血清肌酸激酶活性测定和前白蛋白测定

二、试剂
1.128mmol/L咪唑-醋酸盐缓冲储存液 （pH7.0， 0.25℃） 2.应用试剂Ⅰ 3.应用试剂Ⅱ 4.待测标本

三、操作步骤

1.手工操作 现以具有37℃恒温比色池的分光光度计为例，说 明操作过程。 （1）吸应用试剂Ⅰ2mL加入测定管中，加血清 100μL，混合，放入37℃水浴至少5min。 （2）在37℃水浴中预温应有试剂Ⅱ至少5min。 （3）加入应有试剂Ⅱ200μL，混合，转入3mL比 色皿Ⅲ（1.0cm光径），立即放入恒温比色槽内。 （4）待120s的延滞期后，在340nm波长处，连续 监测线性反应期吸光度变化速率（120s），以吸 光度增加的速率计算血清中CK的活性浓度。
血清肌酸激酶 活性测定
Ⅰ连续监测法测 定血清肌酸激酶
一、检验原理：
磷酸肌酸＋ADP CK 肌酸＋ATP ATP＋葡萄糖 HK 6－磷酸葡萄糖＋ ADP ＋ 6－磷酸葡萄糖＋NADP G6P-DH 6－磷酸葡萄糖酸＋NADPH
原理：
利用酶偶联反应原理连续监测NADP,后
者引起340nm吸光度的增高，在340nm 监测单位时间内NADPH的生成量，可 计算出CK的活性浓度。

2.自动化生化分析仪操作程序的设置 按手工操作要求设置参数为：系数3698、温 育时间min、滞留时间120s、比色皿光径 1.0cm、稀释倍数23、血清占反应液体积分 数0.0430
四、临床意义
1、CK主要存在于骨骼肌和心肌，在脑组织 中也有存在。正常人血浆中酶活性很低。血 清中CK活性的变化主要见于下列情况。 (1) CK主要用于心肌梗死的诊断：心肌梗死 会出现血清CK活性明显变化。心肌梗死发病 的早期，即发病后2~4小时此酶即开始升高， 12~48h达最高值，可高达正常上限的10~12 倍，在2~4天降至正常水平。此酶对诊断心 肌梗死较其他的心肌酶谱AST、LD的阳性率 高，特异性强，是用于心肌梗死早期诊断， 估计病情和判断预后的较好指标。病毒性心 肌炎时CK也有明显升高，而且样品溶血情况 不影响CK活性的测定。


（2）肌营养不良症、皮肌炎、骨骼肌损伤等 也可导致CK升高。脑血管意外，脑膜炎，甲 状腺机能低下症等疾病及一些非疾病因素 （如剧烈运动，各种插管及手术，肌肉注射 冬眠灵和抗生素等）也可能引起CK活性增高。
Ⅱ肌酸显色法测 定血清肌酸激酶
一、原理
磷酸肌酸+ADP CK 肌酸+ATP ＋ 肌酸+双乙酰+α-萘酚 Mg² 红色化合物 (λ=540nm) 在一定范围内，红色深浅与肌酸量成正比， 从而可求得血清中CK活性。在反应性体系中 ＋ 加入Mg² 做激活剂，半胱氨酸供给巯基，保 持CK活性中心必需基团不被氧化；氢氧化钡 和硫酸锌沉淀蛋白质并中止反应。
前白蛋白的 测定
原理

样本中的PA（前白蛋白）与试剂中相应的抗 体相遇，立即形成抗原抗体复合物，在特定 的缓冲环境中形成浊度，其浊度在合适的抗 体浓度存在时与抗原含量成正比，与相同条 件操作的较准品比较，即可求出样本中PA的 含量。
1.作为营养不良的评价标准。其评价标准： PA0.2~0.4g/L为正常，0.1~0.15g/L为轻度缺 乏，0.05~0.1g/L为中度缺乏，<0.05g/L为严 重缺乏。 2.作为肝脏损害的评价指标。PA作为营养不 良和肝功能不全的指标比清蛋白和转铁蛋白 敏感性更高。 3.属负性APRP（急性时相反应蛋白）。在急 性炎症、恶性肿瘤、创伤等任何急需合成蛋 白质的情况下，血清PA均迅速下降。

二、试剂

1、混合底物溶液 2、储存碱溶液 3、双乙酰溶液 4、 α-萘酚溶液 5、1.7mmol/L肌酸标准溶液 6、50g/L硫酸锌溶液 7、60g/L氢氧化钡溶液 8、待测标本
三、操作步骤



（1）取4支试管，分别标明空白管、标准管、对照 管和测定管。 （2）按书的表格进行操作。 （3）混匀，在540nm波长处，用空白管调零，读 取各管的吸光度。 （4 ）单位定义：1mL血清在37℃与底物作用1h产 生1μmol肌酸为1个CK活性单位，若此单位乘以 1000/60或16.7可换算成国际单位（U/L）。