含酚污水降解菌的分离

真菌培养基平板上连续划线分离，最后
挑取单菌落接种到耐酚斜面培养基上，
37℃培养2d。
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（二）耐酚菌驯化 先活性污泥、放入苯酚无机培养液中、30℃振
荡培养6—10 d，使苯酚降解菌大量增殖，淘汰对 酚不适应的微生物；再添加苯酚无机培养液(苯酚 终浓度增加至100mg/L 30℃振荡培养4—6d。再流 加苯酚无机培养液(苯酚终浓度增加至 200mg/L)30℃振荡培养4—6d，再提高到加250 mg/L苯酚无机培养液，30℃培养4d后从中选出对 苯酚耐受力强的苯酚降解
53、其他物品 稀释分离来自用的装有无菌水的试管，每 组6支。 无菌移液管，每组2支。
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四、步骤实验
分离——耐酚菌驯化——性能测定
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1.什么是传统机械按键设计？
传统的机械按键设计是需要手动按压按键触动PCBA上的 开关按键来实现功能的一种设计方式。
传统机械按键结构层图：
按
PCBA
键
开关 键
传统机械按键设计要点： 1.合理的选择按键的类型， 尽量选择平头类的按键，以 防按键下陷。 2.开关按键和塑胶按键设计 间隙建议留0.05~0.1mm， 以防按键死键。 3.要考虑成型工艺，合理计 算累积公差，以防按键手感 不良。
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梯度平板法分离纯化 • —般微生物在含苯酚培养基上不能生长，
苯酚耐受菌株的筛选，可采用与筛选药物 抗性菌株一样的梯度平扳法。即在培养基 中加入—定量的药物。使大量细胞中的少数 抗性菌细胞在平板上的一定剂量药品的部 位长成菌落。从而判定该菌耐苯酚的能力。
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三、实验材料 1、菌源
含酚工业污水或含酚废水曝气池中的活性污泥 2、培养基 耐酚细菌培养基，包括固体（平板、斜面）和液 体两种。 固体：牛肉膏蛋白胨固体培养基，灭菌后加入苯 酚至6g/L。
上层培养基薄的部分苯酚浓度大大降低，造成上层培
养基由厚到薄苯酚浓度递减的梯度
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梯度平板制备及菌落生长情况
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2．涂布法分离
将采集的样品按稀释涂布法分离，
37℃培养2d后，半板上生长的菌落也
形成密度梯度，上层培养基薄的部分苯
酚低浓度区形成菌苔较多、上层培养基
厚的部分苯酚高浓度区出现稀少菌落。
将此菌落在耐酚细菌培养基平板或耐酚
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思考题 说明采用梯度平板法进行药物 抗性菌株筛选的优越性。
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（一）分离酚降解菌
1．梯度平板制备
四、实验内容
在已灭过菌在的已培灭过养菌的皿培1中．养梯皿，度中先平，板先倾制倾备倒倒77－－10 1m0l不m含苯l不含苯酚 的已灭过菌酚放的的置细已木灭条菌过上培菌，的使养细皿基菌中或的，真培将菌养培基培养倾养基斜，成皿将斜培面一养，侧皿而一且放侧刚置木条上，
使皿中的培皿好养放完基平全，盖倾再住斜倾培倒养成7皿－斜底10部面m，1，待已培融而养化且基的凝无刚固菌后耐好，酚完将真培菌全养培盖住培养 皿底部，待培m养1)养基，或刚基耐好凝酚完细全固菌盖培后住养下，基层(斜将苯面酚培，终由养浓于度皿苯为酚7放5的m平扩g/1散，00作再倾倒7－ 10 m1已融化用上的，层上培无层养培菌基养由耐基厚薄酚到的薄细部苯分菌酚苯浓培酚度浓养递度减基大的大梯(苯降度低(酚图，6终造－成4浓度为 6g/L)，刚好完全盖住下层斜－2面)。 ，由于苯酚的扩散作用，
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（三）性能测定 1、初筛
制备不同浓度苯酚含量的平板培养基，将选出的 耐酚力强的菌株在其上分别划线分离，自高酚浓度 平板上长出的菌落，即为苯酚降解力高的菌株。 复筛。
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2、复筛
•将经初筛纯化的菌种，分别接入碳源对照培养液 和苯酚培养液中，20℃振荡培养48h，于发酵的0、 12、24、36、48h取样，在OD600处检测光密度值 (OD)。绘制在葡萄糖培养液和苯酚培养液上的生长 曲线，在苯酚培养液中生长速度下降不明显者为耐 酚菌株。
含酚污水降解菌的分离
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一、目的要求
☺学习从含酚工业废水、活性污泥中筛选苯酚 降解菌。 ☺学习通过活性污泥培养驯化和分离耐酚菌
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二、实验原理
许多微生物可从不同基物中获取能量，具有降解某 些特殊污染物的能力，这是目前环境微生物研究的重 点。本次实验以含酚污水降解菌的分离、纯化与筛选 为例，介绍某些特殊污染物微生物降解菌的筛选方法。