连翘及连翘叶抑菌抗炎活性及其主要化学成分研究

连翘为木犀科连翘属植物，以果实入药，其性微寒，味苦，归肺、心、胆经，具有清热解毒、消肿散结、疏散风热的功效［1］，临床常用于急性风热感冒、痈肿疮毒、淋巴结核、尿路感染等症，中医素有“疮家圣药”之称。我国盛产连翘，其资源丰富、成分复杂、生物活性多样，是临床常用的中药材，也是许多中成药的重要原料。本研究选用连翘及连翘叶为研究对象，对其抑菌抗炎活性及生物活性与主要成分之间的相关性进行研究。

1实验材料

1.1仪器：岛津LC-20AD高效液相色谱仪，ME204电子天平。

1.2菌种和培养基：乙型溶血性链球菌32210，金黄色葡萄球菌26003，藤黄球菌28001，枯草杆菌63501，表皮葡球菌26069，白色葡萄球菌26101，肺炎链球菌31001，肺炎克雷伯菌46117，铜绿假单胞菌10104，大肠杆菌44102，乙型副伤寒沙门菌50094，白色念珠菌9800，以上菌种均购自中国食品药品检定研究院。所用培养基均购自北京陆桥技术有限责任公司。

1.3试药：连翘，收集不同来源、不同批号的连翘药材共16批；连翘叶1批，自制，采集当年新鲜的连翘叶子，自然晾干。连翘对照药材（120908-201216）、连翘酯苷A（111810-201405）、连翘苷（110821-201514），均购自中国食品药品检定研究院。

1.4实验动物：昆明种小鼠（20.0±

2.0）g，雄性，中国人民解放军军事医学科学院实验动物中心；SD大鼠（200±20）g，雄性，山西医科大学实验动物中心。

2方法

2.1连翘苷、连翘酯苷A的测定

参考文献［2］方法对16批连翘和1批连翘叶中连翘苷、连翘酯苷A的含量进行测定。

2.2体外抑菌活性评价

2.2.1敏感菌筛选

采用试管稀释法［3］对连翘进行10株细菌和1株真菌的抑菌活性筛选，测定连翘水煎液对各菌悬液的最低抑菌浓度（MIC）和最低杀菌浓度（MBC）。

2.2.2连翘及连翘叶体外抑菌活性研究

2.2.2.1连翘及连翘叶的制备：取药材粉末0.40g，精密加40%乙醇10ml，超声处理45min，放冷，摇匀，离心，取上清液，经0.22μm膜过滤备用。

2.2.2.2对照溶液制备：取连翘对照药材，同法处理。2.2.2.3体外抑菌活性测定：取玻璃试管4×9支，分别编为1~9号，前2组为样品组，第3组为对照药材组，第4组为溶剂对照组。每支试管中加入MHB培养基［4］1ml，按试管稀释法将1~6管制成20~0.625mg/ml的药液，7号加菌不加药，8号加药不加菌，9号不加药也不加菌，接着向编号1~7号管中加入制备好的表皮葡萄球菌悬液（约1×105/ml），吹打混匀，37℃培养24h后每管加入5mg/ml MTT0.9%氯化钠注射液，继续培养1h，观察溶液颜色，紫色表示有菌生长，未变色表示细菌生长被抑制，未变色的最小浓度即为样品的MIC。对16批连翘和1批连翘叶测定其MIC。

2.3抗炎活性研究［5］

2.3.1二甲苯致小鼠耳肿胀实验：取小鼠120只，雄性，随机分为12组，即空白组、连翘7.5、3.75g/kg组（4批），连翘叶7.5、3.75g/kg组，地塞米松组。每日灌胃1次，连续给药7d，末次给药1h后，小鼠右耳涂以二甲苯20μl/只，左耳不涂作自身对照。30min后，处死，用内径8mm的打孔器打下双耳相应部位耳片，称质量。

2.3.2棉球所致大鼠肉芽肿增生实验：取健康SD大鼠80只，随机分为8组，即正常对照组、模型对照组、连翘2.5g/kg 组（连翘4批），连翘叶组，地塞米松组，每日给药1次，连续14d。给药第5天，除空白组外将大鼠乙醚浅麻醉，在双侧腹股沟皮下植入（20.0±1.0）mg的灭菌棉球各1个。术后第11天处死动物，剥离出包有肉芽组织的棉球，置60℃烘箱12h 烘干，称质量，取2个棉球重量均值减去棉球重量40mg，即为肉芽组织干质量，计算每100g体质量肉芽组织干重和药物对肉芽组织形成的抑制率。

2.4统计学分析

采用SPSS17.0进行统计分析，采用t检验、字2检验与相关分析，以P<0.05为差异有统计学意义。

3结果

3.1连翘苷、连翘酯苷A的测定

16批连翘中连翘苷0.04%~0.25%，连翘酯苷A0.53%~

·药物研究·

连翘及连翘叶抑菌抗炎活性及其主要化学成分研究王婷婷张蕻杨志敏赵思俊李洋宋伟维朴晋华张立伟

DOI：10.11655/zgywylc2019.14.021

基金项目：山西省实验动物科研专项基金（2013k08）

作者单位：030001太原，山西省食品药品检验所（王婷婷、张蕻、

杨志敏、赵思俊、李洋、宋伟维、朴晋华）；山西大学分子科学研究所

（张立伟）

通信作者：张立伟

2.77%；

连翘叶中连翘苷1.18%，连翘酯苷A 2.55%。3.2连翘及连翘叶体外抑菌活性研究

3.2.1

敏感菌筛选：连翘水煎液对9种试验菌均有不同程度

的抑菌效果，其中对表皮葡萄球菌抑菌作用最强，金黄色葡萄球菌次之，因而选用表皮葡萄球菌作为抑菌活性评价的试验用菌株。

3.2.2连翘及连翘叶体外抑菌活性研究结果：16批连翘MIC

为1.25~5.0mg /ml 。随着化学成分，特别是连翘酯苷A 的含量升高，连翘的抑菌活性呈一致性升高趋势，采用SPSS 17.0中

双变量相关分析方法，计算连翘中的连翘苷、连翘酯苷A 含量与MIC 的相关性，结果连翘酯苷A 含量与MIC 间的Per⁃son 相关系数为-0.809（P <0.01），连翘苷含量与MIC 间的Person 相关系数为-0.576（P <0.05），均呈显著负相关。3.3抗炎活性研究

3.3.1连翘及连翘叶对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀的影响

与空白组比较，除连翘叶高剂量组以外，其各组均能不同

程度的抑制二甲苯所致的耳廓肿胀，其中连翘3号7.5g /kg 、连翘6号7.5、3.75g /kg 组、连翘8号3.75g /kg 组差异有统计学意义（P <0.05）。以3.75g /kg 组抑制率排序：连翘6号>连翘8号>连翘3号>连翘叶>连翘14号。见表2。

3.3.2连翘及连翘叶对大鼠棉球肉芽肿形成的影响

与空白组比较，连翘各给药组用药后对肉芽增生有不同

程度的抑制作用，其中连翘6、14号及连翘叶差异有统计学意义（P <0.01），抑制率排序：连翘叶>连翘6号>连翘14号>连翘8号>连翘3号。

源讨论

本研究采用高效液相色谱法（HPLC ）对16批连翘进行连翘苷和连翘酯苷的含量测定，从测定结果可见各批次间差异较大，为后续生物活性评价选择样品提供了依据。通过敏感菌筛选，确定表皮葡萄球菌作为试验用菌对所有样品进行抑菌试验，同时将化学分析结果与抑菌活性结果进行Pear-son 相关分析，

连翘的MIC 与连翘酯苷A 、连翘苷的含量均显著相关，说明两种成分均为连翘中的抑菌活性物质［6］

。

抗炎活性研究，选择连翘酯苷A 含量不同水平的4批连翘和1批连翘叶作为研究对象，通过小鼠耳肿胀和大鼠棉球肉芽肿两个模型，分别评价其对急、慢性炎症的缓解作用，结果各样品均能不同程度的缓解炎症的作用。将抗炎作用、抑菌MIC 和含量测定结果进行相关分析，除抑菌活性与连翘酯苷

A 含量显著相关外，

抗炎活性与连翘酯苷A 、连翘苷含量均无明显相关性，由此可见生物活性评价仍具有其独特的优势，单一成分的控制并不能评价中药材整体质量，因而如何开发准确易行的生物活性评价方法仍是我们未来研究的方向。

另外，本研究将连翘叶与连翘同时作为研究对象，对其化学成分和生物活性进行了同步测定，结果连翘叶中连翘苷含量为1.18%，远高于连翘0.04%~0.25%，连翘酯苷A 含量为2.55%，

与连翘0.53%~2.77%相比，也处于较高水平。抑菌试验结果连翘叶MIC 为1.25mg /ml ，与连翘酯苷A 含量接近的连翘处于同一水平，而连翘苷的高含量并未引起其抑菌能力的明显改变，因而再次证明连翘酯苷A 为连翘中抑菌活性的主要活性成分。抗炎试验结果表明连翘叶对耳肿胀抑制效果一般，但对棉球肉芽肿的抑制效果优于所有连翘，说明连翘叶对慢性炎症具有良好的治疗效果，具有很好的开发前景。

参考文献

［1］国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）［M ］.北京：化学

工业出版社，2015：159⁃160.

［2］王姝君，

李石飞，张立伟.连翘含量测定方法优化及（青）老翘质量控制标准建立探讨［J ］.中国中药杂志，2018，43（15）：3157⁃3162.

［3］陈奇.中药药理研究方法学［M ］.北京：人民卫生出版社，1993：259⁃262.［4］李仲兴，

王秀华，赵建宏，等.应用M⁃H 琼脂进行五倍子等5种中药对28株肠球菌的体外抗菌活性观察［J ］.中草药，2001，32（10）：1101⁃1103.［5］胡竟一，雷玲，余悦，等.连翘的抗炎解热作用研究［J ］.中药药

理与临床，2007，23（3）：51⁃52.

［6］姜醒，

鲁丽敏，春蕾.连翘中具有抗菌活性的苯乙醇苷类化学成分研究［J ］.中国现代中药杂志，2017，19（5）：642.（收稿日期：2018⁃12⁃09）

23.62.8

-

32.710.47.726.014.931.829.63.757.5-0.75mg 3.757.57.53.757.53.75146±4399±53a

108±25a 129±64100±52a 103±43a 143±22131±24135±26112±28a -5.37.5154±253.75

129±32

12.1

注：a

与空白组比较P <0.05

肿胀抑制率

（%）剂量（g /kg ）肿胀率（%）表22组连翘及连翘叶

对二甲苯致小鼠耳廓肿胀度的影响（x±s ）连翘8号⁃L 组10连翘14号⁃H 组10空白组10地塞米松组10连翘14号⁃L 组10连翘8号⁃H 组10连翘3号⁃H 组10连翘3号⁃L 组10连翘6号⁃H 组10连翘6号⁃L 组10连翘叶⁃H 组10连翘叶⁃L 组

10

组别只数