全反式维甲酸立体稳定脂质体家兔体内药动学研究

临床药学
全反式维甲酸立体稳定脂质体家兔体内药动学研究
赵蓉,朱家壁,李颖寰,马平(中国药科大学中昆制剂研究所江苏南京210009)
摘要:目的 以全反式维甲酸(RA)普通脂质体为对照,测定RA立体稳定脂质体的家兔体内药动学。

方法 6只家兔双周期双交叉静脉注射RA普通脂质体和立体稳定脂质体后,以尼莫地平为内标,采用高效液相色谱法测定血液中的药物含量;并采用3P87药动学程序进行数据处理。

结果 RA普通和立体稳定脂质体的t1/2 分别为6和16min,t1/2 分别为47和247min, M R T分别为51和133min,A UC分别为171.2和391.9g min mL-1,这4个参数经配对t检验进行统计分析,具有极显著性差异(P<0.01)。

结论 制备RA立体稳定脂质体,可提高血药浓度,延长药物的作用时间。

关键词:全反式维甲酸;脂质体;药动学
中图分类号:R969.1文献标识码:A文章编号:1001-2494(2001)10-0680-03
The pharmacokinetic study of all trans retinoic acid sterically stabilized liposomes in rabbits
ZHAO Rong,ZHU Jia bi,LI Ying huan,MA Ping(Zhongkun Phar maceutical Resear ch I nstitute,China Phar maceutical Univer sity,N anj ing210009,China)
ABSTRAC T:OBJECTIVE T he pharmaco kinetics of all trans retinoic acid(RA)conventional and ster ically stabilized liposomes in r abbits were studied and compared.METHODS By a randomized cross o ver desig n,six rabbits were receiv ed a single dose of either RA conventional or RA ster ically stabilized liposomes intravenously.T he RA in plasma w as detected by high performance liquid chro matography and the pharmacokinetic parameters w ere calculated by3P87pharmaco kinetic prog ramme.RESULTS T he t1/2 of RA conventional liposomes and the sterically stabilized liposo mes w er e6and16min.t1/2 47and247min,M RT51and133min,A UC 171.2and391.9g min mL-1,respectively.T her e was statist ic sig nificant difference in parameters betw een the two dosag e forms.
C ONCLUSION T he results show ed that RA ster ically stabilized liposomes had long er circulation time in plasma w ith much higher concentr at ion than RA conventional liposomes.
KEY WORDS:all trans retinoic acid;liposomes;pharmacokinetics
全反式维甲酸(all-trans retinoic acid,RA)具有很强的诱导分化肿瘤细胞的作用,是治疗急性早幼粒细胞白血病(APL)、骨髓异常增生(白血病前期)的临床首选药物[1~2]。

RA是一种多烯酸结构的化合物,对湿、热、光均十分敏感,极易发生异构化反应。

RA几乎不溶于水,口服吸收的生物利用度约为50%。

我们制备了静脉注射的RA立体稳定脂质体[3],并以普通脂质体为对照,进行了家兔体内药动学研究。

立体稳定脂质体(sterically stabilized liposomes, SSL)又称为长循环脂质体(long circulation lipo somes),是一种新型的脂质体。

在脂质体中掺入聚山梨酯 80,聚山梨酯 80的聚氧乙烯基可在其表面生成立体位阻屏障,在血液中不易被血浆蛋白识别、摄取,从而在血液中的驻留时间较普通脂质体有显著延长[4]。

1 仪器与试剂
Waters高效液相色谱仪,包括510型高压泵, 715型自动进样器,配以M illennium2010色谱专家系统操作及数据处理软件,M ODEL D0A-V130-BN无油真空泵,低压溶剂过滤器,AT-130型柱温箱,(美国Waters公司);XH-89型涡旋混合器(浙江乐成电器厂);80-2型离心沉淀器(上海手术器械厂);尼莫地平(山东新华制药厂);RA普通脂质体(自制,批号20000308);RA立体稳定脂质体(自制,批号20000308);乙腈、甲醇为色谱纯;其他试剂均为分析纯。

2 方 法
由于RA的光、热不稳定性,所有实验操作均应在暗室中进行,处理过程应迅速。

2.1 立体稳定脂质体的制备及包封率的测定
以聚山梨酯 80为修饰聚合物。

以薄膜蒸发结
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中国药学杂志2001年10月第36卷第10期
合冷冻干燥法制备RA普通和立体稳定脂质体。

将药物、卵磷脂、胆固醇、聚山梨酯 80等依次溶于无水乙醇,经旋转蒸发仪真空抽干,置真空干燥器中过夜,加入冻干保护剂的水溶液水合,预冻12h后,冷冻干燥,即得RA脂质体粉针。

包封率的测定采用葡聚糖凝胶Sephadex G-50色谱法进行分离测定,以Tris HCl pH9.0缓冲液为洗脱液,收集前40和后50m L,分别用甲醇破坏、稀释至一定浓度后,用紫外分光光度法在338nm 波长下测定脂质体中药物和游离药物含量。

包入脂质体中的药物量除以药物上样量即为脂质体包封率。

3次测得结果平均为(98.1 1.0)%。

2.2 血样处理[5]
取肝素抗凝全血,2500r min-1离心,分离血浆0.5mL于离心管中,加入尼莫地平内标标准液(0.5 mg mL-1)10L,再加入0.5mL磷酸盐缓冲液pH 7.0(0.025mmol L-1KH2PO4+0.04mmol L-1 Na2H PO4 2H2O),用2mL乙醚 醋酸乙酯(50!50)涡旋萃取5min,离心取上清液,氮气流挥干有机溶剂,用50L流动相复溶,进样20L。

2.3 含量测定方法[6]
以尼莫地平为内标,使用高效液相色谱法测定血浆中的RA含量。

预柱C18(20mm∀3.0mm,10 m)(中国科学院大连化学物理所);色谱柱YWGC18(250mm∀3.0m m,5m)(中国科学院大连化学物理所);流动相为乙腈 甲醇 水 10%醋酸铵(60!16!20!4);流速为1.0mL min-1;柱温为25#;检测波长340nm;进样量为20L。

2.4 方法学研究
2.4.1 专属性考察 取空白兔血浆、加入内标尼莫地平及RA标准品的兔血浆、静脉注射2mg kg-1 RA立体稳定脂质体30min时的兔血浆加入内标,经处理后按∃2.2%项处理、测定。

2.4.2 线性范围与检测限 精密称取RA标准品适量,用甲醇溶解配制成储备液。

在空白兔血浆中加入RA,使其浓度分别为20,50,100,250,500, 1000,2500,5000,10000ng m L-1。

按∃2.2%项下方法进行提取测定,以RA浓度c(ng mL-1)对色谱峰面积比值A(A RA/A NIMO)回归计算。

2.4.3 回收率试验 &方法回收率:在空白兔血浆中加入RA标准品,使其浓度分别为20,500,10000 ng mL-1,按∃2.2%项下方法处理测定后代入标准曲线计算出测得量,回收率(%)=(测得量/加入量)∀100%。

∋萃取回收率:在空白兔血浆中加入RA标准品,使其浓度分别为20,500,10000ng mL-1,按∃2.2%项下方法处理,进样测定得峰面积A,另取流动相配制的等浓度RA标准品直接进样测定,得峰面积A(,回收率(%)=(A/A()∀100%。

2.4.4 精密度试验 在空白兔血浆中加入RA标准品,使其浓度分别为20,500,10000ng mL-1,按∃2.2%项下方法处理,于不同时间分别进样测定,以峰面积比计算日内与日间的变异系数和精密度。

2.5 药动学实验设计
取6只健康家兔,称重,采用双周期双交叉实验。

RA普通脂质体和立体稳定脂质体用前水合,静脉注射给药。

采血时间分别为:0,5,15,30min, 1,1.5,2,3,4,6,8h。

测得的血药浓度 时间数据,用中国药理学会编制的3P87药动学程序拟合,并计算相应的药动学参数,各药动学参数间采用配对t检验。

3 结 果
3.1 方法学的结果
专属性测定结果表明:药物与内标尼莫地平及血浆中的其他内源性成分能有效分离,满足含量测定要求。

RA与内标保留时间为12.8和5.01min。

该方法在20~10000ng mL-1范围内线性良好,回归方程及相关系数分别为:c= 1.41792A-0.097 092,r=0.9999,(n=5)。

方法最低检测浓度为20 ng mL-1。

本色谱方法在线性范围内RA的方法回收率为(99.530.55)%,萃取回收率为(77.88 0.95)%;日内精密度<7%,日间精密度<10%;表明该方法准确、可行。

3.2 血药浓度和药动学参数
6只家兔分别静脉注射RA普通和立体稳定脂质体,平均血浓经时曲线见图1。

经3P87程序拟合后符合静脉注射开放二隔室模型,主要药动学参数见表1和表2。

利用NCSS统计软件对两种制剂的参数t1/2 ,t1/2 ,M RT,A UC作了配对t检验,(以同一个体接受两种制剂后的结果作配对比较),4种参数在RA两种制剂间均反映出了极显著性差异(P <0.01)。

4 讨 论
药物包裹于脂质体中可改变药物的动力学特征,脂质体的组成、粒径、电荷、给药途径、剂量及给药频率均影响药物的体内动力学。

另外,通过酶、pH或温度变化可促进药物在靶位点的选择性释放,在注射位点或循环中的脂质体若能避免网状内皮系统的清除,则可作为缓释库而持续释药。

普通脂质
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图1 静脉注射RA普通和立体稳定脂质体平均药 时曲线)∗)-立体稳定脂质体;)+)-普通脂质体
Fig1 Plasma concentration profile after intravenous adminis tration of conventional(con)and sterically stabilized(SSL)li posomes
)∗)-st e rica lly stabi lize d;)+)-c onventional
表1 静脉注射普通和立体稳定脂质体的模型化解析结果Tab1 Pharmacokinetic parameters of RA in rabbits(n=6) after taking RA co nventional(con)and sterically stabilized (SSL)liposomes intravenously
参数普通脂立体稳定参数普通脂立体稳定
质体脂质体质体脂质体K21/min-10.1580.023 /min-10.0170.004 K10/min-10.0240.007t1/2 /m i n46.8206.9 K12/min-10.0690.017V c/L kg-10.5100.537 /m i n-10.2350.044Clr/L min kg-10.0120.004 t1/2 /min 5.816.1
表2 静脉注射普通和立体稳定脂质体的统计矩解析结果Tab2 M oment parameters of RA in rabbits(n=6)aft er tak ing RA conventional(con)and sterically stabilized(SSL)lipo somes intravenously
参数c on SSL 参数con SSL
A UC/g min mL-1171.2391.9MRT/min50.8125.1 A UMC/g min2 mL-18623.849295.7VRT/min22961.210056.0体在到达有效作用位点前已部分从血液循环中清除。

但普通脂质体的上述缺陷可通过在其脂质双层表面连接上亲水性链,遮蔽磷脂膜表面的蛋白结合、作用位点得到解决,这种立体稳定脂质体的血液循环时间显著延长,向RES组织分布的速度和程度均减小,能更有效地靶向至有效作用位点。

由RA普通和立体稳定脂质体的家兔体内平均血浓经时曲线可以看出,立体稳定脂质体的血药浓度及A UC明显高于普通脂质体,分别为171.2和391.9g m in mL-1。

由表1,表2中所列的模型参数及统计矩参数可知:RA普通和立体稳定脂质体的t1/2 分别为6和16min,表明后者向RES组织分布的速度较慢;t1/2 分别为47和247min,表明后者从血液中的清除速度较慢;M RT分别为51和133 min,说明了RA立体稳定脂质体在血液中的驻留时间明显长于普通脂质体。

参考文献
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学报,2000,35(12):921.
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(收稿日期:2000 06 15)
丁咯地尔血药浓度的高效液相色谱法测定及其药动学
陈汇,肖宙,顾世芬,曾繁典(同济医科大学临床药理研究所,湖北武汉430030)
摘要:目的 建立血清中丁咯地尔浓度的反相离子对高效液相色谱分析方法,并用此法研究了丁咯地尔人体药动学。

方法 血样碱化后用二氯甲烷萃取。

以甲醇 水 冰醋酸(70!30!0.1),含0.005mol L-1十二烷基硫酸钠(pH4)为流动相,Waters N o va Pak C18(5m150mm∀3.9mm)色谱柱分离。

检测波长278nm。

结果 丁咯地尔在0.05~2g mL-1浓度范围呈线性,r =0.9996。

最低定量浓度0.025g mL-1。

低、中、高浓度(0.1,0.8,1.6g mL-1)的方法回收率分别为93.4%,95.0%和98.3%,日间及日内RSD分别<4%和<6%。

药动学研究表明,口服丁咯地尔国产与进口制剂的药 时曲线符合一级吸收一级消除的二房室模型。

结论 此法准确可靠,操作简便,适用于临床药动学研究及血药浓度监测。

关键词:丁咯地尔;高效液相色谱法;药动学
中图分类号:R927.2,R969.1文献标识码:A文章编号:1001-2494(2001)10-0682-04
Determination of buflomedil in serum by HPLC and study on its pharmacokinetics
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中国药学杂志2001年10月第36卷第10期。