固相萃取-_超高效液相色谱-_串联质谱法测定小麦中6_种真菌毒素

90
2023年9月下 第18期 总第414期
工艺设计改造及检测检修
China Science & Technology Overview
0引言
真菌毒素是由真菌天然生成的次生代谢物[1]。

真菌毒
素种类繁多，可污染多种水果、谷物和粮食[2]。

由于具有
较高的化学稳定性且可耐受不同形式的分解，许多此类物质都具有致癌性、雌激素活性和毒性作用[3]。

真菌毒素一直属于欧洲食品和饲料快速预警系统(RASFF)中通报的最高风险类别，它们在慢性饮食风险因素中位居榜首，优先级高于合成污染物、植物毒素、食品添加剂或农药残留[4]。

因此，全世界出台了多种法规，规定了特定真菌毒素
的允许限值[5]。

世界上许多国家均在进行毒性、发生率和消费数据以
及经济和政治方面的全面风险评估后，对常见真菌毒素实
行了管制[6]。

例如，欧盟委员会法规No.1881/2006（及
后续修正案）规定了不同食品中黄曲霉毒素B1、B2、G1和G2、伏马菌素B1和B2、脱氧雪腐镰刀菌烯醇、玉米赤霉烯酮和曲霉毒素A 的最高允许浓度(MPL)，并为T-2和HT-2毒素设定了指导限值[7]。

粮谷被视为真菌毒素污染的高风险商品，摄取的粮谷仅含ppb (µg/kg)浓度的真菌毒素就有可能引发严重疾病[8]。

EFSA 的最新科学意见将
雪腐镰刀菌烯醇的每日可耐受摄入量(TDI)确定为每日每kg 体重1.2μg，其最高平均浓度通常见于燕麦、玉米、大麦和小麦产品中[9]。

2018年，RASFF 门户网站发布了25
份有关谷物中严重真菌毒素污染的通报[10]。

农产品中小麦、大米和玉米等是最易受到污染的谷物，因此也是监测的重点[11]。

这些谷物中有许多天然成分都是UPLC-MS/MS 分析的干扰物[12]。

采用直通式净化方法开
发出一种简单快速的样品前处理方案和UPLC-MS/MS 分析方法，以小麦为例分析了6种真菌毒素。

该方法简单、快速、有效，能满足多种粮谷中真菌毒素的检测需要。

1 试验资料
1.1 仪器、试剂与材料
美国Waters 公司UPLC Xevo TM TQ-MS 超高效液相
色谱-串联质谱仪，德国IKA 公司Vortex Genie 3漩涡振荡器，德国Sigma 公司低温高速离心机。

德国Dr. Ehrenstorfer GmbH 公司真菌毒素标准品：
15-乙酰脱氧雪腐镰刀菌烯醇、脱氧雪腐镰刀菌烯醇-3-葡萄糖苷、HT-2、3-乙酰脱氧雪腐镰刀菌烯醇、雪腐镰
刀菌烯醇、杂色曲霉毒素，甲酸（色谱纯）等。

1.2 试验方法1.
2.1 标准溶液配制
分别称取（精确 到0.1mg）适量6种真菌毒素的标准
品，乙腈溶解， 然后配制1g/L 标准储备液，-20℃温度下保存。

吸取标准储备液1mL，然后置于100mL 的容量瓶内，乙腈稀释。

配制混合标准储备液10mg/L 后，-20℃
温度下保存。

1.2.2 样品处理
50mL 离心管中加小麦样品2.00g，水2mL，涡旋
振荡1min 后加乙腈8mL，于自动振荡器内振荡30min。

高速离心5min，取上清液，至Oasis HLB 固相萃取小柱，再收集流出液于40℃温度下氮气吹干；以1mL 的
0.1%(v/v)甲酸水溶液-（90:10,v/v）乙腈溶液溶解，再涡
旋振荡，然后过0.22μm 的滤膜。

1.2.3 色谱条件
色谱柱：Acquity UPLC BEH C18（1.7μm，100mm×
收稿日期：2023-06-12
*基金项目：宁波市农业重大专项（2015C110004）；宁波市科技惠民项目（2017C50014）；宁波市社会发展科技攻关项目（2014C50012）；
国家农产品质量安全风险评估重大专项（GJFP20191101、GJFP201801101、GJFP201701101、GJFP201701104、GJFP201601101、GJFP201501201、GJFP2014011）
作者简介：章豪（1985―），男，浙江宁波人，博士研究生，副研究员，研究方向：农兽药及有机污染物残留降解分析及风险评估。

固相萃取-超高效液相色
谱-串联质谱法测定小麦中6种真菌毒素*
章　豪　陈山乔　江潇潇　吴银良　朱　勇　陈　国
(宁波市农业科学研究院，农业农村部农产品质量安全风险评估实验室（宁波），浙江宁波 315040)
摘　要：本文采用直通式净化方法开发出一种简单快速的样品前处理方案和UPLC-MS/MS 分析方法，以小麦为例分析了6种真菌
毒素。

该方法简单、快速、有效，能满足多种粮谷中真菌毒素的检测需要。

关键词：固相萃取柱；超高效液相色谱-串联质谱法；真菌毒素；小麦中图分类号：O657.63
文献标识码：B
文章编号：1671-2064(2023)18-0090-03
工艺设计改造及检测检修China Science & Technology Overview
2.2 固相萃取小柱的选择
本试验对QuEChERS和Oasis HLB两种方法进行了比较。

从小麦中选取阴性样品进行添加回收试验，无需活化、洗脱和淋洗等步骤，采用Oasis HLB固相萃取小柱进行净化后，回收率、基质干扰均优于QuEChERS净化结果。

了6种真菌毒素。

该方法简单、快速、有效，能满足多种粮谷中真菌毒素的检测需要。

参考文献
[1] 张家宁,丁轲,韩涛等.液质联用法检测饼干中4种单端孢霉烯类真菌毒素[J].食品安全质量检测学报,2015,6(6):2179-2187.
图1 小麦加标样品的MRM色谱图
91
2023年9月下 第18期 总第414期
工艺设计改造及检测检修China Science & Technology Overview
(Ningbo), Ministry of Agriculture and Rural Aff airs, Ningbo Zhejiang 315040) Abstract:This article adopts a direct purifi cation method to develop a simple and fast sample pretreatment scheme and UPLC-MS/MS analysis method, using wheat as an example to analyze 6 types of fungal toxins. This method is simple, fast, and eff ective, and can meet the detection needs of various fungal toxins in grains.
Key words:solid phase extraction column;Ultra Performance Liquid Chromatography-tandem Mass Spectrometry (UPLC MS/MS); mycotoxins;wheat
922023年9月下 第18期 总第414期。