组织及血液碱性磷酸酶(AKP ALP)活性检测试剂盒说明书 微量法
碱性磷酸酶(ALP)检测试剂盒使用说明
碱性磷酸酶(ALP)检测试剂盒(磷酸苯二钠微板法)货号：G5610有效期：6个月有效。
产品内容：产品规格试剂(A):ALP Assay buffer 2.5ml试剂(B):ALP显色液 2.5ml试剂(C):显色基液7.5ml试剂(D):Phenol标准(1mg/ml)1ml试剂(E):ddH2O1ml产品说明：碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase，简称ALP或AKP)为一类磷酸酯酶，广泛分布于哺乳动物组织内，其活性所需最适pH9.2~9.8。
此酶主要存在于物质交换活跃之处(细胞膜)，如肠上皮和肾近曲小管的刷状缘、附睾上皮之静纤毛、肝的毛细胆管膜以及微动脉和毛细血管动脉部之内皮，还见于内质网、高尔基复合体、吞饮小泡、肠上皮之溶酶体、中性粒细胞之中性颗粒以及平滑肌的细胞膜。
碱性磷酸酶检测试剂盒(磷酸苯二钠微板法)(Alkaline Phosphatase Colorimetric Assay Kit)采用磷酸苯二钠比色法，其检测原理是磷酸苯二钠在碱性条件下，可在碱性磷酸酶的作用下生成游离酚和磷酸。
在碱性条件下酚与氨基安替比林结合，并经氧化生成红色醌式结构物，呈深浅不一的红色，产物红色越深，说明碱性磷酸酶活性越高，反之则酶活性越低，通过酶标仪测定510nm处吸光度，据此通过比色分析就可以计算出碱性磷酸酶活性水平。
该试剂盒可用于检测细胞或组织的裂解液或匀浆液、血浆、血清等样品中内源性的碱性磷酸酯酶活性。
该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。
自备材料：96孔板、水浴锅或恒温箱、酶标仪操作步骤(仅供参考)：1、配制标准品工作液：取出Phenol标准(1mg/ml)恢复至室温后，取0.1ml溶解于1.9ml ddH2O，使浓度达到0.05mg/ml，即为标准品工作液-Phenol(0.05mg/ml)。
按照下表稀释系列标准品溶液。
012345010******** Phenol(0.05mg/ml)(μl)ddH2O(μl)55453525155相当于金氏单位(U/L)010********2、准备样品：（1）细胞或组织样品：取恰当细胞或组织裂解液，如果有必要需进行适当匀浆，低速离心取上清，-80℃冻存，用于碱性磷酸酯酶的检测。
土壤碱性磷酸酶(S-AKP_ALP)活性检测试剂盒说明书__可见分光光度法UPLC-MS-4052
可见分光光度法土壤碱性磷酸酶（S-AKP/ALP）活性检测试剂盒说明书注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。
货号：UPLC-MS-4052规格：50T/48S产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系工作人员。
试剂名称规格保存条件试剂一液体21mL×1瓶2-8℃保存试剂二粉剂×1瓶2-8℃保存试剂三液体5mL×1瓶2-8℃保存试剂四粉剂×2支2-8℃保存标准品液体1mL×1支2-8℃保存溶液的配制：1.试剂二：临用前加50mL蒸馏水充分溶解，2-8℃保存8周。
2.试剂四：临用前取1支加576μL无水乙醇（自备），24μL蒸馏水充分溶解。
用不完的试剂2-8℃保存2周（变褐色后不能再使用）3.标准品：0.5μmol/mL苯酚标准液。
产品说明：土壤磷酸酶是一类催化土壤有机磷化合物矿化的酶，其活性的高低直接影响着土壤中有机磷的分解转化及其生物有效性，是评价土壤磷素生物转化方向与强度的指标。
土壤磷酸酶受到土壤碳、氮含量、有效磷含量和pH显著影响。
通常按照其最适pH范围，分为碱性、中性和酸性三种类型磷酸酶。
碱性环境中，S-AKP/ALP催化磷酸苯二钠水解生成苯酚和磷酸氢二钠，通过测定酚的生成量即可计算出S-A KP/ALP活性。
S-AKP/ALP，OH-Phenyl Disodium Phosphate Phenol+Na2HPO4Alkaline conditionsPhenol+2,6-Dibromobenzoquinone Chlorimide Indoxyl(660nm)注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。
如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：可见分光光度计、1mL玻璃比色皿、台式离心机、水浴锅/恒温培养箱、分析天平、可调式移液器、冰、研钵、蒸馏水、30-50目筛、乙醇和甲苯（不允许快递）。
骨源性碱性磷酸酶检测试剂盒(凝集素亲和法)产品技术要求北京中生金域诊断
骨源性碱性磷酸酶检测试剂盒（凝集素亲和法）适用范围：用于体外半定量检测人体全血或血清中骨源性碱性磷酸酶催化活性。
1.1 产品型号：JY–Color–BAP NB；JY–Color–BAP AB。
1.2 产品规格1.2.1 包装规格：20人份/盒、50人份/盒、100人份/盒。
1.2.2产品组成：产品主要组成成分见表1、表2。
表1 试剂盒配置表配 置 规 格 （装量）20人份/盒 50人份/盒 100人份/盒反应装置 1×20支 1×50支 5×20支显色液 JY–Color–BAP NB1ml ×1瓶3.5ml ×1瓶7ml ×1瓶 JY–Color–BAP AB洗涤液 JY–Color–BAP NB3ml ×1瓶 8ml ×1瓶 8ml ×2瓶 JY–Color–BAP AB终止液 JY–Color–BAP NB3ml ×1瓶4ml ×1瓶 8ml ×1瓶 JY–Color–BAP AB 7ml ×1瓶 7ml ×2瓶一次性定量取血管（含吸头）21支（含吸头1个）52支（含吸头1个）104支（含吸头1个）注：试剂盒中一次性定量取血管为外购有医疗器械证书的产品。
表2试剂配方和浓度配 置 组成 浓度显色液 氯化钠（NaCl） 700mmol/L氯化镁（MgCl2） 25mmol/L二甲基亚砜（DMSO）0.9%（体积比）洗涤液 氯化钠（NaCl） 13%氯化镁（MgCl2） 2.9% 聚乙二醇（PEG）13%氯化锌（ZnCl2） 7%氯化钙（CaCl2） 18%氯化锰（MnCl2） 32%迭氮钠（NaN3） 5%JY–Color–BAP NB终止液氯化钠（NaCl） 18%迭氮钠（NaN3） 25% JY–Color–BAP AB终止液 乙磺酸（MES） 9%氯化钠（NaCl） 13%迭氮钠（NaN3） 7%2.1 外观2.2.1 反应装置为白色塑料制品，结构应完整、表面光洁、无缺失、无折损、无脱落；2.2.2 测定用液体外观要求：a) 显色液为浅黄色液体，不得有任何沉淀及絮状悬浮物；b) 洗涤液为无色透明液体，不得有任何沉淀及絮状悬浮物；c) 终止液为无色透明液体，不得有任何沉淀及絮状悬浮物。
碱性磷酸酶(ALP)检测试剂盒标准操作程序
碱性磷酸酶(ALP)测定标准操作程序1.摘要碱性磷酸酶（ALP）存在于成骨细胞、干细胞、白细胞、肾、脾、胎盘、前列腺和小肠内。
测定血清或肝素化血浆中的碱性磷酸酶活力，做临床辅助诊断用。
2.适用范围程序适用于日立7600自动生化分析仪检测血清、血浆中碱性磷酸酶（ALP）的活力。
3.职责使用日立7600自动生化分析仪进行测定碱性磷酸酶（ALP）活力的工作人员要严格按照本SOP程序进行,室负责人监督管理；本SOP的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经生化室负责人、科主任签字批准生效。
4.检测方法上海科华生物工程股份有限公司生产的碱性磷酸酶（ALP）试剂盒采用的是AMP缓冲液法。
5.原理在AMP的缓冲环境下，磷酸对硝基苯在碱性磷酸酶的作用下，可以水解成磷酸盐和对硝基苯酚。
在一定底物浓度范围内,磷酸对硝基苯的水解产物对硝基苯酚会引起405nm处吸光度的上升，其上升速率与血清中碱性磷酸酶的活力成正比。
−→−+OH−−磷酸盐对硝基苯酚磷酸对硝基苯碱性磷酸酶+26.仪器日立7600自动生化分析仪7.试剂7.1试剂来源：上海科华生物工程股份有限公司提供7.2试剂瓶内主要成分：R1：AMP缓冲液（PH10.50）、乙酸镁；R2：AMP缓冲液（PH8.85）、磷酸对硝基苯、乙酸镁。
AMP：2-氨基-2-甲基-1-丙醇7.3试剂稳定性：试剂在2-8℃避光保存，有效期1年。
试剂工作液在2-8℃避光保存，可稳定4周，15-25℃可保存稳定4天。
7.4试剂准备：试剂为即用式。
8.标准品和质量控制8.1校准程序：使用某某公司提供的标准品对自动分析仪进行校准。
按照公司标准品使用要求，并以9g/L氯化钠溶液或去离子水为空白，经校准测定，仪器自动对标准品响应量通过合适的数学模型绘制校准曲线。
8.2质控品某某公司提供的生化复合定值质控血清做为室内质控品。
每日在测定前做一次质控。
该质控品为干粉包装，在2-8℃冰箱可稳定到失效期，使用前用5ml去离子水复溶，待质控物充分溶解（大约30分钟）后使用。
生化大实验--AKP(碱磷酶)的表达与纯化
三、AKP表达纯化
实验设计
培养表达，收集菌体 表达菌体超声破碎
纯化监测
紫外监测
高速离心去沉淀
浓度测定
离子交换层析粗分离
OD280
加热除杂,高速离心
比活力
硫铵沉淀富集
SDS-PAGE
分子筛层析进一步分离
透析浓缩
纯化方案的评估
组分 Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ 体积 mL 蛋白 mg/mL 总蛋 白 mg 活力 U/mL 总活 力 U 比活力 U/mg 提纯 倍数 1 回收 率 100％
5. 鉴 定 方 法 电泳：琼脂糖电泳、聚丙烯凝胶电泳 免疫分析：凝集反应、免疫扩散、固相免疫吸附、 免疫印迹等 色谱：气相色谱、高压液相色谱、质谱 特定的化学反应、PCR、生物芯片、DNA测序、 DNA重组杂交技术、表型变化等 6. 标记技术 7. 实验数据的测量、记录、处理与分析 8. 试剂的配制与保存 9. 样品的保存与处理
相对误差：绝对误差在真实值中所占的百分率。
精确度和偏差：精确度表示在相同条件下，进行多次实验的测定值相近 的程度。一般用偏差来衡量分析结果的精确度。 偏差：绝对偏差、相对偏差。
误差来源
1、系统误差（可测误差）： 测定过程中，某些经常发生的原因所造成的，它对测定结果的影响比较稳定， 在同一条件下重复测定中常重复出现，使测定结果不是偏高，就是偏低，而 且大小有一定规律，它的大小与正负往往可以测定出来，至少从理论上来说
提高实验准确度的方法
减少系统误差：
设置标准对照和空白试验 、校正仪器 减少偶然误差： 平均取样、多次取样 减少责任误差： 提高认识、端正实验态度、加强管理等
分子筛层析：
将上述离心上清上样、洗脱（Buffer A）
洗脱流速为15 mL/小时，每管接收2 mL
生物化学大实验-akp的浓度测定与活性检测
用于制备样品和分离细 胞或组织中的不同组分。
用于保持反应温度恒定。
用于精确移取一定量的 样品和试剂。
PART 04
实验步骤与方法
REPORTING
WENKU DESIGN
AKP的浓度测定步骤与方法
准备试剂和设备
01
根据实验要求准备所需的试剂和设备，如AKP标准品、酶标仪、
酶标板等。
配置标准品溶液
改进建议
为了更准确地测定AKP的浓度和活性，建议采取以下措施：首先，确保试剂的纯度，避免使用含有杂质或污染物 的试剂；其次，严格控制实验条件，如温度、pH值等，确保实验条件的一致性和准确性；最后，采用更先进的 检测方法和技术，如色谱法、质谱法等，以提高实验结果的准确性和可靠性。
PART 07
参考文献
数据处理
根据标准品溶液的浓度和光密 度值绘制标准曲线，并计算待
测样本中AKP的浓度。
AKP的活性检测步骤与方法
准备试剂和设备
01 根据实验要求准备所需的试剂
和设备，如底物、终止液、分 光光度计等。
配置反应体系
02 将底物溶解在适当的缓冲液中
，加入待测样本，设置空白对 照。
启动反应
03 将反应体系在恒温条件下孵育
进行AKP的浓度和活性检测。
PART 02
实验原理
REPORTING
WENKU DESIGN
AKP的浓度测定原理
酶联免疫吸附法（ELISA）
利用抗原与抗体的特异性结合，通过酶与底物反应的显色反应，测定AKP的浓 度。
分光光度法
利用特定波长下的吸光度值与AKP浓度的线性关系，通过测定吸光度值计算 AKP的浓度。
掌握AKP的浓度测定 与活性检测方法
Calcein PI细胞活性与细胞毒性检测试剂盒说明书
Calcein/PI 细胞活性与细胞毒性检测试剂盒产品简介：碧云天生产的Calcein/PI 细胞活性与细胞毒性检测试剂盒(Calcein/PI Cell Viability/Cytotoxicity Assay Kit ，或Calcein/PI Live/Dead Viability/Cytotoxicity Assay Kit)是一种非常便捷的基于Calcein-AM (钙黄绿素)和PI (碘化丙啶)双荧光染色法检测动物细胞死活的试剂盒。
本试剂盒使用便捷，荧光染色和检测仅需约30分钟。
本试剂盒染色30分钟后，就可进行后续的荧光显微镜拍照、流式分析或者荧光酶标仪定量等荧光检测和分析。
本试剂盒的原理是两种探针可分别检测细胞内酯酶活性和细胞膜完整性，从而反映细胞活性与细胞毒性。
其中Calcein AM 染色活细胞，呈现绿色荧光；而碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)染色死细胞，呈现红色荧光。
本试剂盒用于检测动物细胞活性与细胞毒性效果参考图1。
图1. Calcein/PI 细胞活性与细胞毒性检测试剂盒用于HT-29(人结肠癌细胞)细胞活性与细胞毒性检测的效果图。
HT-29细胞(C6410)在明场视野下仔细观察可以看到有明显的坏死细胞(图A)；绿色荧光标记的即为Calcein 染色的活细胞(图B)，红色荧光标记的即为PI 染色的死细胞(图C)；Calcein和PI 双染叠加(merge)后可以非常清晰地观察到活细胞和死细胞的荧光染色差别(图D)。
在本实验中，HT-29细胞经TSZ 处理4小时。
TSZ 为TNFα、SM-164和Z-V AD-FMK 组成的细胞程序性坏死诱导试剂(C1058)。
实测数据会因实验条件、检测仪器等的不同而存在差异，图中数据仅供参考。
Calcein AM (Calcein Acetoxymethyl Ester ，中文名称为钙黄绿素AM或钙黄绿素乙酰氧基甲酯)，是一种可以对活细胞进行荧光染色的细胞染色试剂，Calcein AM 是在Calcein (钙黄绿素)的基础上增加了乙酰氧基甲酯(AM)基团，加强了疏水性，因此能够很容易穿透细胞膜。
索莱宝（Solarbio）AKP ALP活性检测试剂盒说明书
组织及血液碱性磷酸酶（AKP/ALP ）活性检测试剂盒说明书可见分光光度法货号：BC2140规格：50T/24S产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。
试剂名称规格保存条件提取液液体30 mL×1瓶4℃保存试剂一液体10 mL×1瓶4℃保存试剂二液体10 mL×1瓶4℃保存试剂三液体30 mL×1瓶4℃保存标准液液体1 mL×1支4℃保存溶液的配制：1、标准液：10 μmol/mL 酚标准液，临用前蒸馏水稀释至2.5μmol/mL 备用。
产品说明：AKP/ALP 是一种含锌的糖蛋白酶，在碱性环境中可水解各种天然及人工合成的磷脂单酯化合物。
AKP/ALP 广泛分布于人体各脏器中，以肝脏为主。
在碱性环境中，AKP/ALP 催化磷酸苯二钠生成游离酚；酚与4-氨基安替比林和铁氰化钾反应红色亚醌衍生物，在510nm 有特征光吸收；通过测定510nm 吸光度增加速率，来计算AKP 活性。
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。
如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：可见分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
操作步骤：一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）称取约0.1g 组织，加提取液1mL 充分研磨，4℃，10000rpm 离心10min ，取上清液待测。
血液可直接用于测定，或者适当稀释后用于测定。
二、操作步骤1、可见分光光度计预热30min 以上，调节波长到510nm，蒸馏水调零。
2、操作表试剂名称（μL ）测定管对照管空白管标准管蒸馏水--20-标准品---20上清液20---试剂一200200200200试剂二200200200200混匀后置于37℃水浴中保温15min试剂三600600600600上清液-20--混匀后于510nm测定吸光度，分别记为A测定管、A对照管、A空白管、A标准管。
AKP说明书
碱性磷酸酶 (U / gprot)
=
测定管吸光度 标准管吸光度
×
标准管含酚的量 (0.003mg)
÷
取样量中的蛋白克数
= 0.081 × 0.003 ÷ (1.29 ×10−3 × 0.03) = 32.37U / gprot 0.194
南京建成生物工程研究所 南京建成科技有限公司
地 址： 南京市中央路 258－27 号 电 话：（025）83360321
基质液(ml)
0. 5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
充分混匀,37℃水浴 15 分钟
显色剂(ml)
1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5
立即混匀,在 520nm 处,1cm 光径,0 管调零,测各管 OD 值
以所测得的吸光度为纵坐标，以相应的标准浓度单位为横坐标，绘制标准曲线。
×
100ml 0.05ml
= 0.404 × 0.005 × 100 = 16.16金氏单位 /100ml
0.250
0.05
1
本试剂盒仅用于科研、实验室
南京建成
（二）、组织匀浆中 AKP 的测定：
1、 操作表：
测定管
标准管
空白管
1%组织匀浆(ml)
0.03
0.1mg/ml 酚标准液(ml)
三、操作：
Байду номын сангаас
(一)、血清（浆）中 AKP 的测定： 1、操作表：
测定管
标准管
空白管
血
清（ml）
0.05
0.1mg/ml 酚标准应用液（ml）
0.05
双 蒸 水（ml）
0.05
alp活性检测
WAKO原装产品现货特价：碱性磷酸酶（ALP）的活性检测试剂盒/offer_sale/detail/2039842.html摘要碱性磷酸酶的活性检测试剂盒。
常用于检测培养的成骨细胞、实验动物血清和骨组织中的碱性磷酸酶活性。
碱性磷酸酶(ALP)广泛分布于肝脏、骨、小肠之中。
特别在骨代谢研究领域方面被用作为骨形成指标之一。
本品是用p–硝基苯磷酸作为底物的碱性磷酸酶检测试剂盒，利用微孔板，可进行多种样品的检测。
【检测原理】样品在含有p-硝基苯磷酸的碳酸盐缓冲液(pH9.8)中反应，在样品中的碱性磷酸酶作用下，p-硝基苯磷酸分解为p-硝基酚和磷酸。
生成的p-硝基酚为碱性，呈黄色。
根据测量其405nm的吸光值，计算出样品中碱性磷酸酶的活性。
■LabAssay TM ALP [p-硝基苯磷酸基质法]【性能】检测范围：>0.06 mmol/L标准曲线范围：0～0.5 mmol/L再现性：C.V.<10%【试剂盒组成】・底物---------------------20片（溶解时：p-硝基苯磷酸二钠6.7mmol/L)・底物溶解液-------100ml×1瓶（2.0mmol/L氯化镁含有0.1mol/L碳酸盐缓冲液pH9.8)・反应终止液-------100ml×1瓶（0.2mol/L氢氧化钠溶液）・标准液---------------10ml×1瓶（0.5mmol/L p-硝基酚溶液）【试剂的配制】1）底物缓冲液：1片底物溶解于5mL底物溶解液中。
2）反应终止液：直接使用。
3）系列稀释标准液：将标准液用蒸馏水依次稀释为0.5、0.25、0.125、0.0625 mmol/L等2倍率稀释液系列。
【标准操作法】向96孔微孔板内添加100μl底物缓冲液和20μl样品，在微孔板震荡器上充分振荡1分钟后，37℃孵育15分钟。
添加80μl反应终止液，在微孔板震荡器上充分振荡1分钟后，用酶标仪测量405nm处的吸光值。
alp试剂盒 说明书
碧云天生产的碱性磷酸酶检测试剂盒(Alkaline Phosphatase Assay Kit)是一种用于快速、便捷地检测细胞或组织的裂解液或匀浆液、血清、血浆、尿液等样品中内源性的碱性磷酸酶活性的试剂盒。
碱性磷酸酶(Alkaline Phosphatase)，也称碱性磷酸酯酶，可以在碱性条件下催化磷酸酯键的水解。
哺乳动物中，肝脏、胆管、肾脏、骨头和胎盘中的碱性磷酸酶活性比较高。
常见的碱性磷酸酶包括肠道碱性磷酸酶(alkaline phosphatase, intestinal, ALPI)、非组织特异性碱性磷酸酶(alkaline phosphatase, tissue-nonspecific isozyme, ALPL)和胎盘碱性磷酸酶(alkaline phosphatase, placental type, 也称placental alkaline phosphatase, PLAP)。
干细胞，如iPS中，碱性磷酸酶的活性很高，常被用作iPS成功诱导的标志。
另外，分化的结肠癌细胞中碱性磷酸酶的活性也会显著升高，被当作结肠癌细胞分化程度定性和定量的指标。
此外，血清中碱性磷酸酯酶的升高，被称作高碱性磷酸酶血症(hyperalkalinephosphatasemia)，被认为和恶性胆管阻塞(malignant biliary obstruction)、原发性胆管硬化(primary biliary cirrhosis)、原发性硬化胆管炎(primary sclerosing cholangitis)、肝淋巴瘤(hepatic lymphoma)和肝肉瘤(hepatic sarcoidosis)等肝胆疾病密切相关。
血清中碱性磷酸酶活性升高还和骨头生成密切相关，因为碱性磷酸酶是成骨细胞的副产物。
血清中碱性磷酸酶活性过低也和一些疾病相关。
儿童和孕妇血清中的碱性磷酸酶活性较普通人高一些。
血清中碱性磷酸酶活性范围在20-140U/L。
碱性磷酸酶km值测定实验报告
竭诚为您提供优质文档/双击可除碱性磷酸酶km值测定实验报告篇一：酶促反应动力学实验报告酶促反应动力学实验报告14301050154杨恩原实验目的：1.观察底物浓度对酶促反应速度的影响2.观察抑制剂对酶促反应速度的影响3.掌握用双倒数作图法测定碱性磷酸酶的Km值实验原理：一、底物浓度对酶促反应速度的影响在温度、ph及酶浓度恒定的条件下，底物浓度对酶的催化作用有很大的影响。
在一般情况下，当底物浓度很低时，酶促反应的速度(v)随底物浓度[s]的增加而迅速增加，但当底物浓度继续增加时，反应速度的增加率就比较小，当底物浓度增加到某种程度时反应速度达到一个极限值(即最大速度Vmax)。
底物浓度和反应速度的这种关系可用米氏方程式来表示(michaelis-menten方程)即：式中Vmax为最大反应速度，Km为米氏常数，[s]为底物浓度当v=Vmax/2时，则Km=[s]，Km是酶的特征性常数，测定Km是研究酶的一种重要方法。
但是在一般情况下，根据实验结果绘制成的是直角双曲线，难以准确求得Km和Vmax。
若将米氏方程变形为双倒数方程(Lineweaver-burk方程)，则此方程为直角方程，即:以1/V和1/[s]分别为横坐标和纵坐标。
将各点连线，在横轴截距为-1/Km，据此可算出Km值。
本实验以碱性磷酸酶为例，测定不同浓度底物时的酶活性，再根据1/v和1/[s]的倒数作图，计算出其Km值。
二、抑制剂对酶促反映的影响凡能降低酶的活性，甚至使酶完全丧失活性的物质，成为酶的抑制剂。
酶的特异性抑制剂大致上分为可逆性和不可逆性两类。
可逆性抑制又可分为竞争性抑制和非竞争性抑制等。
竞争性抑制剂的作用特点是使该酶的Km值增大，但对酶促反映的最大速度Vmax值无影响。
非竞争性抑制剂的作用特点是不影响[s]与酶的结合，故其Km值不变，然而却能降低其最大速度Vmax。
本实验选取na2hpo4作为碱性磷酸酶的抑制物，确定其抑制作用属于哪种类型。
植酸酶活性检测试剂盒说明书 微量法
植酸酶活性检测试剂盒说明书微量法注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
货号：BC3145规格：100T/48S产品内容：提取液：液体100mL×1瓶，4℃保存。
缓冲液：液体10mL×1瓶，4℃保存。
试剂一：粉剂×2支，4℃保存，临用前加缓冲液4mL配制，现用现配。
试剂二：液体10mL×1瓶，4℃保存。
试剂三：液体10mL×1瓶，4℃保存。
显色剂：粉剂×6瓶，4℃保存，临用前根据用量每瓶加0.4mL双蒸水溶解，再加1.6mL试剂三混匀。
样本处理产品说明：植酸酶（phytase）是催化植酸及其盐类水解为肌醇与磷酸（盐）的一类酶的总称，属磷酸单酯水解酶，它能将食品和饲料中植酸及其盐转化为可供有机体利用的有效磷，降低粪便中的磷含量，减轻对环境的污染，改善营养成分的吸收和利用，因此具有极其广泛的研究和应用价值。
测定原理植酸酶在一定温度和pH值条件下，水解底物植酸钠生成无机磷与肌醇衍生物，无机磷在酸性环境中与钼酸铵显色剂反应生成蓝色复合物，在700nm处有特征吸收峰，根据700nm处吸光值变化可计算得植酸酶活性。
自备实验用品及仪器天平、低温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、恒温水浴锅，超声溶解器，回旋式振荡器。
操作步骤：1.酶制剂：按照质量（g）：提取液体积(mL)为1：500~1000的比例（建议称取约0.001g，加入1mL提取液）第1页，共4页加入提取液，在超声波溶解器上溶解15min，再用回旋式振荡器振荡15min，待测。
2.组织：按照质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g，加入1mL提取液）加入提取液，在超声波溶解器上溶解15min，再用回旋式振荡器振荡15min，4℃，4000g离心10min，取上清待测。
3.饲料样品：饲料烘干粉碎，过40目筛，按照质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g，加入1mL提取液）加入提取液，在超声波溶解器上溶解15min，再用回旋式振荡器振荡15min，4℃，4000g离心10min，取上清待测。
碱性磷酸酶标记抗体说明书
北京索莱宝科技有限公司碱性磷酸酶标记抗体说明书（AP antibody conjugate）
规格：0.1ml
保存：-20℃保存，避免反复冻融，保质期至少为1年；稀释后2～8℃可保存2周。
产品说明：
碱性磷酸酶标记抗体具有发光信号平台期长、背景值低、底物长期稳定的特点，是常用的化学发光分析法之一。
本公司制备的AP标记抗体，可用于多种免疫学实验，如：ELISA﹑WB﹑IHC等。
本品每0.1ml液体中含有AP200g，IgG含量约100g。
抗体浓度：1mg/ml
储存液：0.01M PBS(pH7.4)﹑1%BSA﹑0.03%Proclin300和50%Glycerol.
工作效价：
ELISA：1：2000-10000
WB：1：1000-10000
IHC：1：100-1000
具体效价以产品标签为准，最佳使用浓度需根据所检测样本的抗原及一抗效价优化而定。
显色说明：用BCIP/NBT作为底物进行显色，最终形成不溶性的深蓝色至蓝紫色沉淀。
第1页，共1页。
碱性磷酸酶km实验报告
竭诚为您提供优质文档/双击可除碱性磷酸酶km实验报告篇一：碱性磷酸酶Km值得测定(1)碱性磷酸酶Km值得测定原理在适宜条件下，酶促反应的初速度随底物浓度【s】增大而增大，当底物浓度达一定时则反应趋于稳定，反应速度最大。
关系可用米氏方程表示Km是酶的特征性常数。
将米氏方程变形为双倒数方程对1/s作图可算出Km步骤，以1/V结果由y=9.2961x+1.1465算出当y=0时x=-0.233，继而算出Km值=8.11mmol/L讨论计算出来的Km值与查资料所得到的值有一定的差距。
实验是粗测，本身存在实验误差，我们在操作过程中也造成误差，所以导致与实际值差距较大。
尿蛋白定性检测原理加热可以使蛋白质变性，溶液ph等于pI时溶解度最小。
步骤1.取大试管一支，加入5ml澄清尿液。
2.用试管夹持试管上端，酒精灯加热尿液斜面至沸。
(:碱性磷酸酶km实验报告)3.滴加5%乙酸2~3滴于尿液表面，轻轻混匀局部，加热。
结果未加热部分是澄清，加热部分浑浊明显讨论正常尿液中不会出现浑浊，本实验尿液加入了蛋白质。
尿液中如果出现沉淀则说明出现了病症。
分子筛层析（凝胶过滤法）原理多孔凝胶对不同大小分子的排阻效应，使不同分子分离。
大分子先出，小分子后出。
步骤1.取5~8滴4mg/ml蓝色葡萄聚糖液和4滴2mg/ml重铬酸钾液混匀。
2.将层析柱出水口打开，缓放柱内液体至凝胶柱表面加入混匀的待层析液。
3.从上口缓加蒸馏水，成2~3cm高水柱，出水口用小试管接水。
4.在上口加洗脱液洗脱。
每支小试管接1cm液体，并编号。
5.观察不同小试管的液体颜色的变化。
结果讨论分子筛层析能够大致的分离分子量不同的物质，但是分离的物质不纯有杂质，实验时间也相对较长，操作复杂。
篇二：实验名称碱性磷酸酶的分离纯化实验报告实验名称碱性磷酸酶的分离纯化、比活性测定与动力学分析实验日期20XX年10月25号实验地点生化实验室合作者指导老师总分教师签名批改日期碱性磷酸酶（AKp或ALp）是一种底物特异性较低，在碱性条件下能水解多重磷酸单脂化合物的酶，需要镁和锰离子为激活剂。
亮氨酸氨基肽酶(LAP)活性检测试剂盒说明书 微量法
亮氨酸氨基肽酶（LAP）活性检测试剂盒说明书微量法注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
货号：BC4145规格：100T/96S产品内容：试剂一：液体120mL×1瓶，4℃保存；试剂二：粉剂×1瓶，4℃避光保存；临用前加入2.5mL丙酮溶解。
产品说明：LAP是一种膜结合酶，广泛存在于肝、胆、胰等组织中，参与组织蛋白和某些肽类的降解更新。
各类肝病患者因肝细胞损伤，血清LAP的活性均有不同程度的升高，LAP可以作为各类肝病的一项初步检测指标，特别是肝癌鉴别诊断的指标。
LAP分解L-亮氨酸对硝基苯胺生成对硝基苯胺，后者在405nm有最大吸收峰，通过测定吸光值升高速率来计算LAP活性。
自备实验用品及仪器：天平、低温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、丙酮、匀浆器/研钵。
操作步骤：一、样本处理：组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL试剂一）进行冰浴匀浆，然后，10000g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。
细胞：按照细胞数量（104个）：试剂一体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL 试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后10000g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。
液体：直接检测。
二、测定操作：1、分光光度计/酶标仪预热30min以上，波长调至405nm，分光光度计蒸馏水调零。
2、加样表：在微量玻璃比色皿/96孔板中分别加入下列试剂试剂名称（μL）测定管空白管试剂一10样品上清10试剂一170170试剂二2020在微量玻璃比色皿/96孔板中分别加入上述试剂，充分混匀后于405nm处测定30s时的吸光值A1，迅速置于37℃水浴3min（有控温功能的酶标仪可以将温度调至37℃），拿出迅速擦干测定210s时的吸光值A2，计算△A测定管=A2测定-A1测定，△A空白管=A2空白-A1空白，△A=△A测定管-△A空白管。
碱性磷酸酶(AKP)
催化机理
H2O取代无机磷酸， 完成催化反应
底物磷酸酯嵌 其它的磷酸的氧原子则与Arg-166 中间体的磷原子 入酶的结合部 的胍基形成氢键 断裂P-OR 键 位，磷酸酯的 两个氧原子分 别与Zn1和Zn2 配位，形成两 个Zn原子之间 的磷酸盐桥
去质子化的 磷酸酯被绑定 Ser进攻磷原 子，从而导致 到Ser-102中的 Ser-残基的 磷酸化，并形成共价 活性位点 Ser磷酸盐中间体(仍然与Zn 配位)
金属离子的作用
②酶与底物以金 属离子Zn为桥接 点，金属将底物 磷酸引导到正确 的位置（Ser-活 性部位），使酶 促反应顺利进行。
金属离子的作用
③金属Zn1中和
离去基团的负电
荷，是RO―能
够顺利离去。
金属离子的作用
④Mg定位了水
分子，催化Ser-
102的质子化和
去质子化的反应。
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
金属离子的作用
①锌离子在碱性磷酸酶中有广义Lewis酸的作用，极化底 物，使之成为一个良好的亲电试剂。 ②酶与底物以金属离子Zn为桥接点，金属将底物磷酸引
导到正确的位置（Ser-活性部位），使酶促反应顺利进行。
③金属Zn1中和离去基团的负电荷，是RO-能够顺利离去。 ④Mg定位了水分子，催化Ser-102的质子化和去质子化的 反应。
Zn1原子配位的氢氧根离 子进攻磷酸基，形成POH键，最终形成无机磷 酸盐与底物的非共价结 合形式。
Mg配位的水分子现在 作为一个质子酸，将 一个质子给Ser-102， 则P-Ser键断裂
金属离子的作用
①锌离子在碱性 磷酸酶中有广义 Lewis酸的作用， 极化底物，使之 成为一个良好的 亲电试剂。
碱性磷酸酶（ALP）
碱性磷酸酶测定试剂盒(NPP底物-AMP缓冲液)产品技术要求dd
碱性磷酸酶测定试剂盒（NPP底物-AMP缓冲液）
组成：
适用范围：用于体外定量测定人血清中碱性磷酸酶的活性。
2.1外观
试剂盒外观应整洁，液体无渗漏，文字符号标识清晰；试剂1：无色澄清液体；试剂2：淡黄绿色澄清液体。
2.2装量
每瓶不少于标示值。
2.3试剂空白吸光度
用指定的空白样品测试试剂（盒），在光径1cm下，在A405nm处测定试剂空白吸光度A≤0.8，空白变化率△A/min≤0.005。
2.4分析灵敏度
试剂测定（120±12）U/L被测物，吸光度变化△A/min≥0.01。
2.5线性范围
2.5.1在[25，750]U/L内，相关系数R≥0.990。
2.5.2在 [25，100]U/L时绝对偏差不超过±10U/L，测定（100，750]U/L相对偏差不超过±10%。
2.6精密度
2.6.1 重复性
重复测试（120±12）U/L的样本，所得结果的变异系数（CV%）应不大于5%。
2.6.2批间差
测定（120±12）U/L样本，所得结果的批间相对极差（R）应不大于10%。
2.7准确度
比对试验相关系数r2≥0.95， [25，100]U/L区间内，绝对偏差不超过±10U/L，（100，750]U/L区间内，相对偏差不超过±10%。
2.8 效期稳定性
试剂有效期为12个月，取到效期后一个月内进行检测，测定结果应符合2.3-2.6.1、2.7项要求。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
组织及血液碱性磷酸酶（AKP/ALP）活性检测试剂盒说明书微量法
货号：BC1595
规格：100T/48S
产品说明：
AKP/ALP是一种含锌的糖蛋白酶，在碱性环境中可水解各种天然及人工合成的磷脂单酯化合物。
AKP/ALP 广泛分布于人体各脏器中，以肝脏为主。
在碱性环境中，AKP/ALP催化磷酸苯二钠生成游离酚；酚与4-氨基安替比林和铁氰化钾反应红色亚醌衍生物，在510nm有特征光吸收；通过测定510nm吸光度增加速率，来计算AKP活性。
自备仪器和用品：
紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、台式离心机、水浴锅、可调式移液器和蒸馏水。
试剂组成和配制：
试剂一：液体×1瓶，4℃保存。
试剂二：液体×1瓶，4℃避光保存。
试剂三：液体×1瓶，4℃避光保存。
试剂四：液体×1瓶，4℃避光保存，未变成蓝绿色之前均可使用。
标准品：液体×1支（EP管中），2μmol/mL酚标准液，4℃保存。
操作步骤：
一、粗酶液提取：
1.组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL试剂
一）进行冰浴匀浆，4℃、10000rpm离心10min，取上清液待测。
2.血液可直接测定，或者适当稀释后测定。
二、测定步骤：
1.分光光度计预热30min以上，调节波长到510nm，蒸馏水调零。
2.试剂三置于37℃水浴中预热30min以上。
3.空白管：取EP管，加入4μL蒸馏水，40μL试剂二，40μL试剂三，混匀后置于37℃水浴中保温15min；
加入试剂四120μL，混匀后于510nm测定吸光度，记为A空白管。
4.标准管：取EP管，加入4μL标准品，40μL试剂二，40μL试剂三，混匀后置于37℃水浴中保温15min；
加入试剂四120μL，混匀后于510nm测定吸光度，记为A标准管。
5.对照管：取EP管，加入40μL试剂二，40μL试剂三，混匀后置于37℃水浴中保温15min；加入试剂
四120μL，混匀；最后加入4μL上清液，混匀后于510nm测定吸光度，记为A对照管。
6.测定管：取EP管，加入4μL上清液，40μL试剂二，40μL试剂三，混匀后置于37℃水浴中保温15min；
加入试剂四120μL，混匀后于510nm测定吸光度，记为A测定管。
其中标准管和空白管只需做一管，测定管和对照管每个样均需做。
三、AKP/ALP活性计算：
a.使用微量石英比色皿测定的计算公式如下
1.血液中AKP/ALP活力计算
活性单位定义：37℃中每毫升血液每分钟催化产生1μmol酚定义为一个活性单位。
AKP/ALP活力(U/mL)=[C标准品×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)×V反总]÷V样×V样总÷T=6.8×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)
C标准品：2μmol/mL；V反总：反应体系总体积（mL），1020μL=1.02mL；V样：加入反应体系中上清液体积（mL），0.020mL；V样总：1mL；T：反应时间（min），15min。
2.组织中AKP/ALP活性计算
（1）按蛋白浓度计算
活性单位定义：37℃中每毫克蛋白每分钟催化产生1μmol酚。
AKP/ALP(U/mg prot)=[C标准品×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)×V反总]÷(Cpr×V样)÷T = 6.8×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)÷Cpr
（2）按样本质量计算
活性单位定义：37℃中每克样品每分钟催化产生1μmol酚。
AKP/ALP(U/g)=[C标准品×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)×V反总]÷(V样÷V样总×W)÷T
= 6.8×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)÷W
C标准品：2μmol/mL；V反总：反应体系总体积（mL），205μL=0.205mL；
Cpr：粗酶液蛋白质浓度（mg/mL），需要另外测定；W：样品质量；
V样：加入反应体系中上清液体积（mL），0.004mL；V样总：提取液体积，1mL；
T：反应时间（min），15min。
b.使用96孔板测定的计算公式如下
1．血液中AKP/ALP活力计算
活性单位定义：37℃中每毫升血液每分钟催化产生1μmol酚定义为一个活性单位。
AKP/ALP活力(U/mL)=[C标准品×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)×V反总]÷V样×V样总÷T=6.8×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)
C标准品：2μmol/mL；V反总：反应体系总体积（mL），1020μL=1.02mL；
V样：加入反应体系中上清液体积（mL），0.020mL；V样总：1mL；T：反应时间（min），15min。
2.组织中AKP/ALP活性计算
（1）按蛋白浓度计算
活性单位定义：37℃中每毫克蛋白每分钟催化产生1μmol酚。
AKP/ALP(U/mg prot)=[C标准品×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)×V反总]÷(Cpr×V样)÷T
=6.8×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)÷Cpr
（2）按样本质量计算
活性单位定义：37℃中每克样品每分钟催化产生1μmol酚。
AKP/ALP(U/g)=[C标准品×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)×V反总]÷(V样÷V样总×W)÷T
=6.8×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)÷W
C标准品：2μmol/mL；V反总：反应体系总体积（mL），205μL=0.205mL；
Cpr：粗酶液蛋白质浓度（mg/mL），需要另外测定；W：样品质量；
V样：加入反应体系中上清液体积（mL），0.004mL；V样总：提取液体积，1mL；
T：反应时间（min），15min。
注意事项：
1.试剂二、试剂三和试剂四均需避光保存。
2.试剂四变蓝绿色后不能再使用。
3.加入试剂四后必须立即混匀，否则显色不完全。