蛋白沉淀的原因
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蛋白沉淀的原因:
1、蛋白自身的性质
这大概是最主要的原因。
例如膜蛋白及一些疏水性高的蛋白就很容易发生疏水聚合而沉淀。
这从我们做膜蛋白提取以及包涵体溶解时都有切身体会。
2、pH值
蛋白质大多数都在高pH时溶解性高,低pH时易沉淀。
这可能与氢键的形成有关。
但有时候更低pH时蛋白又溶解了。
例如,一个蛋白在pH9时可溶,pH6时沉淀,但pH3时又可溶。
这种pH沉淀有时候是可逆的,但有时候是不可逆的。
特别是蛋白质自身疏水性较强时可逆性较差。
例子有我们将包涵体蛋白复性(去除了变性剂)后,如果降低pH,蛋白质沉淀出来,再提高pH往往难以使蛋白再溶,需要加变性剂溶。
3、盐浓度
就是盐析效应。
高浓度的盐破坏蛋白的水化层,使得蛋白质聚集沉淀。
常用的就是硫酸铵沉淀。
盐析沉淀通常对蛋白质的高级结构没有破坏,再溶时活性可以完全恢复。
常见的例子就是硫酸铵沉淀纯化IgG。
同样,硫酸铵沉淀也常碰到不可逆的情况。
例如大肠杆菌表达的重组蛋白往往在硫酸铵沉淀后再溶困难。
4、有机溶剂
例子有丙酮沉淀。
但有机溶剂也不是全部对蛋白起沉淀作用,有时候也有助溶作用。
例如有些膜蛋白的有机溶剂抽提。
5、温度
高温或低温都有可能使得蛋白质沉淀。
煮沸沉淀常见了,低温沉淀的例子有血液制品的冷乙醇沉淀。
6、表面活性剂
对蛋白质有助溶作用。
例如做电泳的SDS就是很强的表面活性剂。
还有TWEEN,Triton等等。
7、还原剂
还原剂往往对蛋白质有助溶作用。
有些蛋白当加入的还原剂在空气中慢慢氧化后,就会沉淀析出。
8、变性剂
如尿素、盐酸胍。
包涵体蛋白在用变性剂溶解后,再去除变性剂经常会沉淀析出。