高效液相法测定返顾马先蒿中毛蕊花糖苷的含量

高效液相法测定返顾马先蒿中毛蕊花糖苷的含量【摘要】目的：建立测定返顾马先蒿中毛蕊花糖苷含量的方法。

方法：高效液相法以
十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（SHIMADZU，Shim-pack VP-ODS 5μm 4.6mmI.D.×250mm）；
以乙腈-0.1%磷酸溶液（16.5:83.5）为流动相；流速：1.0ml/min。

理论板数按毛蕊花糖苷峰计
算应不低于5000。

结果：结果表明毛蕊花糖苷在21.44～1286.40ng范围内呈良好的线性关系，线性回归方程为Y=0.000608765X+1.67921，r=0.9999，回收率为100.42%,RSD为1.2%。

结论：该方法简便、灵敏、准确，可用于测定返顾马先蒿中毛蕊花糖苷的含量。

【关键词】高效液相法;返顾马先蒿;毛蕊花糖苷;含量
[ 中图分类号 ]R2[ 文献标号 ]A[ 文章编号 ]2095-7165（2018）18-0006-02
引言
本品为玄参科植物返顾马先蒿[1]Pedicularis resupinata L.的干燥地上部分。

分布于我国东北、华北、山东、安徽、山西、甘肃、四川、贵州；欧洲、前苏联西伯利亚和远东地区，蒙古、朝鲜、日本也有分布，本品为蒙医常用药材，具有拢敛扩散之毒，清胃火，止泻的功能。

用于眼花，胃胀，痧症，肉毒症。

1.仪器、试剂与试药
1.1 仪器:高效液相色谱仪为岛津LC-20A、LC-2010；二极管阵列检测器、紫外检测器；色谱数据工作站为LC-solution。

1.2 试剂与试药乙腈为色谱纯，其他均为分析纯试剂。

毛蕊花糖苷对照品（中国药品生
物制品检定所）供含量测定用，批号为111530-200404、含量以94.8%计，批号为111530-201007。

2.溶液的制备
2.1 对照品溶液的制备：精密称取毛蕊花糖苷对照品2.144mg，置100ml量瓶中，加流
动相（乙腈-0.1%磷酸溶液（16.5∶83.5））溶解并稀释至刻度，即得（浓度为：
21.44μg/ml）。

2.2 供试品溶液的制备：取本品粗粉约0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲
醇100ml，称定重量，加热回流30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液25ml，减压回收溶剂近干，残渣用流动相溶解，转移至25ml量瓶中，加流动相至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

3.方法学考察
3.1 色谱条件
色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（SHIMADZU，Shim-pack VP-ODS 5μm
4.6mmI.D.×250mm）；流动相：乙腈-0.1%磷酸溶液（16.5∶83.5）；流速：1.0ml/min；理论
板数按毛蕊花糖苷峰计算应不低于5000。

3.2 提取方法的考察
供试品溶液的制备采用甲醇超声提取30分钟、60分钟、90分钟、甲醇加热回流提取
30分钟、60分钟、90分钟提取六种方法比较。

结果见表1（未按干燥品计算）
表1 提取方法考察结果
供试品中毛蕊花糖苷HPLC图谱
图1 专属性考察结果图谱
3.4线性关系考察
取“2.1”项下对照品溶液（浓度为：21.44μg/ml），精密吸取上述对照品溶液1.0μl、5.0μl、10.0μl、20.0μl、40.0μl、60.0μl注入高效液相色谱仪，记录峰面积，与进样量做线性回归。

结果见表 2
表2 线性关系考察结果
3.7稳定性试验
取同一供试品溶液，分别在放置0小时、2小时、4小时、6小时、10小时、12小时。

注入液相色谱仪，记录峰面积值。

结果见表5
表5 返顾马先蒿中毛蕊花糖苷含量测定稳定性试验
结果显示：供试品溶液在室温放置12小时，峰面积无显著变化，表明毛蕊花糖苷溶液
在12小时内性质稳定。

4.讨论
4.1流动相的选择
参照《中国药典》2015年版一部地黄项下毛蕊花糖苷含量测定方法。

以乙腈-0.1 醋酸（16∶84）作为本品毛蕊花糖苷含量测定的流动相并进行了系统适用性考察，色谱峰纯度及
分离度不理想；以乙腈-0.1%磷酸溶液（15.5∶84.5）作为本品毛蕊花糖苷含量测定的流动相
并进行了系统适用性考察，色谱峰纯度及分离度不理想；摸索乙腈-0.1%磷酸（16.5∶83.5）
作为本品毛蕊花糖苷含量测定的流动相并进行了系统适用性考察，色谱峰纯度及分离度能够
满足实验要求故采用乙腈-0.1磷酸（16.5∶83.5）作为测定本品毛蕊花糖苷的流动相。

4.2测定波长的选择
精密吸取毛蕊花糖苷对照品溶液、供试品溶液各20μl注入液相色谱仪。

毛蕊花糖苷对
照品色谱峰峰纯度好，紫外光谱最大吸收为330nm；供试品溶液中毛蕊花糖苷色谱峰保留时
间与毛蕊花糖苷对照品一致，峰纯度及分离度好，紫外光谱与毛蕊花糖苷对照品一致，在
330nm处有最大吸收。

通过以上试验以及参照《中国药典》2015年版一部地黄含量测定项下的有关色谱条件与系统适用性试验，最终确定检测波长为334nm。

结果见图3图3 返顾马先蒿中毛蕊花糖苷光谱图
参考文献:
[1]卫生部药典委员会.《中华人民共和国卫生部药品标准》蒙药（分册）
[2]国家药典委员会编.《中国药典》2015年版一部.中国医药科技出版社。