生物化学实验报告-酵母RNA的提取与鉴定

实验五酵母RNA的提取与鉴定

一、实验目的

1.掌握稀碱法分离酵母RNA的原理与操作过程。

2.了解RNA的组分并掌握定性鉴定的具体方法。

二、实验原理

1.酵母核酸中RNA含量较多，DNA含量则少于2%。

2.RNA可溶于碱性溶液，当碱被中和后，可加乙醇使其沉淀，有此可得粗RNA制品。

3.用碱液提取的RNA有不同程度的降解

三、实验仪器

1.离心机

2.水浴锅

3.电炉

4.烧杯

5.量筒

四、实验试剂

1.干酵母粉

2.0.2%氢氧化钠溶液：2g氢氧化钠溶于蒸馏水并稀释至1000ml。

3.乙酸

4.95%乙醇

5.无水乙醚

6.10%硫酸

7.氨水

9.5%硝酸银溶液：5g硝酸银溶于蒸馏水并稀释至100ml，贮于棕色瓶中。

1.苔黑酚-三氯化铁溶液：

将100mg苔黑酚溶于100ml浓盐酸中，再加入100mgFeCl

3.6H2O。

临用时配制。

五、实验步骤

1.RNA的提取：

（1）称取2g干酵母粉于100ml烧杯中，加入

0.2%氢氧化钠溶液10ml，沸水浴加热30分钟，经常搅拌（如沸水浴过程中溶液蒸干可再加5~10ml氢氧化钠）。然后加入乙酸数滴，使提取液呈酸性（pH 试纸检验），离心10-15分钟（4000r.p.m）。

（2）取上清液，加入2倍体积的95%乙醇，边加边搅，加毕，静止，待完全沉淀，过滤。

（3）滤渣先用95%乙醇洗2次，每次约5毫升，再用无水乙醚洗2次，每次也约5ml。

（4）洗涤时可小心地用玻璃棒搅动沉淀。乙醚滤干后，滤渣即为粗RNA，可鉴定。

2.鉴定：

（1）取上述RNA约

0.5g，加10%硫酸5ml,加热至沸1—2分钟，将RNA水解。

（2）取水解液

0.5ml，加入苔黑酚-三氯化铁溶液1ml，加热至沸1分钟，观察颜色变化。

（3）水解液2ml，加入氨水2ml和5%硝酸银溶液1ml，观察是否产生絮状嘌呤银化合物。

六、实验结果

加热至沸1分钟后，溶液变成绿色；产生絮状嘌呤银化合物沉淀

七、实验分析

实验注意事项

1.过滤时,洗涤不能带水,否则沉淀粘在滤纸上取不下来。

2.有时絮状沉淀出现较慢,可放十多分钟。

3.利用等电点控制RNA析出时，应严格控pH。

4.离心的时候，要两两对称放置，且离心管中溶液的量基本一样。否则会遭成离心机转子的损坏。