注射用重组人干扰素a-2b工艺规程
重组人干扰素α-2b
重组人干扰素α-2b生产工艺设计(赵杨杨，河南城建学院，平顶山，4567000)摘要：重组人干扰素α-2b(rIFN 2b)是一种广谱抗病毒、抗肿瘤和调节机体免疫功能的药物。
干扰素是病毒进入机体后诱导宿主细胞产生的反应物，它从细胞释放后可促使其他细胞抵抗病毒的感染，干扰素增强免疫功能的机理是：调节机体的免疫监视，防御和稳定功能，使杀伤(NK)细胞、Tc细胞的细胞毒杀伤作用增强；使吞噬细胞的活力增强；诱导外周血液中单核细胞活性；增加或诱导细胞表皮主要组织相容复合物抗原的表达。
临床用于治疗多发性骨髓病，后天免疫缺损症(AIDS)病人所患的卡波济肉瘤、恶性黑色素瘤、毛状细胞白血病及慢性活动性乙型肝炎。
关键词：重组人干扰素α-2b、菌种构建、分离、纯化、检测1.基因工程假单胞杆菌菌种的建立1.1干扰素基因的克隆从感染新城疫病毒的人血红白细胞中分离干扰素α-2b基因的mRNA，由逆转录酶将Poly（A）RNA反转录形成cRNA第一链。
再由DNA聚合酶Ⅰ的Klenow片段催化聚合形成cDNA第二条链。
在dCTP存在的条件下，利用末端转移酶给cDNA加Poly（dC)尾，连接到质粒pBR322上。
转化到大肠杆菌感受态细胞中，并用氨苄青霉素和四环素筛选抗性克隆，获得编码人干扰素α-2b的基因序列。
1.2干扰素表达载体的构建把干扰素基因与宿主载体pAYC37连接，筛选出序列正确的表达载体pVG。
将表达载体导入假单胞杆菌中，筛选得到干扰素工程菌，表达重组人干扰素-α-2b不低于2.0×109IU/L，并具有氨苄青霉素、四环素和链霉素的抗性。
2. 重组人干扰素α-2b发酵与纯化2.1重组人干扰素α-2b工程菌的发酵取菌种1ml接种于100ml LB培养基(含50μg/ml氨苄青霉素)的锥型瓶中,摇床30℃震荡培养6~7h,OD值达0.6~0.7h,按1∶20的比例转种于1000ml LB培养基中,摇床30℃震荡培养7~8h,OD值达1.0~1.2h,接种30L发酵罐中,30℃培养4~5h后,42℃培养4h,离心收集菌体。
干扰素的生产工艺过程
干扰素的生产工艺过程1．菌种制备取－70℃下保存的甘油管菌种（工作种子批），于室温下融化。
然后，接入摇瓶，培养温度30℃，pH7.0，250 r/min活化培养18±2小时后，进行吸光值测定和发酵液杂菌检查。
2．种子罐培养将已活化的菌种接入装有30L培养基的种子罐中，接种量10%，培养温度30℃，pH7.0，级联调节通气量和搅拌转速，控制溶解氧为30%，培养3～4小时，转入发酵罐中，同时取样发酵液进行显微镜检查和LB培养基划线检查，控制杂菌。
3．发酵罐培养将种子液通入300L培养基的发酵罐中，接种量10%，培养温度30℃，pH7.0。
级联调节通气量和搅拌转速，控制溶解氧30%，培养4小时。
然后控制培养温度20℃，pH6.0，溶解氧60%，继续培养5～6.5小时。
同时进行发酵液杂菌检查，当OD值达9.0±1.0后，用5℃冷却水快速降温至15℃以下，以减缓细胞衰老。
或者将发酵液转入收集罐中，加入冰块使温度迅速降至10℃以下。
4．菌体收集将已降温的发酵液转入连续流离心机，16000 r/min离心收集。
进行干扰素含量、菌体蛋白含量、菌体干燥失重、质粒结构一致性、质粒稳定性等项目的检测。
菌体于－20℃冰柜中保存时，不得超过12个月。
每保存3个月，检查一次活性。
11.4.3.4 干扰素发酵过程控制在假单孢杆菌的发酵生产中，菌体在培养1.5小时分裂速度最快，到3.5小时开始下降。
而干扰素的迅速合成出现在3.5小时之后，在4小时达到最大，然后由于降解而迅速下降。
可见在发酵生产工艺中，假单孢杆菌的生长和干扰素的生产基本处于不相关状态，可采用两段培养的策略进行过程控制。
1．溶解氧控制分别在生长阶段和生产阶段采用各自最佳溶解氧浓度，以期提高干扰素的发酵水平。
通过级联调节通气量和搅拌转速得以实现。
2．温度控制假单孢杆菌生长最适温度与产物形成最适温度是不同的。
产物合成温度控制在20℃可以有效防止干扰素-α2b的降解，而其最佳生长温度则为30℃。
注射用重组人干扰素α2b(假单胞菌)
注射用重组人干扰素α2b（假单胞菌）Zhusheyong Chongzu Ren Ganraosu α2b (Jiadanbaojun) Recombinant Human Interferon α2b for Injection（P.putida）本品系由高效表达人干扰素α2b基因的腐生型假单胞菌，经发酵、分离和高度纯化后冻干制成。
含适宜稳定剂，不含防腐剂和抗生素。
1基本要求生产和检定用设施、原料及辅料水、器具、动物等应符合“凡例”的有关要求。
2制造2．1工程菌菌种2．1．1名称及来源重组人干扰素α2b工程菌株系由带有人干扰素α2b基因的重组质粒转化的腐生型假单胞菌菌株(Pseudomonas putida VG-4)。
2．1．2种子批的建立应符合“生物制品生产检定用菌毒种管理规程”的规定。
2．1．3菌种检定主种子批和工作种子批的菌种应进行以下各项全面检定。
2．1．3．1划种LB琼脂平板应呈典型腐生型假单胞菌集落形态，无其他杂菌生长。
2．1．3．2染色镜检棒状，可运动，有荚膜，无芽孢。
涂片染色后应呈典型的革兰阴性。
2．1．3．3对抗生素的抗性应与原始菌种相符：硫酸链霉素150μg/ml，盐酸四环素50μg/ml和氨苄西林100μg/ml。
2．1．3．4电镜检查（工作种子批可免做）应为典型腐生型假单胞菌形态，无支原体、病毒样颗粒及其他微生物污染。
2．1．3．5生化反应不液化明胶，不水解淀粉和聚β-羟基丁酸酯（附录ⅪⅤ），不能利用反硝化作用进行厌氧呼吸，能够合成荧光色素。
2．1．3．6干扰素表达量在摇床中培养，应不低于原始菌种的表达量（1.0×109IU/L）。
2．1．3．7表达的干扰素型别应用抗α2b型干扰素参考血清做中和试验，证明型别无误。
2．1．3．8质粒检查该质粒的酶切图谱应与原始重组质粒相符。
2.1.3.9 目的基因核苷酸序列检查目的基因核苷酸序列应与理论值相符。
2．2原液2．2．1种子液制备将检定合格的工作种子批菌种接种于适宜的培养基（可含适量抗生素）中培养，供发酵罐接种用。
重组人干扰素生产工艺
4.1 干扰素α-2b分离工艺过程
菌体裂解 预处理 初级分离
(1)菌体裂解
裂解缓冲液：纯化水配制，2℃～10℃ （pH7.5）
使用保护剂：EDTA，PMSF。 破碎－20℃菌体：2厘米以下的碎块 搅拌：加裂解缓冲液，2℃～10℃，2hr 冻融: 细胞完全破裂，释放干扰素。
(2)预处理-沉淀
15℃以下。 检测：发酵液杂菌检查
3.4．菌体收集
连续流离心机：冷却的发酵液，16000 r/min 离心收集。
菌体保存：－20℃冰柜，不超过12个月。 检测：干扰素含量、菌体蛋白含量、菌体干燥
失重、质粒结构一致性、质粒稳定性。
4 干扰素的分离纯化工艺过程
4.1、干扰素分离工艺过程
4.2、干扰素的纯化工艺过程
主要内容
干扰素概述 基因工程假单胞杆菌的构建与保藏 干扰素的发酵工艺过程 干扰素的分离纯化工艺过程
1 .干扰素概述
干扰素的种类 干扰素的理化性质 干扰素的生物学活性 干扰素的临床应用 干扰素的生产工艺路线
1.1 干扰素的种类
概念： （interferon，IFN）
干扰素是一种细胞因子，它是机体感染病毒时，宿主细胞 通过抗病毒应答反应，而产生的一组结构类似、功能相近 的低分子糖蛋白。英文名称为Interferon，简称IFN。
重组人干扰素α-2b（rhIFNα-2b）
重组人干扰素α-2b（rhIFNα-2b）
产品名字：重组人干扰素α-2b
英文名字：Recombinant Human Interferon Alfa-2b
来源：酵母（Yeast）
分子量：重组人干扰素α-2b是一个单链的非糖基化多肽链，含165个氨基酸残基，两对二硫键，分子量约为19.3kD。
规格：20微克，100微克
配方：本品为无菌冻干粉，缓冲体系为20mM磷酸盐缓冲液。
人干扰素α-2b是由165个氨基酸残基组成的单链多肽，内含4个Cys，形成两对二硫键，其中Cys1-Cys98，Cys29-Cys138形成二硫键，分子量约为19.3kD。
干扰素在细胞表面与特殊的受体结合而发挥某些细胞活性，首先能诱导产生特异蛋白质，如蛋白激酶和2’, 5’寡聚腺苷酸合成酶等。
这两个酶的独特性质是均可被双链RNA激活，自磷酸化作用由此发生。
干扰素还能增强巨噬细胞的吞噬活性和淋巴细胞对靶细胞的特殊毒性，引起免疫调节。
人干扰素α-2b的作用如下：
（1）抗病毒作用：IFN-α具有广谱的抗病毒作用。
（2）抑制某些细胞的生长（cytostatic）。
（3）免疫调节作用：促进大多数细胞MHC类抗原的表达，活化NK细胞和CTL。
（4）抑制和杀伤肿瘤细胞：IFN-α杀伤肿瘤细胞主要是通过促进机体免疫功能，提高巨噬细胞、NK和CTL的杀伤水平。
应用领域：细胞培养，诊断试剂，实验检测等，详询我司。
避免反复冻融。
重组人干扰素α2a栓微生物限度检测标准操作规程
重组人干扰素α2a栓剂微生物限度检测标准操作规程依据：《中华人民共和国药典》2005年版第三部。
范围：本实验适用于重组人干扰素α2a栓剂的成品微生物限度检定。
目的：检查栓剂的微生物污染程度。
原理：在适合细菌及霉菌生长的培养基上，在适宜的温度下培养，通过菌落计数，测定栓剂染菌量，利用选择培养基，通过细菌形态及鉴别试验对控制菌进行检测。
内容：1 材料1．1 样品：从该批栓剂中随机抽取。
1．2 培养基1．2．1 干粉营养肉汤培养基。
1．2．2 干粉营养琼脂培养基。
1．2．3 干粉玫瑰红钠琼脂培养基。
1．2．4 干粉胆盐乳糖培养基。
1．2．5 干粉十六烷三甲基溴化氨琼脂培养基。
1．2．6 干粉甘露醇高盐琼脂培养基。
1．2．7 干粉绿脓菌素测定用培养基。
1．2．8 干粉明胶培养基。
1．2．9干粉硝酸盐胨水培养基。
以上培养基均由中国药品生物制品检定所提供。
1．3 试剂柠檬酸钠Na3C6H5O7. 2H2O 分析纯氯化钠NaCl 分析纯碘化钾KI 分析纯碘I2化学纯无水乙醇CH3CH2OH 分析纯结晶紫C25H30ClN3.9H2O草酸铵(NH4)2C2O4.H2O 化学纯沙黄氯仿CHCl3分析纯盐酸HCl 分析纯来苏儿外用二盐酸二甲基对苯二胺1．4 阳性对照菌1．4．1 金黄色葡萄球菌：购自吉林省药检所。
1．4．2 铜绿假单胞菌：购自吉林省药检所。
1．5 注射用水：符合《中华人民共和国药典》2005年版要求。
1．6 其它接种针、接种环、硫酸纸、剪刀、镊子、刀片、牛皮纸、脱脂棉、线绳、滤纸、载玻片、煤气头、石棉网1．7 仪器及设备超净工作台CBK-D20型安徽蚌埠净化设备厂台式离心机TGL-16G型上海安亭科学仪器厂扭力托盘天平TN-100B型上海第二仪器厂电子分析天平ES-120J 型沈阳龙腾电子称量仪器有限公司恒温培养箱PYX-DHS型湖北省黄石市医疗器械厂空气恒温震荡器HZQ-C型哈尔滨市东联电子技术开发有限公司生物显微镜XSZ-H3型重庆光学仪器厂恒温水浴箱HW-1 型北京医疗设备厂4℃冰箱BCD-185型沈阳医疗器械厂1．8 器皿试管、杜试管、注射器（10ml）、平皿（90mm）、青霉素瓶（10ml）、250ml 三角瓶、烧杯（100ml、250ml、500ml）、吸管（10ml、5ml、1ml）、吸球（1ml、10ml）、离心管50ml、250ml血浆瓶、盐水瓶（250ml、500ml）、试管栓、青瓶栓、翻帽栓、量筒（100ml、250ml、500ml）、玻璃棒2 方法2．1 准备工作2．1．1 工作环境：所有无菌操作在100级超净台内进行，其他需在K空调环境中操作，确认场地清场合格后，摘下“清场合格”标志牌，挂上“使用中”标志牌。
人干扰素a2b生产工艺
测定方法
菌体浓度测定采用浊度法 测定波长600 nm处的光密度(OD600), 根据标准曲线计算菌体干重。 葡萄糖测定采用葡萄糖测定试剂盒测定 乙酸测定采用气相色谱法
hIFNa2b的电泳测定采用三(羟甲 基)甲基甘氨酸(φ=0.15)-SDS-聚丙 烯酰胺三层胶系统分离目的蛋白 , 凝胶用考马斯亮蓝染色,用图像分
析系统定量 。
取发酵液于12 000 r/min,4°C下离 心10 min,得到的菌体用Tris-HCl缓 冲液(50 mmol/L, pH 7.0,4°C)洗涤, 然后溶于上样缓冲液中[12mmol/L、 pH 6.8 Tris-HCl,甘油 (φ=0.05),SDS(7.5 g/L),巯基乙醇 (φ=0.02),溴酚兰(0.5 g/L]。
结果与讨论
分批发酵
在5 L罐中分批培养
葡萄糖流加对于hIFNa2b 生产水平的影响
诱导前添加有机氮源对hIFNa2b生产水平 的影响
Interferona2b,hIFNa2b)
hIFNa2b是由165个氨基酸组成的多 肽,具有抗病毒、抗肿瘤、免疫调节、 修复DNA结构损伤等作用。
hIFNa2b在临床上广泛应用,对肝炎、
呼吸道病毒感染、疱疹病毒感染等 均具有治疗作用。
培养基： 种子培养基为LB培养基 蛋白胨10 g/L 酵母抽提物5 g/L NaCl 10 g/L 灭菌后加入100 mg/L氨苄青霉素钠 分批发酵培养基为含葡萄糖 5 g/L的LB 培养基
发酵罐培养
将二级种子以6%的接种量接入5 L 发酵罐(RIBE-5型)中。培养液装量 为2.5 L，生长阶段控制温度30°C, 表达阶段控制温度42°C，发酵过 程中控制pH为7.0,通气量4 L/min， 初始搅拌转速为400 r/min,发酵过 程中转速逐渐提高以维持溶氧大于 20%。
重组人干扰素生产工艺
重组人干扰素生产工艺一、简介重组人干扰素（Interferon）是一类重要的免疫调节蛋白，在生物制药领域具有广泛的应用，特别是在抗病毒、抗肿瘤和免疫调节等方面。
重组人干扰素生产工艺是指利用基因工程技术，将人体细胞中制造干扰素的基因导入细菌、真菌或动植物细胞中，并通过发酵、提取等步骤最终制备重组人干扰素的过程。
本文将介绍重组人干扰素生产工艺的关键步骤、技术原理及优化方法。
二、生产工艺步骤1.基因克隆和表达载体构建：–选择适合的重组表达宿主菌，如大肠杆菌、毕赤酵母等。
–将编码重组人干扰素的基因克隆到表达载体中，构建表达载体。
–将表达载体导入宿主菌细胞中，实现干扰素基因的表达。
2.发酵过程：–设计合适的培养基，满足宿主菌的生长和表达需求。
–进行适当的培养条件控制，如温度、pH值、氧气供给等。
–监测培养过程中的生长情况和干扰素的表达水平。
3.重组人干扰素的提取与纯化：–通过离心、超滤等方法将细菌或细胞破碎，释放干扰素。
–采用亲和层析、离子交换层析等技术进行干扰素的纯化和富集。
–进行最终的纯化步骤，得到高纯度的重组人干扰素。
三、关键技术原理•基因克隆：利用PCR扩增目的基因，将其插入适当的表达载体中。
•表达调控：通过调控启动子、转录子等元件来控制干扰素基因的表达水平。
•蛋白质纯化：利用蛋白质的生物特性，如大小、电荷等，选用不同的层析技术进行纯化。
四、工艺优化方法1.菌种优化：选择高表达、稳定的宿主菌株，优化质粒结构。
2.培养条件优化：根据宿主菌的生长情况，调整培养基成分和培养条件。
3.表达调控：利用诱导剂、转录启动子等手段调控干扰素基因的表达水平。
4.提取纯化优化：优化破碎、纯化过程，提高干扰素的产率和纯度。
五、结论重组人干扰素的生产工艺是一项复杂而重要的技术，通过不断优化工艺流程和条件，可以提高干扰素的产量和纯度，满足临床和市场需求。
未来随着基因工程技术的不断发展，重组人干扰素生产工艺将进一步精细化和高效化，为人类健康带来更大的益处。
干扰素α-2b长效注射微球的处方和制备工艺的研究
干扰素α-2b长效注射微球的处方和制备工艺的研究吴诚;尹东锋;鲁莹;钟延强【期刊名称】《第二军医大学学报》【年(卷),期】2006(27)1【摘要】目的:制备载干扰素-α2b(IFN--α2b)可注射微球,开发其长效注射剂型。
方法:以乳酸-羟乙酸共聚物(PLGA)为载体材料,用复乳法(w/o/w)和固体/油/油(s/o/o)法制备载IFN--α2b长效注射微球;考察粒径大小、外观、包封率等理化性质;用微量二辛可宁酸(bicinchoninic acid,BCA)法考察微球的体外释药特性及影响因素;用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳初步评价了微球制备工艺和体外释放过程对IFN--α2b稳定性的影响。
结果:用两种方法制备的微球球形圆整,分散性好,包封率在80%以上;用w/o/w法制备微球时,IFN--α2b原液超滤处理可显著影响微球的平均粒径和体外释放特性,使用特性黏度较低的PLGA时,两种方法制备的微球在1个月内的累积释放均显著提高;使用s/o/o法制备的微球中IFN--α2b部分聚集,而w/o/w法制备的微球中的IFN--α2b的电泳行为和原液相同。
结论:w/o/w和s/o/o法制备的载IFN--α2b注射微球均可在体外缓释1个月。
【总页数】5页(P76-80)【关键词】干扰素α;微球体;聚乳酸羟基乙酸共聚物;制备工艺【作者】吴诚;尹东锋;鲁莹;钟延强【作者单位】第二军医大学药学院药剂学教研室【正文语种】中文【中图分类】R944【相关文献】1.重组α-2b干扰素缓释微囊制备工艺及体外释药过程研究 [J], 张磊;杨松;葛志强;储结根;元英进2.干扰素α-2b缓释微球的制备及影响因素考察 [J], 李志平;李云富;张振亚;刘燕;曲燕燕;梅兴国3.干扰素α-2b复合物PLGA微球的制备及影响因素 [J], 樊莉;鲁莹;吴诚;钟延强4.新型免疫磁性微球的制备及其在α-2b干扰素分离纯化中的应用 [J], 曹宇;陈家琪;王深琪;杨文博;白钢因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
重组人干扰素α2a
注射用重组人干扰素α1b从干扰素最初发现到现在已经过去50年，当年英国科学家Isaacs和Lindenmann发现用加热灭活的流感病毒孵育小鸡尿囊绒膜会产生一种物质，它能对肝病毒的感染产生抵抗。
1957年,Proc R Soc Lond B Biol Sci刊登了他们的论文,在这篇论文中,Isaacs和Lindenmann将这种因子命名为干扰素(INTERFERON)。
从1980年代后期开始,借助分子生物学技术的发展,科学家们对干扰素的研究更加深入,各型干扰素、干扰素亚型及其功能逐渐为人们所认识,目前已经确认干扰素三种主要生物学作用为抗病毒、抗肿瘤和免疫调节作用。
同时,由于DNA重组技术应用,干扰素制备技术也得到很大提高, 干扰素的研制经历了人白细胞干扰素、重组技术干扰素等阶段。
但在重组DNA技术发展和应用以前，分离纯化工艺的收率较低，而且有潜在病毒污染的危险。
1981年重组DNA技术的成功,提供了一种经济的方法得以产生大量纯化的重组人干扰素。
【1】干扰素是一组多功能的细胞因子，根据其氨基酸结构、抗原性和细胞来源，可将其分为三类：IFN-α, IFN-β和IFN-γ。
α干扰素为多基因产物，分为许多亚型，其中IFN-α1b主要用于抗病毒治疗、抑制和杀伤肿瘤细胞以及免疫调节。
《中国生物制品规程》1995年版开始收载细胞因子类制品，分别是“冻干精制人白细胞干扰素”，“冻干基因工程干扰素α1b”, “冻干基因工程干扰素α2a”。
“冻干精制人白细胞干扰素”是用特定的诱生剂诱导健康人白细胞，经提取后制成的冻干干扰素。
由于该制品生产原料来源困难，工艺复杂，收率低，价格昂贵，并且具有血源性病毒污染的潜在风险，随着基因工程干扰素的出现已被淘汰，《中国生物制品规程》2000年版不再收载该制品。
从《中国生物制品规程》2000年版起，采用重组DNA技术生产的干扰素α1b制品命名为“重组人干扰素α1b”。
基因工程干扰素α1b是通过重组DNA技术将人干扰素α1b的编码基因引入某种工程菌（大肠杆菌）后，高效地表达该基因产物，再经分离、纯化、冻干制得。
请设计干扰素a2b的发酵工艺规程
请设计干扰素a2b的发酵工艺规程1、对重组人干扰素a2b或该制剂的任何成份有过敏史者禁用。
2、患有严重心脏疾病者禁用。
3、严重的肝、肾或骨髓功能不正常者禁用。
4、癫痫及中枢神经系统功能损伤者禁用。
5、有其他严重疾病不能耐受本品者，不宜使用。
[成份]主要成份为重组人干扰素a2b，由高效表达人干扰素a2b。
基因的腐生型假单胞菌，经发酵、分离和高度纯化制成。
辅料为人血白蛋白，甘露醇、磷酸氢二钠、酸二氢钠。
[性状] 应为白色薄壳状琉松体，加入标示量注射用水后应迅速复溶为澄明液体。
[适应症]1、用于治疗某些病毒性疾病，如急慢性病毒性肝炎、带状疱疹、尖锐湿疣。
2、用于治疗某些肿瘤，如毛细胞性白血病、慢性髓细胞性白血病、多发性骨髓瘤、非何杰金氏淋巴痛、恶性黑色素瘤、肾细胞癌、喉乳头状瘤、卡波氏肉瘤、卵巢癌、基底细胞癌、表面膀胱癌等。
[规格]按不同规格分别为1X106IU,支，3X106IU/支，5X106IU/支，6X106IU/支，复溶后体积1、0毫升。
[用法用量]本品可以肌肉注射、皮下注射和病灶注射。
1、慢性乙型肝炎: 皮下或肌肉注射，3--6x106IU/日,连用四周后改为3次/周，连用16周以上。
2、急慢性丙型肝炎:皮下或肌肉注射,3--6x106IU/日,连用四周后改为3次/周，连用16周以上。
3、丁型肝炎: 皮下或肌肉注射，4-5x106TU/日,连用四周后改为3次/周，连用16周以上。
4、带状疱疹: 肌肉注射，1x1061U/日，连用6天，同时口服无环鸟苷。
5、尖锐湿疣: 可单独应用，肌肉注射，1-3x1061U/日，连用四周。
也可与激光或电灼等合用，一般采用疣体基底部注射，1x1061U/次。
6、毛细胞性白血病: 2-8x 1061U/m2天，连用至少3个月、7、慢性髓细胞性白血病: 3-5x1061Um2天，肌肉注射。
可与化疗药物羟基脲、Ara-c等合用。
8、多发性骨髓瘤:作为诱导或维持治疗，3-5x1061U/m2,肌肉注射，3次/周，并与VMCP等化疗方案合用。
人干扰素α—2b生产工艺的研究
人干扰素α—2b生产工艺的研究
阎玉清;巫爱珍
【期刊名称】《生物工程学报》
【年(卷),期】1996(012)001
【摘要】人干扰素α-2b的简易、高效生产工艺研究,包括高效率、小型化的发酵
技术,不用单克隆抗体亲和层析的纯化工序,以及大肠杆菌表达的人干扰素α-2b包
涵体蛋白的天然构型复性等问题,从10L基因工程大肠杆菌发酵液所得1000g菌体中得人干扰素α-2b约500mg,效价为1×10~8u/mg,设备投资少,生产成本低,产
品表现了高纯度、高效价。
适宜大量生产,为广大人民群众提供廉价高质量药品创
造了条件。
【总页数】5页(P23-27)
【作者】阎玉清;巫爱珍
【作者单位】不详;不详
【正文语种】中文
【中图分类】TQ464.7
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技术标准文件1．产品概述1.1 产品名称：商品名：隆化诺通用名：注射用重组干扰素α-2b英文名：Recombinant Human Interferon α-2b for Injection。
汉语拼音：Zhusheyong Chongzurenganraosu α-2b。
产品代码:1.3类别：生物药1.4剂型：冻干粉针剂1.5规格：⑴100万单位；⑵300万单位；〔3〕500万单位1.6批量：60000 瓶1.7性状：本品为白色薄壳状疏松体，参加标示量注射用水后应迅速复溶为澄明液体。
1.8作用与用途：治疗慢性乙型肝炎、肿瘤及其它病毒性疾病。
1.9包装规格：100万单位×10瓶×40盒/箱， 300万单位×10瓶×40盒/箱，500万单位×10瓶×40盒/箱1.10贮藏：2～8℃避光保存。
1有效期：2年6个月2批准文号：300万单位国药准字S1*******；500万单位国药准字S2*******；3考前须知：1. 本品冻干制剂为白色疏松体，溶解后为无色透明液体，如遇有浑浊、沉淀等异常现象，那么不得使用。
包装瓶有损坏、过期失效不能使用。
1.13.2. 以注射用水溶解时应沿瓶壁注入，以免产生气泡，溶解后宜于当日用完，不得放置保存。
1.14禁忌：1.14.1. 对重组人干扰素α-2b或该制剂的任何成分有过敏史。
1.14.2. 患有严重心脏疾病。
1.14.3. 严重的肝、肾或骨髓功能不正常者。
1.14.4. 癫痫及中枢神经系统功能损伤者。
1.14.5. 有其他严重疾病不能耐受本品者，不宜使用。
2．处方及处方依据：规格：100万单位/瓶；批量：60000 瓶规格： 300万单位/瓶；批量：60000 瓶规格： 500万单位/瓶；批量：60000 瓶2.2处方依据：规格： 100万IU /瓶国药准字S1*******；规格： 300万IU /瓶国药准字S1*******规格： 500万IU /瓶国药准字S2******* 2.3生产批件:药品GMP证书及生产批件复印件：见附录3．工艺3.2 生产过程及技术参数配料仓库配料人员应认真对照生产领料单〔附件1〕核对原料“合格证〞上的代号、名称、规格、有效期，按生产领料单上物料品名及数量仔细称量，在生产核料单〔附件2〕和配料标签上注明物料的物料编码、名称、批号、重量，由QA中控人员监督复核生产核料单、重量、配料标签与封签，内容无误后，由配料人和复核人共同在生产领料单和核料单签字。
配料完毕交车间核料人员。
核料车间核料人员接收生产核料单及由仓库配料间配封好的物料，认真核对物料的品名、规格、批号、重量等，进一步确证无误后，在生产核料单上车间收料处注明日期及签名。
将核准物料传递到原辅料暂存间。
由配料人员确认电子秤已经校正后，根据核料单上的领取数量核对领来的原辅料的种类、数量。
配制过滤3.2.3.1 主要设备为250L配制罐及过滤系统，所在区域为C级区。
3.2.3.2 确认配制罐及过滤系统已灭菌，操作室无与生产无关的物品。
.3 配制罐及过滤系统在线灭菌121℃、30min，对滤芯做完整性测试(μm≥μm≥)〔MILLIPORE〕。
3.2.3.4 配制过滤过程A．mol/L磷酸盐缓冲溶液。
B．mol/L磷酸盐缓冲溶液，甘露醇注射液、再参加人血白蛋白和适量的10℃以下注射用水，搅拌均匀，测pH值。
C．辅料溶液p—molmol/L磷酸溶液调节。
D．将处方量的原液参加配制好的辅料溶液中，加注射用水至规定体积，搅拌均匀测pH值。
药液p —molmol/L磷酸溶液调节。
μμm的过滤器精滤，通过管道输送至灌装间。
取50ml？药液送质量部QC测pH值、可见异物和细菌内毒素。
中间体质量检验合格后，按标示量的100%计算装量。
F．过滤结束后，对过滤器进行气泡点试验，μm≥μm≥〔MILLIPORE〕G．将可拆卸的部件送至清洗间清洗，将配制过滤系统在线清洗灭菌。
H．清场，去除与生产无关物品，清洁地面并去除废弃物，经检查合格后，挂上清场合格证。
3.2.3.5 工艺技术要求：A．工艺用水：注射用水符合公司内控标准。
B．注射用水及氮气均应经0.22μm滤膜过滤。
C．配制好的药液应在6小时内除菌过滤结束；除菌过滤后的药液应在6小时内灌装完毕。
D．除菌过滤器在使用前应清洗灭菌。
灭菌物品存放规定：A．不锈钢盘、桶等工器具及灌装机部件经清洗、灭菌后应存放在百级层流下，且存放时间不得超过8小时，否那么应重新清洗、灭菌。
B．已灭菌的无菌服只能当班使用。
3.2.4洗瓶3.2.4.1洗烘瓶：主要设备为QCL40立式洗瓶机和KSZ920/120A隧道式灭菌烘箱，所在区域为D 级洁净区，隧道烘箱出口在灌装A级区。
3.2.4.2 生产流程：3.2.4.3 生产过程：A. 理瓶---根据内包材配料/核料单核对领取批量的2ml管制抗生素瓶；---在理瓶间〔控制区〕除去内包装，码盘过程中检查有无缺陷，经传递窗传入瓶暂存间。
B. 生产前准备---清场检查，更换模具；---各传动部件检查，滤芯气泡点试验，水电气检查，超声波、循环泵和各管路检查；---隧道烘箱网带检查，往清洗槽注水，更换本批生产状态标志，准备生产。
C. 清洗灭菌操作---翻开洗瓶机超声波，开启循环泵、增压泵和相关清洗管路，按生产流程进行清洗、灭菌、枯燥。
D. 生产操作全过程应随时注意观察设备的运行状况和各仪表指示变化，发现异常及时报告并妥善处理，保证生产的正常进行。
E. 停机---停止洗瓶相关操作，关闭注射用水、压缩空气，清洗槽排空；---隧道烘箱在管制抗生素瓶全部传出后进行“日间停止〞操作。
F. 打印隧道烘箱灭菌记录，并将记录贴在批生产记录上。
G. 记录：认真、及时、完整填写批生产记录及其它相关记录。
H. 清场---将本批剩余未清洗瓶子退库；---不锈钢盘、工器具等清洗消毒后保存；---滤芯气泡点试验；---清洁设备外表、墙面、地面、地漏等；---清场结束由IPC人员检查并发放清场合格证。
3.2.4.4 工艺技术要求：A. 工艺用水：注射用水符合公司内控标准。
B. 循环水经1.0μm过滤器过滤，注射用水及压缩空气经0.22μm过滤器过滤，每批生产前后均需作0.22μm滤芯完整性测试。
C. 循环水压力0.2～0.4MPa，注射用水压力0.2～0.4MPa，压缩空气压力0.2～0.4MPa。
D. 洗净的瓶子在传送时应有防止污染的措施，并应在2小时内灭菌。
E. 灭菌后的瓶子应在100级层流下存放，并在8小时内使用完，否那么应重新清洗、灭菌。
3.2.5胶塞处理.1 主要设备为KJCS-5全自动胶塞清洗机，所在区域为C级洁净区，出料口在无菌万级区局部百级下。
.2 生产流程：A．根据内包材配料/核料单核对领取相应规格的胶塞，并核对数量。
B．生产前准备：清场检查，滤芯气泡点试验，水电气检查，更换本批生产状态标志，准备生产。
C. 参数设定及核对：D．加料：将胶塞放入进料桶中，真空吸料。
E．清洗灭菌：按设定程序进行清洗、灭菌、枯燥。
F. 生产操作全过程应随时注意观察设备的运行状况和各仪表指示变化，发现异常及时报告并妥善处理，保证生产的正常进行。
G. 出料：由无菌万级区的出料人员操作，设备运行结束后打印本批操作记录，并将其附在批生产记录中。
H. 记录：及时、准确、完整地填写批生产记录及其它相关记录。
I. 清场---将本批剩余胶塞退库，清洗胶塞机腔体；---滤芯气泡点试验；---清洁设备外表、墙面、地面、地漏等；---清场结束由QA人员检查并发放清场合格证。
.3工艺技术要求：A. 工艺用水：注射用水符合公司内控标准。
B. 注射用水及压缩空气经过滤器过滤，生产前后均需作完整性测试。
C. 灭菌后的胶塞应在100级层流下存放在洁净、枯燥、无菌的不锈钢桶内，并应在8小时内使用完。
3.2.6铝盖处理3.2.6.1 主要设备为KJCS-5全自动铝盖清洗机，所在区域为C级洁净区，出料口在百级区域。
3.2.6.3 生产过程：A ．根据内包材配料/核料单核对领取相应规格的铝盖，并核对数量。
B ．生产前准备：清场检查，水电气检查，更换本批生产状态标志，准备生产。
C. 参数设定及核对：D ．加料：将铝盖放入进料桶中，真空吸料。
E ．清洗灭菌：按设定程序进行清洗、灭菌、枯燥。
F. 生产操作全过程应随时注意观察设备的运行状况和各仪表指示变化，发现异常及时报告并妥善处理，保证生产的正常进行。
G . 出料：由C 级区的出料人员操作，设备运行结束后打印本批操作记录，并将其附在批生产记录中。
H. 记录：及时、准确、完整地填写批生产记录及其它相关记录。
I. 清场---将本批剩余铝盖退库，清洗铝盖机腔体； ---滤芯气泡点试验；---清洁设备外表、墙面、地面、地漏等； ---清场结束由QA 人员检查并发放清场合格证。
3.2.6.4 工艺技术要求：A. 工艺用水：纯化水符合公司内控标准。
B. 压缩空气经过滤器过滤，生产前后均需作完整性测试。
C. 灭菌后的铝盖应在100级层流下存放在洁净、枯燥、无菌的不锈钢桶内，并应在8小时内使用完。
3.2.7灌装加塞主要设备为DGS-8灌装加塞机，所在区域为A级区。
3.2.7.1生产流程：3.2.7.2生产过程：A. 生产前准备---清场检查，安装模具并用75%酒精擦拭；---水电气、层流装置检查，终端滤芯气泡点试验，更换本批生产状态标志。
---从对开门烘箱取出已灭菌的工器具，安装振荡盘和陶瓷泵、连接灌装管路；---胶塞出料后转移至百级下备用；---与配制人员协作完成药液的压滤，将缓冲罐转移至灌装区百级下，与计量泵相连接；---确认管制抗生素瓶清洗、枯燥灭菌合格〔由QA人员确认〕。
B. 生产操作---开启主机，排除系统内气泡；---试装，检查可见异物及调节装量；---启动输送带、理塞、真空泵，选择“无瓶不灌〞；---调节灌装速度，在出料口将灌装好的产品整齐地排列在不锈钢盘内放入冻干机内。
---灌装过程每小时取1次样〔每次每灌装头1支，共8支〕，检查装量及可见异物。
C.灌装结束后，排出剩余药液，收集至容器中，贴上可回收标签传递至配制岗位存放。
D.终端滤芯气泡点试验。
E.记录：认真、及时、完整填写批生产记录及其它相关记录。
F. 清场---将剩余胶塞、管制抗生素瓶收集清理，作报废处理；---可拆卸部件及工器具传至非无菌万级区工器具清洗间进行清洗、灭菌；---75%酒精清洁设备外表、墙面、地面、层流装置等；---清场结束由QA人员检查并发放清场合格证。
3.2.7.3工艺技术要求A．控制装量ml。
B．无可见异物。
3.2.8冻干3.2.8.1主要设备为上海远东YO-20〔CIP.SIP〕型真空冷冻枯燥机3.2.8.2 生产流程：3.2.8.3生产过程：A. 生产前准备---清场检查，确认设备已清洁、灭菌枯燥；---检查设备各装置仪表的运行情况，更换本批生产状态标志，准备生产。