梨叶片离体培养和植株再生
金花梨叶片不定梢再生体系研究
究， 以期建立高效 、 稳定的不定梢再生体系 ， 为采用
基 因工程进 一步改 良金花梨 品种奠 定基础 。
ｌ 试验 材料及 方法 １ １材 料 ．
采用 Ｓ Ｓ ｏ ｉｄｗ ００统 计 分 析 软件 包 Ｐ Ｓｆｒｗｎ ｏ ｓ１．
对实验观察数据资料进行方差分析 、 多重 比较等， 同时对有关数据进行极差分析 】 。
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２０ 年第 ３ ０７ 期
九江学院学报
・ ９・ ８
口处 出现少量 白色愈 伤组 织 。５天 后 ， 部 份 叶 片 ２ 少
切伤 处 出现 芽点或 丛芽 点 。
表 ３ 不 同浓度激素种类及配 比对叶片不定梢诱导 的影响
注： 细胞分裂素组成及 比例 ：Ｂ １ Ｔ １Ｔ， ２ Ａ：Ｋ ：Ｚ 对各处理愈伤组织诱 导率进行 Ｌ Ｄ检验 ， Ｓ 小写 字母表示 ５ 差异显著性水平 ， ％
２Ｃ， 天光照 ｌ ￣ 每 ４小时 ， 强为 ２０ １ 光 ００ｘ左右 。
叶片接种一周后 ， 开始隆起 ， 出现凹凸不平 ， 表
明叶片在生长 ， 叶片增大。Ｏ天后 ， 叶柄、 ２ 在 叶片切
不定梢诱导率 ＝发生不定梢的叶片数 ／接种
收稿 日期 ：０ ６—０ ２０ ６—２ ３
作者简介 ： 曾云英（９６一 ） 女 ， １７ ， 重庆长寿人 ， ， ， 硕士 讲师 主要从事 园艺植物 方面的研 究。
株在苹果 等果树 上报道较 多 】在梨 上 少见报 道 。 ， 后 成活 的叶片数 Ｘ１０ ０ ％
表 １ 叶片不定梢诱导正交实验因子水平表
— —
因
＼
水 素 、、＼
平
１
２
３
Ａ 细胞分裂素（ Ｂ １ Ｔ １Ｔ １Ｏ ３ Ｏ ５Ｏ ２ Ａ：Ｋ ：Ｚ ） ． ． ． ＢＩ Ａ（ ／） Ｂ ｍｓ１ Ｏ １ Ｏ２ Ｏ３ ． ． ．
红星梨叶片不定梢诱导及增殖培养
红星梨叶片不定梢诱导及增殖培养苏艳丽;田鹏;魏闻东【摘要】为了找到红星梨叶片离体培养的最佳条件，从取材时间、暗培养、植物生长调节物质、不同继代次数等方面研究其对红星梨叶片再生的影响。
结果表明：外植体取4月初的茎段较好，选用继代2次植株的叶片，细胞分裂素BA比TDZ 效果好，生长素IBA比NAA效果好，暗培养30 d，适合叶片再生的培养基为NN69＋BA 5.0 mg/L＋IBA 0.3 mg/L，适合再生苗增殖的培养基为MS＋BA 1.0 mg/L＋IBA 0.2 mg/L＋GA 0.2 mg/L。
%In order to find the best conditions of leaves in vitro culture, effects of sampling time, dark culture, plant growth regulators and subculture times on leaf regeneration in Pyrus communis were researched. The results showed that, the best explants were the stem segments in early April, it had best effect that leaves subcultured for two times were dark cultured for 30 days, BA had better effects than TDZ, and IBA had better effect than NAA. Suitable culture medium for leaf regeneration was NN69 + BA 5.0 mg/L + IBA 0.3 mg/L, and suitable culture medium for regeneration seedling multiplication was MS+BA 1.0 mg/L+IBA 0.2 mg/L+GA 0.2 mg/L.【期刊名称】《经济林研究》【年(卷),期】2015(000)001【总页数】4页(P103-106)【关键词】红星梨;叶片;再生【作者】苏艳丽;田鹏;魏闻东【作者单位】中国农业科学院郑州果树研究所，河南郑州 450009;中国农业科学院郑州果树研究所，河南郑州 450009;中国农业科学院郑州果树研究所，河南郑州 450009【正文语种】中文【中图分类】S661.2红星梨Pyrus communis cv. Starkrimson系郑州果树研究所1988年由新西兰引入国内的优秀全红色西洋梨品种，果实葫芦形，外观鲜红艳丽，风味独特有香气，肉质柔软多汁，风味酸甜清香可口，目前国内生产与市场上数量较少，价格较高，出口前景看好。
梨茎尖和叶片高效离体繁殖再生体系建立
梨茎尖和叶片高效离体繁殖再生体系建立建立稳定、高效的叶片不定梢再生体系是梨转基因成功的关键环节。
为此本试验以梨离体芽苞作外植体,在初代培养诱导试管苗成功的基础上,分别以MS、AS和1/2 MS培养基为基本培养基,附加不同的激素组合,根据培养基配方及培养条件,通过正交试验设计并结合方差分析和多重比较,研究不同培养基对梨试管苗芽增殖影响;叶片愈伤组织的诱导及愈伤组织的分化和试管苗生根的影响。
试验研究获得的主要结果如下:1、外植体消毒及初代培养将外植体用75%酒精处理10 s后再用0.1% HgCl<sub>2</sub>消毒4 min时,取得最佳消毒效果。
外植体芽诱导的适宜培养基为1/2 MS + 6-BA 0.5 mg/L + NAA 0.2 mg/L。
2、增殖培养鸭梨茎段增殖的适宜培养培养条件是以1/2 MS为基本培养基,附加0.8 mg/L的6-BA ; 0.3 mg/L的IBA及0.5 mg/L的GA3,增殖倍数为3.83;黄冠梨茎段增殖的适宜培养条件是以AS为基本培养基,附加0.8 mg/L的6-BA;0.1 mg/L的IBA及0.5 mg/L的GA3,增殖倍数为3.56;基本培养基对梨茎段增殖和生长无显著影响;不同浓度的6-BA处理,差异达到了显著水平。
3、愈伤组织的诱导与再生试验从两个梨品种叶片上再生出不定芽,建立起黄冠和鸭梨叶片再生不定芽体系。
叶片离体培养以1/2 MS培养基为基本培养基,附加不同浓度TDZ和IBA,结果以1/2 MS附加2.5 mg/L的TDZ及0.5 mg/L的IBA适宜鸭梨叶片诱导愈伤及分化的培养基组合;以1/2 MS附加0.5 mg/L的TDZ及0.5 mg/L的IBA为适宜黄冠叶片诱导愈伤组织及分化的培养基组合;在适宜条件下,鸭梨和黄冠叶片再生频率达到65.28%和66.67%,平均再生芽数为4.78和3.17。
4、梨苗生根以1/2 MS + 1.0 mg/L IBA的培养基诱导鸭梨和黄冠的生根效果稍好,生根数、根长,统计均显著高于其他处理。
梨叶片再生苗生根研究
１ 材料 和 方 法
１ １ 材 料 ．
取砀 山酥 、 八月红 、 茄 ２ ５ｃ 左右 、 红 ． ｍ 继代 培
养 ５次 的再 生苗 茎段 作为供 试材 料 。继代 培养基
为 ＭＳ＋ ６ ＢＡＩ ０ ｍｇ ｌ Ｉ Ａ０ ２ ｍｇ ｌ 一 ． ／＋ Ｂ ． ／ 。 １ ２ 实 验 方 法 ．
宜 培 养 基 为 １ ４ ＋０ ３ ｇ ｌ Ｂ ／ ＭＳ ． ｒ ￣ Ｉ Ａ＋ ｓ ｃｏ ｅ３ ／ ， ａ ｕ ｒ ｓ ０ｇ １ 暗培 养 ７ ｄ 则 生根 效 果佳 。 另 外 ， 们 还 对 砀 山酥 、 月 ， 我 八 红 和 红 茄 梨 叶 片 再 生 苗 进 行 了二 次 生 根 ， 现 八 月红 的 生 根 效 果 最好 ， 发 生根 率 达 ５ ， 次是 红 茄 为 ３ ， Ｏ 其 ５ 而
统并 且选 择优 化 培养 基 配 方 ， 服 在 培养 基 上 配 克 方 的盲 目性 引， 研 究 利 用 正 交 实 验 法 对 培 养 本 基 的 主要成分 进行 系统 的研究 。
种 对其 改 良相 当 困难 。体 细胞诱 变育 种和 遗传转
化 为梨 品种 改 良提供 了新 的手段 。植 物外植 体再 生 是 遗 传 转 化 的基 础 ， 叶片 是 最 常 用 的外 片再 生苗 ； 交 法 ； 根 叶 正 生
梨为 世界 五 大水 果 之 一 ， 为 我 国传 统 果树 也
红梨 叶片再生 苗生 根率 ， 建立 梨 叶片再生 体 系 ， 为 梨 树无 性变异 体筛选 和 遗传转 化 奠定基 础 。 正 交法是 一种 多 因子 的 实验 设 计 法 ， 设 计 其
陕
西
农
业
科
学
梨 叶 片再 生 苗 生根 研 究
黄冠梨叶片再生体系的建立
３ ／ ０ｇＬ＋琼脂 ６０ｇＬ ． ／ 。
１２ ． 方 法
度的升高 ， 叶片再生率呈增高的趋势， 不同处理问存在显著 且 差异 。低浓度 的 Ｔ Ｚ不能诱 导 叶片再生 ，Ｄ Ｄ Ｔ Ｚ为 １０ｍ ／ ． ｇＬ 时， 再生率均为 ０ 。高浓度 的 Ｔ Ｚ有 利于叶 片再生 Ｄ Ｄ Ｚ为 ３０ｍ ／ 时 ， Ａ浓度升 高， ． ｇ Ｌ Ｉ Ａ 再生率也相应升 高， ＇ Ｚ浓度 而 Ｉ ＇ Ｄ
Ｉ 材 料 与方 法
１ Ｉ 材料 ．
以黄 冠 梨 试 管 苗 为 材 料 ， 代 培 养 基 为 Ｍ ＋ 继 Ｓ
６一Ｂ ． Ｌ＋Ｎ Ａ ０ ２ ｍ ／ Ａ １０ｍ Ａ ． ｇＬ＋Ｇ ３０ １ ｍ ／ Ａ ． ｇＬ＋蔗 糖
由表 １可见 ， 不同浓度 Ｔ Ｚ Ｉ Ａ配 比的培养基上再生率 Ｄ、 Ａ
摘要 ：以黄冠梨试管苗 为材 料， 探讨 了不 同浓度 Ｔ Ｚ与 ＩＡ组合 、Ｄ Ｄ Ａ Ｔ Ｚ与 Ｎ Ａ 的组合 以及 ６一Ｂ Ａ Ａ与 ｕＡ的组 合， 以及不 同叶片放置方式对黄冠梨再生的影 响。结果表明 ：Ｄ Ｔ Ｚ与 Ｉ Ａ组合诱导叶片再生效果最好 ，Ｄ Ａ Ｔ Ｚ与 Ｎ Ａ的 Ａ
组合优于 ６一Ｂ Ａ与 Ｉ Ａ的组合 ； Ａ 叶片放置方式对再生率影响不 大。在 Ｎ ６ Ｎ ９＋Ｔ Ｚ５ ０ｍ ／ Ｉ ０ ３ｍ ／ Ｄ ． ｇＬ＋ 从 ． ｇ Ｌ培养基 中暗培养 ２ １ｄ后， 叶片再生率最高 ， 平均再生率为 ７ ．０ ， ７ １ ％ 平均每个外植体再生芽数 为 ５３ ．３个。
于诱 导培 养 基 ， 瓶接 种 １ 叶块 ， 种 ４瓶 ， 每 ０个 接 重复 ３次 。黑
通过梨未受精胚珠离体培养获得单倍体植株的方法与制作流程
本技术提供了一种通过梨未受精胚珠离体培养获得单倍体植株的方法，包括以下步骤：在无病虫害的梨树花枝上选择生长状态较好的花蕾，在开花当天摘下雌蕊作为外植体；将雌蕊先放在4℃冰箱内低温预处理3d，然后置于均匀磁场中处理60min；接种前先将雌蕊消毒，然后从子房中剥取胚珠接种在诱导培养基上培养至形成胚状体；将胚状体转入分化培养基培养25~40d，使其发育成具有根、茎、叶的完整小植株；将小植株转入生根培养基培养20~30d，炼苗3~4d后移栽；采用DNA流式细胞术鉴定再生植株倍性。
本技术初步建立了梨未受精胚珠离体培养再生体系，并成功获得了单倍体植株，可为加速梨单倍体育种进程以及种质资源创新、新品种选育奠定基础。
技术要求1.一种通过梨未受精胚珠离体培养获得单倍体植株的方法，包括以下步骤：（1）外植体的获取：在无病虫害的梨树花枝上选择生长状态较好的花蕾，在开花当天摘下雌蕊作为外植体；（2）接种前的预处理：将雌蕊用湿纱布包好后先放在4℃冰箱内低温预处理3d，然后置于强度为200~400mT的均匀磁场中处理60min；（3）胚状体的诱导：接种前先将雌蕊消毒，然后从子房中剥取胚珠接种在诱导培养基上，在温度26~28℃、黑暗条件下培养 10~15d，然后转移至光照条件下继续培养至形成胚状体；（4）胚状体的分化：将步骤（3）中的胚状体转入分化培养基，在温度24~26℃、光照强度2000~3000lx、光周期13~15h/d 的条件下培养25~40d，胚状体可发育成具有根、茎、叶的完整小植株；（5）根系的诱导与移栽：待步骤（4）中的小植株长至5~10cm高时，将其转入生根培养基，培养20~30d后植株的根长可达2~3cm，根粗可达0.5~1.0mm，在室内自然光下开瓶炼苗3~4d后移栽；（6）再生植株倍性鉴定：采用DNA流式细胞术鉴定再生植株倍性。
在于，所述步骤（3）中，雌蕊的消毒程序如下：把雌蕊置于超净工作台上，先用75%乙醇浸泡30s，无菌水冲洗1次；再用0.1%氯化汞水溶液浸泡15min，期间每隔3min 摇晃1次，最后以无菌水冲洗4次。
西洋梨品种'红考密斯'的组织培养及离体叶片不定梢再生
西洋梨品种'红考密斯'的组织培养及离体叶片不定梢再生孙清荣;关秋竹;孙洪雁【摘要】以西洋梨(Pyrus communis L.)品种'红考密斯'新生长的半木质化嫩枝茎段为外植体,促使腋芽萌发获得无菌试管苗;以试管苗为试材,研究基本培养基、外源植物生长物质对增殖和生根的影响;以试管苗的离体叶片为外植体,研究植物生长物质的种类和浓度对叶片不定梢再生的影响.结果表明,试管苗适宜的增殖培养基为MS+0.5 mg·L-16-BA+0.1 mg·L-1 TDZ+0.3 mg·L-1 IBA;适宜的壮苗培养基为MS+0.1 mg·L-1 TDZ+0.3 mg·L-1 IBA;适宜的生根培养基为1/2MS(仅MS大量元素减半)+0.3 mg·L-1 NAA+20 g·L-1蔗糖,生根率为82.2％,平均单株根数为3.3条;叶片不定梢再生的最佳培养基为:NN69+2 mg·L-16-BA+0.3 mg·L-1 IBA,不定梢再生率为76.8％,平均每叶不定梢数为1.2个.【期刊名称】《山东农业科学》【年(卷),期】2018(050)011【总页数】5页(P28-32)【关键词】西洋梨;红考密斯;增殖;离体叶片;不定梢再生;生根【作者】孙清荣;关秋竹;孙洪雁【作者单位】山东省果树研究所,山东泰安 271000;山东省果树研究所,山东泰安271000;山东省果树研究所,山东泰安 271000【正文语种】中文【中图分类】S661.204+.3梨果营养丰富，深受消费者喜爱。
过去人们习惯食用肉质细脆、香甜爽口的东方梨，但随着生活水平的提高，人们对梨果的消费习惯日趋多样化，肉质柔软、香甜溶口、果心小的西洋梨也越来越受消费者喜欢。
‘红考密斯’梨是由山东省果树研究所从美国引进的一个优良红色西洋梨品种[1]。
该品种是‘考密斯’的一个浓红型芽变，果皮全红，果肉乳白色，后熟后汁液多，甜芳香味浓，是西洋梨中鲜食品质极佳的品种之一。
雪花梨的离体培养与快速繁殖
雪花梨 （ Ｐ ｙ ｒ ｕ ｓ ｂ ｒ ｅ ｔ ｓ ｃ ｈ ｎ ｅ ｉ ｄ ｅ ｒ ｉ Ｒｅ ｈ ｄ ． ） 属 白 梨
系统 ， 是华 北地 区 主栽 的大 果 型 传 统 品种 ， 以其 品 质 优 良和独 特风 味 倍 受 国 内外 市 场 的 青 睐＿ １ ］ 。雪
花 梨适 应 区域 广 ， 不仅 适 宜 北 方 大 部 分 地 区栽 培 ，
养基 、 Ｎ ＡＡ； 最佳 的 雪 花 梨 组 培 苗 增 殖 培 养 基 为 ＭＳ ＋６ 一Ｂ Ａ １ ． ０ ｍｇ・Ｌ Ｉ １ ＋ ＮＡＡ ０ ． １ ５ ｍｇ・Ｌ ＋ ＧＡ ３ ０ ． ５ ｍｇ。
Ｌ 一， 增 殖 系数 达 ３ ． ９ ； 适宜雪花梨组培苗的生根培养基 为 １ ／ ２ ＭＳ ＋Ｉ Ｂ Ａ １ ． ０ ｍｇ・ Ｌ － 。 ， 生根 率 达 ４ １ ． ４ 。
ｍｅ ｄ ｉ ｕ ｍ ，ＮＡＡ ；ｔ ｈ ｅ ＭＳ ｍｅ ｄ ｉ ｕ ｍ ｗｉ ｔ ｈ １ ． ０ ｍｇ ・Ｌ ６ 一 ＢＡ＋ ０ ． １ ５ ｍｇ・Ｌ ＮＡＡ＋ ０ ． ５ ｍｇ ・Ｌ＿。 ＧＡ３ ｗａ ｓ ｏ ｐ ｔ ｉ ｍａ ｌ ｆ ｏ ｒ
ｔ ｈ ｅ ｓ ｈ ｏ ｏ ｔ ｍｕ ｌ ｔ ｉ ｐ ｌ ｉ ｃ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ，ｔ ｈ ｅ ｐ ｒ ｏ ｌ ｉ ｆ ｅ ｒ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｃ ｏ ｅ ｆ ｆ ｉ ｃ ｉ ｅ ｎ ｔ ｗａ ｓ ｕ ｐ ｔ ｏ ３ ． ９ ａ ｆ ｔ ｅ ｒ ｃ ｕ ｌ ｔ ｕ ｒ ｉ ｎ ｇ ｆ ｏ ｒ ４ ０ ｄ ａ ｙ ｓ ，ｔ ｈ ｅ ＭＳ ｍｅ ｄ ｉ ｕ ｍ ｗｉ ｔ ｈ
Ａｂ ｓ ｔ ｒ ａｃ ｔ ： Ｓｉ ｎｇ ｌ ｅ ｂｕ ｄ ｓ ｔ ｅ ｍ ｏ ｆ Ｐｅ ａ ｒ Ｘｕｅ ｈｕ ａ ｌ ｉ ｗｅ ｒ ｅ ｕｓ ｅ ｄ ａ ｓ ｅ ｘ ｐｌ ａ ｎｔ ｓ ｔ Ｏ ｅ ｓ ｔ ａ ｂｌ ｉ ｓ ｈ ｉ ｎ ｖｉ ｔ ｒ ｏ ｃ ｕ ｌ ｔ ｕｒ ｅ ａ ｎｄ ｒ ａ ｐ ｉ ｄ ｐｒ ｏｐ ａ ｇａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｓ ｙｓ — ｔ ｅ ｍ ． Ｔｈｅ ｒ ｅ ｓ ｕｌ ｔ ｓ ｓ ｈ ｏｗ ｅ ｄ ｔ ｈａ ｔ ｍｉ ｄ — Ｍ ａｙ ｗａ ｓ ｔ ｈ ｅ ｂｅ ｓ ｔ ｓ ａ ｍ ｐｌ ｉ ｎ ｇ ｔ ｉ ｍｅ ｆ ｏｒ Ｘｕ ｅ ｈｕ ａ ｌ ｉ ，ｅ ｆ ｆ ｅ ｃ ｔ ｏ ｆ ｃ ｕｌ ｔ ｕｒ ｅ ｍｅ ｄ ｉ ｕ ｍ ， ６一 ＢＡ ａ ｎｄ Ｎ ＡＡ ｏ ｎ ｐｒ ｏｌ ｉ ｆ ｅ ｒ ａ ｔ ｉ ｏｎ ｃ ｏ ｅ ｆ ｆ ｉ ｃ ｉ ｅ ｎ ｔ ｓ ｈｏ ｗｅ ｄ ｇｒ ｅ ａ ｔ ｄｉ ｆ ｆ ｅ ｒ ｅ ｎ ｃ ｅ，ｔ ｈｅ ｉ ｒ ｉ ｍ ｐａ ｃ ｔ ｓ ｆ ｏｌ ｌ ｏｗｅ ｄ ａ ｄｅ ｓ ｃ ｅｎ ｄｉ ｎｇ ｏｒ ｄｅ ｒ ｏ ｆ ６一 ＢＡ ，ｃ ｕｌ ｔ ｕｒ ｅ
山西特有品种梨枣叶片的组织培养及植株再生
基 ：５ Ｍ （ ） Ｓ＋ＩＡ １ ５ Ｂ ． 。上 述 培养 基 均 附加 蔗 糖 ３ Ｏ
ｇ・ Ｌ 、 脂 ７ ｇ・Ｌ～， Ｈ ５ ８ 琼 ｐ ． 。培 养 温 度 ２ ６～ ２ ￣ 光 照 １ ｄ～， 照度 ２０ ０ｌ。 ８Ｃ， ６ ｈ・ 光 ０ ｘ ４ 生 长与 分化 情 况 ４５ 移栽 ．
９９％ ：
试 管 苗 移 人 炼 苗 室 ， 揭 瓶 盖 在 自然 光 下 炼 苗 ｌ 不 周 ， 开 瓶盖 再 炼苗 之 ＝
４ ２ 诱 导芽 的 分化 ．
将 诱 导 出的 愈伤 组 织 接 于培
养基 （ ） ２ 中诱 导 芽 的 分 化 。３ ０ ｄ后 在 黄 绿 色 愈 伤 左右 ， 可将 小 苗移 人 大 田。通 过 上 述方 法 成 活率 可 组 织 上形成 芽 点 ， 而 分 化 出芽 ， 继 分化 率 为４ ． ％ ， ８３ 达 到 ８ ％ 以上 。 Ｏ 平均 每块 愈 伤 组 织 芽 分 化 数 为 ５ ２个 ， 多 达 ９ ． 最 ５ 意 义 与 进 展 梨 枣 为 山 西 省 特 有 枣 树 优 良 品 个 ，０ ｄ后芽 高 达 １９ｔ ｌ 右 。 ４ ． ｉ 左 ｌ 种 。 目前 通过 其 叶 片 再 生 植 株 尚 未 见 报 道 。梨 枣 ４ ３ 继 代培 养 将 诱 导 出 的 小 苗 切 成 １ｃ 左 右 ． ｍ “ 红似 玛瑙 甜 如 蜜 ， 如 鸡 蛋 脆 如 梨 ” 素 有 “ 维 大 ， 活 的茎段 ， 到继 代 培养 基 （ ） （ ） 。经过 ３ 转 ３ 、４ 中 ５ｄ的 生 素 丸 ” “ 健 滋 补 丸 ” 美 称 ， 枣 树 中 稀 有 的 、保 的 是 培 养均可 形 成许 多 丛 生芽 ， 丛 生 芽反 复 转接 可 以 将 名 贵 鲜食 品 种 。梨 枣 较 短 的保 鲜 期 制 约 了其 大 规 不 断增 殖 （ ） ３ 中芽 分 化 数 为 接 种数 的 ３ ２倍 ， ． 最 模 推广 ， 梨枣 叶 片来 源 广 ， 产 生 有益 的 突变 体 ： 而 易 多的茎段 可 分化 出 ６～ ７个丛 生 芽 ， 均 芽高 为 ２ ２ 平 ． 其 再 生植 株 的 成 功 ， 能 对 保 鲜 基 因 （ ｔ 转 化 及 可 ／） ｐ ＣＩ（ ） Ｉ ；４ 中芽 分 化 数 为接 种 数 的 ２ ６倍 ， 多 的可 Ｔ ． 最 突 变体 的选 择 ， 立 良好 的再 生 系统 以及 枣树 的快 建 产生 ４～５个 丛 生芽 ， 均 芽 高 为 ３ ０ Ｃｌ 平 ． ｌ。上 述 结 ｌ 速 繁殖 ， 一定 的参考 意义 。 具 果说 明 ，３ 有 利 于 枣芽 器 官 分 化 ， （ ） 利 于芽 （） 而 ４有
梨试管苗离体叶再生芽的培养基筛选
将 接 种 后 的 试 管 苗 置 于 温度 为 ２ ＋ ℃ ， 照为 ｌｏ ～ ５２ 光 ５ｏ ２ ０ Ｉ． 照 时 数 为 ｌｈｄ的环 境 下 进 行 培养 。 ００ 光 ｘ Ｏ／
２ 结 果 与 分析
从 试 管 苗上 取 下 幼 叶 。 剪 刀 横 剪 ２ ３道 小 口 （ 断 用 ～ 剪 中 脉 ）然 后 接 到第 二 套 培养 基 上 。 ，
ｌ 材 料 和 方 法
Ｂ ２５＋从 １ ；２１ Ｍ Ｂ ２５＋Ａ Ｉ ；３ Ｓ＋ Ａ ． Ａ ． Ｉ ． （） ２ Ｓ＋ Ａ ． Ｉ Ａ ． （Ｍ Ｂ Ｓ ０ ／ Ｏ ） ０＋
Ｉ ｌ （ Ｍ ＋ Ａ ． Ｉ Ａ （ ＭＳ Ｂ ２ ＋Ａ ０ ５ Ｍ 从 ４ Ｓ Ｂ ７ ＋Ａ １ ５ ） ５ ） ＋Ａ ． ＩＡ． ； ５ ２
Ｂ ５ Ｉ Ａ ． （７Ｍ Ｂ Ｔ５＋Ａ ０２ ；１） Ｓ＋ Ａ ． Ａ ． Ａ １ ；１） Ｓ＋ Ａ ． ＩＡ ． （８Ｍ Ｂ ７５＋ ０＋ ０ ５ ＩＡ ．（９ Ｍ ＋ Ａ ．＋Ａ ．。 Ａ ０ ； １ Ｓ Ｂ ７ ＩＡ１ ５１ ５ ０
１４ 培 养条 件 ．
从 试 管苗 上 取 下 幼 叶 ． 做 任 何 处 理 直 接 种 到第 一 套 不
内 蒙古 农 业 科 技 ２ ０ （）７ — ７ ０ ８ ２ ：６ ７
Ｉ ｎ ｒＭｏ ｇ ｌ ｒ ｕｔｒｌＳ ｉｎ ｅＡｎ ｅ ｈ ｏｏ ｙ ｎ ｅ ｎ ｏｉ Ａｇｉ ｌ ａ ｃｅ ｃ ｄ Ｔ ｃ ｎ ｌｇ ａ ｃ ｕ
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梨试管苗离体叶再生芽的培养基筛选
选 出以 Ｍ Ｓ为基 本培 养基 时 Ｂ 和 Ｉ Ａ的最 佳组 合 。 Ａ Ａ 第 一 套 。 １ ） Ｓ
ｌｄ后 ， 子展 开 。诱 导率 在 ３ｄ左 右达 到 高峰 （ １ 。 Ｏ 叶 ０ 表 ）
库尔勒香梨离体叶片再生体系的建立
构"但仅有少量的球状结构转化成了不定梢# 1[4 (o/;4:*&+ $HT8D28/4**+ $f28:,82,*'+ 等相继以几种梨 试管苗的叶片为材料并成功诱导出不定梢"但再生 率不高# \85/N等*%+ 于 $))$ 年在改变氮源比例的 条件下"康弗伦斯不定芽再生率高达 )*V'A# 目 前已经有康弗伦斯$小香& 783L85'$考密斯& H;Pl ,38'$帕西&f/998H2/99/-8'等*)+ 欧洲梨品种取得了 成功# 在东方梨中"砂梨的冀蜜$丰水$二十世纪 &Z,.,998,L,'$r;94,$7T,-3T4*$#+ 和白梨的水晶梨*$$+ $ 谢花甜梨*$"+ 及金花梨*$?+ 等品种有了不定梢再生 的报道# 近几年国内外对库尔勒香梨组织培养研 究较少"目前有关库尔勒香梨组织培养主要集中在 离体快繁技术方面# 王建新等*$=+ 以库尔勒香梨的 茎尖作为外植体"比较了三种基本培养基& c7 培 养基$改良 c7 培养基$$ >"c7 培养基'对增殖的影 响"结果发现以改良 c7 培养基的增殖率最高"达 到 **V'A# 刘晓婷*$&+ 以库尔勒香梨叶片为外植 体"是目前叶片诱导再生不定芽效率最高的"最佳
#!引 言
( 研究意义) 库尔勒香梨是新疆梨系统中最具 代表性的优良品种"地域性极强"有 $ =## 年栽培 历史"享誉国内外市场*$+ # 香梨风味甜美"肉质细 腻"酸甜 可 口" 已 成 为 重 要 的 出 口 创 汇 农 产 品 之 一*"+ # 经过长期栽培实践"已育有一些优良品系" 但香梨树普遍存在坐果率低$产量不稳定$品质下 降等问题# 常规育种预见性差$周期长$效率 较 低*?+ "利用遗传转化技术改良香梨品质及产量相关 特性"为分子水平改良培育香梨品种提供了很好的 育种策略# 但香梨转基因育种进展缓慢"其主要原 因是至今仍未建立有效的遗传转化体系"因此"库 尔勒香梨叶片再生体系的建立"是进行其遗传转化 的前期基础# (前人研究进展) 梨离体叶片培养起 步较晚"始于 $)%% 年# \/,P82等*=+ 用西洋梨康弗 伦斯&H;-a828-38'试管苗叶片做试验"在 * (J1和 nJ1的共同作用下"部分愈伤组织能够形成球状结
砀山酥梨叶片培养和植株再生
砀山酥梨叶片培养和植株再生赵竑博;徐凌飞;马锋旺;梁东;符轩畅【期刊名称】《西北农业学报》【年(卷),期】2007(016)002【摘要】以砀山酥梨叶片为外植体,首次系统地研究了基本培养基、植物生长调节剂、碳源、暗培养时间和琼脂用量等对其再生不定芽的影响.结果表明,砀山酥梨叶片再生不定芽的适宜组合为NN69+6-BA 2.5 mg·L-1+IBA 0.3 mg·L-1+山梨醇20 g·L-1+琼脂8.0 g·L-1,暗培养20 d.叶片再生频率最高为83%,平均再生芽数2.17.叶片再生苗在生根培养基1/4 MS+IBA 0.5 mg·L-1+ NAA0.3 mg·L-1+蔗糖20 g·L-1+琼脂6.0 g·L-1上已经生根.【总页数】5页(P153-157)【作者】赵竑博;徐凌飞;马锋旺;梁东;符轩畅【作者单位】西北农林科技大学园艺学院,陕西杨凌,712100;西北农林科技大学园艺学院,陕西杨凌,712100;西北农林科技大学园艺学院,陕西杨凌,712100;西北农林科技大学园艺学院,陕西杨凌,712100;西北农林科技大学园艺学院,陕西杨凌,712100【正文语种】中文【中图分类】S661.2【相关文献】1.毛稔叶片离体培养及植株再生研究 [J], 唐淑玲;徐江宇;江鸣涛;林仙淋;卓孝康;彭东辉2.康乃馨‘白雪公主’叶片培养植株再生 [J], 吕世佳;张虹;虎娟;张芮;王丽娟;徐宏波;陈任3.毛稔叶片离体培养及植株再生研究 [J], 唐淑玲;徐江宇;江鸣涛;林仙淋;卓孝康;彭东辉;4.半蒴苣苔的叶片组织培养及植株再生 [J], 阮慧泽;李珍;任燕燕;邬枭楠;邵于豪;潘飞翔;夏国华5.君迁子休眠芽及叶片离体培养体系优化及植株再生 [J], 李晶;罗玉洁;张青林;罗正荣;刘继红因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
红姬凤梨离体培养植株再生关键技术研究
红姬凤梨离体培养植株再生关键技术研究孟艳琼1,张志平2,何琬璐1,傅松玲13 (1.安徽农业大学林学与园林学院,安徽合肥230036;2.安徽农业大学园艺学院,安徽合肥230036)摘要 [目的]建立红姬凤梨组织培养快繁体系。
[方法]以MS培养基为基本培养基添加植物生长调节剂,对红姬凤梨叶片进行愈伤组织诱导,并进行芽分化、芽的继代增殖和生根培养。
[结果]叶鞘愈伤组织诱导以MS+2,42D0.5m g/L+BA3.0m g/L+K T2.0m g/L培养基最好、愈伤组织诱导率和分化率分别达82.4%和40.2%;丛生芽诱导以MS+2,42D0.2m g/L+NAA0.05m g/L+BA3.0m g/L+K T2.0 m g/L培养基增殖效果最佳,增殖倍数达9.72;生根诱导以1/2MS+NAA3.0m g/L培养基诱导生根效果最好,平均每株生根12.12条。
[结论]采用组织培养可有效去除病毒,增加繁殖系数。
关键词 红姬凤梨;叶片培养;诱导;植株再生中图分类号 S682.39 文献标识码 A 文章编号 0517-6611(2009)12-05364-03K ey T echnologies in vitro P lant R egeneration of Tissue Culture of Cryptanthus bromelioidesMENG Yan2qiong et al (C ollege of F orestry and G ardening,Anhui Agricultural University,H efei,Anhui230036)Abstract [Objective]T he research aim ed to establish rapid propagation system of Cryptanthus bromelioides‘T ricolor’.[M eth od]T he leaves of Cryptan2 thus bromelioides‘T ricolor’were carried on callus induction,bud differentiation,bud subculture proliferation and rooting culture w ith the MS culture m edi2 um added h orm ones.[Result]T he results sh owed that MS m edium supplem ented w ith2,42D0.5m g/L,BA3.0m g/L,K T2.0m g/L was best for callus induction in which the induction rate and differentiation rate of callus were82.4%and40.2%respectively.MS m edium supplem ented w ith2,42D0.2 m g/L,NAA0.05m g/L,BA3.0m g/L,K T2.0m g/L was best for clum p sh oots induction in which proliferation tim es was9.72.1/2MS m edium supple2 m ented w ith NAA3.0m g/L was best for root induction in which the m ean number of roots was12.12.[C onclusion]T issue culture could effectively rem ove the virus and increase propagation cofficient.K ey w ords Cryptanthus bromelioides‘T ricolor’;Leaf culture;Induction;Plant regeneration 红姬凤梨(Cryptanthus bromelioides‘T ricolor’)属凤梨科姬凤梨属,原产于南美热带地区,主要分布在巴西的原始森林中,我国南方有盆栽种植。
丰水梨茎段和茎尖离体培养与植株再生研究
丰水梨茎段和茎尖离体培养与植株再生研究以砂梨品种丰水梨(Pyrus pyrifolia‘Hosui’)为试验材料,开展茎段和茎尖离体培养与植株再生研究。
采用的茎段诱导培养基为LP+ IBA 0.4mg/L
+6-BA0.5mg/L+泛酸钙1.0 mg/L+生物素0.1mg/L+核黄素0.5mg/L+VC 1.0mg/L,添加蔗糖20.0g/L,琼脂6.8g/L;继代培养基为LP+IBA 0.4mg/L +6-BA 0.5mg/L +泛酸钙1.0 mg/L+生物素0.1mg/L+核黄素0.5mg/L,添加蔗糖20.0g/L,琼脂
6.8g/L。
在此基础上重点进行了试管苗茎尖诱导培养和试管苗生根诱导培养研究。
主要结果如下:1.研究了不同浓度的IBA对丰水梨试管苗茎尖培养的影响,结果表明IBA浓度在0.5 mg/L到1.0 mg/L之间为最适浓度。
2.研究了基本培养基对丰水梨试管苗生根的影响,结果表明适宜丰水梨试管苗生根的基本培养基为1/4MS培养基,生根率可达68.75%。
3.以1/4MS培养基为基本培养基,研究了不同浓度的IBA对丰水梨试管苗生根的影响,结果表明适宜丰水梨试管苗生根的IBA浓度为0.3mg/L,生根率可达75.0%。
4.以1/4MS培养基为基本培养基,研究了不同浓度的PG对丰水梨试管苗生根的影响,结果表明适宜丰水梨试管苗生根的PG浓度为80.0mg/L,生根率可达87.5%。
5.暗培养是丰水梨试管苗生根所必须的前培养,适宜丰水梨试管苗生根的暗培养时间为7-9d。
6.炼苗移栽时,应先将生根试管苗基部培养基清洗干净,之后在三角瓶中用营养液水培7d,待有新根产生后移栽于培养基质中。
培养基质为蛭石:营养土
=1:1。
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学
报
２ ９卷
近 ，细 胞 分 裂 能 力 强 ，再 生 效 率 高 。
２ ４ 不 同 品 种 试 管 苗 叶 片 再 生 能 力 比较 ．
４ ０ ｄ的试 管 苗顶 部 叶 片 ，去 叶 柄 ，垂 直 叶 中 脉 横 切 伤 ３刀 ，接 种 在 再 生 培 养 基 上 ，首 先 暗 培 养 ，然 后转 移到培养 架 上 培 养 。叶 片再 生 基 本 培 养 基 为 Ｎ ６￣ Ｎ ９引，此 培 养 基 为 正 交 试 验 筛 选 出 的 Ｎ ６ Ｎ ９＋
（ 西北 农 林科 技 大学 园艺 学 院 ，杨凌 ７２ ０ ； 陕西 师 范大学 生 命科 学 学 院 ，西安 ７０ ６ ） １ １０ １０ ２ 摘 要 ：用 梨 （ ｙｕ ）４个 栽 培 品种 的 叶片诱 导 不 定 芽 。暗 培 养 ２ ，取 试 管 苗 顶 部 幼 嫩 叶 片 ，远 轴 Ｐ ｒｓ ０ｄ
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２ Ｏ ，２ （ ） ６ ～３ ８ Ｏ ２ ９ ４ ：３ ７ ６
Ａｅ ｒ ｅ ｌ ｒ ｅ Ｓ ｒ＇ ｔ Ｈｏ ｔ ｕ ｔ ａ ｉ ｃ ａ ｉ ｕ ｅ ａ
梨 叶 片 离 体 培 养 和 植 株 再 生
徐 凌 飞 马 锋 旺 王 始 之 ２ 任 小 林 曹 晓 雁 ２
ｃ ｌ ｖ ｒ ‘ ｌＩ Ｉ ｕｌ ａ ｓ Ｒ 试 管 苗 叶 片 为 外 植 体 ，远 轴 面 向
下 的再 生 频 率 和 再 生 芽 数 分 别 为 ４ ． ％ 和 １ ３ ， ４５ ．３
而 远 轴 面 向 上 的分 别 为 ２ ．％ 和 ０ ８ 。远 轴 面 气 ７８ ．３ 孔 较 多 ，组 织 疏 松 ，容 易 吸 取 更 多 的养 分 ，所 以接 种 时 以远 轴 面 向 下 为 宜 。 ２３ 外 植 体 的取 材 部 位 对 叶 片再 生 的 影 响 ． 取 八 月 红 梨 试 管 苗 顶 部 ２～４位 展 开 的幼 叶 和下 部 的 叶 片 接 种 。结 果 表 明 ：顶 部 叶 片 的 再 生 频 率 和再 生 芽 数 分 别 为 ４ ．％ 和 ０．３ ５ ８ ，而 下 部 叶 片 分 别 为 １ ． ％ 和 ０ ５ 。顶 部 叶 片 幼 嫩 ，离 分 生 组 织 ６７ ．０
在相 同 培 养 基 上 ， 八 月 红 、 水 晶 、 砀 山 酥 和 早 酥 梨 叶 片 再 生 频 率 分 别 为 ７ ． ％ 、 ３ ． ％ 、 ７８ ３３ ３ ．％ 、３ ３ ；再 生 芽 数 分 别 为 １８ ８９ ３． ％ ．３、０．３、０６ ８ ．７、０．０。八 月 红 梨 再 生 能 力 最 强 ，叶 片再 生 频 ５ 率 显 著 高 于 其 它 ３个 品 种 ，再 生 芽 数 最 多 。 另 外 八 月 红 梨 叶 片 出 芽 较 快 ，生 长 势 也 好 ，接 种 后 ２ ０ｄ
暗 培 养 可 以显 著 提 高 水 晶梨 叶 片 的再 生 频 率 ， 八 月 红 梨 叶 片 暗 培 养 再 生 频 率 也 高 于 没 有 经 过 暗 培养 的 。对 这 两 个 梨 品 种 来 说 ，暗 培 养 ２ ， 叶 ０ｄ 片再生频率 最高 （ １。 表 ）
２ ２ 外 植 体 接 种 方 向 对 叶 片 再 生 的 影 响 ．
２ 结 果 与分 析
２． 暗 培 养 时 间对 梨 叶 片再 生 的影 响 １
表 １ 不 同 暗 培 养 时 间对 梨 叶 片 再 生 的 影 响
Ｔａ ｌ １ Ｅｆ ｅ ｔ ｏ ｂ ｅ ｆ ｃ ｆｄａ ｋ ｐｅ ｄ １ ｒ ｏ Ｏ１ｈＩ ｅ ｅ ｒ ｉ ｎ ｏ ｌｆ ＂ ｄ ｒ ｇ ￣ ａｆ ｏ ｆ ｅ ， ｔ
～
Ｂ ． ｇ Ｌ＋Ｌ ０ ５ｍｇＬ，附 加 蔗 糖 ３ ／ ，琼 脂 ６ ０ｇ Ｌ Ｈ ． 激 素 试 验 除 外 ） Ａ ５０ｍ ／ 从 ． ／ ０ｇ Ｌ ． ／ ，ｐ ５ ８（ 。每 瓶 接 种 ３ 个 叶 片 ，随 机 区组 试 验 设 计 ，每 处 理 ６瓶 ，重 复 １ ～２次 。 叶片 接 种 后 ６ 计 再 生 效 率 ，并 对 结 果 ０ｄ统 进 行 方 差 分 析 ，显 著 水 平 为 ００ ．５。将 诱 导 出 不 定 芽 的 叶 片 接 种 于 ＭＳ＋Ｂ ． ／Ｌ＋ＩＡ ０ ２ｍｇＬ Ａ ０ ５ｍｅ Ｂ ． ／ 的生 长 培 养 基 上 ，培 养 ３ 将 不 定 芽 发 育 成 的新 梢 切 成 ２～３ｅ 茎 段 ，转 入 生 根 培 养 基 。 每 品 种 ０ｄ后 ｍ 接种茎段 ３ ０个 以 上 。 培 养 温 度 （５±２ ℃ ，光 照 强 度 ２００Ｉ，光 照 时 间 １ ／ 。 ２ ） ０ ｘ ４ｈ ｄ
面 向下接 触 培养 基 ，叶片再 生 效率 高 。八月 红 品种 的 叶 片再 生 效率 高 于其 它 ３个 品 种 。在 Ｎ ６ Ｎ ９＋Ｔ Ｚ １０ Ｄ ． ｍ／Ｌ＋ＩＡ ０ ５ｎ Ｌ培 养基 上 ，八 月红 梨 叶片再 生 频 率 为 １０ ，平 均再 生 芽数 为 ５ ７ ｅ Ｂ ． ０％ ．８。八 月 红 梨 和 水 晶 梨 叶片再 生 苗在 附加 ＩＡ的 １２ Ｓ培 养基 上 生根 。 Ｂ ／Ｍ 关键 词 ：梨 ；叶片培 养 ；植 株再 生 中图分 类号 ：Ｓ６ １ ２ ６ ． 文 献标 识 码 ：Ａ 文章 编 号 ：０ １—５ Ｘ （Ｏ２ ４０ ６ —２ ５３３ ３ ２Ｏ ）０ －３７０ －
１ 目的 、材 料 与 方 法
梨 叶 片 再 生效 率 普 遍 较 低 【＇ 。作 者 通 过 对 影 响 梨 叶 片 离 体 再 生 的 若 干 因素 的 研 究 ，建 立 梨 叶 片 ｌ 再 生 体 系 ，为 梨 树 无 性 变 异 体 筛 选 和 遗 传 转 化 研 究 奠 定 基 础 。 以 中 国梨 主栽 品 种 八 月 红 、砀 山 酥 、早 酥 、水 晶 （ 高 芽 变 ）梨 试 管 苗 为 试 材 ，取 继 代 培 养 ３ 新 Ｏ