《杂质检查方法学研究与评价(PPT 42页)》

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二、杂质检查方法的建立
• 3、杂质检查常见方法介绍
• （5）样品的处理和配制
• －预处理样品考虑
•
乳膏
•
提取可能导致的杂质漏检和失真
•
衍生化处理导致杂质丢失
• －样品浓度的影响
•
浓度高利于杂质检出，但防超载
•
低浓度样品杂质的检查难题？
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二、杂质检查方法的建立
• 3、杂质检查常见方法介绍
制药杂质加查方法可能不适 • －被仿制药标准较低，无杂质检查项或较为简单 • －被仿制药的杂质检查方法无法获得
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二、杂质检查方法的建立
• 2、仿制药杂质检查方法建立的一般考虑点 • （2）结合杂质的理化特点： • 根据杂质谱，考虑杂质结构、理化性质 • 例如： • 阿司匹林→比色法→游离水杨酸（CP2005） • 葡萄糖注射液→UV法→5-羟甲基糠醛
互为补充，控制杂质 • －化学法＆色谱法＆光谱法＆生物检定法 • － 同一方法采用不同测试条件 ➢ 如正相HPLC、反相HPLC、不同流动相的反相HPLC等 • －分离技术于检测手段联用，较为有效，如HPLC、GC、LC-
MS、GC-MS 、HPLC-PDA、CE 等
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二、杂质检查方法的建立
•
－－仿制药与被仿制药的质量一致
•
－－杂质的种类和数量不高于被仿制药
• （3）杂质研究的基础
•
－－杂质检查方法不合适或方法学验证不完善，
杂质检查不可靠，无法准确评价药品质量
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一、概述
• 仿制药与被仿制药一致性要求 • 药学方面一致（含量、结构、杂质、其他检查项等） • 杂质的数量和种类低于被仿制药，否则需要分析杂质的安
• 2、仿制药杂质检查方法建立的一般考虑点 • （6）综合药学的其他研究结果： • 杂质检查与药物外观色泽、含量等项目间存在密切联
系，如果这些项目发生明显变化，而杂质基本不变时， 应分析原因，关注杂质检查方法的可行性。
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二、杂质检查方法的建立
• 3、杂质检查常见方法介绍 • HPLC法 • －考虑被仿制药的色谱条件 • －考察同类物质质量标准中的杂质检查方法 • －一般选择多种色谱条件：正相和反相 • －方法包括：固定相、流动相、洗脱方式、波长、测
• （6）杂质的定量计算方法
• －杂质对照品法：定量准确，已知杂质，需用杂质对照品
• －校正因子的主成分自身对照法：定量准确，已知杂质，无需 长期提供杂质对照品
• －不加校正因子的主成分自身对照法：前提是假定杂质与主成 分的响应因子基本相同，有一定的误差，可用于未知杂质，已 知杂质对主成分的响应因子在0.9～1.1之间
全性并提供有关数据，必要时应进行相关的安全性试验 • 建立杂质适宜的杂质检查方法用于判断一致性 • 用语工艺优化、去除杂质、考察稳定性、控制药物质量
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一、概述
• 2、目前国内仿制药研究中杂质检查面临的困难
• －－杂质来源不清：被仿制药和仿制药杂质的种 类和数量不清，包括杂质产生和引入的过程、降 解途径
• 3、杂质检查常见方法介绍 • （1）固定相的选择 • －注意不同品牌柱子在耐用性方面的研究： • a、当杂质峰与主峰的分离情况不十分完美 • b、确定辅料峰的相对保留时间（用于定位扣除辅料的
干扰）
• c、确定特定杂质的相对保留时间 • d、确定有关物质出峰完毕的保留时间 • －－当不同品牌而引起以上各因素不固定时，应在标
• －有助于杂质谱的分析和定性
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三、杂质检查方法学验证的要求
➢方法验证的目的 • 考察分析方法十分适用于杂质的检测
和定量 ➢方法验证中面临的困难 • 杂质谱不清 • 杂质对照品无法获取 ➢验证的具体要求
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三、杂质检查方法验证的要求
• 1、专属性 • －指在可能的共存主分存在时，对被分析无物准确测
• －常见的是对未知杂质，不加校正因子的主成分自身对照或面积归一化法 （无法准确定量，无法有效检测杂质）
• TLC法 • －设备和操作简便，一些特定杂质的检查 • －灵敏度较差、定量不够精确，分离度欠佳，有时无法满足需要 • －仅限于限度检查（半定量），结合不同原理的检视技术能使各杂质斑点均
可显示，弥补HPLC的不足。 • －需做好系统实用性试验
试样品的处理、具体操作、计算方法
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二、杂质检查方法的建立
• 3、杂质检查常见方法介绍
• （1）固定相的选择
• －根据特征研究的药物的特性选择合适填料的柱子。常用RPHPLC，色谱柱多选C18柱、C8柱、苯基柱、氨基柱也有使用
• －C18柱时，流动相有机溶剂％通常≥5％
• －流动相的pH值2～8
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二、杂质检查方法的建立
• 2、仿制药杂质检查方法建立的一般考虑点 • （1）参考被仿制药的方法： • A、被仿制药杂质检查方法和限度如何？标准中控制了
哪些杂质？ • B、重要参考，为方法建立提供重要的信息，全面考察 • C、不可简单套用 • －工艺或处方的不同，二者的杂质谱可能不同，被仿
高 • －化学法＆TLC法＆HPLC法 • － HPLC/MS，HPLC/荧光 • CE法可用于微量样品 • GC适用于挥发性杂质检查
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二、杂质检查方法的建立
• 2、仿制药杂质检查方法建立的一般考虑点 • （5）注意多种方法联用： • 由杂质多样性复杂性和方法局限性所决定 • 单一方法不能满足多个杂质的检测时，可采用两种以上的方法
Information • －ANDAs:Impurities in Drugs Products • Q3A(R) • Q3B(R)
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一、概述
• 4、杂质的范围
• 有机杂质－－包括工艺中引入的杂质和降 解产物，化学结构与活性成分的分子式类
似或具渊源关系，通常称有关物质
• 无机杂质－－产生的无机物 • 残留溶剂－－生产过程中使用的有机溶剂
60 ℃ －－对于原料药有需要考虑水溶液或混悬液的降解 －－考虑在不同pH值条件下的降解 －－光照试验可采用4500Lx
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三、杂质检查方法验证的要求
➢ 存在的主要问题 （1）主药完全降解，无法对降解产物进行检测 （2）由于选择降解条件强度不够，使药物未能降解，而
杂质检查方法学研究与评价
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主要内容
• 一、概述 • 二、杂质检查方法的建立 • 三、杂质检查方法学验证的要求 • 四、杂质检查方法和方法验证常见问题分
析
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一、概述
• 1、杂质检查方法和方法验证对仿制药的重要意义
• （1）安全性的重要保证－－关注毒性杂质
• （2）评价仿制药是否一致的关键指标之一
定的能力
• －分离度：专属性指标、杂质谱的明确是基础 • －杂质可得→最难物质分离对得分离试验、粗品中间
体分离试验、辅料与杂质及主成分得分离试验 • －杂质不可得→强制降解试验、与另一成熟方法比对 • 峰纯度→二极管阵列、质谱；改变流动相的比例 • 方法不够专属时，应多个方法予以补充
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三、杂质检查方法验证的要求
• －pH>8，溶解硅胶载体，宜选用耐碱填充剂，包覆聚合物、 高纯硅胶为载体并具有高表面覆盖度的键合硅胶、非硅胶或有 机-无机杂化填充剂
• －pH<2，键合相水解脱落，宜选用耐酸性填充剂：有机-无机 杂化填充剂、具有大体积侧链的二异丙基或二异丁基取代C18 键合硅胶等
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二、杂质检查方法的建立
（CP2005） • 氨基酸原料药→TLC法→其它氨基酸（CP2005）
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二、杂质检查方法的建立
• 2、仿制药杂质检查方法建立的一般考虑点 • （3）结合杂质的毒性特点： • 安全性控制的需要 • 被仿制药和自身杂质的毒性如何？重视药理毒理及临床安全性
研究结果的作用 • 对于有些分子通过以下化学反应可能产生潜在的遗传毒性作用 • －烷基化 • －交联 • －脱嘌呤 • 可参考遗传毒性库 • 遗传毒性杂质或具有可能引起遗传毒性的结构的杂质需要建立
准中注明品牌
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二、杂质检查方法的建立
• 3、杂质检查常见方法介绍
• （2）流动相的选择
• 尝试多种流动相
• 结合杂质的性质
•
－手性杂质
•
－无紫外吸收杂质
•
－一般杂质
• （3）洗脱方式的选择
• 等度洗脱
• 梯度洗脱
• 极性大的化合物可能被掩盖，极性小的化合物难以被洗 脱，甚至保留在柱上，可使用梯度洗脱法
➢ 降解试验的注意点 ➢ －－降解程度
➢ －－当降解产物、中间体、副产物吸收波长不同时的 处理
➢ －－制剂降解破坏
➢ －－消除辅料的干扰，当无法避开辅料的干扰时应对 辅料进行定于予以扣除
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三、杂质检查方法验证的要求
➢ 破坏性试验 －－酸降解：一般采用0.1mol/L～1mol/L的盐酸或硫酸 －－碱降解：一般采用0.1mol/L～1mol/L的氢氧化钠溶液 －－氧化降解采用合适的过氧化氢溶液 －－必要时可以加热或提高浓度 －－对高温试验通常温度高于加速试验温度的10℃，如50 ℃ 、
• －－杂质甲醇方法缺乏针对性：不知控制何种杂 质以及为何控制，缺乏安全性数据的支持
• －－杂质对照品制备困难（受限于工艺困难）： 方法验证不充分
• －－杂质检查结果难于评价：以及基础薄弱，需
要提高杂质研究水平，包括杂质检查方法和验证
水平，以体改仿制药研制水平
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一、概述
• 例 盐酸曲美他嗪片 • －－进源自标准采用梯度洗脱，对3种已知杂•
• 来源－－工艺杂质、降解产物、从反应物 及试剂中混入的杂质（外源性杂质）等
• 结构杂质－－几何异构体、光学异构体、
聚合物、其它甾体、其它氨基酸
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二、杂质检查方法的建立
• 目的 • 1、建立杂质检查方法是质控的要求 • －－包括具体的分析操作方法，以及计算
方法、限度要求 • 2、用语分析杂质谱 • －－考察与被仿制药一致性，进而优化制
备工艺及稳定性考察
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二、杂质检查方法的建立
• 1、杂质检查方法建立的前提 • －（1）被仿制药杂质谱如何： • 参考公开信息：质量标准、说明书、有关文献和专利 • －（2）自身杂质如何？ • 理论综合分析（合成路线、反应条件、处方工艺、辅
料等）、直接测试
• 用于未知杂质或未定性杂质的“标记”方法 • －LC-MS/GC-MS或CE-MS法 • －HPLC峰保留时间对比法 • －其它方法
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二、杂质检查方法的建立
• 定量方法 • －限度检查（半定量） • －对照品比较法：已知杂质，对照品 • －自身对照法：已知杂质、未知杂质、色调一致 • －检视技术：显色、荧光、自身颜色
• LC-MS、GC-MS、GC-IR、CE-MS法
• －分离技术和鉴别技术联用，为解析化合物的结构提供直接证 据
质、单个未知杂质及总杂质分别进行控制 • －－国内仿制采用等度洗脱，仅对未知杂
质（单个杂质和/或总杂质进行控制） • －－国内同品种标准对有关物质的规定：
总杂质不得过1.0％
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一、概述
• 3、主要的技术指导原则和技术要求 • 《化学药物杂质研究的技术指导原则》 • 《已有国家标准化学药品研究技术指导原则》 • 过渡期品种集中审评（化学药品）技术要求 • FDDA、ICH的相关指导原则 • －Guidances for Industry • ANDAs:Impurities in Drugs Substances • Chemistry、Manufacturing、Controles
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二、杂质检查方法的建立
• 3、杂质检查常见方法介绍 • （4）波长的选择 • －选择的原则是大部分主要杂质与主成分均在此波长
下有吸收：二极管阵列法 • －无紫外吸收或检测波长处吸收相差较大的多种化合
物，有时在单一检测波长处不能检出 • －兼顾各杂质吸收情况：特定波长检测特定杂质 • －必要时，该用其它类型的检测器
• －峰面积归一化法：简便，因杂质与主成分响应因子不同，线 性范围不同、仪器对他们的积分精度及准确度不同等因素，有 一定的局限性
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二、杂质检查方法的建立
• 目前定量方法中存在的主要问题 • －杂质对照品法：使用较少 • －主成分自身对照法：较少采用校正因子计算（杂质无法进行归属或杂质对
照品无法得到，校正因子无法计算）
灵敏的试验方法 • －EMEA《遗传毒性杂质限度指导原则》：毒理学担忧阈值
（TLC)1.5mg/人/日
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二、杂质检查方法的建立
• 2、仿制药杂质检查方法建立的一般考虑点 • （4）考虑不同检查方法的特点： • 主要是灵敏度和专属性能否符合要求 • 痕量杂质和遗传毒性杂质的严格控制，对方法要求较