558.728.848.72粗灰分Ash11.2411.1711.2311.2211.44铜Copper/(mg/kg)14.2123.9537.01135.63499.63㊀㊀1)复合蛋白由大豆浓缩蛋白与蚯蚓粉按1ʒ3的比例配制Thecompoundproteinwaspreparedbysoybeanproteinconcen⁃trateandearthwormmealat1ʒ3㊂㊀㊀2)预混料为每千克饲料提供Thepremixprovidedthefollowingperofdiets:VA6000.0IU,VD2000.0IU,VE100.0mg,VK5.0mg,VB115.0mg,VB215.0mg,烟酸niacin30.0mg,VB610.0mg,泛酸pantothenateacid25.0mg,叶酸folicacid0.2mg,VB120.03mg,生物素biotin0.2mg,VC100.0mg,肌醇inositol100mg,Zn40.0mg,Fe150.0mg,Mn20.0mg,I0.4mg,Co0.1mg,Se0.1mg,Mg50.0mg㊂㊀㊀3)实测值Measuredvalues㊂1.3.4㊀血清生化指标测定㊀㊀采血完成后将血液于4ħ环境中静置过夜,再于4ħ条件下以3500r/min离心15min,取上清液于-80ħ超低温保存待测血清中谷丙转氨酶(GPT)㊁谷草转氨酶(GOT)㊁碱性磷酸酶(AKP)㊁溶菌酶(LZM)㊁Cu⁃ZnSOD活性及T⁃AOC㊂上述指标测定所用试剂盒均购于南京建成生物工程研究所,测定步骤参照试剂盒操作说明书㊂1.4㊀数据处理与分析㊀㊀试验结果采用平均值ʃ标准误(meanʃSE)表示,用SPSS22.0软件进行单因素方差分析(one⁃wayANOVA),若组间差异显著,再采用Duncan氏法进行多重比较,显著水平为P<0.05㊂2㊀结果与分析2.1㊀饲料铜水平对黄鳝生长性能的影响㊀㊀由表2可知,随着饲料铜水平的升高,黄鳝的增重率㊁特定生长率呈先上升后下降的趋势,饲料系数则呈先下降后上升的趋势,黄鳝在饲料铜水平为37.01mg/kg时有最佳的生长表现及饲料效率㊂以饲料系数和增重率作为评价指标,通过折线回归分析得出黄鳝对饲料中铜的需求量分别为44.29㊁45.84mg/kg(图1)㊂2.2㊀饲料铜水平对黄鳝形态参数及体成分的影响㊀㊀由表3可知,饲料铜水平对黄鳝的脏体比㊁肝体比㊁肠体比㊁脾体比㊁胴体率和肥满度均无显著影响(P>0.05)㊂㊀㊀由表4可知,饲料铜水平对黄鳝全鱼水分㊁粗蛋白质及粗脂肪含量无显著影响(P>0.05),全鱼粗灰分含量则在表现出随饲料铜水平的升高而增加的趋势,135.63㊁499.63mg/kg铜组显著高于14.21㊁23.95㊁37.01mg/kg铜组(P<0.05)㊂20814期刘㊀瑜等:饲料铜水平对黄鳝生长㊁组织铜蓄积和血清生化指标的影响表2㊀饲料铜水平对黄鳝生长性能的影响Table2㊀Effectsofdietarycopperlevelongrowthperformanceofricefieldeel(Monopterusalbus)铜水平Copperlevel/(mg/kg)初均重IBW/g末均重FBW/g增重率WGR/%特定生长率SGR/(%/d)饲料系数FCR14.2162.54ʃ0.9785.12ʃ2.64a36.11ʃ3.71a0.51ʃ0.04a1.27ʃ0.22b23.9561.31ʃ0.3984.19ʃ1.56a37.34ʃ2.58a0.53ʃ0.03a1.22ʃ0.10ab37.0162.41ʃ0.4394.23ʃ2.60b50.85ʃ4.28b0.68ʃ0.04b0.98ʃ0.79a135.6361.80ʃ0.4391.43ʃ1.29b47.93ʃ1.56b0.65ʃ0.03b1.17ʃ0.08ab499.6362.39ʃ0.0881.48ʃ1.38a30.60ʃ2.12a0.44ʃ0.02a1.74ʃ0.16c㊀㊀同列数据肩标无字母或相同字母表示差异不显著(P>0.05),不同小写字母表示差异显著(P<0.05)㊂下表同㊂㊀㊀Inthesamecolumn,valueswithnoletterorthesamelettersuperscriptsmeannosignificantdifference(P>0.05),whilewithdifferentsmalllettersuperscriptsmeansignificantdifference(P<0.05).Thesameasbelow.图1㊀以饲料系数和增重率为评价指标通过折线回归分析黄鳝对饲料中铜的需求量Fig.1㊀Analysisofdietarycopperrequirementofricefieldeel(Monopterusalbus)bybrokenlineregressionwithFCRandWGRasevaluationindexes表3㊀饲料铜水平对黄鳝形态参数的影响Table3㊀Effectsofdietarycopperlevelonmorphologicalparametersofricefieldeel(Monopterusalbus)铜水平Copperlevel/(mg/kg)脏体比HSI/%肝体比VSI/%肠体比CI/%脾体比SI/%胴体率CP/%肥满度CF/(g/cm3)14.215.06ʃ0.353.44ʃ0.451.70ʃ0.080.30ʃ0.1079.19ʃ1.740.26ʃ0.0123.955.27ʃ0.373.41ʃ0.501.98ʃ0.210.33ʃ0.0978.68ʃ1.770.27ʃ0.0137.015.24ʃ0.293.12ʃ0.401.83ʃ0.160.31ʃ0.0778.64ʃ2.000.27ʃ0.01135.635.79ʃ0.384.09ʃ0.651.75ʃ0.180.31ʃ0.0678.88ʃ1.700.27ʃ0.01499.635.10ʃ0.203.05ʃ0.411.80ʃ0.220.33ʃ0.0578.69ʃ1.810.27ʃ0.01表4㊀饲料铜水平对黄鳝体成分的影响Table4㊀Effectsofdietarycopperlevelonbodycompositionofricefieldeel(Monopterusalbus)%铜水平Copperlevel/(mg/kg)水分Moisture粗蛋白质Crudeprotein粗脂肪Crudelipid粗灰分Ash14.2170.70ʃ0.8417.57ʃ0.288.20ʃ0.582.49ʃ0.11a23.9571.73ʃ0.6217.69ʃ0.727.98ʃ0.492.52ʃ0.10a37.0170.95ʃ0.8617.89ʃ0.658.15ʃ0.592.57ʃ0.06a135.6370.20ʃ0.3916.84ʃ0.288.44ʃ0.922.69ʃ0.06b499.6370.94ʃ0.7316.95ʃ0.578.56ʃ0.472.97ʃ0.12b3081㊀动㊀物㊀营㊀养㊀学㊀报32卷2.3㊀饲料铜水平对黄鳝组织铜蓄积的影响㊀㊀由表5可知,499.63mg/kg铜组全鱼㊁肝脏㊁肠道㊁脾脏㊁皮肤中铜蓄积量均为最高,显著高于其他各组(P<0.05),肾脏及肌肉中铜蓄积量各组间则无显著差异(P>0.05)㊂观察黄鳝各组织中铜蓄积量的高低可以发现,铜主要蓄积于肝脏及肠道,且蓄积量受饲料铜水平的影响,铜水平为499.63mg/kg时肝脏和肠道中铜蓄积量分别是铜水平为14.21mg/kg时的59.28和9.07倍㊂随着饲料铜水平的升高,脾脏中铜蓄积量无明显规律变化,脾脏铜蓄积量在铜水平为499.63mg/kg时最高,在铜水平为37.01mg/kg时次之,并显著高于铜水平为14.21㊁23.95㊁135.63mg/kg时(P<0.05)㊂表5㊀饲料铜水平对黄鳝组织铜蓄积的影响(鲜重基础)Table5㊀Effectsofdietarycopperleveloncopperaccumulationintissuesofricefieldeel(Monopterusalbus)(freshweightbasis)mg/kg铜水平Copperlevel/(mg/kg)全鱼Wholebody肝脏Liver肠道Intestine肾脏Kidney脾脏Spleen肌肉Muscle皮肤Skin14.211.92ʃ0.38a3.50ʃ0.63a3.15ʃ0.80a1.89ʃ0.370.61ʃ0.30a0.15ʃ0.091.02ʃ0.23a23.951.73ʃ0.41a3.98ʃ1.12a4.31ʃ0.09a2.51ʃ0.250.23ʃ0.14a0.13ʃ0.050.98ʃ0.31a37.011.99ʃ0.41a6.24ʃ1.79b4.12ʃ1.07a2.12ʃ0.401.57ʃ0.12b0.28ʃ0.051.29ʃ0.37a135.632.59ʃ0.49a41.46ʃ9.79c9.87ʃ0.18b2.27ʃ0.190.87ʃ0.19a0.48ʃ0.091.44ʃ0.49a499.635.12ʃ0.34b207.48ʃ3.30d28.11ʃ9.10c2.15ʃ1.413.65ʃ0.23c0.43ʃ0.072.35ʃ0.46b2.4㊀饲料铜水平对黄鳝血清生化指标的影响㊀㊀由表6可知,饲料铜水平对黄鳝血清GOT㊁AKP㊁LZM活性无显著影响(P>0.05)㊂随着饲料铜水平的升高,黄鳝血清GPT㊁Cu⁃ZnSOD活性和T⁃AOC先升高后趋于平稳,其中血清GPT活性表现为135.63㊁499.63mg/kg铜组显著高于14.21㊁23.95㊁37.01mg/kg铜组(P<0.05),血清Cu⁃ZnSOD活性和T⁃AOC表现为37.01㊁135.63㊁499.63mg/kg铜组显著高于14.21㊁23.95mg/kg铜组(P<0.05)㊂表6㊀饲料铜水平对黄鳝血清生化指标的影响Table6㊀Effectsofdietarycopperlevelonserumbiochemicalindexesofricefieldeel(Monopterusalbus)铜水平Copperlevel/(mg/kg)谷丙转氨酶GPT/(U/L)谷草转氨酶GOT/(U/L)碱性磷酸酶AKP/(U/L)溶菌酶LZM/(U/mL)总抗氧化能力T⁃AOC/(mmol/L)铜锌超氧化物歧化酶Cu⁃ZnSOD/(U/mL)14.215.97ʃ0.63a31.88ʃ2.3111.12ʃ3.25262.69ʃ25.190.52ʃ0.03a121.47ʃ0.26a23.955.99ʃ1.06a33.12ʃ3.6313.12ʃ2.53256.99ʃ22.110.51ʃ0.05a122.57ʃ2.12a37.016.38ʃ0.59a34.32ʃ5.6714.00ʃ2.36244.40ʃ9.620.75ʃ0.05b128.09ʃ0.45b135.638.03ʃ0.36b38.61ʃ4.1012.21ʃ3.06230.45ʃ29.370.75ʃ0.03b125.20ʃ0.19b499.638.42ʃ0.38b38.53ʃ4.3214.66ʃ3.66247.39ʃ17.540.69ʃ0.05b125.39ʃ1.35b3㊀讨㊀论3.1㊀饲料铜水平对黄鳝生长性能的影响㊀㊀养殖动物生长速度及对饲料效率的高低是衡量饲料营养是否全面的重要指标㊂本试验中,14.21㊁23.95及499.63mg/kg铜组黄鳝的增重率与饲料系数较差,说明饲料铜缺乏或过量均会抑制黄鳝的生长,降低饲料效率㊂以饲料系数及增重率为评价指标,通过折线回归分析表明,黄鳝饲料铜水平以44.29 45.84mg/kg为宜㊂已有研究表明,对饲料中铜需求量黑带石斑鱼为2 3mg/kg[4]㊁黄颡鱼为3.1 4.2mg/kg[6]㊁俄罗斯鲟为7 8mg/kg[14]㊁欧洲鳇为10 13mg/kg[15]㊁斑点叉尾为20.2mg/kg[3]㊁团头鲂幼鱼为25.17 25.65mg/kg[16],均低于本试验得出的黄鳝对饲料中铜的需求量,这可能与黄鳝栖息习性有40814期刘㊀瑜等:饲料铜水平对黄鳝生长㊁组织铜蓄积和血清生化指标的影响关㊂自然条件下水体中的重金属通常在水底部沉积[17],黄鳝为营底栖穴居生活的肉食性鱼类,长期生活在水环境底部并以底栖生物为食,这使得黄鳝更易富集铜元素,这可能在一定程度上强化了黄鳝对铜的利用能力,因而对饲料中铜的需求量较高㊂3.2㊀饲料铜水平对黄鳝形体参数及体成分的影响㊀㊀研究发现,升高饲料铜水平会显著降低黄颡鱼的肝体比㊁脏体比及全鱼粗脂肪含量[6];高铜饲料(铜水平为2400mg/kg)导致鲻鱼肝体比和肥满度显著降低[18];饲料铜水平超过900mg/kg时会引起大西洋鲑肥满度显著降低[19];饲料铜水平升高会显著降低异育银鲫和斑点叉尾的肝体比[20]㊂但也有研究发现不同铜水平饲料对大黄鱼[8]㊁俄罗斯鲟[14]的形态参数及体成分无显著影响㊂上述试验结果的不同可能与试验对象㊁试验周期㊁试验饲料铜水平及养殖环境的差异有关㊂在本试验中,饲料铜水平的差异不足以造成各组间黄鳝形体参数及全鱼水分㊁粗蛋白质㊁粗脂肪含量的显著差异;全鱼粗灰分含量则随着饲料铜水平的升高而增加,这与在黄颡鱼[6]及欧洲鳇[15]上的研究结果相似,推测造成此试验结果的主要原因是矿物元素间的相互作用㊂3.3㊀饲料铜水平对黄鳝组织铜蓄积的影响㊀㊀鱼类肝脏是铜的主要代谢器官,在铜摄入过量时,过多的铜可积累在肝脏,进而缓解高铜带来的毒性,当铜摄入不足时,肝脏中储存的铜又可被机体利用[21]㊂在本试验中,黄鳝肝脏铜蓄积量最高,与在斑点叉尾[3]㊁黑带石斑鱼[4]及大黄鱼[8]上所得研究结果相同㊂全鱼铜蓄积量可作为衡量鱼类铜营养水平的优良指标[9]㊂本试验中,在14.21㊁23.95㊁37.01mg/kg铜组之间全鱼铜蓄积量差异不显著时,肝脏铜蓄积量却出现了显著差异,结合这3组黄鳝的生长表现,笔者认为肝脏铜蓄积量能够更切实的反映黄鳝铜营养状况㊂㊀㊀肠道是鱼类吸收并转运饲料铜的主要器官㊂在本试验中,肠道铜蓄积量在低铜(铜水平为14.21㊁23.95㊁37.01mg/kg)组与高铜(铜水平为135.63㊁499.63mg/kg)组间出现显著差异,但全鱼铜蓄积量在14.21㊁23.95㊁37.01及135.63mg/kg铜组间差异不显著,表明饲料铜水平低于需求量时黄鳝肠道对饲料铜具有较强的吸收能力,饲料铜水平高于需求量时黄鳝肠道在一定程度上能够减少铜的吸收和转运,维持机体铜水平的相对稳定㊂Clearwater等[22]在对虹鳟铜吸收与分布的研究中发现注射至胃中的铜离子(Cu2+)浓度由26mg/kg提升至192mg/kg时,肠道对过量铜吸收的屏障能力被抑制,内脏中的铜离子浓度迅速升高㊂刘博等[23]认为高铜损伤肠道的机制为:过量铜通过芬顿反应产生大量的羟自由基引起肠道细胞死亡脱落,造成肠道氧化损伤,进而引发肠道功能障碍㊂本试验中,饲料铜水平达到499.63mg/kg时黄鳝全鱼铜蓄积量显著上升,这表明黄鳝肠道对过高水平铜饲料的转运抵抗屏障能力有限,过量的铜可能造成黄鳝肠道损伤,进而破坏肠道对铜的屏障作用㊂㊀㊀脾脏是鱼类重要的造血及免疫器官㊂蒋蓉[24]在黄颡鱼饲料中补充铜,造成脾脏铜蓄积量增加的同时提升了黄颡鱼的免疫活性㊂饲料铜水平升高引起试验鱼脾脏铜蓄积量增加的现象同样见于吉富罗非鱼[25-26]㊂本试验中,37.01mg/kg铜组黄鳝的生长表现最佳的同时还显著提升了脾脏铜蓄积量,推测脾脏可能是铜发挥生理功能的重要器官㊂㊀㊀人工养殖水产动物最终目的是快速获取更多优质的肉制品供人食用,重金属在肌肉中的沉积与消费者健康关系密切[2],因此了解清楚饲料铜是否会在水产动物肌肉中过量蓄积对于水产养殖业具有重要意义㊂在本试验中,除499.63mg/kg铜组黄鳝肝脏铜蓄积量超标外,全鱼及其他组织铜蓄积量均符合我国GB18406.4 2001[27]及NY5073 2006[28]中规定的铜蓄积量ɤ50mg/kg的要求,且不同铜水平饲料对黄鳝肌肉铜蓄积量无显著影响且肌肉铜最高蓄积量仅为0.48mg/kg,这与在斑点叉尾[3],黄颡鱼[6]㊁大黄鱼[8]及吉富罗非鱼[25-26]上所得研究结果一致,但在凡纳滨对虾上的研究发现饲料中补充铜显著提升了凡纳滨对虾肌肉铜蓄积量[29],产生不同的结果可能与鱼类和甲壳动物生理功能存在差异有关㊂3.4㊀饲料铜水平对黄鳝血清生化指标的影响㊀㊀血清GPT㊁GOT活性可作为反映鱼类肝脏受损伤程度的有效指标[30]㊂Kim等[21]用铜水平为50 500mg/kg的饲料饲喂许氏平鲉60d,结果发现许氏平鲉血清GPT㊁GOT活性显著上升;Al⁃Akel等[31]用铜水平为250 1000mg/kg的饲料饲喂鲤鱼60d,结果发现鲤鱼血清GPT㊁GOT活性5081㊀动㊀物㊀营㊀养㊀学㊀报32卷均显著上升;然而,斑点叉尾摄食铜水平为11.1 51.1mg/kg的饲料42d后血清GPT㊁GOT活性则无显著变化[3]㊂在本试验中,高铜(铜水平为135.63㊁499.63mg/kg)组黄鳝血清GPT活性显著高于低铜(铜水平为14.21㊁23.95㊁37.01mg/kg)组,且135.63㊁499.63mg/kg铜组之间差异不显著,表明高铜饲料可能造成黄鳝肝脏细胞损伤,但这种损伤程度未因饲料铜水平的继续上升而加剧㊂㊀㊀Cu⁃ZnSOD是动物体内主要的抗氧化酶之一,占总超氧化物歧化酶(T⁃SOD)的90%[32],其活性高低被认为是评价动物铜营养状况的优良指标[14]㊂在本试验中,饲料铜水平达到37.01mg/kg及以上时黄鳝血清T⁃AOC及Cu⁃ZnSOD活性显著上升,表明饲料铜水平上升可促进黄鳝机体抗氧化性能的提升㊂同样,在俄罗斯鲟[14]㊁凡纳滨对虾[33]上的研究也发现摄食适宜铜水平的饲料时抗氧化能力得到了显著提升㊂㊀㊀血清AKP㊁LZM活性可有效反映机体免疫状况㊂研究发现,43.1㊁78.9mg/kg铜水平的饲料显著提升了日本沼虾血清AKP㊁LZM活性[34];100150mg/kg铜水平的饲料则显著提升了团头鲂血清AKP活性[7]㊂但在本试验中,不同铜水平的饲料对黄鳝血清AKP㊁LZM活性无显著影响,产生不同的结果可能与试验鱼种类㊁试验饲料铜水平存在一定关系,具体机理还需进一步研究㊂4㊀结㊀论㊀㊀在基础饲料中适量添加铜可提升黄鳝机体的的抗氧化性能,获取更佳的生长性能,但过量添加铜则会对黄鳝的增重率㊁饲料系数㊁肝脏功能造成不良影响㊂以增重率和饲料系数为评价指标,60 95g的黄鳝对饲料中铜的需求量为44.29 45.84mg/kg㊂参考文献:[1]㊀麦康森.水产动物营养与饲料学[M].2版.北京:中国农业出版社,2011:95.[2]㊀常显志,吴志强,黄亮亮,等.漓江5种常见食用经济鱼类重金属含量分析[J].环境科学与技术,2017,40(9):203-208.[3]㊀万祖德.叶黄素㊁氧化豆油㊁铜和血球蛋白粉对斑点叉尾生长和体色的影响[D].硕士学位论文.上海:上海海洋大学,2016.[4]㊀LINYH,SHIEYY,SHIAUSY.Dietarycopperre⁃quirementsofjuvenilegrouper,Epinephelusmalabari⁃cus[J].Aquaculture,2008,274(1):161-165.[5]㊀叶超霞,刘永坚,田丽霞,等.饲料中高水平铜对斜带石斑鱼(Epinepheluscoioides)生长和铜㊁铁㊁锰㊁锌含量的影响[J].海洋与湖沼,2013,44(3):606-610.[6]㊀TANXY,LUOZ,LIUX,etal.Dietarycopperre⁃quirementofjuvenileyellowcatfishPelteobagrusful⁃vidraco[J].AquacultureNutrition,2011,17(2):170-176.[7]㊀SHAOXP,LIUWB,LUKL,etal.Effectsoftribas⁃iccopperchlorideongrowth,copperstatus,antioxi⁃dantactivities,immuneresponsesandintestinalmicro⁃floraofbluntsnoutbream(Megalobramaamblyceph⁃ala)fedpracticaldiets[J].Aquaculture,2012,338-341:154-159.[8]㊀CAOJJ,MIAOX,XUW,etal.Dietarycopperre⁃quirementsofjuvenilelargeyellowcroakerLarimich⁃thyscroceus[J].Aquaculture,2014,432:346-350.[9]㊀BERNTSSENMHG,LUNDEBYEAK,HAMREK.TissuelipidperoxidativeresponsesinAtlanticsalmon(SalmosalarL.)parrfedhighlevelsofdietarycop⁃perandcadmium[J].FishPhysiologyandBiochemis⁃try,2000,23(1):35-48.[10]㊀CLEARWATERSJ,FARAGAM,MEYERJS.Bio⁃availabilityandtoxicityofdietbornecopperandzinctofish[J].ComparativeBiochemistryandPhysiologyPartC:Toxicology&Pharmacology,2002,132(3):269-313.[11]㊀罗鸣钟,斳恒,杨代勤.黄鳝生物学及养殖生态学研究进展[J].水产科学,2014,33(8):529-534.[12]㊀闫建林,储张杰,龚世园,等.饲料蛋白质含量对黄鳝生长的影响[J].湖北农业科学,2009,48(1):156-158.[13]㊀王松,储张杰,龚世园,等.饲料中脂肪含量对黄鳝生长的影响[J].水利渔业,2008,28(3):67-68.[14]㊀王和伟.俄罗斯鲟Acipensergueldenstaedtii幼鱼对饲料铜的需要和利用研究[D].博士学位论文.上海:华东师范大学,2017:37-38.[15]㊀MOHSENIM,POURKAZEMIM,BAISC.Effectsofdietaryinorganiccopperongrowthperformanceandimmuneresponsesofjuvenilebeluga,Husohuso[J].AquacultureNutrition,2014,20(5):547-556.[16]㊀刘汉超.团头鲂(Megalobramaamblycephala)Fe㊁Cu㊁Zn㊁P需要量的研究[D].硕士学位论文.苏州:60814期刘㊀瑜等:饲料铜水平对黄鳝生长㊁组织铜蓄积和血清生化指标的影响苏州大学,2014.[17]㊀吴红岩,赵金良,唐首杰,等.华东地区鳜肌肉重金属含量现状与风险分析[J/OL].生态毒理学报,2019:1-15.[2019-12-11].http://kns.cnki.net/kcms/de⁃tail/11.5470.X.20190828.1754.002.html.[18]㊀BAKERRTM,HANDYRD,DAVIESSJ,etal.Chronicdietaryexposuretocopperaffectsgrowth,tis⁃suelipidperoxidation,andmetalcompositionofthegreymullet,Chelonlabrosus[J].MarineEnvironmen⁃talResearch,1998,45(4/5):357-365.[19]㊀BERNTSSENMHG,LUNDEBYEAK,MAAGEA.Effectsofelevateddietarycopperconcentrationsongrowth,feedutilisationandnutritionalstatusofAtlan⁃ticsalmon(SalmosalarL.)fry[J].Aquaculture,1999,174(1/2):167-181.[20]㊀种香玉,周立志,韩冬,等.饲料中铜浓度对异育银鲫和斑点叉尾的影响[J].水生生物学报,2014,38(4):751-763.[21]㊀KIMSG,KANGJC.Effectofdietarycopperexpo⁃sureonaccumulation,growthandhematologicalpa⁃rametersofthejuvenilerockfish,Sebastesschlegeli[J].MarineEnvironmentalResearch,2004,58(1):65-82.[22]㊀CLEARWATERSJ,BASKINSJ,WOODCM,etal.Gastrointestinaluptakeanddistributionofcopperinrainbowtrout[J].JournalofExperimentalBiology,2000,203(16):2455-2466.[23]㊀刘博,杨文艳,杨连玉.铜肠道稳态平衡调控机制研究进展[J].中国畜牧兽医,2017,44(9):2662-2667.[24]㊀蒋蓉.铜㊁铁㊁锰㊁锌对黄颡鱼生长和生理机能的影响[D].硕士学位论文.苏州:苏州大学,2006:58-59.[25]㊀崔欣.日粮中高铜对吉富罗非鱼生长㊁消化及与铜代谢相关生理机能影响的研究[D].硕士学位论文.湛江:广东海洋大学,2013:49.[26]㊀王文龙,崔欣,李成成,等.饲料中铜暴露对吉富罗非鱼幼鱼血红细胞微核和组织中铜蓄积的影响[J].生态毒理学报,2014,9(4):757-764.[27]㊀中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局.GB18406.4 2001农产品安全质量无公害水产品安全要求[S].北京:中国标准出版社,2004.[28]㊀国家水产品质量监督检验中心.NY5073 2006无公害食品水产品中有毒有害物质限量[S].北京:中国标准出版社,2006.[29]㊀刘伟,文华,吴建开,等.高铜饲料对凡纳滨对虾生长㊁肌肉和肝胰脏铜积累的影响[J].淡水渔业,2008,38(2):12-16.[30]㊀唐涛,钟蕾,郇志利,等.3种大豆产品替代鱼粉对黄鳝生长性能㊁肠道消化酶活性和血清生化指标的影响[J].动物营养学报,2019,31(2):970-980.[31]㊀AL⁃AKELAS,AL⁃BALAWIHFA,AL⁃MISNEDF,etal.Effectsofdietarycopperexposureonaccumu⁃lation,growth,andhematologicalparametersinCypri⁃nuscarpio[J].Toxicological&EnvironmentalChem⁃istry,2010,92(10):1865-1878.[32]㊀王昌禄,曹俊武,王玉荣,等.铜锌超氧化物歧化酶(SOD)研究进展 从基因到功能[J].现代生物医学进展,2008,8(5):940-943.[33]㊀董晓慧,杨原志,郑石轩,等.饲料中不同铜源和水平对凡纳滨对虾生长㊁免疫和组织铜含量的影响[J].大连水产学院学报,2007(5):377-383.[34]㊀孔有琴.日本沼虾(Macrobrachiumnipponense)幼虾的铜营养生理研究[D].博士学位论文.上海:华东师范大学,2014:38-39.7081㊀动㊀物㊀营㊀养㊀学㊀报32卷∗Correspondingauthor,professor,E⁃mail:zhouqiubai@163.com(责任编辑㊀菅景颖)EffectsofDietaryCopperLevelonGrowth,TissueCopperAccumulationandSerumBiochemicalIndexesofRiceFieldEel(Monopterusalbus)LIUYu㊀WEILili㊀ZHOUQiubai∗㊀YANGXin㊀JIANGWenhao㊀HUChonghua㊀ZHANGWenping㊀WANGZirui(CollegeofAnimalScienceandTechnology,JiangxiAgriculturalUniversity,Nanchang330045,China)Abstract:Thedietarycopperrequirementofricefieldeel(Monopterusalbus)andtheaccumulationruleofcopperinricefieldeeltissueswereinvestigatedinthisexperiment,whichprovidedthebasisforthedietarycopperlevelandthefoodsafetyofricefieldeel.Inthepresentexperiment,chalcanthitewasusedasthecoppersource,and0,10.0,36.8,135.7and500.0mg/kgcopperwereaddedtobasaldietintheformofequalloga⁃rithmicinterval,respectively.Themeasuredvaluesofcopperlevelinthefivedietswere14.21,23.95,37.01,135.63and499.63mg/kg,respectively.Thegrowthindexes,morphologicalparameters,bodycomposition,tissuecopperaccumulationamountandserumbiochemicalindexesofricefieldeelwiththeinitialbodyweightof(62.09ʃ1.07)gweremeasuredafterfeedingfor60daysunderthesameaquacultureconditions.Eachdietfedto4culturenetswith30ricefieldeelsineachculturenet.Theresultsshowedasfollows:withthedietarycopperlevelincreasing,theweightgainrate(WGR)andspecificgrowthrate(SGR)ofricefieldeelin⁃creasedfirstlyandthendecreased,whilethefeedconversionrate(FCR)decreasedfirstlyandthenincreased.Whenthedietarycopperlevelwas37.01mg/kg,theWGR,SGRandFCRwerethebest.Dietarycopperlevelhadsignificanteffectsonthecopperaccumulationamountinthewholefish,liver,intestine,spleenandskin(P<0.05),buthadnosignificantdifferenceeffectsonthecopperaccumulationamountinthemuscleandkid⁃ney(P>0.05),andthemusclecopperaccumulationamountineachgroupremainedatalowlevel.Thecop⁃peraccumulationamountindifferenttissueswasinorderasfollows:liver>intestine>spleen>wholefish>skin,amongwhichthe499.63mg/kgcoppergroupexceededthenationalsafetylimitofcopperinfood(50mg/kg).Dietarycopperlevelhadnosignificanteffectsontheserumglutamicoxaloacetictransaminase(GOT),alkalinephosphatase(AKP)andlysozyme(LZM)activities(P>0.05).Withthedietarycopperlevelincreasing,theactivitiesofalanineaminotransferase(GPT),copper⁃zincsuperoxidedismutase(Cu⁃ZnSOD)andtotalantioxidantcapacity(T⁃AOC)inserumofricefieldeelincreasedfirstlyandthenmaintainsta⁃ble.TheserumGPTactivityin135.63and499.63mg/kgcoppergroupswassignificantlyhigherthanthatin14.21,23.95and37.01mg/kgcoppergroups(P<0.05),andtheserumCu⁃ZnSODactivityandT⁃AOCin37.01,135.63and499.63mg/kgcoppergroupswassignificantlyhigherthanthatin14.21and23.95mg/kgcoppergroups(P<0.05).Inconclusion,feedingappropriatecopperleveldietcanimprovethebodyantioxidantabilityofricefieldeel,andinsufficientorexcessivecopperwillreducethegrowthperformanceofricefieldeel.Copperismainlyaccumulatedinliverandintestine.Feedinghigh⁃copperdietwillleadtocopperaccumulationex⁃ceedstandardinliver,andthereisariskofliverinjuryofricefieldeel,whichhasnoobviousimpactonfoodsafetyofitsmuscle.UsingFCRandWGRasevaluationindexes,thecopperrequirementof60to95gricefieldeelis44.29to45.84mg/kg.[ChineseJournalofAnimalNutrition,2020,32(4):1800⁃1808]Keywords:ricefieldeel(Monopterusalbus);copperlevel;growthperformance;tissuecopperaccumulation;serumbiochemicalindexes8081。

几种化学因子对泥鳅精子活力的影响

几种化学因子对泥鳅精子活力的影响

几种化学因子对泥鳅精子活力的影响柴毅;黄栋才;李罗新【期刊名称】《安徽农业科学》【年(卷),期】2009(037)036【摘要】[目的]探讨泥鳅精子在不同浓度K~+、Na~+、Ca~(2+)、Mg~(2+)溶液中的活力并确定泥鳅精子激活液的理化因子的最佳浓度参数.[方法]用挤压法采精,通过观察和比较泥鳅精子在不同试验溶液中的活力,研究了几种化学因子对泥鳅精子活力的影响.[结果]在KCl溶液浓度为0.5%时,其中的泥鳅精子活力达到最高,为246 s,此后随KCl溶液浓度的增大而陡降.在NaCl溶液浓度为0.4%时,其中的泥鳅精子活力达到最高,为100 s,低于精子在KCl溶液中的最高活力,此后随NaCl溶液浓度的增大而快速降低.在CaCl_2溶液浓度为0.4%时,其中的泥鳅精子活力达到最高,为27 s,在MgCl_2溶液浓度为0.3%时,其中的泥鳅精子活力达到最高,为20 s,此后精子活力随二者浓度的增加均表现出缓慢下降的趋势.[结论]在鱼类的人工授精过程中,应避免使用高浓度Ca~(2+)、Mg~(2+)水配制精子激活液.【总页数】2页(P17981-17982)【作者】柴毅;黄栋才;李罗新【作者单位】长江大学动物科学学院,湖北荆州,434025;长江大学动物科学学院,湖北荆州,434025;农业部淡水鱼类种质资源与生物技术重点开放实验室,中国水产科学院长江水产研究所,湖北荆州,434000【正文语种】中文【中图分类】S965.199【相关文献】1.几种因子对鞍带石斑鱼精子活力的影响 [J], 梁伟峰;张海发;王云新;黄国光;黄培卫;沈南南2.几种化学因子对白缘(鱼央)精子活力的影响 [J], 柴毅;李罗新;张彦宁;陈丽3.几种环境因子对大弹涂鱼精子活力的影响 [J], 魏平;闫家强;竺俊全4.几种理化因子对厚壳贻贝精子活力的影响 [J], 钟爱华5.几种环境因子对马口鱼精子活力的影响 [J], 郑学斌;张清科;朱咏梅;竺俊全因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。

硫酸铜对水产植物的影响及对策[最新]

硫酸铜对水产植物的影响及对策[最新]

硫酸铜对水产动物的影响及对策水产用硫酸铜化学式为CuS04·5H2O,含量96%左右。

它来源广、价格低,能杀死多种细菌、寄生虫、藻类及青苔等水产敌害生物。

其原理是Cu2+使生物体蛋白质变性而死亡。

与双效灵、晶体敌百虫等药物配伍使用具有菌虫双杀的效果。

基于以上原因,不少养殖户把它作为常备药物。

但是,硫酸铜客观上也给使用者带来风险,我市每年都会发生数起因使用硫酸铜造成水产动物死亡的事件,给养殖户造成经济损失、指导者蒙受精神压力。

经现场分析、结合权威报道参考,笔者认为硫酸铜对水产动物主要影响及解决对策有以下几点:一、中毒死亡1. 过量使用例1.1988年6月30日,马桥镇祖师村侯某蟹池泼洒硫酸铜杀青苔,浓度为1毫克/升,用药后,河蟹中毒上岸,死亡10多千克,加水急救后缓解。

由于各养殖品种、同一品种不同生长阶段及不同环境条件下对硫酸铜敏感程度不一,淡水白鲳、鳜鱼等鱼类对硫酸铜不敏感,主养鳜鱼的池塘只要溶氧充足,即使饵料鱼全部中毒死亡,鳜鱼却能安然无恙。

治疗淡水鲳原虫病常用浓度1.5毫克/升,青虾池使用浓度一般在0.3毫克/升以下,而中华鳖稚鳖的安全浓度为94.9毫克/升。

一些养殖户不了解这些特殊性,用药过量导致中毒死亡。

例2.2000年7月21日下午5时,斜桥镇灯杆村王某8亩河沟用硫酸铜治中华鳋病和鲢出血病,浓度为0.8毫克/升,22日上午7时,鲢、鲤、鲫、草相继浮出水面,呈严重缺氧状,呼吸节律变快,部分鱼有抽搐现象,鳃片上蒙有一层很淡的氧化膜,鳃丝扭曲。

所幸发现及时,大量进排水稀释,死鱼30千克左右。

硫酸铜毒性受水温、溶氧、pH值、县(悬)浮有机物等因子综合影响。

国内学者曾对白鲢做过试验:水温 16℃--30℃之间,温度每升高5℃,硫酸铜毒性就增强0.85—0.95倍。

对体重12克的鳙鱼试验,温度从22.9℃升至26.7℃,硫酸铜安全浓度从0.71毫克/升降至0.5毫克/升,Ca2+与水体中的游离氨结合生成Cu(NH3)²,毒性增强 1—1.4倍。

HgCl2对泥鳅精子运动的影响

HgCl2对泥鳅精子运动的影响

HgCl2对泥鳅精子运动的影响陈杰;胡家会;陈玉明;王曰文;陈凤梅【期刊名称】《四川动物》【年(卷),期】2012(031)001【摘要】为了检测不同浓度的HgCl2对泥鳅Misgurnus anguillicaudatus精子运动的影响,以泥鳅精子为实验材料,用含终浓度分别为0(对照)、1、5、10、15和20 μmoL/L的HgCl2待测液分别孵育0、2、4和6 h后激活,激活后立即在显微镜(Olympus IX81)下观察精子运动参数.为进一步探讨HgCl2对泥鳅精子运动影响的机制,用终浓度为20μmol/L的HgCl2保存液孵育泥鳅精子10 min,以含终浓度分别为0、0.1、1、10 mmol/L的2-巯基乙醇和20μmol/LHgCl2混合液为激活液激活.激活后立即在显微镜下观察精子运动,发现2-巯基乙醇町逆转HgCl2对泥鳅精子的抑制作用,为探讨HgCl2对泥鳅精子运动影响的可能机制提供参考.【总页数】4页(P50-53)【作者】陈杰;胡家会;陈玉明;王曰文;陈凤梅【作者单位】聊城大学生命科学学院,山东聊城252059;聊城大学生命科学学院,山东聊城252059;聊城大学生命科学学院,山东聊城252059;聊城大学生命科学学院,山东聊城252059;聊城大学生命科学学院,山东聊城252059【正文语种】中文【中图分类】Q959.4;Q955【相关文献】1.CdCl2对泥鳅精子运动的影响 [J], 王曰文;陈杰;陈玉明;陈凤梅;胡家会2.HgCl2与CdCl2对河蟹精子DNA损伤的单细胞凝胶电泳检测研究 [J], 范丽君;周忠良;陈东华;赵云龙;孙菊香;王群3.二甲基亚砜(DMSO)对泥鳅精子运动的影响 [J], 刘国翠;胡家会4.Cu2+对泥鳅精子运动的影响 [J], 陈玉明;胡家会;陈杰;王曰文5.大鳞副泥鳅卵和泥鳅精子杂交受精细胞的观察 [J], 赵振山;高贵琴;孙文学;罗宇良;曹志华因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。

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