转化,转染,转导,感染,中英双字幕解释

转染和转化
转染的定义是“将具生物功能的核酸转移或运送到细胞内并使核酸在细胞内维持其生物功能”。

其中，核酸包括DNA（质粒和线性双链DNA），反义寡核苷酸及RNAi（RNA interference）。

基因转染技术已广泛应用于基因组功能研究（基因表达调控，基因功能，信号转导和药物筛选研究）和基因治疗研究。

基因转染需要一定的转染试剂将带有目的基因的载体运送到细胞内。

早期的磷酸钙转染法转染效率很低，且对很多细胞株无效，因此不能满足很多科研工作的需要。

目前，最常用的转染试剂是阳离子脂质体和阳离子聚合物，它们在克服细胞屏障方面跟病毒有很相象的特征，容易透过细胞膜。

其中，阳离子脂质体在体外基因转染中有很高的效率，然而在体内，它迅速被血清清除，在肺组织内累积，诱发强烈的抗炎反应，这将导致高水平的毒性，因此，在很大程度上限制了其应用。

由于阳离子脂质体的局限性，阳离子聚合物转染试剂日益受到重视。

转化特指将质粒DNA或以其为载体构建的重组DNA导入细菌体内，使之获得新的遗传特性的一种方法。

它是微生物遗传、分子遗传、基因工程等研究领域的基本实验技术之一。

受体细胞经过一些特殊方法（如：电击法，CaCl2等化学试剂法）处理后，使细胞膜的通透性发生变化，成为能容许外源DNA分子通过的感受态细胞。

进入细胞的DNA分子通过复制、表达实现遗传信息的转移，使受体细胞出现新的遗传性状。

由外来DNA引起生物体遗传性状改变的过程称为转化(transformation)。

噬菌体常常可感染细菌并将其DNA注入细菌体内，也可引起细菌遗传性状的改变。

通过感染方式将外来DNA 引入宿主细胞，并导致宿主细胞遗传性状改变的过程称为转染(transfection)。

转染是转化的一种特殊形式。

基因工程:有目的的通过分子克隆技术，人为的操作改造基因，改变生物遗传性状的系列过程。

载体:能在连接酶的作用下和外源DNA片段连接并运送DNA分子进入受体细胞的DNA分子。

转化:指质粒DNA或以它为载体构建的重组DNA导入细菌的过程。

感染:以噬菌体、粘性质粒和真核细胞病毒为载体的重组DNA分子，在体外经过包装成具有感染能力的病毒或噬菌体颗粒，才能感染适当的细胞，并在细胞内扩增。

转导:指以噬菌体为载体，在细菌之间转移DNA的过程，有时也指在真核细胞之间通过逆转录病毒转移和获得细胞DNA的过程。

转染:指病毒或以它为载体构建的重组子导入真核细胞的过程。

基因转染
基因转染的定义是“将具生物功能的核酸转移或运送到细胞内并使核酸在细胞内维持其生物功能”。

其中，核酸包括DNA（质粒和线性双链DNA），反义寡核苷酸及RNAi（RNA interference）。

基因转染技术已广泛应用于基因组功能研究（基因表达调控，基因功能，信号转导和药物筛选研究）和基因治疗研究。

基因转染需要一定的转染试剂将带有目的基因的载体运送到细胞内。

早期的磷酸钙转染法转染效率很低，且对很多细胞株无效，因此不能满足很多科研工作的需要。

目前，最常用的转染试剂是阳离子脂质体和阳离子聚合物，它们在克服细胞屏障方面跟病毒有很相象的特征，容易透过细胞膜。

其中，阳离子脂质体在体外基因转染中有很高的效率，然而在体内，它迅速被血清清除，在肺组织内累积，诱发强烈的抗炎反应，这将导致高水平的毒性，因此，
在很大程度上限制了其应永。

由于阳离子脂质体的局限性，阳离子聚合物转染试剂日益受到重视
转染
转染的概念
转染(transfection)指真核细胞由于外源DNA掺入而获得新的遗传标志的过程。

转染方法的分类
对外源基因转染方法的要求包括：
转移效率高，不影响细胞正常生理活动，低毒性，容易使用，重复性好，易获得稳定转化子.
根据转染的机制不同可划分为化学转染法和物理转染法两大类.
化学转染法
1.DEAE-葡聚糖法
DEAE葡聚是最早应用哺乳动物细胞转染试剂之一，DEAE-葡聚糖是阳离子多聚物，它与带负电的核酸结合后接近细胞膜而被摄取，用DEAE-葡聚糖转染成功地用用于瞬时表达的研究，但用于稳定转染却不是十分可靠。

2.磷酸钙法
磷酸钙法是磷酸钙共沉淀转染法，因为试剂易取得，价格便宜而被广泛用于瞬时转染和稳定转染的研究，先将DNA和氯化钙混合，然后加入到PBS中慢慢形成DNA磷酸钙沉淀，最后把含有沉淀的混悬液加到培养的细胞上，通过细胞胞膜的内吞作用摄入DNA。

磷酸钙似乎还通过抑制血清中和细胞内的核酸酶活性而保护外源DNA 免受降解.
3.人工脂质体法
人工脂质体法采用阳离子脂质体，具有较高的转染效率，不但可以转染其他化学方法不易转染的细胞系，而且还能转染从寡核苷酸到人工酵母染色体不同长度的DNA，以及RNA,和蛋白质.此外，脂质体体外转染同时适用于瞬时表达和稳定表达，与以往不同的是脂质体还可以介导DNA和RNA 转入动物和人的体内用于基因治疗.人工合成的阳离子脂质体和带负电荷的核酸结合后形成复合物，当复合物接近细胞膜时被内吞成为内体进入细胞质，随后DNA 复合物被释放进入细胞核内，至于DNA 是如何穿过核膜的，其机理目前还不十分清楚.。

物理方法
1.显微注射显微注射虽然费力，但是非常有效的将核酸导入细胞或细胞核的方法。

2.电穿孔
这种方法常用来制备转基因动物，但却不适用于需要大量转染细胞的研究。

电穿孔法常用来转染如植物园生智体这样的常规方法不容易转染的细胞。

电穿孔靠脉冲电流在细胞膜上打孔而将核酸导入细胞内。

导入的效率与脉冲的强度和持续时间有关系。

3.基因枪法
基因枪依靠携带了核酸的高速粒子而将核酸导入细胞内，这种方法适用于培养的细胞核在体内的细胞。

基因导入细胞的常用方法
目的基因序列与载体连接后，要导入细胞中才能繁殖扩增，再经过筛选，才能获得重组DNA分子克隆，不同的载体在不同的宿主细胞中繁殖，导入细胞的方法也不相同。

一、转化
由于外源DNA的进入而使细胞遗传性改变称为转化，早在1943年，Avery等就发现有毒肺炎双球菌的DNA与无毒肺炎双球菌共培养后产生有毒性的肺炎双球菌后代的转化现象。

但DNA进入细胞的效率很低，在分子生物学和基因工程工作中可采取一些方法处理细胞，经处理后的细胞就容易接受外界DNA，称为感受态细胞，再与外源DNA接触，就能提高转化效率。

例如大肠杆菌经冰冷CaCl2的处理，就成为感受态细菌，当加入重组质粒并突然由4℃转入42℃作短时间处理，质粒DNA就能进入细菌；用高电压脉冲短暂作用于细菌也能显著提高转化效率，这称为电穿孔（electroporation）转化法。

二、感染
噬菌体进入宿主细菌，病毒进入宿主细胞中繁殖就是感染（infection）。

用经人工改造的噬菌体活病毒作载体，以其DNA与目的序列重组后，在体外用噬菌体或病毒的外壳蛋白将重组DNA包装成有活力的噬菌体或病毒，就能以感染的方式进入宿主细菌或细胞，使目的序列得以复制繁殖。

感染的效率很高，但DNA包装成噬菌体或病毒的操作较麻烦。

三、转染
重组的噬菌体DNA也可象质粒DNA的方式进入宿主菌，即宿主菌先经过CaCl2，电穿孔等处理成感受态细菌再接受DNA，进入感受态细菌的噬菌体DNA可以同样复制和繁殖，这种方式称为转染（transfection）。

M13噬菌体DNA导入大肠杆菌就常用转染的方法。

重组DNA进入宿主细胞也常用转染方式。

最经典的是1973年建立的磷酸钙法，其利用的基本现象是：DNA如以磷酸钙-DNA共沉淀物形式出现时，培养细胞摄取DNA的效率会显著提高。

用电穿孔法处理培养的哺乳类细胞也能提高细胞摄取DNA能力，但所用外加电场的强度、电脉冲的长度等条件与处理细菌者都很不相同。

用人工脂质膜包裹DNA，形成的脂质体（Liposome）可以通过与细胞膜融合而将DNA导入细胞，方法简单而有效，但缺点是有细胞毒性和血清的不亲和性，近年来人们发现了一种更为有效的转染试剂－阳离子聚合物，其克服了脂质体转染试剂细胞毒性大，在体内易被血清清除等缺点，具有转染效率高，操作简单而日益受到重视。

G418筛选
分析转化的功能和表达需要DNA稳定转染至宿主细胞染色体。

外源基因进入细胞后，部分能够通过细胞质进入细胞核内，根据细胞类型，至多80%的进入核内的外源DNA得到瞬时表达。

极少数情况下，进入细胞的外源DNA通过系列非同源性分子间重组核连接，形成巨大的***结构最终整合进细胞染色体。

细胞基因组自由部分表达，所以整合并不一定意味着表达，只有整合到表达区的基因才会表达，而且整合到不同的染色体区段的外源基因的表达的量也是不同的。

由于摄取、整合、表达外源基因是小概率事件，通常根据新表型筛选稳定转染体。

一般情况下这种新表型由共转染的编码抗生素抗性基因提供。

细菌Tn5转座子序列（neo抗性基因）携带的氨基糖苷磷酸转移酶可以将G418转变成无毒形式。

G418是一种氨基糖类抗生素，其结构与新霉素、庆大霉素、卡那霉素相似，它通过影响80S核糖体功能而阻断蛋白质合成，对原核和真核等细胞都有毒性，包括细
菌、酵母、植物和哺乳动物细胞，也包括原生动物和蠕虫。

是稳定转染最常用的选择试剂。

当neo基因被整合进真核细胞基因组合适的地方后，则能启动neo
基因编码的序列转录为mRNA，从而获得抗性产物氨基糖苷磷酸转移酶的高效表达，使细胞获得抗性而能在含有Ｇ418的选择性培养基中生长。

Ｇ418的这一选择特性，已在基因转移、基因敲除、抗性筛选以及转基因动物等方面得以广泛应用。

在进行转染时细胞膜受到影响，抗生素可能对细胞产生较大影响，加上G418有杀菌作用，所以有人主张转让时不加其它抗生素。

其实G418本身有很好的杀菌效果，在用G418进行筛选的过程中很少会发生污染。

但有一点，其实我觉得问题也不是很大，那就是：在老外的一本实验手册中提到，在脂质体转染时所用培养基中最好不加任何抗生素。

我想他的想法可能是脂质体对细胞膜有影响，可能此时加抗生素对细胞损伤较大。

因为庆大霉素、链霉素、G418均是氨基糖甙类药物，其药理作用完全一样。

所以没有必要再用，而且由于另外抗生素的添加实际增加氨基糖甙类药物的浓度，剂量有误差，不利于各实验室之间的交流，在实际操作中，培养液中有抗生素对细胞培养与筛选影响不大。

Protocal
1.G418的配制：取1g G418溶于1ml 1M的HEPES液中，加蒸馏水至10ml，过滤消毒，4度保存。

2.细胞培养：取待测培养细胞，制备成细胞悬液，按等量接种入多孔培养板中，培养6小时左右开始加药。

3.制备筛选培养基：在100μg/ml～1000μg/ml范围内确定几个梯度，比如先做个100μg/ml、400μg/ml、800μg /ml、1000μg/ml，按梯度浓度用培养基稀释G418制成筛选培养基。

4.加G418筛选：吸除培养孔中培养基，PBS洗涤一次，每孔中加入不同浓度的筛选培养基。

5.换液：根据培养基的颜色和细胞生长情况，每3~5天更换一次筛选培养基。

方法同4。

6.确定最佳筛选浓度：在筛选10～14天内能够杀死所有细胞的最小G418浓度即为最佳筛选浓度。

在第一轮就筛选出最佳G418浓度的可能性不大，最有可能的是出现这种情况：用某一浓度G418的量在筛选14天后还不能杀死细胞，而用下一个梯度的G418的量在10天前就看不到活细胞了。

假如是400μg/ml不能杀死细胞，而800μg/ml在第5天就把所有细胞都杀死了，则可以再用500μg/ml、600μg/ml、700μg/ml进一步筛选，以确定最佳筛选浓度！心得：由于特性明确的细胞系G418的最佳用量还是比较稳定的，所以有时候不需要在这么大范围内进行筛选。

比如说你要转染 NIH3T3细胞，现在我告诉你我测试过NIH3T3细胞对G418的敏感性，我用的筛选浓度是200μg/ml。

这时你就可以做150μg/ml、200μg/ml、300μg/ml三个浓度进行筛选
接合、转化、转染、转导、感染等等几个与基因（主要是DNA ）转移相关的概念
1、Conjugation 中文翻译为“结合”
Conjugation is the mechanism by which genetic material is transferred between two bacterial cells by plasmids. A cell containing a conjugative plasmid(F+,fertility+)forms a mating pair with a cell that does not contain a conjugative-plasmid(F-)by means of an F-pilus on the surface of the cell.The pilus contracts,pulling the two cells into contact, and the conjugative plasmids(typified by the F plasmid of E.coli ) is transferred from the plasmid-containing cell, the donor, to the recipient(in some cases,pieces of chromosomal DNA is also transfered to the recipient). The tra genes, carried on the F plasmid, contain all the information for the conjugative process.
《Instant notes in Microbiology》p125
说明：Conjugation 发生在原核生物，这个定义里面的关键是“The pilus contracts,pulling the two cells into contact”这种细胞间的直接接触。

细菌在conjugation 的时候，两个细胞直接接触处形成conjugation tube，单链DNA 可以直接通过这个通道转移，这个通道的形成需要有相应的基因表达（如pilin 形成sex pilus）。

通常情况下conjugation 转移的是带有conjugation 必须基因的质粒，但是少数情况下这种质粒整合到细菌染色体，就可能发生染色体转移(这种染色体中整合了conjugative plasmid 的菌株被称为high-frequency recombination, Hfr strains)。

单链转移完毕，供体和受体细胞分别合成互补链，完成conjugation。

2、Transformation 中文翻译为“转化”
Certain prokaryotes are able to take up free DNA released by other bacteria. This process is called transformation. Brock p283说明：原核生物的transformation 定义中，关键词是free DNA，也就是说，是裸DNA 本身，不是通过其他媒介（如病毒）转移到原核生物里面。

在自然情况下，某些细菌溶解以后释放的DNA 被其他细菌吸收而发生转化，这种自然发生的转化虽然是微生物遗传学的一个重大发现，但是实际意义可能并不太大。

现在我们说到转化，一般都是指实验室内从细菌里面纯化的DNA 分子直接导入遗传性状相异的细菌，比如质粒转化，我们用的是纯化的质粒DNA 本身，没有任何媒介帮助。

从这个概念的内涵来说，只要DNA 进入细菌，就完成了转化过程，所以这里不涉及转化的DNA 是否复制，是否改变细菌的遗传性状以及蛋白是否表达等等，虽然转化是否成功，多半只能通过DNA 是否改变细菌的遗传性状来实现。

在真核生物中，与原核生物的转化完全相同的过程被称为：
3、Transfection 中文翻译为“转染”
The introduction of DNA into mammalian cells is called transfection. Eukaryotic microorganisms and animal and plant cells can take up DNA in a process that resembles bacterial transformation. Because the word transformation in mammalian cells is used to describe the conversion of cells to the malignant (tumorous, cancerous) state, the introduction of DNA into mammalian cells has been called transfection. Brock p998
对于真核生物，转染就是原核生物中转化的同义词。

之所以在真核生物中使用转染这个词来代替转化，是因为人们之前已经习惯了用转化这个词表示真核细胞变为恶性细胞。

A process by which a normal cell becomes a cancer cell. Such cells frequently show loss of growth inhibition and are called transformed or tumor cells. Brock p538
原核生物中，偶尔也用到transfection 这个词，当细菌的转化过程中吸收的外源DNA是病毒DNA时就应该称此过程为转染。

Bacteria can be transformed with DNA extracted from a bacterial virus rather than from another bacterium, a process known as transfection. Brock p282
4、Transduction 中文翻译为“转导”
Transfer of host DNA from one cell to another by a virus. Brock p265
说明：转导是指通过病毒将一个宿主的DNA转移到另一个宿主的细胞中而引起的基因重组现象。

如果供体DNA未与受体DNA发生重组则称此转导过程为流产转导Abortive transduction: a type of transduction in which the donor DNA is not integrated with the recipient chromosome but persists as a nonreplicating fragment that can说明：原核生物的transformation
定义中，关键词是free DNA，也就是说，是裸DNA 本身，不是通过其他媒介（如病毒）转移到原核生物里面。

在自然情况下，某些细菌溶解以后释放的DNA 被其他细菌吸收而发生转化，这种自然发生的转化虽然是微生物遗传学的一个重大发现，但是实际意义可能并不太大。

现在我们说到转化，一般都是指实验室内从细菌里面纯化的DNA 分子直接导入遗传性状相异的细菌，比如质粒转化，我们用的是纯化的质粒DNA 本身，没有任何媒介帮助。

从这个概念的内涵来说，只要DNA 进入细菌，就完成了转化过程，所以这里不涉及转化的DNA 是否复制，是否改变细菌的遗传性状以及蛋白是否表达等等，虽然转化是否成功，多半只能通过DNA 是否改变细菌的遗传性状来实现。

在真核生物中，与原核生物的转化完全相同的过程被称为：
3、Transfection 中文翻译为“转染”
The introduction of DNA into mammalian cells is called transfection. Eukaryotic microorganisms and animal and plant cells can take up DNA in a process that resembles bacterial transformation. Because the word transformation in mammalian cells is used to describe the conversion of cells to the malignant (tumorous, cancerous) state, the introduction of DNA into mammalian cells has been called transfection. Brock p998
对于真核生物，转染就是原核生物中转化的同义词。

之所以在真核生物中使用转染这个词来代替转化，是因为人们之前已经习惯了用转化这个词表示真核细胞变为恶性细胞。

A process by which a normal cell becomes a cancer cell. Such cells frequently show loss of growth inhibition and are called transformed or tumor cells. Brock p538
原核生物中，偶尔也用到transfection 这个词，当细菌的转化过程中吸收的外源DNA是病毒DNA时就应该称此过程为转染。

Bacteria can be transformed with DNA extracted from a bacterial virus rather than from another bacterium, a process known as transfection. Brock p282
4、Transduction 中文翻译为“转导”
Transfer of host DNA from one cell to another by a virus. Brock p265
说明：转导是指通过病毒将一个宿主的DNA转移到另一个宿主的细胞中而引起的基因重组现象。

如果供体DNA未与受体DNA发生重组则称此转导过程为流产转导Abortive transduction: a type of transduction in which the donor DNA is not integrated with the recipient chromosome but persists as a nonreplicating fragment that can说明：前面已经很明确，通过病毒实现基因转移叫做转导，为什么还要说感染这个概念呢？这里也是很多人不能正确理解的地方。

实际上，我们说的转导是指的目的基因（宿主DNA）的转移过程，其主体是目的基因，但是实现转导的手段是病毒感染，这里的主体是病毒载体。

所以我们可以这样说：通过逆转录病毒感染，把ADA 基因转导到造血干细胞里面。

但是我们不能这样说：通过逆转
录病毒转导，把ADA基因感染到造血干细胞里面。