Hrd1转基因小鼠的构建与验证

Hrd1转基因小鼠的构建与验证
杨硕;刘磊;万幸;王文丰;王娟;贺恒;雷蕾;李斌
【期刊名称】《中华实验眼科杂志》
【年(卷),期】2015(033)002
【摘要】背景内质网应激在糖尿病视网膜病变（DR）中发挥着重要作用.羟甲基戊二酰辅酶A还原酶降解蛋白1（Hrd1,又名Syvn1）作为一种内质网相关蛋白降解（ERAD）途径中的核心蛋白,能够减少内质网应激. 目的构建Hrd1高表达小鼠,为今后研究Hrd1在DR中的作用提供动物模型. 方法构建Hrd1系统表达重组质粒,酶切、测序后显微注射3 p1到685枚C57BL/6小鼠受精卵中,移植到代孕母鼠,得到Hrd1转基因小鼠.利用鼠尾PCR检测法鉴定F0代小鼠的基因型.得到Hrd1基因检测阳性鼠后,使其分别与野生型鼠杂交,得到F1代Hrd1转基因小鼠,取鼠尾组织,用PCR检测法再次鉴定F1代小鼠基因型. 结果成功构建了Hrd1重组载体,重组质粒pRP.ExBi-EF1 a-Syvn1-IRES-eGFP的全序列测定结果显示,cDNA序列均正确.接受了Hrd1-pcDNA显微注射的685枚受精卵中成活598枚.将存活的受精卵移植到代孕母鼠后共产子鼠41只,获F0代子鼠8只,生理活动均良好.PCR电泳显示339 bp处阳性条带,该基因型可以传递到子代F1.结论成功构建了Hrd1转基因小鼠.
【总页数】3页(P115-117)
【作者】杨硕;刘磊;万幸;王文丰;王娟;贺恒;雷蕾;李斌
【作者单位】
【正文语种】中文
【中图分类】R373.21
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