常见的染色简介【检验科】 ppt课件

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革兰氏阴性菌:
因其细胞壁薄、外膜层类脂含量高、肽聚糖层薄且交联度差， 在遇脱色剂后，以类脂为主的外膜迅速溶解，薄而松散的肽聚糖网不 能阻挡结晶紫与碘复合物的溶出，因此通过乙醇脱色后仍呈无色，再 经沙黄等红色染料复染，就使革兰氏阴性菌呈红色。
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试剂：
龙胆紫、 碘液、 酒精、 沙黄.
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9、复染：
滴加沙黄复红复染1min，水洗。至此，革兰氏染
色结束。
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革兰氏染色
龙 胆 紫
水冲
水冲 碘液
酒 精
水冲
沙黄
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染色结果
革兰氏阳性菌都呈蓝紫色，革兰氏阴性菌都呈粉红色。
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原理:
通过结晶紫初染和碘液媒染后， 在细胞壁内形成了不溶于水的结晶 紫与碘的复合物.
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革兰氏阳性菌:
由于其细胞壁较厚、肽聚糖网层次较 多且交联致密，故遇乙醇或丙酮脱色 处理时，因失水反而使网孔缩小，再 加上它不含类脂，故乙醇处理不会出 现缝隙，因此能把结晶紫与碘复合物 牢牢留在壁内，使其仍呈紫色.
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和原核细胞相比，真核细胞是结构更为复杂的细胞。它有线粒体等各
种膜细胞器，有围以双层膜的细胞核，把位于核内的遗传物质与细胞 质分开。DNA为长链分子，与组蛋白以及其他蛋白结合而成染色体。
真核细胞的分裂为有丝分裂和减数分裂，分裂的结果使复制的染色体 均等地分配到子细胞中去。
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复染液 也是一种碱性染料，目的是使脱色的细菌重新染上另一种颜色，以便
与未脱色菌进行比较。
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具体操作方法是：
1、取载玻片用纱布擦干，载玻片的一面用marker笔画 一个小圈（用来大致确定菌液滴的位置）。涂菌 的部位在火焰上烤一下，除去油脂。
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2、涂片：
液体培养基：左手持菌液试管，在酒精灯火焰附 近5cm左右打开管盖；右手持接种环在火焰中烧 灼灭菌，等冷却后从试管中沾取菌液一环，在洁 净无脂的载玻片上涂直径2mm左右的涂膜，最后 将接种环在火焰上烧灼灭菌。
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5、染色：
将固定过的涂片放架子上，滴加龙胆 紫染液，染1min。
6、水洗：
用水缓慢冲洗涂片上的染色液，用吸 水纸吸干。简单染色结束可观察细胞 形态。
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7、媒染：
滴加1滴碘液，染1min，水洗。
8、脱色：
吸去残留水，连续滴加95%乙醇脱色20-30s至流出 液无紫色，立即水洗。
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种是最小的生物单位。生物的相同科、目越多，共同点也越多。
域是生物分类法中最高的类别。作为比界高的分类系统，称作 “域”(Domain)或者“总界”(Superkingdom)。目前这三域分别命名 为细菌域(Bacteria)﹑古菌域(Archaea)和真核域(Eukarya)。
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革兰氏染色:
革兰氏染色是用来鉴别细菌的一种方法，利用 细菌细胞壁上的主要成份不同，这种染色法，可 将细菌分成两大类，即革兰氏阳性菌与革兰氏阴 性菌。
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这种染色法是由一位丹麦医生汉斯·克里斯蒂 安·革兰（Hans Christian Gram，1853年－1938年） 于1884年所发明，最初用来鉴别肺炎球菌与克雷 白氏肺炎菌之间的关系。
固体培养基：先在载玻片上滴一滴无菌水，再用 接种环取少量菌体，涂在载玻片上，使其薄而均 匀。
p气中自然干燥。
4、固定：
让菌膜朝上，通过火焰2-3次固定（以不
烫手为宜）。
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固定的目的
① 杀死微生物，固定其细胞结构； ② 保证菌体能牢固地粘附在载玻片上，以免水洗时被水冲掉； ③ 改变菌体对染料的通透性，一般死细胞原生质容易着色。
常见的染色简介
检验科
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生物分类
生物的基本分类层次：界 、门 、纲 、目 、科、 属 、种。 生物的详细分类层次：域、界、门、亚门、总纲、纲、亚纲、总目、
目、亚目、总科、科、亚科、总属、属、亚属、总种、种、亚种。 。
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生物由原核生物、真核生物及非细胞生物组成，包括动物、植物、细 菌、真菌、病毒等.
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原核细胞和真核细胞是细胞的两大基本类型，它们反映细胞进化的两 个阶段。把具有细胞形态的生物划分为原核生物和真核生物，是现代
生物学的一大进展。原核细胞的主要特征是没有线粒体、质体等膜细 胞器，染色体只是一个环状的DNA分子，不含组蛋白及其他蛋白质， 没有核膜。原核生物包括细菌和蓝菌，它们都是单生的或群体的单细 胞生物。
病原微生物分类：细菌、真菌、放线菌、衣原体、支原体、立克次体、 螺旋体、病毒等
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未经染色之细菌，由于其与周围环境
折光率差别甚小，故在显微镜下极难 观察。染色后细菌与环境形成鲜明对 比，可以清楚地观察到细菌的形态、 排列及某些结构特征，而用以分类鉴 定。
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革兰氏染色 抗酸染色 墨汁染色 瑞氏染色
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革兰氏染色法一般包括初染、媒染、 脱色、复染等四个步骤.
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初染：碱性染料，草酸胺结晶紫液
媒染：碘液，其作用的是增强染料与菌体的亲和力，加强染料与细胞 的结合。
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脱色剂
乙醇将染料溶解，使被染色的细胞脱色，利用不同细菌对染料的脱色 程度不同，帮助染料从被染色的细胞中脱色。而将细菌加以区分。革 兰阳性细菌不易被脱色剂脱色，而革兰阴性细菌则易被脱色。