HCV 抗体检测介绍讲课文档
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12
具体样本组成
RNA(+) &RIBA(+)
87
RNA （+）121 RIBA(-)/IND & RNA (+) 34
1 卫生部临检中心评估数据
第31页，共36页。
特异性评估1
Hale Waihona Puke RNA & RIBA 阴性（n=307)
方法
有反应性 无反应性 特异性
Elecsys anti-HCV II
2
305
99.35%
( Elecsys/ Lizvon/Intec)
2nd :特殊样本的评估
– 卫生部临检中心 （多种方法）
评估内容
灵敏度
– 血清转换盘样本 – 日常检测阳性样本 – 临检中心早期感染样本
特异性
– 实验室常规检测样本
确认方法：
– MIKROGEN ® RIBA HCV
– CHIRON® RIBA HCV 3.0
1 卫生部临检中心评估数据
第32页，共36页。
判定真阳性的Cutoff 的初步分析1 基于全部1072例/243例确认阳性样本
方法
S/C n >S/CO 真阳 S/CO n 1 - S/CO 真阳
O
假阳性 性率
假阳性 性率
Elecsys1 >50 68
5
93% 1-50 175
HCV RNA
HCV 基 因分型
确诊
※ ※
疗程
※ ※
疗效的评 持久性应
估
答预测
※
※
第6页，共36页。
Anti-HCV是HCV感染筛查的指标
80%急性感染进展为慢性感染
第7页，共36页。
Anti-HCV 的漏检和假阳性 是困扰实验室问题之一
第8页，共36页。
在低感染人群，假阳性不可忽略
1%的感染率，如特异性99 %，PPV只有50%
第30页，共36页。
早期感染样本的灵敏度评估1
HCV RNA 和/或 RIBA 阳性（n=133)
方法
Elecsys
anti-HCV II A
B
有反应 110 92 98
性
灵敏率
87.2% 69.2% 76.7%
C
92
69.2%
D
91
68.4%
E
86
64.7%
F
86
64.7%
G
87
65.4%
RIBA （+）99 RNA (-) &RIBA (+)
样本数 N=830 17 813
2%
Elecsys® Anti-HCV II
17 0 809 4 100% 99.50%
Vitros® Anti-HCV
17 0 805 8 100% 99.02%
Architect® Anti-HCV
16 1 805 8 94% 99.02%
* RIBA 不确定+ RNA (-) 结果解释为阴性
✓ RIBA（-）；
Anti-HCV有反应性
✓ HCV RNA (-）/RIBA（-） ✓ HCV RNA（-）/ RIBA IND
视为低风险
Anti-HCV确认阳性
Anti-HCV确认阴性
CDC，Guidelines for Laboratory Testing and Result Reporting of Antibody to Hepatitis C Virus 2003
structural proteins
viral polyprotein
non-structural proteins
C E1 E2 NS1 NS2 NS3 NS4A NS4B NS5A NS5B
合成肽
合成肽 重组抗原
• 应用Core， NS3， NS4 抗原片段
• 不再应用NS5（对于灵敏度提升有限但
8
性 假阴性
8
8
7
7
8
1
1
阴 真阴性 1036 性 假阳性
1034 2
1022 14
1036 0
1034 2
统 灵敏度 计 特异性*
100% 99.81
100% 98.64%
88% 100%
88% 99.81%
阳性率 0.8%
*没有HCV RNA结果 , 排除RIBA不确定样本
第28页，共36页。
预选样本的评估
益处： – 提升灵敏度
– 减少了非特异性反应
挑战：
– “度”的把握
– 掌握不好，容易漏检
抗原的选择和生产工艺
HCV病毒缺乏有效体外培养系统 ，难以从病毒中分离出天然抗原 ；生产的抗原材料与天然抗原的 接近度越高，试剂性能越好。
NS3 是构像依赖性抗原，需要使用 重组抗原
– 不同批次间抗原的均一 性非常重要；
中国丙肝临床报告病例逐年递增
中国目前约有1000万例丙肝感染者
中国卫生部公告. 庄辉. 2012世界肝炎日第全3国页丙，肝共专3题6页会议。.
临床报告病例仅是总体患者的冰山一角
中国目 前约有
1000
万例
HCV 感染
者
历年报告临床病 例总和<100万例
超过90%的HCV
感染者尚未被发现
中国卫生部公告. 庄辉. 2012世界肝炎日第全4国页丙，肝共专3题6页会。议.
各种抗原的配比调整
– NS3 抗原在早期诊断和提高 灵敏度上都均有重要价值， 提高NS3抗原的配比
– Core抗原中的N端保守区域
易产生交叉反应，适度减少
Core抗原的配比
– 随着重组技术的进展，使原 料抗原的活性更强
第18页，共36页。
影响试剂性能的主要因素
各种抗原的配比平衡
增加NS3抗原，同时减少核心区 抗原
第14页，共36页。
Anti-HCV有反应性进一步结果解释
HCV 有反应性
– RNA (-) 仍需要进行RIBA 确认，尤其是低流行区域
根据流行率 的确认流程 – 流行率<10%
• 先 RIBA ， 后 RNA 最经济
– 流行率> 20%
• 先RNA， 后RIBA 最经济
– 流行率 10-25%
假阴性
传播扩散风险 医疗安全风险
延误病情
第16页，共36页。
对于HCV病毒认知的深入使检测试
剂性能逐渐提高
a)
结构蛋白
非结构蛋白
5´UTR C E1 E2 NS2 NS3
NS4 NS5A NS5B 3´UTR
b) 新
药 物
蛋白酶抑制剂
NS5A 抑制剂
聚合酶抑制剂
诊 断 Core 蛋白和NS3蛋白的免疫原性最强，是抗体检测最重要组份； 试 剂
HCV特征决定
准确的检测是疾病管理最重要防线
病毒基因组具有高度变异性 – 目前尚无预防性疫苗
HCV在体外持久的稳定性
– 丙肝患者体液污染的器械具有很强的传染性
对于Anti-HCV筛查阳性者应及早确诊、规范治疗
第5页，共36页。
HCV感染诊断实验的选择
方法
筛查
ALT
※
Anti-HCV ※
RIBA
• 两者方案， 费用相当
CDC，Guidelines for Laboratory Testing and Result Reporting of Antibody to Hepatitis C Virus 2003
第15页，共36页。
临床需要高性能的检测试剂
假阳性
不必要的补充确认检测 不必要的就诊和心理伤害 医疗纠纷
2006 Hep/Retro Symposium III Washington D.C., 24-26 September 2006
第13页，共36页。
Anti-HCV有反应性进一步结果解释
Anti-HCV 有反应性
– RIBA（+）
Anti-HCV 有反应性 – HCV RNA（+）
Anti-HCV 有反应性
是会降低检测特异性）
新的试剂缓冲液
减少干扰 增强试剂的稳定性
第22页，共36页。
Elecsys® Anti-HCV II多中心评估
评估单位
1st : 多中心研究
– 北京大学人民医院
（Elecsys/Vitros/Architect）
– 上海交通大学新华医院
（Elecsys/Vitros）
– 四川大学华西医院
第17页，共36页。
第三代Anti-HCV 检测试剂 精选抗原靶位，提升检测性能
NS3 /Core 抗体出现最早
第三代Anti-HCV 的平均窗口期是
6-8周；
NS3 和 Core 抗体要早于 NS4 和 NS5抗体数周时间
第三代试剂中加入Core，NS3， NS4 （部分厂家加入NS5)抗原。
北京大学人民医院 （n=67 )
入选: Vitros(+)
S/CO <8
RIBA 不确定样本的 RNA结果均为 (-) 低S/CO 样本中20% 是真正阳性
第29页，共36页。
预选样本的评估
北京大学人民医院 （n=67 )
灵敏度：92% 特异性*：93%
灵敏度：92% 特异性*：63%
* RIBA 不确定+ RNA (-) 结果解释为阴性
AntiHCV
Anti-HCV 确认阳性*
+
-
+
9999
(TP)
9900(FP) PPV = 9999/(9999 + 9900) = 50.25 %
-
1
(FN)
980100 (TN)
NPV = 989,010/(1 + 989,010) = 99.9999 %
感染者
10,000
未感染 990,000
阴 性
报告
HCV RNA的NAT检测
不 确 定
报告
阴
阳性
性
RIBA HCV检测
阳 性
阴 性
不 确 定
报告
报告
报告
报告
1，Miriam J. Alter et al - Guidelines for Laboratory Testing and Result Reporting of Antibody to Hepatitis C
– Cobas® Taqman HCV RNA
第23页，共36页。
应用血清转换盘评估灵敏度
Elecsys® Anti-HCV II 灵敏度最高
第24页，共36页。
血清转换盘是客观评价早期感染灵敏度 的标准
第25页，共36页。
常规样本的评估
北京大学人民医院 (n=830)
阳性 阴性 统计
真阳性 假阴性 真阴性 假阳性 灵敏度 特异性* 阳性率
RNA 阴性 & RIBA 不确定 (n=419)
方法
Elecsys anti-HCV II
有反应性
34
无反应性
385
特异性
91.89%
A 21
286 93.16%
B 38
269 87.62%
C 42
265 86.32%
A
116 303 72.23%
B
114 315 75.18%
C
77 342 81.63%
*没有HCV RNA结果 , 排除RIBA不确定样本
第27页，共36页。
常规样本的评估
四川大学华西医院 (n=1044)
样本数 Elecsys® Elecsys® Intec® Lizvon® N=1044 Anti-HCV II Anti-HCV Anti-HCV Anti-HCV
阳 真阳性 8
Virus
第10页，共36页。
RIBA（以 Chiron为例）
两个以上条带（＞1+）为阳性
第11页，共36页。
Anti-HCV检测灵敏度也是不能忽略
DNA
3rd gen
2nd gen
1st gen
阳 不同的3rd试剂 性
<== 窗口期 ==> （70天）
第12页，共36页。
第三代试剂之间也有明显差异
HCV 抗体检测介绍
第1页，共36页。
HCV病毒学特征
RNA基因组
衣壳
黄病毒属1 有衣壳蛋白包裹2 已知6种基因型，>80个亚型3 病毒基因组具有高度变异性3
– 形成不同基因构成的病毒亚群或准种
1,4
增殖速度：1012个/天2
病毒颗粒 核心蛋白
1. Purcell R. NIH Consensus Conference on Hepatitis C. 1997; 2. Neumann A, et al. Science 1998; 282: 103; 3. Lauer G & Walker B. N Engl J Med 2001; 345: 41; 4. Hoofnagle J. NIH Consensus Conference on He第pa2t页itis，C共.3169页9。7
NS4 /Core抗原通常使用合成多肽 抗原；
第19页，共36页。
了解试剂性能， 是放心应用的前提！
第20页，共36页。
Elecsys® Anti-HCV II
双抗原夹心法，18分钟
第21页，共36页。
Elecsys® Anti-HCV II 全面升级
viral (+) RNA genome
第26页，共36页。
常规样本的评估
上海交通大学新华医院（n=495)
阳性 阴性 统计
真阳性 假阴性 真阴性 假阳性 灵敏度 特异性* 阳性率
样本数 N=495 1 494
0.2%
Elecsys® Anti-HCV II
Vitros® Anti-HCV
1 0 494 0 100% 100%
1 0 492 2 100% 99.60%
灵敏度 = 99.99 %
特异性 = 99 %
prevalence = 1 %
第9页，共36页。
美国CDC Anti-HCV实验室检测结果
报告导则1
抗-HCV筛查检测 或
根据S/Co比值判定为阳性
阴性 所有阳性结果
报告
高S/Co比值阳性* 报告
低S/Co比值阳性* 或
阳 性
报告
RIBA HCV检测
具体样本组成
RNA(+) &RIBA(+)
87
RNA （+）121 RIBA(-)/IND & RNA (+) 34
1 卫生部临检中心评估数据
第31页，共36页。
特异性评估1
Hale Waihona Puke RNA & RIBA 阴性（n=307)
方法
有反应性 无反应性 特异性
Elecsys anti-HCV II
2
305
99.35%
( Elecsys/ Lizvon/Intec)
2nd :特殊样本的评估
– 卫生部临检中心 （多种方法）
评估内容
灵敏度
– 血清转换盘样本 – 日常检测阳性样本 – 临检中心早期感染样本
特异性
– 实验室常规检测样本
确认方法：
– MIKROGEN ® RIBA HCV
– CHIRON® RIBA HCV 3.0
1 卫生部临检中心评估数据
第32页，共36页。
判定真阳性的Cutoff 的初步分析1 基于全部1072例/243例确认阳性样本
方法
S/C n >S/CO 真阳 S/CO n 1 - S/CO 真阳
O
假阳性 性率
假阳性 性率
Elecsys1 >50 68
5
93% 1-50 175
HCV RNA
HCV 基 因分型
确诊
※ ※
疗程
※ ※
疗效的评 持久性应
估
答预测
※
※
第6页，共36页。
Anti-HCV是HCV感染筛查的指标
80%急性感染进展为慢性感染
第7页，共36页。
Anti-HCV 的漏检和假阳性 是困扰实验室问题之一
第8页，共36页。
在低感染人群，假阳性不可忽略
1%的感染率，如特异性99 %，PPV只有50%
第30页，共36页。
早期感染样本的灵敏度评估1
HCV RNA 和/或 RIBA 阳性（n=133)
方法
Elecsys
anti-HCV II A
B
有反应 110 92 98
性
灵敏率
87.2% 69.2% 76.7%
C
92
69.2%
D
91
68.4%
E
86
64.7%
F
86
64.7%
G
87
65.4%
RIBA （+）99 RNA (-) &RIBA (+)
样本数 N=830 17 813
2%
Elecsys® Anti-HCV II
17 0 809 4 100% 99.50%
Vitros® Anti-HCV
17 0 805 8 100% 99.02%
Architect® Anti-HCV
16 1 805 8 94% 99.02%
* RIBA 不确定+ RNA (-) 结果解释为阴性
✓ RIBA（-）；
Anti-HCV有反应性
✓ HCV RNA (-）/RIBA（-） ✓ HCV RNA（-）/ RIBA IND
视为低风险
Anti-HCV确认阳性
Anti-HCV确认阴性
CDC，Guidelines for Laboratory Testing and Result Reporting of Antibody to Hepatitis C Virus 2003
structural proteins
viral polyprotein
non-structural proteins
C E1 E2 NS1 NS2 NS3 NS4A NS4B NS5A NS5B
合成肽
合成肽 重组抗原
• 应用Core， NS3， NS4 抗原片段
• 不再应用NS5（对于灵敏度提升有限但
8
性 假阴性
8
8
7
7
8
1
1
阴 真阴性 1036 性 假阳性
1034 2
1022 14
1036 0
1034 2
统 灵敏度 计 特异性*
100% 99.81
100% 98.64%
88% 100%
88% 99.81%
阳性率 0.8%
*没有HCV RNA结果 , 排除RIBA不确定样本
第28页，共36页。
预选样本的评估
益处： – 提升灵敏度
– 减少了非特异性反应
挑战：
– “度”的把握
– 掌握不好，容易漏检
抗原的选择和生产工艺
HCV病毒缺乏有效体外培养系统 ，难以从病毒中分离出天然抗原 ；生产的抗原材料与天然抗原的 接近度越高，试剂性能越好。
NS3 是构像依赖性抗原，需要使用 重组抗原
– 不同批次间抗原的均一 性非常重要；
中国丙肝临床报告病例逐年递增
中国目前约有1000万例丙肝感染者
中国卫生部公告. 庄辉. 2012世界肝炎日第全3国页丙，肝共专3题6页会议。.
临床报告病例仅是总体患者的冰山一角
中国目 前约有
1000
万例
HCV 感染
者
历年报告临床病 例总和<100万例
超过90%的HCV
感染者尚未被发现
中国卫生部公告. 庄辉. 2012世界肝炎日第全4国页丙，肝共专3题6页会。议.
各种抗原的配比调整
– NS3 抗原在早期诊断和提高 灵敏度上都均有重要价值， 提高NS3抗原的配比
– Core抗原中的N端保守区域
易产生交叉反应，适度减少
Core抗原的配比
– 随着重组技术的进展，使原 料抗原的活性更强
第18页，共36页。
影响试剂性能的主要因素
各种抗原的配比平衡
增加NS3抗原，同时减少核心区 抗原
第14页，共36页。
Anti-HCV有反应性进一步结果解释
HCV 有反应性
– RNA (-) 仍需要进行RIBA 确认，尤其是低流行区域
根据流行率 的确认流程 – 流行率<10%
• 先 RIBA ， 后 RNA 最经济
– 流行率> 20%
• 先RNA， 后RIBA 最经济
– 流行率 10-25%
假阴性
传播扩散风险 医疗安全风险
延误病情
第16页，共36页。
对于HCV病毒认知的深入使检测试
剂性能逐渐提高
a)
结构蛋白
非结构蛋白
5´UTR C E1 E2 NS2 NS3
NS4 NS5A NS5B 3´UTR
b) 新
药 物
蛋白酶抑制剂
NS5A 抑制剂
聚合酶抑制剂
诊 断 Core 蛋白和NS3蛋白的免疫原性最强，是抗体检测最重要组份； 试 剂
HCV特征决定
准确的检测是疾病管理最重要防线
病毒基因组具有高度变异性 – 目前尚无预防性疫苗
HCV在体外持久的稳定性
– 丙肝患者体液污染的器械具有很强的传染性
对于Anti-HCV筛查阳性者应及早确诊、规范治疗
第5页，共36页。
HCV感染诊断实验的选择
方法
筛查
ALT
※
Anti-HCV ※
RIBA
• 两者方案， 费用相当
CDC，Guidelines for Laboratory Testing and Result Reporting of Antibody to Hepatitis C Virus 2003
第15页，共36页。
临床需要高性能的检测试剂
假阳性
不必要的补充确认检测 不必要的就诊和心理伤害 医疗纠纷
2006 Hep/Retro Symposium III Washington D.C., 24-26 September 2006
第13页，共36页。
Anti-HCV有反应性进一步结果解释
Anti-HCV 有反应性
– RIBA（+）
Anti-HCV 有反应性 – HCV RNA（+）
Anti-HCV 有反应性
是会降低检测特异性）
新的试剂缓冲液
减少干扰 增强试剂的稳定性
第22页，共36页。
Elecsys® Anti-HCV II多中心评估
评估单位
1st : 多中心研究
– 北京大学人民医院
（Elecsys/Vitros/Architect）
– 上海交通大学新华医院
（Elecsys/Vitros）
– 四川大学华西医院
第17页，共36页。
第三代Anti-HCV 检测试剂 精选抗原靶位，提升检测性能
NS3 /Core 抗体出现最早
第三代Anti-HCV 的平均窗口期是
6-8周；
NS3 和 Core 抗体要早于 NS4 和 NS5抗体数周时间
第三代试剂中加入Core，NS3， NS4 （部分厂家加入NS5)抗原。
北京大学人民医院 （n=67 )
入选: Vitros(+)
S/CO <8
RIBA 不确定样本的 RNA结果均为 (-) 低S/CO 样本中20% 是真正阳性
第29页，共36页。
预选样本的评估
北京大学人民医院 （n=67 )
灵敏度：92% 特异性*：93%
灵敏度：92% 特异性*：63%
* RIBA 不确定+ RNA (-) 结果解释为阴性
AntiHCV
Anti-HCV 确认阳性*
+
-
+
9999
(TP)
9900(FP) PPV = 9999/(9999 + 9900) = 50.25 %
-
1
(FN)
980100 (TN)
NPV = 989,010/(1 + 989,010) = 99.9999 %
感染者
10,000
未感染 990,000
阴 性
报告
HCV RNA的NAT检测
不 确 定
报告
阴
阳性
性
RIBA HCV检测
阳 性
阴 性
不 确 定
报告
报告
报告
报告
1，Miriam J. Alter et al - Guidelines for Laboratory Testing and Result Reporting of Antibody to Hepatitis C
– Cobas® Taqman HCV RNA
第23页，共36页。
应用血清转换盘评估灵敏度
Elecsys® Anti-HCV II 灵敏度最高
第24页，共36页。
血清转换盘是客观评价早期感染灵敏度 的标准
第25页，共36页。
常规样本的评估
北京大学人民医院 (n=830)
阳性 阴性 统计
真阳性 假阴性 真阴性 假阳性 灵敏度 特异性* 阳性率
RNA 阴性 & RIBA 不确定 (n=419)
方法
Elecsys anti-HCV II
有反应性
34
无反应性
385
特异性
91.89%
A 21
286 93.16%
B 38
269 87.62%
C 42
265 86.32%
A
116 303 72.23%
B
114 315 75.18%
C
77 342 81.63%
*没有HCV RNA结果 , 排除RIBA不确定样本
第27页，共36页。
常规样本的评估
四川大学华西医院 (n=1044)
样本数 Elecsys® Elecsys® Intec® Lizvon® N=1044 Anti-HCV II Anti-HCV Anti-HCV Anti-HCV
阳 真阳性 8
Virus
第10页，共36页。
RIBA（以 Chiron为例）
两个以上条带（＞1+）为阳性
第11页，共36页。
Anti-HCV检测灵敏度也是不能忽略
DNA
3rd gen
2nd gen
1st gen
阳 不同的3rd试剂 性
<== 窗口期 ==> （70天）
第12页，共36页。
第三代试剂之间也有明显差异
HCV 抗体检测介绍
第1页，共36页。
HCV病毒学特征
RNA基因组
衣壳
黄病毒属1 有衣壳蛋白包裹2 已知6种基因型，>80个亚型3 病毒基因组具有高度变异性3
– 形成不同基因构成的病毒亚群或准种
1,4
增殖速度：1012个/天2
病毒颗粒 核心蛋白
1. Purcell R. NIH Consensus Conference on Hepatitis C. 1997; 2. Neumann A, et al. Science 1998; 282: 103; 3. Lauer G & Walker B. N Engl J Med 2001; 345: 41; 4. Hoofnagle J. NIH Consensus Conference on He第pa2t页itis，C共.3169页9。7
NS4 /Core抗原通常使用合成多肽 抗原；
第19页，共36页。
了解试剂性能， 是放心应用的前提！
第20页，共36页。
Elecsys® Anti-HCV II
双抗原夹心法，18分钟
第21页，共36页。
Elecsys® Anti-HCV II 全面升级
viral (+) RNA genome
第26页，共36页。
常规样本的评估
上海交通大学新华医院（n=495)
阳性 阴性 统计
真阳性 假阴性 真阴性 假阳性 灵敏度 特异性* 阳性率
样本数 N=495 1 494
0.2%
Elecsys® Anti-HCV II
Vitros® Anti-HCV
1 0 494 0 100% 100%
1 0 492 2 100% 99.60%
灵敏度 = 99.99 %
特异性 = 99 %
prevalence = 1 %
第9页，共36页。
美国CDC Anti-HCV实验室检测结果
报告导则1
抗-HCV筛查检测 或
根据S/Co比值判定为阳性
阴性 所有阳性结果
报告
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