枳实黄酮对照提取物研究及其在枳实药材质量控制中的应用

2019 年 9 月第 26 卷第 9 期
中国中医药信息杂志
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枳实黄酮对照提取物研究
及其在枳实药材质量控制中的应用
杨丽丽 1，姜艳艳 1，蒋丽娟 1，张薇 1，张永文 2，刘斌 1
1.北京中医药大学中药学院，北京 102488；2.国家药品监督管理局药品审评中心，北京 100022
摘要：目的 建立枳实黄酮对照提取物制备方法及定量方法，并探索其在枳实药材质量控制中应用的可行
性。

方法 采用溶剂提取法、色谱分离方法制备枳实黄酮对照提取物，以芸香柚皮苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙
皮苷对照品为对照，对枳实黄酮对照提取物含量进行标定。

分别以已知含量的枳实黄酮对照提取物和单体成分
对照品（芸香柚皮苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷）为对照，建立枳实药材 HPLC 含量测定方法，并测定枳
实药材中 4 种成分的含量，采用 t 检验和相关性分析对含量测定结果进行统计分析。

结果 以枳实黄酮对照提
取物为对照，芸香柚皮苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷进样量在各自范围内与峰面积呈良好的线性关系（r＞
0.999 6），平均回收率为 100.45%～101.27%。

t 检验结果显示，2 种方法测定的芸香柚皮苷、柚皮苷、橙皮苷、
新橙皮苷含量 P 值分别为 0.97、0.38、0.69、0.84；相关性分析显示，2 种方法测定结果的相关系数均在 0.95
以上，表明 2 种方法无明显差异。

结论 枳实黄酮对照提取物可用于枳实药材的质量控制，本研究为枳实药材
的质量控制与评价提供了新方法。

关键词：枳实；对照提取物；黄酮；质量控制
中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1005-5304(2019)09-0073-07
DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2019.09.017
开放科学（资源服务）标识码（OSID）：
Study on Flavonoids Reference Extracts and Its Application to Quality Control of Aurantii Fructus Immaturus
YANG Lili1, JIANG Yanyan1, JIANG Lijuan1, ZHANG Wei1, ZHANG Yongwen2, LIU Bin1 1. School of Chinese Materia Medica, Beijing University of Chinese Medicine, Beijing 102488, China;
2. Center for Drug Evaluation, National Medical Products Administration, Beijing 100022, China Abstract: Objective To establish preparation method and quantitative method of flavonoids reference extracts (FRE); To explore the feasibility of its application to quality control of Aurantii Fructus Immaturus. Methods The FRE of Aurantii Fructus Immaturus was prepared by solvent extraction and chromatographic separation techniques. Narirutin, naringin, hesperidin and neohesperidin were set as references to calibrate the contents of FRE of Aurantii Fructus Immaturus. Setting the known contents of FRE of Aurantii Fructus Immaturus and single components (Narirutin, naringin, hesperidin and neohesperidin) as references, HPLC methods for Aurantii Fructus Immaturus were established to detect the four components in Aurantii Fructus Immaturus. The results of the content determination were statistically analyzed by t-test and correlation analysis. Results Setting the reference extracts as references, Narirutin, naringin, hesperidin and neohesperidin were in a good linear relationship (r>0.999 6) within each range, and the average recovery rate was 100.45% to 101.27%. The t-test results showed that the P values of two determination methods of narirutin, naringin, hesperidin and neohesperidin were 0.97, 0.38, 0.69 and 0.84, respectively, and the correlation analysis showed that the correlation coefficients were all above 0.95, indicating that there was no significant difference between the two methods. Conclusion The FRE can be used in the quality control of Aurantii Fructus Immaturus. This study provides a new method for quality control and evaluation of Aurantii Fructus Immaturus. Keywords: Aurantii Fructus Immaturus; control extracts; flavonoids; quality control
基金项目：北京中医药大学基本科研业务费项目（2018-JYBZZ-XJSJJ007） 通讯作者：张永文，E-mail：zhang_yongwen@；刘斌，E-mail：liubinyn67@


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Chinese Journal of Information on TCM
Sep.2019 Vol.26 No.9
中药具有多成分、多靶点作用特点，多成分质量 控制模式已成为中药质量控制的主要趋势和重要研 究方向。

中药常用的多成分质量控制模式基本采用以 多种单一对照品作为对照物质进行中药质量评价，而 多种单一对照品的模式由于存在化学对照品分离难 度大、生产成本及技术要求高、检测成本昂贵等问题， 在实际应用中受到诸多限制[1]。

为解决上述问题，有 研究者提出运用一测多评法开展中药质量控制，但该 方法在相对校正因子的定量、指标成分的色谱峰定 性，以及方法的适用性和耐用性等方面尚存在一些问 题[2-3]。

因此，建立一种适合多成分中药质量控制的 方法是解决中药质量控制问题的有效途径之一，而运 用中药对照提取物对中药进行质量控制，可以在解决 对照品稀缺、多成分同时定量困难等问题方面有较大 改善[4-6]。

枳实为芸香科植物酸橙 Citrus aurantium L.及其 栽培变种或甜橙 Citrus sinensis Osbeck 的干燥幼果， 具有破气消积、化痰散痞功效，主要用于治疗积滞内 停、痞满胀痛、泻痢后重等病症[7]。

枳实中含有黄酮、 生物碱和挥发油等化学成分，其中，黄酮类成分含量 约为 22.45%～33.76%，具有抗炎[8]、抗氧化[9]、抑制 癌细胞[10]和抗过敏[11]等药理作用，为其发挥药效作用 的主要有效成分。

枳实黄酮类成分主要由芸香柚皮 苷、柚皮苷、橙皮苷和新橙皮苷等组成[12-14]。

2015 年版《中华人民共和国药典》（一部）枳实含量测定 项下仅以 70%乙醇浸出物和辛弗林含量为指标进行 质量控制[7]，该评价方法可以在一定程度上控制和评 价枳实的质量，但缺少黄酮类成分这一重要有效成分 类型。

为完善枳实的质量控制体系，本试验选取芸香 柚皮苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷为指标，制备枳 实黄酮对照提取物，并对上述 4 种成分的含量进行标 定，从而将枳实黄酮对照提取物应用于枳实药材的质 量控制。

1 仪器与试药
SHB-Ⅲ循环水式多用真空泵，郑州长城科工贸有 限公司；KQ-500DE 型数控超声波清洗器，昆山市超 声仪器有限公司；Waters 高效液相色谱仪（包括 1525 型二元高压梯度泵系统、2998 型 DAD 检测器、2414 型柱温控制系统、2707 型自动进样系统、Breeze 色谱 工 作 站 ）， 美 国 Waters 公 司 ； 稳 定 性 试 验 箱 （SHH-GSD），重庆永生实验仪器厂；Sunfire C18 色 谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；Sartorious BT 25S 型十万分之一电子分析天平，北京赛多利斯仪器有限 公司。

芸香柚皮苷对照品（批号 MUST-17030408，纯度 99.20%）、柚皮苷对照品（批号 MUST-17040102，纯 度 98.28%）、新橙皮苷对照品（批号 MUST-17040707， 纯度 98.79%），成都曼斯特生物科技有限公司；橙皮 苷对照品（批号 721-860110，纯度 98.08%），中国食 品药品检定研究院。

甲醇（色谱纯，Fisher 公司），屈 臣氏纯净水，其他试剂均为分析纯。

21 批枳实药材分 别购自不同地区，经北京中医药大学刘元艳教授鉴定 为芸香科植物酸橙 Citrus aurantium L.及其栽培变种 或甜橙 Cirtus sinensis Osbeck 的干燥幼果，来源信息 见表 1。

表 1 21 批枳实药材样品来源信息
编号
批号
产地
编号
批号
产地
S1
180612
江西
S12
180201
湖南
S2
180503
四川
S13
171201
江西
S3
180618
四川
S14
180701
四川
S4
180403
四川
S15
161101
江西
S5
170239
湖南
S16
180418
江西
S6
180709
江西
S17
150401
江西
S7
17033101
江西
S18
170215
江西
S8
1604011357
江西
S19
171002
江西
S9
180507
江西
S20
170515
江西
S10 D7100101
江西
S21
171220
四川
S11 171027007
江西
2 方法与结果
2.1 枳实黄酮对照提取物研究
2.1.1 对照提取物制备
取枳实药材（S21），适当破碎（绿豆大），用 8
倍量 70%乙醇（含 0.5%氨水）回流提取 2 次，每次
1.5 h，合并 2 次提取液，减压浓缩至无醇味，冷冻干
燥，即得提取物浸膏。

提取物浸膏加 10 倍量水超声
（功率 100 W，频率 40 kHz）分散 30 min，3000 r/min
离心 30 min。

残渣部分冷冻干燥；上清液以 0.5 BV/h
吸附流速通过 AB-8 大孔吸附树脂柱，以 1 BV/h 洗脱
流速，依次用水洗脱 5 BV、40%乙醇洗脱 4 BV，收
集 40%乙醇洗脱液，减压浓缩，冷冻干燥，即得 40%
乙醇洗脱部位。

残渣与 40%乙醇洗脱部位合并，即得
枳实黄酮对照提取物。

2.1.2 对照提取物标定
2.1.2.1 色谱条件
采用 Sunfire C18 色谱柱（4.6 mm×250 mm，
5 μm），流动相为甲醇-水-乙酸（38∶58∶4），流速
1 mL/min，检测波长 283 nm，柱温 35 ℃，进样量
10 μL。

混合对照品和对照提取物色谱图见图 1。

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1
2
4
3
0
5.0
10.0
15.0
20.0
25.0
A
2
4
1
3
0
5.0
10.0
15.0
20.0
25.0
B
t/min
注：A.混合对照品；B.对照提取物；
1.芸香柚皮苷；2.柚皮苷；3.橙皮苷；4.新橙皮苷
图 1 枳实黄酮对照提取物中 4 种成分 HPLC 图
2.1.2.2 对照品溶液制备
取芸香柚皮苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷对照
品适量，精密称定，加甲醇制成每 1 mL 含芸香柚皮
苷 20.64 μg、柚皮苷 20.59 μg、橙皮苷 21.44 μg、新
橙皮苷 20.72 μg 的溶液。

2.1.2.3 供试品溶液制备
取枳实黄酮对照提取物 15 mg，精密称定，置于
25 mL 容量瓶中，加甲醇超声处理（功率 100 W，频 率 40 kHz）10 min，用甲醇稀释至刻度，摇匀，得供
试品溶液 A（用于芸香柚皮苷、橙皮苷的含量测定）。

取 2 mL 供试品溶液 A，置于 10 mL 容量瓶中，用甲
醇稀释至刻度，摇匀，得供试品溶液 B（用于柚皮苷、
新橙皮苷的含量测定）。

2.1.2.4 线性关系考察
分别精密吸取“2.1.2.2”项下对照品溶液 5、10、
15、20、25 μL，进样测定，以对照品进样量为横坐
标，色谱峰峰面积为纵坐标，进行线性回归，得回归 方程：芸香柚皮苷 Y＝1.868 8×106X－1.265 2×104，
r＝0.999 6，线性范围为 0.103 2～0.516 0 μg；柚皮苷 Y＝1.724 3×106X－7.160 0×102，r＝0.999 7，线性范 围为 0.103 0～0.514 8 μg；橙皮苷 Y＝1.802 3×106X－ 1.223 3×104，r＝0.999 7，线性范围为 0.107 2～ 0.536 0 μg；新橙皮苷 Y＝2.270 8×106X－4.261 0×104，
r＝0.999 6，线性范围为 0.103 6～0.518 0 μg。

2.1.2.5 精密度考察
取“2.1.2.3”项下供试品溶液，连续进样 6 次，
每次吸取 10 μL 注入液相色谱仪，计算芸香柚皮苷、
柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷色谱峰峰面积 RSD，结果
分别为 0.73%、0.15%、0.42%、0.05%，表明仪器精
密度良好。

2.1.2.6 稳定性考察 取“2.1.2.3”项下供试品溶液，分别于制备后 0、
2、4、8、12、24 h 进样，测定芸香柚皮苷、柚皮苷、 橙皮苷、新橙皮苷色谱峰峰面积，计算 RSD 分别为 0.15%、0.06%、0.29%、0.18%，表明供试品溶液在 24 h 内基本稳定。

2.1.2.7 重复性考察
分别精密称定枳实黄酮对照提取物 6 份，按 “2.1.2.3”项下方法平行制备供试品溶液，分别进样， 测定色谱峰峰面积，计算芸香柚皮苷、柚皮苷、橙皮 苷、新橙皮苷含量 RSD，结果分别为 0.69%、0.13%、 1.62%、0.60%，表明该方法重复性良好。

2.1.2.8 加样回收率考察
分别精密称定同一批枳实黄酮对照提取物 6 份， 加入一定量的对照品溶液，按“2.1.2.3”项下方法制 备供试品溶液，分别进样，测定色谱峰峰面积，并计 算芸香柚皮苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷的加样回 收率及 RSD，结果见表 2。

RSD 均小于 3.00%，表明 该方法回收率良好。

表 2 枳实黄酮对照提取物中 4 种成分加样回收率试验
对照品
取样量 样品中 加入量 测得量 回收率 平均回 RSD /mg 含量/mg /mg /mg /% 收率/% /%
芸香柚皮苷 7.59 0.142 9 0.135 7 0.280 6 101.47
7.48 0.140 9 0.135 7 0.276 2 99.70
7.52 0.141 4 0.135 7 0.277 4 100.22 100.63 1.35
7.28 0.136 9 0.135 7 0.271 0 98.82
7.35 0.138 2 0.135 7 0.277 5 102.65
7.42 0.139 5 0.135 7 0.276 5 100.96
柚皮苷
7.59 2.311 9 2.521 2 4.840 8 100.31
7.48 2.278 4 2.521 2 4.798 9 99.97
7.52 2.290 6 2.521 2 4.785 3 98.95 100.16 0.72
7.28 2.217 5 2.521 2 4.746 6 100.31
7.35 2.238 8 2.521 2 4.766 7 100.27
7.42 2.260 1 2.521 2 4.810 8 101.17
橙皮苷
7.59 0.163 9 0.135 0 0.297 7 99.11
7.48 0.161 6 0.135 0 0.298 2 101.19
7.52 0.162 4 0.135 0 0.297 1 99.78 100.66 0.99
7.28 0.157 2 0.135 0 0.293 7 101.11
7.35 0.158 8 0.135 0 0.295 1 100.96
7.42 0.160 3 0.135 0 0.297 7 101.78
新橙皮苷
7.59 2.513 0 2.211 0 4.784 3 102.73
7.48 2.476 6 2.211 0 4.736 5 102.21
7.52 2.489 9 2.211 0 4.705 3 100.20 101.48 0.93
7.28 2.410 4 2.211 0 4.644 6 101.05
7.35 2.433 6 2.211 0 4.685 9 101.87
7.42 2.456 8 2.211 0 4.686 4 100.84


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Chinese Journal of Information on TCM
Sep.2019 Vol.26 No.9
2.1.2.9 对照提取物标定 取 3 批枳实黄酮对照提取物（S3、S5、S6），精
密称定，按“2.1.2.3”项下方法制备供试品溶液，测 定并计算各样品中芸香柚皮苷、柚皮苷、橙皮苷、新 橙皮苷的含量，结果 4 个成分的总含量均高于 60%， 3 批对照提取物的含量标定结果见表 3。

表 3 3 批枳实黄酮对照提取物含量标定结果（%，n＝3）
编号 芸香柚皮苷 柚皮苷 橙皮苷 新橙皮苷 总含量
2.2.1 色谱条件 采用“2.1.2.1”项下色谱条件，对照提取物和供
试品溶液色谱图见图 2。

2
4
1
3
S3
0.82
22.34
2.16
44.65
69.97
S6
2.48
34.13
2.52
27.56
66.69
S5
2.10
23.11
2.04
2.1.3 对照提取物稳定性考察
2.1.3.1 影响因素考察
38.32
65.57
为了解温度、湿度、光照等因素对枳实黄酮对照 提取物稳定性的影响，分别设置高温（60 ℃）、高湿 （25 ℃，相对湿度 90%、75%）和强光照射（4500 lx） 组，于第 5、10 日取样测定，以引湿增重和芸香柚皮 苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷为指标，考察对照提 取物稳定性的影响因素。

结果表明，在 2 种高湿状态 下枳实黄酮对照提取物均有引湿性，需密闭保存；4 组样品芸香柚皮苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷的含
量基本相同，稳定性较好。

2.1.3.2 短期稳定性考察 采用“2.1.2.1”项下色谱条件定期抽样检测，考
察枳实黄酮对照提取物的稳定性。

对照提取物制备后 常温密闭保存，进行 6 个月的稳定性试验，分别于第 0、1、2、3、6 月抽样检测，分析样品中芸香柚皮苷、 柚皮苷、橙皮苷和新橙皮苷含量及 RSD，结果见表 4。

可见，枳实黄酮对照提取物在 6 个月内具有良好的稳 定性。

表 4 枳实黄酮对照提取物稳定性试验结果（%）
时间
芸香柚皮苷
柚皮苷 橙皮苷
新橙皮苷
第0月
1.87
30.88
2.18
33.27
第1月
1.85
31.00
2.15
33.58
第2月
1.88
30.57
2.11
33.86
第3月
1.86
30.80
2.19
32.99
第6月
1.90
30.15
2.13
32.81
RSD
1.03
1.09
1.56
1.28
2.2 对照提取物在枳实药材质量控制中的应用
以枳实黄酮对照提取物为对照，测定枳实药材中
芸香柚皮苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷含量，并与
单体对照品测定结果进行比较，考察对照提取物用于
枳实药材质量控制的可行性。

0
5.0
10.0
1 5.0
20.0
25.0
A
2 4
1
3
0
5.0
10.0
15.0
20.0
25.0
B
t/min
注：A.对照提取物；B.供试品；
1.芸香柚皮苷；2.柚皮苷；3.橙皮苷；4.新橙皮苷
图 2 枳实黄酮对照提取物和枳实药材中 4 种成分 HPLC 图
2.2.2 对照提取物溶液制备 取枳实黄酮对照提取物 22.50 mg，精密称定，置
50 mL 容量瓶中，加甲醇超声处理（功率 100 W，频 率 40 kHz）10 min，用甲醇稀释至刻度，摇匀，制得 每 1 mL 含 0.008 5 mg 芸香柚皮苷、0.137 1 mg 柚皮 苷、0.009 7 mg 橙皮苷、0.149 0 mg 新橙皮苷的对照
提取物溶液。

2.2.3 供试品溶液制备 取枳实药材粉末（过 65 目筛）约 50 mg，精密称
定，置具塞锥形瓶中，精密加入 70%乙醇 12.50 mL， 称定质量，超声处理（功率 100 W，频率 40 kHz）30 min， 放冷，再称定质量，用 70%乙醇补足减失的质量，摇 匀，0.45 μm 微孔滤膜过滤，取续滤液，即得。

2.2.4 方法学考察 2.2.4.1 线性关系考察
精密称取对照提取物 36.75 mg，置 25 mL 容量瓶
中，加甲醇超声溶解，定容至刻度，摇匀，得对照提
取物溶液 A1；精密吸取对照提取物溶液 A1 3 mL，置 5 mL 容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，得对照提取物 溶液 B1；再依次按上述方法分别制备对照提取物溶液 C1、D1、E1。

分别取对照提取物溶液 A1～E1，0.45 μm 微孔滤膜过滤，取续滤液 10 μL 注入液相色谱仪，测
定色谱峰峰面积。

以进样量为横坐标，色谱峰峰面积
为纵坐标，进行线性回归，得回归方程：芸香柚皮苷


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Y＝1.584 4×106X－1.151 6×104，r＝0.999 9，线性范 围为 0.035 8～0.276 4 μg；橙皮苷 Y＝1.684 7×106X＋ 4.060 0×103，r＝0.999 5，线性范围为 0.107 2～ 0.536 0 μg。

精密称取对照提取物 13.32 mg，置 100 mL 容量 瓶中，加甲醇超声溶解，定容至刻度，摇匀，得对照 提取物溶液 A2；精密吸取对照提取物溶液 A2 3 mL， 置 5 mL 容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，得对照提取 物溶液 B2；再依次按上述方法分别制备对照提取物溶 液 C2、D2、E2。

分别取对照提取物溶液 A2～E2，经 0.45 μm 微孔滤膜过滤，取续滤液 10 μL 注入液相色 谱仪，测定色谱峰峰面积。

以进样量为横坐标，色谱
峰峰面积为纵坐标，进行线性回归，得回归方程：柚 皮苷 Y＝1.582 8×106X＋1.823 2×104，r＝0.999 8，线 性范围为 0.103 0～0.514 8 μg；新橙皮苷 Y＝1.795 9× 106X＋7.771 0×103，r＝0.999 6，线性范围为 0.103 6～ 0.518 0 μg。

2.2.4.2 精密度考察
取枳实药材粉末（过 65 目筛）50 mg，精密称定， 按“2.2.3”项下方法制备供试品溶液，连续进样 6 次， 计算色谱峰峰面积 RSD，结果分别为 0.82%、1.08%、 1.22%、0.83%，表明仪器精密度良好。

2.2.4.3 稳定性考察
取“2.2.3”项下供试品溶液，分别于制备后 0、2、 4、8、12、24 h 进样，测定芸香柚皮苷、柚皮苷、橙 皮苷、新橙皮苷色谱峰峰面积，计算 RSD，结果分别 为 0.77%、1.75%、1.67%、1.00%，表明供试品溶液 在 24 h 内基本稳定。

2.2.4.4 重复性考察
取同一批枳实药材粉末（过 65 目筛）6 份，每份 50 mg，精密称定，按“2.2.3”项下方法平行制备 6 份供试品溶液，分别进样，测定芸香柚皮苷、柚皮苷、 橙皮苷、新橙皮苷的含量，计算 RSD，结果分别为 1.95%、1.74%、1.88%、1.91%，表明该方法重复性 良好。

2.2.4.5 加样回收率考察
取已知含量的枳实药材粉末（过 65 目筛）6 份， 每份 25 mg，精密称定，分别置 25 mL 具塞锥形瓶中， 精密加入一定量的对照提取物溶液，按“2.2.3”项下 方法制备供试品溶液，分别精密吸取 10 μL，注入液 相色谱仪，测定色谱峰峰面积。

计算芸香柚皮苷、柚 皮苷、橙皮苷、新橙皮苷的平均回收率及 RSD，结果 见表 5。

芸香柚皮苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷对 应的平均回收率分别为 101.15%、100.55%、100.45%、
101.27%，RSD 分别为 1.67%、1.28%、0.58%、1.22%， 表明该方法回收率良好。

表 5 枳实药材中枳实黄酮提取物 4 种成分加样回收率试验
成分
取样量 样品中 加入量 测得量 回收率 平均回 RSD /mg 含量/mg /mg /mg /% 收率/% /%
芸香柚皮苷 26.24 1.104 7 0.870 0 1.984 6 101.14
25.88 1.089 5 0.870 0 1.987 4 103.20
26.32 1.108 1 0.870 0 2.004 7 103.06 101.15 1.67
24.97 1.051 2 0.870 0 1.927 0 100.67
24.54 1.033 1 0.870 0 1.900 8 99.74
25.76 1.084 5 0.870 0 1.946 8 99.11
柚皮苷
26.24 2.479 4 2.232 0 4.706 0 99.76
25.88 2.445 7 2.232 0 4.700 3 101.01
26.32 2.487 2 2.232 0 4.698 6 99.08 100.55 1.28
24.97 2.359 7 2.232 0 4.654 5 102.81
24.54 2.319 0 2.232 0 4.553 8 100.13
25.76 2.434 3 2.232 0 4.677 8 100.52
橙皮苷
26.24 1.403 8 1.236 0 2.647 9 100.66
25.88 1.384 6 1.236 0 2.616 0 99.63
26.32 1.408 1 1.236 0 2.656 8 101.03 100.45 0.58
24.97 1.335 9 1.236 0 2.572 9 100.08
24.54 1.312 9 1.236 0 2.562 8 101.12
25.76 1.378 2 1.236 0 2.616 4 100.18
新橙皮苷 26.24 1.613 8 1.482 0 3.126 0 102.04
25.88 1.591 6 1.482 0 3.084 6 100.74
26.32 1.618 7 1.482 0 3.091 4 99.37 101.27 1.22
24.97 1.535 7 1.482 0 3.041 1 101.58
24.54 1.509 2 1.482 0 3.004 9 100.92
25.76 1.584 2 1.482 0 3.110 5 102.99
2.2.5 枳实药材含量测定 取 20 批枳实药材粉末（65 目），精密称定，按
“2.2.3”项下方法制备供试品溶液，分别以枳实黄酮 对照提取物和芸香柚皮苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮 苷单体对照品为对照，测定 4 种指标成分的含量，结 果见表 6。

采用配对 t 检验比较对照提取物法与单体 对照品法 2 种方法测定结果的差异，结果芸香柚皮苷、 柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷对应的 P 值分别为 0.97、 0.38、0.69、0.84，均大于 0.05，表明 2 种测定方法之 间无明显差异。

采用 OriginPro9.1 统计软件对对照提 取物法与单体对照品法 2 种方法测定结果进行相关性 分析，结果芸香柚皮苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷 对应的相关系数均大于 0.95，表明 2 种方法测定结果 具有一致性。

因此，枳实黄酮对照提取物可有效替代 单体对照品用于枳实药材的质量评价。

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Chinese Journal of Information on TCM
Sep.2019 Vol.26 No.9
表 6 20 批枳实药材含量测定结果（%）
编号
芸香柚皮苷 单体对照品法 对照提取物法
柚皮苷 单体对照品法 对照提取物法
橙皮苷 单体对照品法 对照提取物法
新橙皮苷 单体对照品法 对照提取物法
S1
3.628 3
3.627 8
9.023 9
8.995 8
3.751 0
3.718 7
5.676 2
5.634 5
S2
0.586 4
0.573 8
10.786 2
10.698 2
0.485 9
0.503 7
8.600 4
8.587 8
S3
0.215 6
0.215 7
8.289 9
8.284 6
0.489 4
0.497 4
16.453 1
16.563 0
S4
0.199 4
0.198 8
7.859 6
7.877 8
0.499 0
0.512 9
20.657 0
20.806 3
S5
0.393 0
0.393 8
8.937 0
8.756 7
0.375 3
0.389 8
11.848 7
11.838 4
S6
0.765 6
0.769 8
12.292 4
12.317 8
0.437 1
0.453 9
9.193 9
9.227 0
S7
0.191 5
0.191 3
8.893 8
8.914 1
0.407 6
0.402 9
11.935 0
11.937 7
S8
0.840 6
0.840 2
10.424 0
10.449 0
0.406 4
0.404 8
6.287 9
6.296 0
S9
0.235 5
0.233 5
5.829 0
5.852 2
1.676 9
1.669 7
17.410 5
17.397 9
S10
1.069 8
1.071 0
0.051 2
0.048 4
3.958 2
3.966 1
0.037 9
0.039 9
S11
0.894 6
0.897 5
13.684 8
13.597 5
0.439 7
0.417 6
9.089 1
9.104 7
S12
0.807 8
0.804 6
0.108 0
0.104 9
3.561 8
3.553 7
0.088 7
0.086 7
S13
0.605 6
0.608 4
5.122 9
5.098 9
2.950 1
2.940 4
6.427 5
6.360 1
S14
2.085 4
2.093 7
－
－
9.928 6
9.911 8
0.044 7
0.043 4
S15
0.999 8
0.992 4
10.707 6
10.660 8
2.259 8
2.240 3
12.676 0
12.630 6
S16
0.335 9
0.340 7
4.411 6
4.392 6
2.905 9
2.895 7
10.896 9
10.842 1
S17
0.381 6
0.387 5
11.531 4
11.549 3
1.166 4
1.150 4
8.161 6
8.110 5
S18
0.863 7
0.861 5
－
－
3.549 3
3.571 3
－
－
S19
0.566 7
0.563 5
11.136 9
11.255 4
0.378 4
0.394 6
8.282 2
8.210 0
S20
1.060 0
1.060 4
－
－
3.286 3
3.289 1
－
－
注：“－”为未检出
3 讨论 本试验中，取同一批次枳实药材，按“2.1.1”项
下方法分别制备 3 批枳实黄酮对照提取物。

所得枳实 黄酮对照提取物中芸香柚皮苷的含量为 1.65%～ 1.71%，柚皮苷的含量为 31.17%～31.54%，橙皮苷的 含量为 2.35%～2.44%，新橙皮苷的含量为 33.63%～ 33.89%，表明枳实黄酮对照提取物中的化学成分比例 相对固定。

在枳实黄酮对照提取物制备工艺研究中发现， 70% 乙醇提取物浸膏加 水 分散后存 在 水不溶物 。

HPLC 含量测定结果显示水不溶物中柚皮苷、新橙皮 苷含量较高。

因此，本试验考察了加入不同倍量的水 对提取物浸膏分散的影响，结果表明，当加入 10 倍 量水时，水不溶物中柚皮苷、新橙皮苷的含量最高。

针对 70%乙醇提取物浸膏的水溶部分，本试验选择 AB-8 大孔树脂对其黄酮类成分进行富集。

依次用不 同浓度乙醇进行洗脱，结果表明 40%乙醇洗脱效果较 好，将水不溶部分与 40%乙醇部位合并即得枳实黄酮 对照提取物。

取同一批次的枳实药材，采用上述制备
工艺分别制备 3 批枳实黄酮对照提取物，所得枳实黄 酮对照提取物中芸香柚皮苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙 皮苷的总含量分别为 68.89%、69.04%、69.46%。

对 另 3 批不同产地的枳实药材重复以上制备工艺，所得 枳实黄酮对照提取物中芸香柚皮苷、柚皮苷、橙皮苷、 新橙皮苷的总含量分别为 69.97%、66.69%、65.57%。

结果表明该制备工艺稳定可行。

本试验分别以单体对照品和枳实黄酮对照提取 物为对照，建立枳实药材的 HPLC 含量测定方法，并 考察了不同色谱柱 Sunfire C18、Agilent Extend-C18、 Xbridge C18，不同流动相甲醇-水-乙酸（38∶58∶4）、 乙腈-水（20∶80）、乙腈-0.1%磷酸水（18∶82）对枳 实黄酮对照提取物的色谱峰及含量的影响，结果本试 验建立的 HPLC 含量测定方法线性范围宽、准确度高、 稳定性及耐用性良好，表明枳实黄酮对照提取物可用 于定量分析中的量值传递。

本试验采用 4 种单体对照品（芸香柚皮苷、柚皮 苷、橙皮苷、新橙皮苷）和枳实黄酮对照提取物为对 照物质分别测定 20 批枳实药材，采用 t 检验对含量测


2019 年 9 月第 26 卷第 9 期
中国中医药信息杂志
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定结果进行比较，运用 OriginPro9.1 统计软件对含量 测定结果进行相关性分析。

结果表明 2 种含量测定方 法所得结果基本一致，枳实黄酮对照提取物可替代单 体对照品应用于枳实药材的质量控制。

该对照提取物 能否用于含枳实的中药复方制剂的质量控制与评价， 尚有待进一步研究。

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（收稿日期：2019-01-10） （修回日期：2019-03-18；编辑：陈静）







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