日立L-8900全自动氨基酸分析仪简易标准操作规程

日立L-8900全自动氨基酸分析仪标准操作规程

一. 目的

为规范日立L-8900全自动氨基酸分析仪的基本操作、维护保养、异常处理程序，防止人为操作失误，确保氨基酸分析仪正常运转，特制定本程序。

二.适用范围

本程序适用于日立L-8900全自动氨基酸分析仪。

三．责任

1. 本程序的实施者为氨基酸分析仪操作者，各实验室负责人对本程序的实施情况进行监

督。

2. 日常运行及维护、定期维护、定期点检及保养由氨基酸分析仪操作者负责。

四. 内容

1．联机

（1）打开电脑。

（2）打开L-8900主机电源。

（3）双击桌面的图标，进入1-1画面，双击图标，进入程序。

1-1

（4）在菜单栏中依次点击和，出现1-2画面，单击

联机。大约两分钟，初始化完毕。中Uninitialized

变成Idle，图1-2变成了图1-3，各个组件可以进行控制了。初始化完毕后，分离柱的温度逐渐上升，分离柱的温度会升到50℃。如果打开反应柱的柱温控制，则温度大约20分钟升到135℃。

1-2

1-3

2、手动各组件控制操作

（1）泵1和泵2

点击，出现2-1的画面。设置泵1，流量0.1ml/分钟，B6 100%。点击打开泵1。泵打开后，泵的背景颜色由灰色变为黄色。

2-1

点击，出现2-2的画面，设置泵2，流量0.1ml/分钟，R3 100%。点击打开泵2。泵打开后，泵的背景颜色由灰色变为黄色。

2-2

（2）自动进样器

点击，出现2-3的画面，设置Sampler Wash不少于3次。

2-3

（3）分离柱柱温箱

点击，出现2-4画面，设置柱温50℃，设置ON，打开柱温箱。柱温箱打开后，背景颜色由灰色变为黄色。

2-4

（4）反应柱柱温箱

点击，出现2-5画面，设置柱温135℃，设置ON，打开柱温箱。柱温箱打开后，背景颜色由灰色变为黄色。

2-5

（5）钨灯

点击，出现2-6画面，设置ON，打开钨灯。钨灯打开后，背景颜色由灰色变为黄色。

2-6

3、编辑方法

（1）Stand By 程序

（a）依次点击、、出现3-1-1的画面。

3-1-1

（b）选中，点击。再依次点击、

，出现3-1-2的画面。

3-1-2

（c）在设置中选中各个柱（也可以不选），其余参数默认。

（d）将方法另存为Stand-By，文件名及路径均可自选。注意最好不要覆盖原来的方法，最好另存方法。

（2）再生程序

如同Stand By 程序，只是选中而已。将方法另存为RG。

（3）分析程序

（a）如同Stand By 程序，选中，参数默认，将方法另存为Analyze。

4、编辑Sequence

（1）依次点击、、，出现4-1画面。选中，其余参数默认。

4-1

（2）点击，出现4-2画面，根据需要填写各个参数（未知样品的个数、未知样品重复次数等）。

4-2

（3）点击，出现4-3画面，根据需要填写各个参数（标样和未知样品的第一个瓶号，增量、进样体积等）。

4-3

（4）点击，出现4-4画面，根据需要填写各个参数（标样品的个数、标样的重复次数等）。

。

4-4

（5）点击，出现4-5画面。

4-5

（6）通过复制、编辑，最终将Sequence编辑如图4-6所示。注意此时第一行是升温程序（Stand-By），第二行是再生程序（RG），两行的进样体积均为0，Run Type是Unknown，第三行是标准样品，四行起是未知样。

（7）将Sequence另存为Test。

5、采集数据

点击Control、Sequence Run，运行Sequence Test。

数据采集完后，机器自动进入清洗程序。清洗一个小时后，自动关泵，关灯，关柱温箱。

6、关机

点击断开连接，关闭程序，关闭主机电源。

7、试剂的准备

反应液R1、R2：醋酸钠(CH3COONa·2H2O)、冰醋酸(CH3COOH)、茚三酮(C9H6O4)、丙二醇甲醚（CH3CH(OH)·CH2OCH3）、硼氢化钠（NaBH4）

缓冲液B1到B6：柠檬酸钠(Na3C6H5O7·2H2O)、柠檬酸(C6H8O7·H2O)、氯化钠(NaCl)、无水乙醇(C2H5OH)、氢氧化钠(NaOH)、硫代双乙醇（硫二甘醇）(S(C2H4OH)2)、苯甲醇（）、brij-35(聚氧乙烯十二烷基谜)、辛酸(C7H15COOH)

试剂建议用优级纯的。

8．出峰情况

Asp：天门冬氨酸Thr：苏氨酸Ser：丝氨酸Glu：谷氨酸Pro：脯氨酸Gly：甘氨酸Ala：丙氨酸Cys：胱氨酸Val：缬氨酸Met：蛋氨酸Ile：异亮氨酸Leu：亮氨酸Tyr：酪氨酸Phe：苯基丙氨酸Lys：赖氨酸NH3：氨气His：组氨酸Trp：色氨酸Arg：精氨酸

9. 仪器使用注意事项

（1）氮气压力：仪器需要的压力为0.05—0.1Mpa，压力过高会损坏仪器。

（2）为避免堵塞，注意泵1泵2的打开顺序。先开泵1，再开泵2。泵1用B6100%，0.1ml/分钟；泵2用R3100%，0.1ml/分钟。

（3）电脑严禁更改设置，严禁安装其他程序，严禁上网。注意避免染上病毒。因软件需要注册，如果操作系统发生故障，请通知天美公司。

（4）进样浓度范围：0.4—10 nmol，过高的浓度会影响分析结果，且容易堵塞反应柱。

（5）注意检查仪器泵的压力是否正常。

（6）计划长期不用可以用B5清洗泵的流路。但最好只清洗泵头，即开泵时最好将排放阀打开。

10. 样品的前处理

准备想做测试的样品，在开动氨基酸分析仪之前，需要进行适合该项检测目的的处理，在这上分有两大系统，一个是将氨基酸以及和它有关连的化合物为对象对游离氨基酸的测定法（以下称生物液分析法），另一个是由蛋白质加水分解而得到的氨基酸对它的分析法（以下称蛋白质加水分解物分析法）在此对其中的几个作介绍。另外，作为原则请用0.45um的过滤器对样品过滤。

（1）生物液分析法的前处理：

主要目的是做氨基酸成分的提取（萃取），除去蛋白质以及不溶性物质。

（a）血液

①把血液用7,000~10,000 rpm(7000~10000 G)离心分离15分钟